CN103191132B - 一种从蟾酥中提取脂蟾毒配基的方法 - Google Patents
一种从蟾酥中提取脂蟾毒配基的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种从中药蟾酥中提取高纯度脂蟾毒配基的制备方法，蟾酥粉碎成中粗粉后，加入70～95%乙醇提取，提取液经过硅胶柱层析分离，得到高纯度的脂蟾毒配基，脂蟾毒配基的含量达到98%以上。本发明方法简单，所得提取物的纯度较高。
Description
技术领域
本发明涉及一种从中药蟾酥中提取高纯度脂蟾毒配基的方法，属于中药技术领域。
背景技术
中药蟾酥来源于蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍Bufo melanostictus Schneider的干燥分泌物。辛，温；有毒。归心经具有解毒，止痛，开窍醒神功能，有毒。用于痈疽疔疮，咽喉肿痛，中暑神昏，痧胀腹痛吐泻。蟾酥因现代药理研究表明其具有抗肿瘤、抗病原微生物和强心等作用而收到了国内外的重视，其所含的脂蟾毒配基即是其活性成分之一，且是蟾酥中含量较高的活性成分。但脂蟾毒配基同时也是其毒性成分之一。
蟾酥因产地不同、加工方法不同和采收季节和时间的差异，蟾酥中脂蟾毒配基的含量差异较大，不利于较好的控制其药效，因此提纯蟾酥中的活性成分是较好的保证其安全性和有效性的手段。但是，现有技术中提取的脂蟾毒配基的提取物一般纯度较低。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种从中药蟾酥中提取高纯度脂蟾毒配基的方法，脂蟾毒配基的含量大于98%。其方法如下：
（1）蟾酥粉碎成通过20目筛的细粉，加入20～40倍蟾酥量的70～95%乙醇，加热回流提取2～3次，每次提取2～4小时，提取液滤过，滤液回收乙醇至无乙醇味，得乙醇提取液A。
（2）提取液A中，加入5倍蟾酥量，粒度为100～200目的硅胶，蒸干，加入已装有硅胶的层析住的顶端（硅胶柱的径高比为1:3～10，装量为提取液A中蟾酥量的10～30倍），以石油醚-丙酮（9:1）混合溶剂为洗脱剂洗脱，洗脱至脂蟾毒配基成分洗脱完全，得洗脱液B。
（3）洗脱液B加热回收溶剂，减压干燥器内干燥48h，得高纯度的脂蟾毒配基提取物。
下面为本发明的实验内容及结果：
1.提取方法：
根据蟾酥药材的性质，药材的粒度选择为40目。
根据影响提取的因素，用正交试验法考察提乙醇浓度（A）、提取时间（B）、料液比（C）对提取效果的影响，考察的因素及水平见表1，考察指标为提取的脂蟾毒配基的量和提取浸膏量。考察因素及水平见表1。
表1 蟾酥提取条件考察L9(33)正交水平设计表
取蟾酥粉末（40目）2.0g，共9份，精密称定，置圆底烧瓶中，按正交表布表组合进行提取，提取液抽滤，合并两次滤液，混匀，加相应浓度乙醇定容至250ml，混匀，得蟾酥提取液。测定提取液中脂蟾毒配基的量和提取浸膏量，结果见表2、表3、表4。
表2 蟾酥提取正交实验结果
注：三种成分的百分含量为每100g蟾酥原药材中所含各个成分的克数，即g/100g。
表3 脂蟾毒配基方差分析表
表4 浸膏率方差分析表
从实验结果可以看出，在设计的范围内，各因素及不同水平对脂蟾毒配基的提取效果影响较小，但乙醇的浓度对浸膏的提取量影响较大（P<0.01）。乙醇浓度越高，提取的浸膏量越小，提取浸膏中，脂蟾毒配基的含量越高，杂质越少，因此，为了纯化时方便，提取溶剂优选用95%乙醇。
纯化方法
2.1蟾酥提取液的制备：精密称取蟾酥药材40g，精密称定，置圆底烧瓶中，加乙醇加热回流提取2次，第一次加乙醇960ml，加热回流1h，第二次，加乙醇640ml，加热回流1h，滤过，合并滤液，回收乙醇至约1000ml，置1000ml容量瓶内，加乙醇至刻度，摇匀，即得。
2.2径高比的考察
硅胶柱的预处理：称取30g硅胶，以石油醚-丙酮（9:1）混合溶剂为洗脱剂，湿法装柱，洗脱1.5个柱体积。三组硅胶柱的径高比为：2:20、2.5:13.5、3:9。
上样硅胶的制备：精密移取50ml蟾酥提取液3份，分别置蒸发皿内，水浴挥去溶剂至约2ml，加入1g硅胶（100目～200目）混合均匀，挥干溶剂，即得。
取3份上样硅胶，分别干法上样到预处理好的硅胶柱上，饱和30min，洗脱，洗脱速度为2.5ml/min。以石油醚-丙酮（9:1）混合溶剂洗脱洗脱，洗至脂蟾毒配基完全，洗脱液蒸干，加无水乙醇溶解，滤过，转移至称量至恒重的干净称量瓶内， 85℃烘干，至减压干燥器内干燥48h，得纯化产物。测定提取物中脂蟾毒配基的量，计算脂蟾毒配基的纯度。结果见表5。
表5 不同径高比的考察结果
2.3硅胶粒度的考察
硅胶柱的预处理：称取硅胶100目～200目、200目～300目各30g，以石油醚-丙酮（9:1）混合溶剂为洗脱剂，湿法装柱，洗脱1.5个柱体积。硅胶柱的径高比为2.5:13.5。
上样硅胶的制备：各精密移取50ml蟾酥提取液，水浴挥去溶剂至约2ml，加入1g硅胶（100目～200目）混合均匀，挥干溶剂，即得。
取上述上样硅胶，分别干法上样到预处理好的硅胶柱上，同2.2项下方法洗脱，制备纯化物，测定脂蟾毒配基纯度。结果见表6。
表6 不同硅胶粒度的考察结果
| 粒度 | 脂蟾毒配基纯度（%） |
| 100～200 | 98.59 |
| 200～300 | 98.68 |
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
（1）蟾酥粉碎通过40目筛，加入30倍蟾酥量的95%乙醇，加热回流提取3次，每次提取3小时，提取液滤过，滤液回收乙醇至无乙醇味，得乙醇提取液A；
（2）提取液A中，加入5倍蟾酥量，粒度为100～200目的硅胶，蒸干，加入已装有硅胶的层析柱的顶端，以石油醚-丙酮（9:1）混合溶剂为洗脱剂洗脱，洗脱至脂蟾毒配基成分洗脱完全，得洗脱液B；
（3）洗脱液B加热回收溶剂至无溶剂味，减压干燥器内干燥48h，得高纯度的脂蟾毒配基提取物；
（4）测定高纯度脂蟾毒配基提取物的含量为98.89%；
实施例2
（1）蟾酥粉碎通过40目筛，加入40倍蟾酥量的70%乙醇，加热回流提取3次，每次提取2小时，提取液滤过，滤液回收乙醇至无乙醇味，得乙醇提取液A；
（2）提取液A中，加入5倍蟾酥量，粒度为100～200目的硅胶，蒸干，加入已装有硅胶的层析柱的顶端，以石油醚-丙酮（9:1）混合溶剂为洗脱剂洗脱，洗脱至脂蟾毒配基成分洗脱完全，得洗脱液B；
（3）洗脱液B加热回收溶剂至无溶剂味，减压干燥器内干燥48h，得高纯度的脂蟾毒配基提取物；
（4）测定高纯度脂蟾毒配基提取物的含量为98.23%；
实施例3
（1）蟾酥粉碎通过40目筛，加入20倍蟾酥量的85%乙醇，加热回流提取3次，每次提取4小时，提取液滤过，滤液回收乙醇至无乙醇味，得乙醇提取液A；
（2）提取液A中，加入5倍蟾酥量，粒度为100～200目的硅胶，蒸干，加入已装有硅胶的层析柱的顶端，以石油醚-丙酮（9:1）混合溶剂为洗脱剂洗脱，洗脱至脂蟾毒配基成分洗脱完全，得洗脱液B；
（3）洗脱液B加热回收溶剂至无溶剂味，减压干燥器内干燥48h，得高纯度的脂蟾毒配基提取物；
（4）测定高纯度脂蟾毒配基提取物的含量98.57%。
Claims (2)
1.一种从蟾酥中提取脂蟾毒配基的制备方法，其特征是，按以下方法制备的：
（1）蟾酥粉碎通过40目筛，加入20～40倍蟾酥量的70～95%乙醇，加热回流提取2～3次，每次提取2～4小时，提取液滤过，滤液回收乙醇至无乙醇味，得乙醇提取液A；
（2）提取液A中，加入5倍蟾酥量，粒度为100～200目的硅胶，蒸干，加入已装有硅胶的层析柱的顶端，以体积比为9:1的石油醚-丙酮混合溶剂为洗脱剂洗脱，洗脱至脂蟾毒配基成分洗脱完全，得洗脱液B；
（3）洗脱液B加热回收溶剂至无溶剂味，减压干燥器内干燥48h，得高纯度的脂蟾毒配基提取物；
（4）测定高纯度脂蟾毒配基提取物的含量；
得到高纯度的脂蟾毒配基，脂蟾毒配基的含量达到98%以上；
所述硅胶柱的径高比为1:3～10，装量为提取液A中蟾酥量的10～30倍。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是，所述提取用乙醇的浓度为95%。
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