CN103214551A

CN103214551A - 毛木耳降血脂功能蛋白质提取物制备方法及其应用

Info

Publication number: CN103214551A
Application number: CN2013100070368A
Authority: CN
Inventors: 赵爽; 刘宇; 许峰; 王守现; 王兰青; 耿小丽; 殷贝贝; 陈杰; 孟莉莉
Original assignee: Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences
Current assignee: Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences
Priority date: 2013-01-08
Filing date: 2013-01-08
Publication date: 2013-07-24
Anticipated expiration: 2033-01-08
Also published as: CN103214551B

Abstract

本发明公开了毛木耳降血脂功能蛋白质提取物制备方法及其应用。该毛木耳降血脂功能蛋白质提取物的制备方法包括：1）将毛木耳子实体粉碎后用水浸提，收集水溶性物质得到毛木耳水溶性提取物；2）对所述毛木耳水溶性提取物进行饱和度为30%的硫酸铵沉淀，收集水溶性物质；对所述水溶性物质进行饱和度为80%的硫酸铵沉淀，收集沉淀，对所述沉淀用去离子水透析后，得到所述毛木耳蛋白质提取物。本发明的毛木耳蛋白质提取物在降低血脂中各项指标中，对总胆固醇含量、甘油三酯含量和低密度脂蛋白胆固醇含量都有降低的作用，可以综合缓解高血脂症的情况，在降脂初期明显降低三种指标在血液中的浓度，可以应用到降脂保健食品和药物的研发领域。

Description

毛木耳降血脂功能蛋白质提取物制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用，特别涉及毛木耳降血脂功能蛋白质提取物制备方法及其应用。

背景技术

随着人们生活水平的不断提高，高能高脂食物的大量摄入、饮酒量的增加以及运动量的减少致使高脂血症的发病率呈明显上升趋势，高血脂症是诱发冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)、动脉硬化、脂肪肝、糖尿病、肥胖症等的重要因素。因此寻找高效无毒的降血脂药物有重要的现实意义。近些年来，在治疗高脂血症方面，中医采用天然药食两用药材研制成的降脂中药，因其具有降脂作用确切，毒副作用小，材料容易获得且价格便宜等优势得到了较大的发展。到目前为止，研究表明,具有降脂作用的单味中药大约有七十多种，但是食用菌来源的材料比较少。食用菌被认为是临床效果较为确切的一类低毒而免疫活性强的生物类物质，具有丰富的营养和保健作用。

毛木耳隶属于担子菌门、层菌纲、木耳目、木耳科、木耳属。学名Auriculariapolytricha，又名构耳、粗木耳，又称黄背木耳、白背木耳。据中国科学院成都生物所分析，毛木耳干品含氨基酸的总量为41.68%。有人体必需氨基酸7种，占总量的42.31%，有其它氨基酸9种，占总量的57.69%。从中医角度上分析，毛木耳入药有益气强身、活血、止血、止痛之功效。可治寒湿性腰腿疼痛、产后虚弱、抽筋麻木、外伤引起的疼痛、血脉不通、麻木不仁、手足抽搐、白带过多、便血、痔疮出血、子宫出血、反胃多痰、年老生疮久不封口等病症。毛木耳是一种食药同源的真菌，具有潜在开发应用的前景。

发明内容

本发明所要解决的一个技术问题是提供毛木耳蛋白质提取物。

本发明所提供的毛木耳蛋白质提取物，按照包括如下步骤的方法制备：

1）将毛木耳子实体粉碎后用水浸提，收集水溶性物质得到毛木耳水溶性提取物；

2）对所述毛木耳水溶性提取物进行饱和度为30%的硫酸铵沉淀，收集水溶性物质；对所述水溶性物质进行饱和度为80%的硫酸铵沉淀，收集沉淀，对所述沉淀用去离子水透析后，得到所述毛木耳蛋白质提取物。

上述步骤1）中，所述用水浸提可为在2-6℃用水浸提10-14小时。所述水可为去离子水。

所述毛木耳子实体可粉碎至50-100目，如100目。

所述毛木耳子实体和水的质量比可为1：40-60，如1：40，所述毛木耳子实体的质量为干重。

所述毛木耳子实体可为新鲜的子实体也可为干燥的子实体。

所述干燥的子实体是将新鲜的毛木耳子实体在常温（如20-25℃）下干燥得到的。

上述步骤2）中，所述饱和度均为硫酸铵在4℃的饱和度。

上述步骤2）中，可采用离心收集所述水溶性物质。所述离心采用的离心力可为6000-15000g（如12000g），离心时间可为10-20分钟（如15分钟）。也可采用离心收集所述沉淀。所述离心采用的离心力可为6000-15000g（如12000g），离心时间可为10-20分钟（如15分钟）。

上述方法中，所述透析采用的半透膜的截留分子量为3kDa。

上述制备方法还包括将透析后的半透膜内的液体在7000-14000g（如8500g），离心10-20分钟（如15分钟），收集上清液，将该上清液进行冷冻干燥，制备成毛木耳蛋白质提取物干粉的步骤。

制备上述毛木耳蛋白质提取物的方法也属于本发明的保护范围。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供上述毛木耳蛋白质提取物的用途。

本发明所提供的上述毛木耳蛋白质提取物的用途，为下述A或B：

A、一种降血脂的产品，其活性成分为上述毛木耳蛋白质提取物；

B、上述毛木耳蛋白质提取物在制备降血脂产品（如药物或食品）中的应用。

其中，所述降血脂可为下述1）-3）中的至少一种：

1）降低血清中总胆固醇含量；

2）降低血清中甘油三酯含量；

3）降低血清中低密度脂蛋白胆固醇含量。

本发明的毛木耳蛋白质提取物在降低血脂中各项指标中，对总胆固醇含量、甘油三酯含量和低密度脂蛋白胆固醇含量都有降低的作用，可以综合缓解高血脂症的情况，在降脂初期明显降低三种指标在血液中的浓度，可以应用到降脂保健食品和药物的研发领域。

附图说明

图1为毛木耳蛋白提取物降低血脂中各项指标图。

图中，低表示低剂量降血脂药物组，高表示高剂量降血脂药物组。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中的毛木耳（Auricularia polytricha(Mont.)Sacc.）3号（赵爽等.毛木耳菌丝体产多糖发酵条件的优化.食品科技.2012年第37卷第4期）公众可从北京市农林科学院获得该菌种，以重复本申请实验。

实施例1、毛木耳蛋白质提取物的制备

1、制备毛木耳子实体

将毛木耳（Auricularia polytricha(Mont.)Sacc.）3号斜面菌种接种到一级种培养基中进行活化，25℃恒温培养，待菌丝长满试管后将其接种到二级种培养基中，25℃恒温培养室培养至菌丝长满，将二级种接种到装有栽培培养基的栽培袋中25℃的条件下进行发菌，菌种长满栽培袋后进行搔菌并移入温室大棚，出菇条件保持湿度在90%以上，温度约为20-25℃，收集第一潮子实体，得到毛木耳（Auriculariapolytricha(Mont.)Sacc.）3号子实体。

其中，该实验所用的培养基如下：

一级种培养基：200g马铃薯，20g葡萄糖，20g琼脂粉，3g KH₂PO₄，10mg维生素B1,5g蛋白胨，1.5g MgSO₄，1000mL蒸馏水，经121℃，30min高压灭菌。

二级种培养基：棉籽壳80%，麸皮18%，石膏1%，糖1%，料水比为1:1，经121℃，30min高压灭菌。

栽培培养基：木屑50%，棉籽壳28%，麸皮20%，糖1%，石膏1%，料水比为1:1-1.2。经121℃，30min高压灭菌。

2、制备毛木耳水溶性提取物

1）收集毛木耳（Auricularia polytricha(Mont.)Sacc.）3号子实体，在20-25℃晾晒得到干品后，粉碎研磨制成100目的均一毛木耳粉；

2）用40质量份的去离子水浸泡1质量份的毛木耳粉，浸泡12小时，12000g离心15min，收集上清液，该上清液即为毛木耳水溶性提取物。

3、制备毛木耳蛋白质提取物

对步骤2的毛木耳水溶性提取物首先在4℃进行饱和度为30%的硫酸铵沉淀（即向步骤2的毛木耳水溶性提取物中加入硫酸铵至硫酸铵的饱和度为30%），沉淀4h后，12000g离心15min，收集上清液，对该上清液在4℃进行饱和度为80%的硫酸铵沉淀（即向该上清液中加入硫酸铵至硫酸铵的饱和度为80%），沉淀4h后，12000g离心15min，收集沉淀，对该沉淀进行透析。其中，透析采用的半透膜的截留分子量为3kDa，沉淀在半透膜中在流动的自来水中透析5h，再在去离子水中透析12h。将透析后的半透膜内的液体在8500g离心15min，收集上清液，将该上清液液氮冷冻后，进行冷冻干燥，制备成毛木耳蛋白质提取物干粉。

实施例2、毛木耳蛋白质提取物降血脂实验

1、降血脂药物的制备

用去离子水溶解实施例1制备的毛木耳蛋白质提取物干粉，得到蛋白质含量为6.67mg/ml毛木耳蛋白质提取物水溶液作为降血脂药物。

其中，毛木耳蛋白质提取物水溶液的蛋白质含量的测定方法如下：

1）标准曲线的制作：利用标准样品小牛血清蛋白（BSA）配置成不同浓度的蛋白溶液，采用BCA（北京博迈德科技公司）蛋白定量试剂盒制作标准曲线。

2）采用BCA蛋白定量试剂盒测定毛木耳蛋白质提取物水溶液中蛋白质含量。

2、高血脂模型的构建

雄性SD大鼠共80只，随机分为2组，第1组10只为正常组，喂以基础饲料；第2组70只为高脂组，喂以高脂饲料。采取大鼠自由取食的方式，饮水不限，实验前记录大鼠体重。60天后，全部大鼠禁食12h，取血，采用血脂仪（7100全自动生化分析仪，日本日立公司）测定血脂各项生理指标：血清总胆固醇(TC)，血清甘油三酯(TG)，血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，并测量大鼠体重。试验所有数据采用SPSS12.0（SPSS Inc.，USA）统计软件的独立样本t检验处理统计。

结果如表1所示，表明高脂组的血清总胆固醇含量、血清甘油三酯(TG)含量和血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量均显著高于正常组（p＜0.05），高脂组的血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量与正常组无显著差异（p＞0.05）。说明得到高血脂模型。

表1、正常组和高脂组的血脂含量

注：数据结果以平均数±标准差表示（n=3），经单因素方差分析，其中*表示的是高脂组与正常组相比较具有显著性差异（P<0.05）的结果。

其中，基础饲料购自北京华阜康生物科技股份有限公司。高脂饲料组成为：在该基础饲料中添加1％基础饲料质量的胆固醇、10％基础饲料质量的猪油、0.1％基础饲料质量的胆酸盐、10％基础饲料质量的蛋黄粉，得到高脂饲料。

3、降脂实验

从步骤2的高血脂模型中选取21只高血脂大鼠，每只体重均在0.45-0.55kg之间，均分为三组，分别为高脂组、低剂量降血脂药物组和高剂量降血脂药物组，每组7只。另外，从步骤2的正常组中随机选7只大鼠作为正常组。高脂组每天饲喂步骤2的高脂饲料；低剂量降血脂药物组每天饲喂步骤2的高脂饲料，并以灌胃的形式每天给予每只大鼠1.5ml步骤1的降血脂药物；高剂量降血脂药物组饲喂步骤2的高脂饲料，并以灌胃的形式每天给予每只大鼠3ml步骤1的降血脂药物；正常组每天饲喂步骤2的基础饲料。上述各组按照上述饲喂方式饲喂28天。每7天尾静脉取血，采用血脂仪（7100全自动生化分析仪，日本日立公司）测定血脂各项生理指标：血清总胆固醇(TC)，血清甘油三酯(TG)，血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。试验所有数据采用SPSS12.0（SPSS Inc.，USA）统计软件的独立样本t检验处理统计。

表2、各组中血脂含量

注：数据结果以平均数±标准差表示（n=3），经单因素方差分析，其中*表示的是药物处理组与高脂组相比较具有显著性差异（P<0.05）的结果。

结果图表2和图1，表明低剂量降血脂药物组和高剂量降血脂药物组与高脂组相比较，可以到达显著性差异的水平，低剂量降血脂药物和高剂量降血脂药物可以有效降低高脂动物的血脂中TC、TG和LDL-C的含量。低剂量降血脂药物组和高剂量降血脂药物组之间并未在所有的血脂指标都达到统计学上5%的差异，同样在给药前期阶段，降脂效果较为明显，低剂量降血脂药物组在降脂7d时可降低TC率高达48.1%，高剂量降血脂药物组在降脂7d时降低TG率高达52.1%，低剂量降血脂药物组在降脂14d时降低LDL-C率高达66.9%。说明毛木耳蛋白质提取物在降低血脂中各项指标中，对TC、TG和LDL-C三种指标都有降低的作用，可以综合缓解高血脂症的情况，在降脂初期明显降低三种指标在血液中的浓度，可以应用到降脂保健食品和药物的研发领域。

Claims

1.毛木耳蛋白质提取物的制备方法，包括：

2.权利要求1所述的制备方法制备的毛木耳蛋白质提取物。

3.一种降血脂的产品，其活性成分为权利要求2所述的毛木耳蛋白质提取物。

4.根据权利要求3所述的产品，其特征在于：所述降血脂为下述1）-3）中的至少一种：

1）降低血清中总胆固醇含量；

2）降低血清中甘油三酯含量；

3）降低血清中低密度脂蛋白胆固醇含量。

5.权利要求2所述的毛木耳蛋白质提取物在制备降血脂产品中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述降血脂为下述1）-3）中的至少一种：

1）降低血清中总胆固醇含量；

2）降低血清中甘油三酯含量；

3）降低血清中低密度脂蛋白胆固醇含量。