CN103254256A - 熊果苷糖酯衍生物在制备化妆品或药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
提供通式I的熊果苷糖酯类衍生物，以其为活性成分的药物组合物，其在制备皮肤美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病药物上的应用。本发明所述的熊果苷糖酯类衍生物能有效抑制和分解黑色素，使黑色素斑彻底消失，起到美白及祛斑的效果；并经斑马鱼急性毒性试验表明，熊果苷糖酯类衍生物与熊果苷比较，毒性低，活性高，具高效安全的特点。式I中：R代表直链或支链的饱和烷酰基或不饱和烷酰基、或反式或顺式不饱和芳香酰基；R1代表氢原子、或直链或支链的饱和烷酰基或不饱和烷酰基、或反式或顺式不饱和芳香酰基；R2代表氢原子、和/或羟基或甲氧基或取代酰基。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及天然熊果苷糖酯衍生物在制备化妆品或药物中的应用，更具体地，涉及熊果苷糖酯衍生物在制备皮肤美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病药物上的应用。
背景技术：
人体皮肤颜色的深浅受多种因素调控，但主要还是取决于黑色素的含量和分布，所以人们的美白观念已经转向黑色素还原的生理性美白。目前市场上涌现出大量的美白护肤品，其安全性和功效性评价自然成为消费者和生产厂家所关注的重点。从动植物、中草药等天然原料中提取的天然活性物质，因化学结构和生物活性没有改变，而其又有多重效能，药效持久稳定，适用面广，无副作用或副作用很小，所以具有顺应“回归自然，科学美容、科学护理这一趋势”的优点。
熊果苷糖酯衍生物为水溶性的配糖体类天然化合物。本发明人最初从山龙眼科银桦属植物或哈克木属植物的叶中分离得到，在本发明之前未发现熊果苷糖酯衍生物具有抑制黑色素活性或以其为原料制备的化妆品或药物制剂的报道，也没有在制备美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病的药物中的应用的报道。
发明内容
本发明旨在提供熊果苷糖酯衍生物抑制黑色素的新用途，具体涉及熊果苷糖酯衍生物在制备皮肤美白及祛斑化妆品及在制备治疗色素沉着性疾病的药物中的应用。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
通式(I)所示的熊果苷糖酯衍生物及其药学上可接受的盐及配糖体，
其中：R代表直链或支链的饱和烷酰基或不饱和烷酰基、或反式或顺式不饱和芳香酰基；R1代表氢 原子、或直链或支链的饱和烷酰基或不饱和烷酰基、或反式或顺式不饱和芳香酰基；R2代表氢原子、和/或羟基或甲氧基或取代酰基。
针对上述的通式(I)化合物，本发明优选的技术方案是R、R1为乙酰基、反式或顺式咖啡酰基、香豆酰基和桂皮酰基。
针对上述的通式(I)化合物，本发明优选的技术方案是R分别为反式或顺式咖啡酰基，R1分别为氢原子或乙酰基，R2分别为氢原子或羟基或甲氧基。
针对上述的通式(I)化合物，本发明优选的技术方案是R为反式或顺式咖啡酰基、香豆酰基和桂皮酰基，R1和R2为氢原子，结构式如(II)所示，R3和R4代表氢原子、羟基或甲氧基。
针对上述的通式(I)化合物，本发明优选的技术方案是R为反式或顺式咖啡酰基、香豆酰基和桂皮酰基，R1和R2为氢原子，如结构式(III)所示，R5和R6代表氢原子、羟基或甲氧基。
上述熊果苷糖酯类衍生物在制备化妆品中的应用。
上述应用中，所述化妆品为皮肤美白类化妆品。
上述应用中，所述化妆品为祛斑类化妆品。
熊果苷糖酯类衍生物在制备治疗色素沉着性疾病的药物中的应用。
熊果苷糖酯类衍生物作为黑色素抑制剂。
熊果苷糖酯类衍生物在制备黑色素抑制剂中的应用。
熊果苷糖酯类衍生物，以及包含熊果苷糖酯类衍生物在内的两种或两种以上 的美白皮肤、祛斑及治疗色素沉着性皮肤病的药物组成的复方在制备化妆品中和黑色素抑制剂中的应用。
所述的包含熊果苷糖酯类衍生物在内的两种或两种以上的美白皮肤、祛斑及治疗色素沉着性皮肤病的药物组成的复方的应用，其中所述的复方为熊果苷糖酯类衍生物、含熊果苷糖酯类衍生物和三七总皂苷的药物组合、熊果苷糖酯类衍生物和三七总皂苷和人参总皂苷的药物组合。
本发明涉及熊果苷糖酯类衍生物抑制黑色素的新用途，可用于制备皮肤美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病药物上的应用，所以制备化妆品或药物的有效成分是熊果苷糖酯类衍生物。
以上所述的含有熊果苷糖酯类衍生物的化妆品或药物，可以是包含熊果苷糖酯类衍生物在内的两种或两种以上的美白皮肤、祛斑及治疗色素沉着性皮肤病的药物组成的复方；也可以是单方(这里的“单方”是指：其中的熊果苷糖酯类衍生物是唯一的美白皮肤、祛斑及治疗色素沉着性皮肤病的药物)。
经实验表明，本发明所述的熊果苷糖酯类衍生物对黑色素能发挥出有效的抑制或(和)分解作用，使黑色素斑彻底消失，能起到美白及祛斑的效果；熊果苷糖酯类衍生物对黑色素具有更强的抑制效果，并且在低浓度下就显示对黑色素有较强的抑制作用；并经斑马鱼急性毒性试验表明，熊果苷糖酯类衍生物急性毒性作用低，高效安全，因此熊果苷糖酯类衍生物可以用来制备具有美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病的药物。
本发明中涉及的熊果苷糖酯类衍生物组合物包括使用含有熊果苷糖酯类衍生物的植物提取物，植物或其果实的工业处理的副产物的提取物，或者是含有比原始存在于植物中的更高浓度的熊果苷糖酯类衍生物植物的工业副产品，但并不局限于此。
上述任一项所述的药用盐，是指药学上或化妆品中可接受的盐，包括与有机酸或无机酸形成的盐，所述的有机酸包括但不限于酒石酸、柠檬酸、甲酸、乙酸、乙二酸、丁酸、草酸、马来酸、琥珀酸、己二酸、藻酸、柠檬酸、天冬氨酸、苯苯磺酸、樟脑酸、樟脑磺酸、二葡糖酸、环戊烷丙酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、葡庚糖酸、甘油磷酸、半硫酸、庚酸、己酸、延胡索酸、2-羟基乙磺酸、乳酸、马来酸、甲磺酸、烟酸、2-萘磺酸、扑酸、果胶酯酸、3-苯基丙酸、苦味酸、新戊酸、丙酸、琥珀酸、酒石酸、硫代氰酸、对-甲苯磺酸盐和十一烷酸盐，所述 的无机酸包括但不限于盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸或磷酸。
本发明的熊果苷糖酯类衍生物及其组合物可以是任何合适形式，例如固体，半固体，液体或气溶胶形式。一般情况下，药物含有本发明的化合物或提取物作为活性成分，与适合外部，肠道，或肠胃外给药的有机或无机载体或赋形剂混合。活性成分可以是复方的，例如，与常规无毒药学可接受载体和/或赋形剂制成片剂、小药丸、胶囊、栓剂、阴道栓、溶液、乳液、混悬液和适合使用的其他形式。在组合物中使用的药学可接受载体包括，例如，水、葡萄糖、乳糖、阿拉伯胶、明胶、甘露糖醇、淀粉、三硅酸镁、滑石、玉米淀粉、角蛋白、胶态二氧化硅、马铃薯淀粉，和适合在制备固体、半固体、液体或气溶胶形式的制剂中使用的其他载体。组合物可以另外含有稳定剂，增稠剂，和/或着色剂和香料。
经口服给药时，首先使化合物与常规的药用辅剂如赋形剂、崩解剂、黏合剂、润滑剂、抗氧化剂、包衣剂、着色剂、芳香剂、表面活性剂等混合，将其制成颗粒剂、胶囊、片剂等形式给药；非经口给药时可以注射液、输液剂或栓剂等形式给药。制备上述制剂时，可使用常规的制剂技术。
本发明的熊果苷糖酯类衍生物及其组合物可以是任何合适形式，例如固体，半固体，液体或气溶胶形式。一般情况下，化妆品含有本发明的化合物或提取物作为活性成分，与适合外部，肠道，或肠胃外给药的有机或无机载体或赋形剂混合。活性成分可以是复方的，例如，与常规无毒化妆品学可接受载体和/或赋形剂制成散剂、液体药剂、醑剂、酊剂、软膏剂、糊剂、硬膏剂、涂膜剂、火棉胶剂、膜剂、气雾剂和适合使用的其他形式。在组合物中使用的化妆品学可接受载体包括，例如，水、葡萄糖、乳糖、阿拉伯胶、明胶、甘露糖醇、淀粉、三硅酸镁、滑石、玉米淀粉、角蛋白、胶态二氧化硅、马铃薯淀粉，和适合在制备固体、半固体、液体或气溶胶形式的制剂中使用的其他载体。组合物可以另外含有稳定剂，增稠剂，和/或着色剂和香料。
附图说明：
图1-1：通过图像分析定性评价6'-O-咖啡酰基熊果苷(6'-O-caffeoyl-arbutin)(简称：KIBVA)抑制黑色素的药效学。其中，a:空白对照；b:0.1%的DMSO溶剂对照；c:60μM KIBVA处理组；d:100μM KIBVA处理组；e:200μM KIBVA处理组；f:400μM KIBVA处理组。与溶剂对照相比，肉眼观察可见不同浓度的KIBVA处理组均有不同程度的黑色素抑制效果。
图1-2：通过图像分析定量评价KIBVA抑制黑色素的药效学。与溶剂对照相比，不同浓度的KIBVA处理组，对黑色素的抑制效果均有显著性差异。(***：P＜0.001)
图1-3：通过图像分析定性比较KIBVA和熊果苷抑制黑色素的药效学。其中，a0:溶剂对照组；a1:60μM KIBVA处理组；a2:100μM KIBVA处理组；a3:200μMKIBVA处理组；a4:400μM KIBVA处理组；b0:空白对照组；b1:60μM熊果苷处理组；b2:100μM熊果苷处理组；b3:200μM熊果苷处理组；b4:400μM熊果苷处理组。通过肉眼定性分析，发现相同浓度的KIBVA处理组抑制黑色素的效果要优于相同浓度的熊果苷处理组。
图1-4：通过图像分析定量比较KIBVA和熊果苷抑制黑色素的药效学。与溶剂对照相比，不同浓度的KIBVA处理组，对黑色素的抑制效果均有显著性差异；而熊果苷处理组，除了60μM处理组与溶剂对照相比没有显著性差异外，其他浓度处理组均有显著性差异；同时我们发现相同浓度的KIBVA和熊果苷处理组中，KIBVA抑制黑色素的效果要显著优于熊果苷处理组。(***：P＜0.001)
图2：通过图像分析定性评价KIBVA移除后黑色素的恢复情况。其中a0:空白对照组；b0:溶剂对照组；c0:200μM KIBVA对照组；a1:KIBVA移除24小时后空白对照组；b1:KIBVA移除24小时后溶剂对照组；c1:KIBVA移除24小时后药物处理组。
具体实施方式：
下面结合附图和实施例对本发明做进一步阐述，但本发明的保护范围并不限于此。
实施例1：
6'-O-咖啡酰基熊果苷(6'-O-caffeoyl-arbutin)(简称：KIBVA)对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、6'-O-咖啡酰基熊果苷(6'-O-caffeoyl-arbutin)(简称：KIBVA)的制备：采用本申请人获得授权的中国专利“专利号：ZL200710065956.X”的方法，该方法所得6'-O-咖啡酰基熊果苷得率高，纯度高，制备过程简单易行，生产周期短，易于批量制备和工业化生产工艺。制备得到的KIBVA结构式如下：
2、斑马鱼选取：
将6hpf的AB系斑马鱼置于解剖显微镜下观察，挑取发育正常且一致的斑马鱼移入6孔微孔板中，每孔30尾。(注：本发明中的hpf=hour post fertilization，中文是指斑马鱼受精后小时数，如6hpf是指斑马鱼受精后6个小时)。斑马鱼由杭州环特生物饲养全封闭循环系统水养殖系统提供(下同)。
3、化合物处理：
试验设置四个实验组，分别为A、B、C和D组，其中A组为空白对照(control)处理组，含有3mL养殖用水；B组为溶剂(0.1%DMSO，即0.1%二甲基亚砜)对照处理组，即为含有3μL DMSO的3mL养殖用水；C组为浓度分别是60、100、200、400、600μM的熊果苷处理组(Arbutin)，含有用3mL养殖用水配置的浓度分别为60、100、200、400、600μM的熊果苷溶液；D组则是浓度分别为60、100、200、400、600μM的KIBVA处理组，含有用3mL养殖用水分别配置的浓度为60、100、200、400、600μM的KIBVA溶液。每个实验组的每个浓度处理均放入30尾发育一致的6hpf斑马鱼，并置于28℃培养箱中避光培养至52hpf拍照。
4、图像分析：
(1)KIBVA抑制黑色素的药效学评价：
将被KIBVA处理至52hpf的斑马鱼(每个浓度处理随即选取10尾)置于立体显微镜观察、拍照(背面观)并保存。一方面通过观察对比分析定性评价各个处理组中斑马鱼黑色素被抑制的情况(图1)；另一方面利用尼康NIS-ElementsD3.10高级图像处理软件对图像进行定量分析，计算斑马鱼头部背侧不透明度平均值与KIBVA浓度之间的“药效——剂量”关系(图2)以及黑色素被抑制率。其中在定量分析中用到的术语“不透明度”，是指不透明度总和与评价区域面积的 比值，不透明度总和与被评价区域的黑色素含量成正比例关系。
另外，药物(KIBVA、熊果苷)对黑色素的抑制率计算公式为：
统计学处理结果以
表示，多组间比较采用方差分析(ANOVA)，两组间比较采用Dunnett’sT-检验进行统计学处理，p<0.05为差异性显著。根据统计学处理结果可定量确定KIBVA对黑色素的抑制情况。
通过定量分析，得出A组空白对照组不透明度平均值为0.40±0.040；B组溶剂对照组不透明度平均值为0.39±0.021，D组中浓度分别为60、100、200、400μM的KIBVA处理组不透明度平均值分别0.32±0.041、0.28±0.039、0.22±0.015、0.20±0.019，则根据计算公式得；浓度分别为60、100、200、400μM的KIBVA对黑色素的抑制率分别为：18.5%、21.4%、44.1%、48.7%，可见不同浓度的KIBVA处理组均有不同程度的黑色素抑制效果。
(2)KIBVA与熊果苷在抑制黑色素效果上的比较：
将被熊果苷（C组）和KIBVA（D组）处理至52hpf的斑马鱼（每个浓度处理随即选取10尾）置于立体显微镜观察、拍照（背面观）并保存。一方面通过观察对比分析定性评价各个处理组中斑马鱼黑色素被抑制的情况；另一方面利用尼康NIS-Elements D3.10高级图像处理软件对图像进行定量分析，计算斑马鱼头部背侧不透明度平均值与KIBVA浓度之间的“药效——剂量”关系以及黑色素被抑制率。
另外，药物(KIBVA、熊果苷)对黑色素的抑制率计算公式为：
统计学处理结果以
表示，多组间比较采用方差分析(ANOVA)，两组间比较采用Dunnett’sT-检验进行统计学处理，p<0.05为差异性显著。根据统计学处理结果可定量确定KIBVA对黑色素的抑制情况。
通过定量分析，得出A组空白对照组不透明度平均值为0.40±0.040；B组溶剂对照组不透明度平均值为0.39±0.021；C组中浓度分别为60、100、200、400μM的熊果苷处理组的不透明度平均值分别为：0.38±0.044；0.35±0.022；0.32±0.04；0.28±0.043；D组中浓度分别为60、100、200、400μM的KIBVA 处理组不透明度平均值分别0.32±0.041、0.28±0.039、0.22±0.015、0.20±0.019；则根据计算公式得；浓度分别为60、100、200、400μM的熊果苷处理组对黑色素的抑制率分别为：2%、12.7%、18.3%、27%；而浓度分别为60、100、200、400μM的KIBVA对黑色素的抑制率分别为：18.5%、21.4%、44.1%、48.7%。
斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和KIBVA处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果非常明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而KIBVA则为60μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和KIBVA处理组，发现每个浓度的KIBVA处理组抑制黑色素的效果明显要比相应浓度的熊果苷效果好。
实施例2：
斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
1、斑马鱼选取：
将6hpf的AB系斑马鱼置于解剖显微镜下观察，挑取发育正常且一致的斑马鱼移入6孔微孔板中，每孔30尾。
2、化合物处理：
试验设置三个实验组，分别为A、B、和C组，其中A组为空白对照(control)处理组，含有3mL养殖用水；B组为溶剂(0.1%DMSO，即0.1%二甲基亚砜)对照处理组，即为含有3μL DMSO的3mL养殖用水；C组为浓度为200μMKIBVA处理组，即用3mL养殖用水配置的200μM KIBVA溶液。
每个处理组均选用30尾发育一致的6hpf斑马鱼，并置于28℃培养箱中培养至52hpf后拍照；拍照结束后移除KIBVA24h后，再次拍照。
3、图像分析：
将被KIBVA处理至52hpf的斑马鱼随即选取10尾置于立体显微镜观察、拍照（背面观）并保存。通过观察对比分析定性评价各个处理组中斑马鱼黑色素被抑制的情况；
斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM KIBVA处理的斑马鱼，经拍照发现，与对照组比较，黑色素明显减少，然而在将KIBVA移除24小时后，斑马鱼的黑色素明显的增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除KIBVA后，得以恢复，这可能是因为KIBVA具有抑制melan-细胞黑色素生成及抑制酪氨酸酶活性或者促进黑素的运输、转运及代谢 的作用，所以KIBVA对防止和改善色素沉淀具有很好的效果。
实施例3：
KIBVA的急性毒性试验：
1、斑马鱼选取：
将6hpf的AB系斑马鱼置于解剖显微镜下观察，挑取发育正常且一致的斑马鱼移入6孔微孔板中，每孔30尾。
2、化合物处理：
本试验采用静水式试验，根据预实验结果分别设置6个不同的KIBVA和熊果苷浓度(二者均分别为：0μM、10μM、100μM、1mM、2mM、3mM)，每个浓度放入30尾发育一致的6hpf斑马鱼，放入28℃培养箱中避光培养，将斑马鱼的死亡率作为评价指标。
3、试验结果：
通过试验结果记录及统计分析，发现：
(1)斑马鱼被药物处理至52hpf时，观察发现，熊果苷和KIBVA处理组，斑马鱼的最大非致死浓度均为3mM。
(2)斑马鱼被药物处理至96hpf时，观察发现，熊果苷处理组斑马鱼的最大非致死浓度约为1mM，而KIBVA处理组则为2mM。
在实施例2中，熊果苷和KIBVA抑制黑色素的起效浓度分别为100μM和60μM，而二者在急性毒性实验浓度范围内的最大非致死剂量分别为1mM和2mM，也就是熊果苷和KIBVA的最大非致死浓度分别是相应起效浓度的33倍倍和10倍，以上结果表明，KIBVA与熊果苷比较，急性毒性较低，因此安全性更好。在应用斑马鱼模型实验发现，6'-O-咖啡酰基熊果苷对黑色素能发挥出有效的抑制或(和)分解作用，使黑色素斑彻底消失，能起到美白及祛斑的效果；同时通过与相同浓度的熊果苷对比，6'-O-咖啡酰基熊果苷对黑色素具有更强的抑制效果，并且在低浓度下就显示对黑色素有较强的抑制作用；并经斑马鱼急性毒性试验表明，6'-O-咖啡酰基熊果苷急性毒性作用低，高效安全，因此6'-O-咖啡酰基熊果苷可以用来制备具有美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病的药物。
实施例4：
岩茶苷A对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶苷A的制备：岩茶(Vaccinium spp.)芽原料去杂、洗净、烘干、粉碎成过30目筛的粗粉。上述粗粉1.77kg用80%含水丙酮冷浸提取3次，每次浸提取时间2天，过滤、合并滤液、减压浓缩、回收溶剂(可用于反复提取)。上述滤液进一步浓缩至小体积后，缓缓倾入D101大孔吸附树脂层析柱的上端，提取物与大孔吸附树脂的重量比为1:8-15，柱径高比为1:10，以不同浓度的甲醇梯度洗脱。同时，用薄层层析法检测指导洗脱，薄层层析的条件为：苯-甲酸乙酯-甲酸(1:7:1)为展开剂，2％的三氯化铁乙醇液为显色剂。得到组分1(366g)，组分2(91g)和组分3(15g)。取部分上述组分2分别通过多种柱层析手段，包括Diaion HP20SS、Sephadex LH-20、MCI gel CHP20P、Chromatorex ODS、Toyopearl HW-40F反相柱层析，以不同浓度的甲醇梯度洗脱，从中得到岩茶苷A(278mg)，其结构式如下：
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶苷A处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而岩茶苷A则为50μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶苷A处理组，发现每个浓度的岩茶苷A处理组抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶苷A处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而在将岩茶苷A移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶苷A后，得以恢复，所以岩茶苷A对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例5：
岩茶苷B对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶苷B的制备：岩茶芽原料去杂、洗净、烘干、粉碎成过30目筛的粗粉。上述粗粉1.77kg用80%含水丙酮冷浸提取3次，每次浸提取时间2天，过滤、合并滤液、减压浓缩、回收溶剂(可用于反复提取)。上述滤液进一步浓缩至小体积后，缓缓倾入D101大孔吸附树脂层析柱的上端，提取物与大孔吸附树脂的重量比为1:8-15，柱径高比为1:10，以不同浓度的甲醇梯度洗脱。同时，用薄层层析法检测指导洗脱，薄层层析的条件为：苯-甲酸乙酯-甲酸(1:7:1)为展开剂，2％的三氯化铁乙醇液为显色剂。得到组分1(366g)，组分2(91g)和组分3(15g)。取部分上述组分2分别通过多种柱层析手段，包括Diaion HP20SS、Sephadex LH-20、MCI gel CHP20P、Chromatorex ODS、Toyopearl HW-40F反相柱层析，以不同浓度的甲醇梯度洗脱，从中得到岩茶苷B(43mg)，其结构式如下：
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶苷B处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而岩茶苷B则为50μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶苷B处理组，发现每个浓度的岩茶苷B处理组抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶苷B处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将岩茶苷B 移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶苷B后，得以恢复，所以岩茶苷B对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例6：
岩茶苷C对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶苷C的制备：岩茶芽原料去杂、洗净、烘干、粉碎成过30目筛的粗粉。上述粗粉1.77kg用80%含水丙酮冷浸提取3次，每次浸提取时间2天，过滤、合并滤液、减压浓缩、回收溶剂(可用于反复提取)。上述滤液进一步浓缩至小体积后，缓缓倾入D101大孔吸附树脂层析柱的上端，提取物与大孔吸附树脂的重量比为1:8-15，柱径高比为1:10，以不同浓度的甲醇梯度洗脱。同时，用薄层层析法检测指导洗脱，薄层层析的条件为：苯-甲酸乙酯-甲酸(1:7:1)为展开剂，2％的三氯化铁乙醇液为显色剂。得到组分1(366g)，组分2(91g)和组分3(15g)。取部分上述组分2分别通过多种柱层析手段，包括Diaion HP20SS、Sephadex LH-20、MCI gel CHP20P、Chromatorex ODS、Toyopearl HW-40F反相柱层析，以不同浓度的甲醇梯度洗脱，从中得到岩茶苷C(43.7mg)，其结构式如下：
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶苷C处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而岩茶苷C则为48μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶苷C处理组，发现每个浓度的岩茶苷C处理组抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶苷C处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将岩茶苷C移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶苷C后，得以恢复，所以岩茶苷C对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例7：
岩茶苷D对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶苷D的制备：岩茶芽原料去杂、洗净、烘干、粉碎成过30目筛的粗粉。上述粗粉1.77kg用80%含水丙酮冷浸提取3次，每次浸提取时间2天，过滤、合并滤液、减压浓缩、回收溶剂(可用于反复提取)。上述滤液进一步浓缩至小体积后，缓缓倾入D101大孔吸附树脂层析柱的上端，提取物与大孔吸附树脂的重量比为1:8-15，柱径高比为1:10，以不同浓度的甲醇梯度洗脱。同时，用薄层层析法检测指导洗脱，薄层层析的条件为：苯-甲酸乙酯-甲酸(1:7:1)为展开剂，2％的三氯化铁乙醇液为显色剂。得到组分1(366g)，组分2(91g)和组分3(15g)。取部分上述组分2分别通过多种柱层析手段，包括Diaion HP20SS、Sephadex LH-20、MCI gel CHP20P、Chromatorex ODS、Toyopearl HW-40F反相柱层析，以不同浓度的甲醇梯度洗脱，从中得到岩茶苷D(6.7mg)，其结构式如下：
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶苷D处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量 评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而岩茶苷D则为40μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶苷D处理组，发现每个浓度的岩茶苷D抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶苷D处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将岩茶苷D移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶苷D后，得以恢复，所以岩茶苷D对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例8：
岩茶苷E对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶苷E的制备：岩茶芽原料去杂、洗净、烘干、粉碎成过30目筛的粗粉。上述粗粉1.77kg用80%含水丙酮冷浸提取3次，每次浸提取时间2天，过滤、合并滤液、减压浓缩、回收溶剂(可用于反复提取)。上述滤液进一步浓缩至小体积后，缓缓倾入D101大孔吸附树脂层析柱的上端，提取物与大孔吸附树脂的重量比为1:8-15，柱径高比为1:10，以不同浓度的甲醇梯度洗脱。同时，用薄层层析法检测指导洗脱，薄层层析的条件为：苯-甲酸乙酯-甲酸(1:7:1)为展开剂，2％的三氯化铁乙醇液为显色剂。得到组分1(366g)，组分2(91g)和组分3(15g)。取部分上述组分2分别通过多种柱层析手段，包括Diaion HP20SS、Sephadex LH-20、MCI gel CHP20P、Chromatorex ODS、Toyopearl HW-40F反相柱层析，以不同浓度的甲醇梯度洗脱，从中得到岩茶苷E(3.2mg)，其结构式如下：
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶苷E处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而岩茶苷E则为40μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶苷E处理组，发现每个浓度的岩茶苷D抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶苷E处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将岩茶苷E移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶苷E后，得以恢复，所以岩茶苷E对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例9：
岩茶苷F对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶苷F的制备：岩茶芽原料去杂、洗净、烘干、粉碎成过30目筛的粗粉。上述粗粉1.77kg用80%含水丙酮冷浸提取3次，每次浸提取时间2天，过滤、合并滤液、减压浓缩、回收溶剂(可用于反复提取)。上述滤液进一步浓缩至小体积后，缓缓倾入D101大孔吸附树脂层析柱的上端，提取物与大孔吸附树脂的重量比为1:8-15，柱径高比为1:10，以不同浓度的甲醇梯度洗脱。同时，用薄层层析法检测指导洗脱，薄层层析的条件为：苯-甲酸乙酯-甲酸(1:7:1)为展开剂，2％的三氯化铁乙醇液为显色剂。得到组分1(366g)，组分2(91g)和组分3(15g)。取部分上述组分2分别通过多种柱层析手段，包括Diaion HP20SS、Sephadex LH-20、MCI gel CHP20P、Chromatorex ODS、Toyopearl HW-40F反相柱层析，以不同浓度的甲醇梯度洗脱，从中得到岩茶苷F(83.2mg)，其结构式如下：
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶苷F处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而岩茶苷F则为40μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶苷F处理组，发现每个浓度的岩茶苷F抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶苷F处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将岩茶苷F移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶苷F后，得以恢复，所以岩茶苷F对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例10：
岩茶苷G对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶苷G的制备：岩茶芽原料去杂、洗净、烘干、粉碎成过30目筛的粗粉。上述粗粉1.77kg用80%含水丙酮冷浸提取3次，每次浸提取时间2天，过滤、合并滤液、减压浓缩、回收溶剂(可用于反复提取)。上述滤液进一步浓缩至小体积后，缓缓倾入D101大孔吸附树脂层析柱的上端，提取物与大孔吸附树脂的重量比为1:8-15，柱径高比为1:10，以不同浓度的甲醇梯度洗脱。同时，用薄层层析法检测指导洗脱，薄层层析的条件为：苯-甲酸乙酯-甲酸(1:7:1)为展开剂，2％的三氯化铁乙醇液为显色剂。得到组分1(366g)，组分2(91g)和组分3(15g)。取部分上述组分2分别通过多种柱层析手段，包括Diaion HP20SS、Sephadex LH-20、MCI gel CHP20P、Chromatorex ODS、Toyopearl HW-40F反相柱层析，以不同浓度的甲醇梯度洗脱，从中得到岩茶苷G(46.4mg)，其结构式如下：
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶苷G处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而岩茶苷G则为40μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶苷G处理组，发现每个浓度的岩茶苷G抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶苷G处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将岩茶苷G移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶苷G后，得以恢复，所以岩茶苷G对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例11：
岩茶苷H对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶苷H的制备：岩茶芽原料去杂、洗净、烘干、粉碎成过30目筛的粗粉。上述粗粉1.77kg用80%含水丙酮冷浸提取3次，每次浸提取时间2天，过滤、合并滤液、减压浓缩、回收溶剂(可用于反复提取)。上述滤液进一步浓缩至小体积后，缓缓倾入D101大孔吸附树脂层析柱的上端，提取物与大孔吸附树脂的重量比为1:8-15，柱径高比为1:10，以不同浓度的甲醇梯度洗脱。同时，用薄层层析法检测指导洗脱，薄层层析的条件为：苯-甲酸乙酯-甲酸(1:7:1)为展开剂，2％的三氯化铁乙醇液为显色剂。得到组分1(366g)，组分2(91g)和组分3(15g)。取部分上述组分1分别通过多种柱层析手段，包括Diaion HP20SS、 Sephadex LH-20、MCI gel CHP20P、Chromatorex ODS、Toyopearl HW-40F反相柱层析，以不同浓度的甲醇梯度洗脱，从中得到岩茶苷H(25.7mg)，其结构式如下：
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶苷H处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而岩茶苷H则为40μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶苷H处理组，发现每个浓度的岩茶苷H抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶苷H处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将岩茶苷H移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶苷H后，得以恢复，所以岩茶苷H对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例12：
含'-O-咖啡酰基熊果苷(6'-O-caffeoyl-arbutin)在内的药物组合对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、'-O-咖啡酰基熊果苷(6'-O-caffeoyl-arbutin)药物组合的制备：采用实施例1的方法制备得KIBVA，取适量KIBVA，以3:1的比例加入三七总皂苷，混合均匀，即得'-O-咖啡酰基熊果苷(6'-O-caffeoyl-arbutin)药物组合。
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和KIBVA药物组合处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而KIBVA药物组合则为68μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和KIBVA药物组合处理组，发现每个浓度的KIBVA药物组合处理组抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μMKIBVA药物组合处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将KIBVA药物组合移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除KIBVA药物组合后，得以恢复，所以KIBVA药物组合对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例13：
含'-O-咖啡酰基熊果苷(6'-O-caffeoyl-arbutin)在内的药物组合对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、'-O-咖啡酰基熊果苷(6'-O-caffeoyl-arbutin)药物组合的制备：采用实施例1的方法制备得KIBVA，取适量KIBVA，以3:1:1的比例加入三七总皂苷和人参总皂苷，混合均匀，即得'-O-咖啡酰基熊果苷(6'-O-caffeoyl-arbutin)药物组合。
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处 理，同对照比，熊果苷和KIBVA药物组合处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而KIBVA药物组合则为70μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和KIBVA药物组合处理组，发现每个浓度的KIBVA药物组合处理组抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μMKIBVA药物组合处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将KIBVA药物组合移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除KIBVA药物组合后，得以恢复，所以KIBVA药物组合对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例14：
含岩茶A在内的药物组合对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶A药物组合的制备：采用实施例4的方法制备得岩茶A，取适量岩茶A，以3:1:1的比例加入三七总皂苷和人参总皂苷，混合均匀，即得岩茶A药物组合。
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶A药物组合处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而岩茶A药物组合则为60μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶A药物组合处理组，发现每个浓度的岩茶A药物组合处理组抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶A药物组合处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再 将岩茶A药物组合移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶A药物组合后，得以恢复，所以岩茶A药物组合对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例15：
含岩茶B在内的药物组合对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶B药物组合的制备：采用实施例5的方法制备得岩茶B，取适量岩茶B，以3:1:1的比例加入三七总皂苷和人参总皂苷，混合均匀，即得岩茶B药物组合。
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶B药物组合处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而岩茶B药物组合则为65μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶B药物组合处理组，发现每个浓度的岩茶B药物组合处理组抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶B药物组合处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将岩茶B药物组合移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶B药物组合后，得以恢复，所以岩茶B药物组合对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例16：
含岩茶C在内的药物组合对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶C药物组合的制备：采用实施例6的方法制备得岩茶C，取适量岩茶C，以3:1:1的比例加入三七总皂苷和人参总皂苷，混合均匀，即得岩茶C药物组合。
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶C药物组合处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而岩茶C药物组合则为65μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶C药物组合处理组，发现每个浓度的岩茶C药物组合处理组抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶C药物组合处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将岩茶C药物组合移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶C药物组合后，得以恢复，所以岩茶C药物组合对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例17：
含岩茶D在内的药物组合对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶D药物组合的制备：采用实施例7的方法制备得岩茶D，取适量岩茶D，以3:1:1的比例加入三七总皂苷和人参总皂苷，混合均匀，即得岩茶D药物组合。
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶D药物组合处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而 岩茶D药物组合则为65μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶D药物组合处理组，发现每个浓度的岩茶D药物组合处理组抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶D药物组合处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将岩茶D药物组合移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶D药物组合后，得以恢复，所以岩茶D药物组合对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例18：
含岩茶E在内的药物组合对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶E药物组合的制备：采用实施例8的方法制备得岩茶E，取适量岩茶E，以3:1:1的比例加入三七总皂苷和人参总皂苷，混合均匀，即得岩茶E药物组合。
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶E药物组合处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而岩茶E药物组合则为65μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶E药物组合处理组，发现每个浓度的岩茶E药物组合处理组抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶E药物组合处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将岩茶E药物组合移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶E药物组合后，得以 恢复，所以岩茶E药物组合对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例19：
含岩茶F在内的药物组合对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶F药物组合的制备：采用实施例9的方法制备得岩茶F，取适量岩茶F，以3:1:1的比例加入三七总皂苷和人参总皂苷，混合均匀，即得岩茶F药物组合。
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶F药物组合处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而岩茶F药物组合则为65μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶F药物组合处理组，发现每个浓度的岩茶F药物组合处理组抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶F药物组合处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将岩茶F药物组合移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶F药物组合后，得以恢复，所以岩茶F药物组合对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例20：
含岩茶G在内的药物组合对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶G药物组合的制备：采用实施例10的方法制备得岩茶G，取适量岩茶G，以3:1:1的比例加入三七总皂苷和人参总皂苷，混合均匀，即得岩茶G药物组合。
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶G药物组合处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而岩茶G药物组合则为65μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶G药物组合处理组，发现每个浓度的岩茶G药物组合处理组抑制黑色素的效果比相应浓度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶G药物组合处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将岩茶G药物组合移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶G药物组合后，得以恢复，所以岩茶G药物组合对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
实施例21：
含岩茶H在内的药物组合对斑马鱼黑色素抑制的效果：
1、岩茶H药物组合的制备：采用实施例11的方法制备得岩茶H，取适量岩茶H，以3:1:1的比例加入三七总皂苷和人参总皂苷，混合均匀，即得岩茶H药物组合。
2、斑马鱼选取：
同实施例1。
3、化合物处理：
同实施例1。
4、抑制黑色素的药效学评价：
实验方法同实施例1。斑马鱼黑色素抑制实验表明：经过46小时的药物处理，同对照比，熊果苷和岩茶H药物组合处理组中，斑马鱼黑色素显著减少，在定量评价中皮肤美白效果明显；熊果苷抑制黑色素的起效浓度为100μM，而岩茶H药物组合则为65μM；同时通过比较相同浓度的熊果苷和岩茶H药物组合处理组，发现每个浓度的岩茶H药物组合处理组抑制黑色素的效果比相应浓 度的熊果苷效果好。
5、斑马鱼黑色素抑制恢复试验：
实验方法同实施例2。斑马鱼黑色素抑制恢复实验表明：经过46小时100μM岩茶H药物组合处理的斑马鱼，与对照组比较，黑色素相对减少，然而再将岩茶H药物组合移除24小时后，斑马鱼的黑色素相对增多，与对照组肉眼观察比较，已经没有显著性差异，这说明黑色素在移除岩茶H药物组合后，得以恢复，所以岩茶H药物组合对防止和改善色素沉淀具有一定的效果。
化妆品制剂实施例1：
按实施例1或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21的方法先制得本发明的上述化合物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，与赋形剂重量比为3:1的比例加入赋形剂，制成祛斑精华液。
化妆品制剂实施例2：
按实施例1或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13的方法先制得本发明的上述化合物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，制成祛斑面霜或祛斑晚霜。
化妆品制剂实施例3：
按实施例1或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21的方法先制得本发明的上述化合物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，与赋形剂重量比为9:1的比例加入赋形剂，制成祛斑乳液。
化妆品制剂实施例4：
按实施例1或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21的方法先制得本发明的上述化合物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，与赋形剂重量比为9:1的比例加入赋形剂，制成祛斑面膜膏或祛斑面膜粉。
化妆品制剂实施例5：
按实施例1或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或 16或17或18或19或20或21的方法先制得本发明的上述化合物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，与赋形剂重量比为9:1的比例加入赋形剂，制成祛斑喷雾剂。
药物制剂实施例1：
按实施例1或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21的方法先制得本发明的上述化合物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。
药物制剂实施例2：
按实施例1或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21的方法先制得本发明的上述化合物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐,将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于2安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。
药物制剂实施例3：
按实施例1或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21的方法先制得本发明的上述化合物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，与赋形剂重量比为9:1的比例加入赋形剂，制成粉剂。
药物制剂实施例4：
按实施例1或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21的方法先制得本发明的上述化合物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按其与赋形剂重量比为1:5-1:10的比例加入赋形剂，制粒压片。
药物制剂实施例5：
按实施例1或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21的方法先制得本发明的上述化合物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按常规口服液制法制成口服液。
药物制剂实施例6：
按实施例1或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21的方法先制得本发明的上述化合物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。
药物制剂实施例7：
按实施例1或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21的方法先制得本发明的上述化合物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按其与赋形剂重量比为3:1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。
Claims (15)
1.通式(I)所示的熊果苷糖酯类衍生物及其药学上可接受的盐及配糖体，
其中：R代表直链或支链的饱和烷酰基或不饱和烷酰基、或反式或顺式不饱和芳香酰基；R1代表氢原子、或直链或支链的饱和烷酰基或不饱和烷酰基、或反式或顺式不饱和芳香酰基；R2代表氢原子、和/或羟基或甲氧基或取代酰基。
2.如权利要求1所述的熊果苷糖酯类衍生物，其中R、R1为乙酰基、反式或顺式咖啡酰基、香豆酰基和桂皮酰基。
3.如权利要求1所述的熊果苷糖酯类衍生物，其中R分别为反式或顺式咖啡酰基，R1分别为氢原子或乙酰基，R2分别为氢原子或羟基或甲氧基时的化合物：对羟基苯酚-O-(6'-O-顺式咖啡酰基)-β-D-葡萄糖苷，即岩茶苷A、2,4-二羟基苯酚-O-(6'-O-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖苷，即岩茶苷B、3,4-二羟基苯酚-O-(6'-O-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖苷，即岩茶苷C、3-甲氧基-4-羟基苯酚-O-(6'-O-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖苷，即岩茶苷D、对羟基苯酚-O-(4'-O-乙酰基-6'-O-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖苷，即岩茶苷E，
岩茶苷A
岩茶苷B
岩茶苷C
岩茶苷D
岩茶苷E。
4.如权利要求1所述的熊果苷糖酯类衍生物，其中R为反式或顺式咖啡酰基、香豆酰基和桂皮酰基，R1和R2为氢原子，结构式如(II)所示，R3和R4代表氢原子、羟基或甲氧基，
5.如权利要求4所述的熊果苷糖酯类衍生物，为如下结构式所述的化合物岩茶苷F和岩茶苷G，
岩茶苷F
岩茶苷G。
6.如权利要求1所述的熊果苷糖酯类衍生物，其中R为反式或顺式咖啡酰基、香豆酰基和桂皮酰基，R1和R2为氢原子，如结构式(III)所示，R5和R6代表氢原子、羟基或甲氧基，
7.如权利要求6所述的熊果苷糖酯类衍生物，为如下结构式所示的岩茶苷H，
岩茶苷H。
8.权利要求1-7任一项所述的熊果苷糖酯类衍生物在制备化妆品中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述化妆品为皮肤美白类化妆品。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述化妆品为祛斑类化妆品。
11.权利要求1-7任一项所述的熊果苷糖酯类衍生物在制备治疗色素沉着性疾病的药物中的应用。
12.权利要求1-7任一项所述的熊果苷糖酯类衍生物作为黑色素抑制剂。
13.权利要求1-7任一项所述的熊果苷糖酯类衍生物在制备黑色素抑制剂中的应用。
14.权利要求1-7任一项所述的熊果苷糖酯类衍生物，以及包含熊果苷糖酯类衍生物在内的两种或两种以上的美白皮肤、祛斑及治疗色素沉着性皮肤病的药物组成的复方在制备化妆品中和黑色素抑制剂中的应用。
15.如权利要求14所述的包含熊果苷糖酯类衍生物在内的两种或两种以上的美白皮肤、祛斑及治疗色素沉着性皮肤病的药物组成的复方的应用，其特征在于所述的复方为含熊果苷糖酯类衍生物和三七总皂苷的药物组合、熊果苷糖酯类衍生物和三七总皂苷和人参总皂苷的药物组合。
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