CN103239760B - 防粘连外科补片及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种防粘连外科补片及其制备方法。本发明提供的制备防粘连外科补片的方法，包括如下步骤：（1）使用碱溶液浸泡处理离体的动物腹膜组织；（2）使用表面活性剂溶液浸泡处理步骤（1）的产物；（3）使用碱溶液浸泡处理步骤（2）的产物；（4）使用pH5.8-7.8的辐照保护试剂溶液浸泡处理步骤（3）的产物；（5）使用PBS缓冲液浸泡处理步骤（4）的产物；（6）将步骤（5）的产物依次进行冷冻干燥和辐照灭菌，得到防粘连外科补片。本发明提供的外科补片具有天然的双层膜结构，可以有效防止粘连反应的发生，最大化保证了内源性修复的进行，并成功抑制了外源性修复的发生。

Description

防粘连外科补片及其制备方法

技术领域

本发明属于植入医疗器械领域，具体涉及一种用于外科手术的防粘连外科补片及其制备方法。

背景技术

在现代外科手术中，在组织切除或部分切除、脑膜损伤修复、肌腱损伤修复等手术后，很容易发生粘连反应。

受伤组织的修复分为内源性修复和外源性修复两种途径：若营养供应充分，吻合质量高则为内源性愈合，这种愈合很少发生粘连；反之，外源性愈合占优势，修复的组织周围会发生大量粘连。

组织的内源性愈合必须以组织良好的营养状态为基础。但是人到中年以后组织的自我修复能力和供养能力都会变弱，另外部分组织器官由于自身特点，其供养也不充分，所以很难靠内源性愈合来压制外源性愈合，粘连也就很难避免。

为了让组织更好更快的修复，防止发生粘连，会选择使用防粘连膜。例如肌腱损伤修复后常见的并发症就是肌腱粘连，如何防止周围组织侵入愈合过程中的肌腱组织是目前外科手术中的难题。

现代外科手术中，80%以上的并发症是由于发生粘连反应而产生的。不使用防粘连膜很难保证损伤器官正常修复。所以在手术过程中会选择使用防粘连膜，现有的防粘连膜有两种：一是人工合成的聚合材料膜，这种膜在人体中不能完全被降解，会作为永久性异物留在身体中；二是纯天然的胶原蛋白膜材料，这种材料的缺点是降解过快，尤其是在体液或血液丰富的位置，其往往在损伤器官还没愈合时就降解完毕，导致只能防止阶段性的粘连反应的发生，当胶原材料降解完毕，损伤器官依然会发生粘连反应。

发明内容

本发明的目的是提供一种防粘连外科补片及其制备方法。

本发明提供的制备防粘连外科补片的方法，包括如下步骤：

（1）使用碱溶液浸泡处理离体的动物腹膜组织；

（2）使用表面活性剂溶液浸泡处理步骤（1）的产物；

（3）使用碱溶液浸泡处理步骤（2）的产物；

（4）使用pH5.8-7.8（如pH5.8-6.8、pH6.8-7.8、pH5.8、pH6.8或pH7.8）的辐照保护试剂溶液浸泡处理步骤（3）的产物；

（5）使用PBS缓冲液浸泡处理步骤（4）的产物；

（6）将步骤（5）的产物依次进行冷冻干燥和辐照灭菌，得到防粘连外科补片。

所述步骤（1）中：所述碱溶液可为碱性化合物溶液。所述碱性化合物可为NaOH、KOH或Ca(OH)₂。所述碱性化合物溶液中，所述碱性化合物的浓度可为0.2-2M（如0.2-0.5M、0.5-2M、0.2M、0.5M或2M）。所述步骤（1）中：所述浸泡处理的条件可为：0-25℃（如0-8℃、4-25℃、2±2℃、6±2℃或23±2℃）、60-90分钟（如60-70分钟、70-90分钟、60分钟、70分钟或90分钟）。所述碱溶液具体可为碱性化合物的水溶液。

所述步骤（2）中：所述表面活性剂可为非离子型表面活性剂，要求残留可控、无细胞毒性或低细胞毒性、不会污染环境。所述步骤（2）中：所述表面活性剂可为TritonX-100、Tween-80或Tween-40。所述表面活性剂溶液中，表面活性剂的浓度可为0.5-3g/100ml（如0.5-1g/100ml、1g-3g/100ml、0.5g/100ml、1g/100ml或3g/100ml）。所述步骤（2）中：所述浸泡处理的条件可为：0-25℃（如0-10℃、6-25℃、2±2℃、8±2℃或23±2℃）、5-168小时（如5-10小时、10-168小时、5小时、10小时或168小时）。所述表面活性剂溶液具体可为表面活性剂水溶液。

所述步骤（3）中：所述碱溶液可为碱性化合物溶液。所述碱性化合物可为NaOH、KOH或Ca(OH)₂。所述碱性化合物溶液中，所述碱性化合物的浓度可为0.2-2M（如0.2-0.5M、0.5-1M、1-2M、0.2M、0.5M、1M或2M）。所述步骤（3）中：所述浸泡处理的条件可为：0-25℃（如0-10℃、6-25℃、2±2℃、8±2℃或23±2℃）、60-90分钟（如60-70分钟、70-90分钟、60分钟、70分钟或90分钟）。所述碱溶液具体可为碱性化合物的水溶液。

所述步骤（4）中：所述辐照保护试剂可为芦丁。所述辐照保护试剂溶液中，所述辐照保护试剂的浓度可为0.01-0.5g/100ml（如0.01-0.1g/100ml、0.1g-0.5g/100ml、0.01g/100ml、0.1g/100ml或0.5g/100ml）。所述步骤（4）中：所述浸泡处理的条件可为：18-28℃（如18-25℃、21-28℃、20±2℃、23±2℃或26±2℃）、1-5小时（如1-3小时、3-5小时、1小时、3小时或5小时）。所述辐照保护试剂溶液具体可为辐照保护试剂水溶液。为了在实现产品无菌保证的前提下，最大化减少产品本身受到破坏，后续步骤采用了辐照灭菌，所以本步骤采取辐照保护剂处理，进一步减少辐照对产品的破坏。

所述步骤（5）中：所述PBS缓冲液的pH可为5.8-7.8（如5.8-6.5、6.5-7.8、5.8、6.5或7.8）。所述步骤（5）中：所述浸泡处理的条件可为：0-25℃（如0-10℃、6-25℃、2±2℃、8±2℃或23±2℃）、4-168小时（如4-10小时、10-168小时、4小时、10小时或168小时）。

所述灭菌为钴-60辐射灭菌。所述钴-60辐射灭菌的辐照剂量具体可为15-30KGy（如15-25KGy、25-30KGy、15KGy、25KGy或30KGy）。

所述动物具体可为猪或牛。

所述腹膜组织（主要成分为胶原蛋白）具体可为子宫组织。

以上任一所述方法制备得到的防粘连外科补片均属于本发明的保护范围。

本发明提供的外科补片，具有天然的双层膜结构，可以有效防止粘连反应的发生。其光滑面可以有效隔离损伤器官和周围组织，有效防止周围组织的侵入；非光滑面可以与损伤器官良好贴合，并保证血液、体液的交换与流通。最大化保证了内源性修复的进行，并成功抑制了外源性修复的发生。

附图说明

图1为冷冻干燥后得到的产物的照片。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

芦丁：国药集团化学试剂有限公司，产品编号为U1606503，CAS编号为250249-75-3。该商购的芦丁的分子式为C₂₇H₃₀O₁₆·3H₂O，实施例中制备的芦丁溶液的浓度均以C₂₇H₃₀O₁₆计。

芦丁的结构式如下：

实施例1、防粘连外科补片的制备

1、从规范化管理的屠宰厂中收集刚完成屠宰的猪的子宫，尽量避免接触污染物，收集后立即冷冻储存。

2、将步骤1得到的子宫解冻并充分清洗，修剪去除不易加工的部分。

3、第一次碱处理

使用碱溶液浸泡处理步骤2的产物。

本步骤的目的为：使膜组织中的非胶原类蛋白变性水解、溶出。

具体步骤：使用2M NaOH水溶液，6±2℃浸泡处理60分钟，然后用清水洗涤。

4、表面活性剂处理

使用表面活性剂溶液浸泡处理步骤3的产物。

本步骤的目的为：破坏细胞膜结构，使细胞破碎溶出。

具体步骤：使用0.5g/100ml TritonX-100水溶液8±2℃浸泡处理10小时，然后用清水洗涤。

5、第二次碱处理

使用碱溶液浸泡处理步骤4的产物。

本步骤的目的为：去除可能存在的内毒素及灭活可能存在的病毒。

具体步骤：使用1M NaOH水溶液，8±2℃浸泡处理60分钟，然后用清水洗涤。

6、辐照保护剂处理

用pH5.8-7.8的辐照保护试剂溶液浸泡处理步骤5的产物。

具体步骤：使用pH6.8、0.1g/100ml的芦丁水溶液，23±2℃浸泡处理3小时，然后用清水洗涤。

也可以用辐照保护试剂溶液对步骤5的产物进行表面涂抹，来代替浸泡处理。

7、缓冲处理

用pH5.8-7.8的PBS缓冲液浸泡处理步骤6的产物。

具体步骤：使用pH6.5的PBS缓冲液，8±2℃浸泡10小时，然后用清水洗涤。

pH6.5的PBS缓冲液的制备方法：取磷酸二氢钾0.68g，加0.1M氢氧化钠水溶液15.2ml，用水稀释至100ml。

8、取步骤7的产物，使用冻干机进行冷冻干燥，然后封装并用钴-60辐射灭菌，（辐照剂量为25KGy）。照片见图1。

实施例2、防粘连外科补片的制备

1、从规范化管理的屠宰厂中收集刚完成屠宰的牛的子宫，尽量避免接触污染物，收集后立即冷冻储存。

2、将步骤1得到的子宫解冻后并充分清洗，修剪去除不易加工的部分。

3、第一次碱处理

使用碱溶液浸泡处理步骤2的产物。

本步骤的目的为：使膜组织中的非胶原类蛋白变性水解、溶出。

具体步骤：使用0.5M KOH水溶液，2±2℃浸泡处理70min，然后用清水洗涤。

4、表面活性剂处理

使用表面活性剂溶液浸泡处理步骤3的产物。

本步骤的目的为：破坏细胞膜结构，使细胞破碎溶出。

具体步骤：使用1g/100ml Tween-80水溶液23±2℃浸泡处理5小时，然后用清水洗涤。

5、第二次碱处理

使用碱溶液浸泡处理步骤4的产物。

本步骤的目的为：去除可能存在的内毒素及灭活可能存在的病毒。

具体步骤：使用0.5M KOH水溶液，2±2℃浸泡处理70min，然后用清水洗涤。

6、辐照保护剂处理

用pH5.8-7.8的辐照保护试剂溶液浸泡处理步骤5的产物。

具体步骤：使用pH5.8、0.01g/100ml的芦丁水溶液，26±2℃浸泡处理5小时，然后用清水洗涤。

也可以用辐照保护试剂溶液对步骤5的产物进行表面涂抹，来代替浸泡处理。

7、缓冲处理

用pH5.8-7.8的PBS缓冲液浸泡处理步骤6的产物。

具体步骤：使用pH5.8的PBS缓冲液，23±2℃浸泡处理4小时，然后用清水洗涤。

pH5.8的PBS缓冲液的制备方法：取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g，加水使溶解成1000ml。

8、取步骤7的产物，使用冻干机进行冷冻干燥，然后封装并用钴-60辐射灭菌，（辐照剂量为15KGy）。

实施例3、防粘连外科补片的制备

1、从规范化管理的屠宰厂中收集刚完成屠宰的猪的腹膜，尽量避免接触污染物，收集后立即冷冻储存。

2、将步骤1得到的腹膜解冻后并充分清洗，修剪去除不易加工的部分。

3、第一次碱处理

使用碱溶液浸泡处理步骤2的产物。

本步骤的目的为：使膜组织中的非胶原类蛋白变性水解、溶出。

具体步骤：使用0.2M Ca(OH)₂水溶液，23±2℃浸泡处理90min，然后用清水洗涤。

4、表面活性剂处理

使用表面活性剂溶液浸泡处理步骤3的产物。

本步骤的目的为：破坏细胞膜结构，使细胞破碎溶出。

具体步骤：使用3g/100ml Tween-40水溶液2±2℃浸泡处理168小时，然后用清水洗涤。

5、第二次碱处理

使用碱溶液浸泡处理步骤4的产物。

本步骤的目的为：去除可能存在的内毒素及灭活可能存在的病毒。

具体步骤：使用0.2M Ca(OH)₂水溶液，23±2℃浸泡处理90min，然后用清水洗涤。

6、辐照保护剂处理

用pH5.8-7.8的辐照保护试剂溶液浸泡处理步骤5的产物。

具体步骤：使用pH7.8、0.5g/100ml的芦丁水溶液，20±2℃浸泡处理1小时，然后用清水洗涤。

也可以用辐照保护试剂溶液对步骤5的产物进行表面涂抹，来代替浸泡处理。

7、缓冲处理

用pH5.8-7.8的PBS缓冲液浸泡处理步骤6的产物。

具体步骤：使用pH7.8的PBS缓冲液，2±2℃浸泡处理168小时，然后用清水洗涤。

pH7.8的PBS缓冲液的制备方法：取磷酸氢二钠35.9g，加水溶解，并稀释至500ml，得到甲液；取磷酸二氢钠2.76g，加水溶解，并稀释至100ml，得到乙液；将甲液91.5ml与乙液8.5ml混合，摇匀。

8、取步骤7的产物，使用冻干机进行冷冻干燥，然后封装并用钴-60辐射灭菌，（辐照剂量为30KGy）。

实施例4、防粘连外科补片的性能

采用力学测量仪（微机控制电子万能试验机，深圳市新三思计量技术有限公司，型号CMT8502），以25mm/min的速度对使用缝合线缝合的产品进行拉伸，实施例1得到的防粘连外科补片的撕裂力大约是5-8N，实施例2得到的防粘连外科补片的撕裂力大约是10-12N，实施例3得到的防粘连外科补片的撕裂力大约是9-12N，均完全符合缝合要求。

实施例5、动物实验

1、取雌性来享鸡，体重1.5-1.8kg，用氯胺酮肌肉注射麻醉后，常规消毒铺巾，上高位止血带，在无菌条件下，取鸡的右足第3趾，采用“L”形切口暴露第3趾的趾浅及趾深屈肌腱。于中节趾骨处切断趾浅及趾深屈肌腱。

2、完成步骤1后，将实验动物分成四组，分别进行如下处理：

第一组：实验动物的趾浅屈肌腱不进行处理，趾深屈肌腱在断裂处直接缝合；

第二组：实验动物的趾浅屈肌腱不进行处理，趾深屈肌腱在断裂处用实施例1制备的防粘连外科补片修补缺口并缝合；

第三组：实验动物的趾浅屈肌腱不进行处理，趾深屈肌腱在断裂处用实施例1制备的防粘连外科补片修补缺口并缝合；

第四组：实验动物的趾浅屈肌腱不进行处理，趾深屈肌腱在断裂处用实施例1制备的防粘连外科补片修补缺口并缝合。

各组实验动物缝合2周、4周和6周后伤口皮肤均无红肿、硬结等感染征象。第一组试验动物：缝合4周后，可以观察到肌腱周围水肿减轻，可见肌腱断裂端与周围组织结合紧密，可分离，但较困难；缝合6周后，可见炎症反应消退，肌腱与周围组织明显粘连，无法钝性分离。第二组、第三组和第四组实验动物各个时期的表型一致：缝合4周后，可见缝合口处略膨大、表面光滑，与周围组织无粘连；缝合6周后，吻合口膨大消失，腱外形回复正常，肌腱表面光滑与周围组织无粘连。

Claims (5)

1.一种制备防粘连外科补片的方法，包括如下步骤：

(1)使用碱溶液浸泡处理离体的动物腹膜组织；所述步骤(1)中：所述碱溶液为碱性化合物溶液，所述碱性化合物为NaOH、KOH或Ca(OH)₂；所述碱性化合物溶液中，所述碱性化合物的浓度为0.2-2M；所述浸泡处理的条件为：0-25℃、60-90分钟；

(2)使用表面活性剂溶液浸泡处理步骤(1)的产物；所述步骤(2)中：所述表面活性剂为TritonX-100、Tween-80或Tween-40；所述表面活性剂溶液中，表面活性剂的浓度为0.5-3g/100ml；所述浸泡处理的条件为：0-25℃、5-168小时；

(3)使用碱溶液浸泡处理步骤(2)的产物；所述步骤(3)中：所述碱溶液为碱性化合物溶液，所述碱性化合物为NaOH、KOH或Ca(OH)₂；所述碱性化合物溶液中，所述碱性化合物的浓度为0.2-2M；所述浸泡处理的条件为：0-25℃、60-90分钟；

(4)使用pH5.8-7.8的辐照保护试剂溶液浸泡处理步骤(3)的产物；

(5)使用PBS缓冲液浸泡处理步骤(4)的产物；所述步骤(5)中：所述PBS缓冲液的pH为5.8-7.8；所述浸泡处理的条件为：0-25℃、4-168小时；

(6)将步骤(5)的产物依次进行冷冻干燥和辐照灭菌，得到防粘连外科补片。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(4)中：所述辐照保护试剂为芦丁；所述辐照保护试剂溶液中，所述辐照保护试剂的浓度为0.01-0.5g/100ml；所述浸泡处理的条件为：18-28℃、1-5小时。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述灭菌为钴-60辐射灭菌。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述动物为猪或牛。

5.权利要求1至4中任一所述方法制备得到的防粘连外科补片。