CN101955501B - 一种中试规模提取分离高纯度红景天苷的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种红景天提取物及其制备方法。该方法，包括如下步骤：1)将红景天块根粉碎后，用水煎煮后合并煎煮液，浓缩得浸膏I；2)向浸膏I中加入乙醇，沉淀，溶解，浓缩得到浸膏II；3)向浸膏II中加入乙醇，沉淀，溶解，浓缩得浸膏A；4)将浸膏A上样于大孔树脂柱中，用水、乙醇水溶液a和乙醇水溶液b洗脱，收集洗脱液，浓缩得浸膏B；5)将浸膏B上样于大孔树脂柱中，依次用水、乙醇水溶液c和乙醇水溶液d洗脱，收集洗脱液，浓缩得浸膏C；6)将浸膏C上样于大孔树脂柱中，用乙醇水溶液e和乙醇水溶液f进行洗脱，浓缩、烘干后得到红景天提取物。该方法提取过程中无有机溶剂，提取物纯度大于90％，提取损失率低。

Description

一种中试规模提取分离高纯度红景天苷的方法

技术领域

本发明涉及一种红景天提取物及其制备方法。

背景技术

红景天苷是景天科红景天属植物的主要活性成分，具有诸多药理作用，如(1)抗心肌缺血(张早华，杨梅香，王广泽.红景天胶囊对实验性心肌缺血合并心衰大鼠的影响.中国实验方剂学杂志，1998，4(1)：24-26)；(2)抗缺氧抗疲劳抗衰老；(3)免疫调节等(宋月英，韩慧文，郝素云.红景天研究进展.武警医学院学报，2004；13(1)：66-67)。临床应用与产品开发：刘新宏等(刘心宏，何桂英，姚小伟，等.圣地红景天胶囊治疗心绞痛患者30例.陕西中医，1999，20(1)：8-9)应用圣地红景天胶囊治疗30例心绞痛患者，总有效率90％；毛静远(毛静远，王化良，赵汝菊，等.红景天胶囊治疗冠心病心绞痛临床研究.中国医药学报，2002，17(8)：480-483)应用红景天胶囊治疗100例冠心病、心绞痛患者(心血淤阻型)，总有效率90％。目前市售红景天制剂的原料药多为红景天苷含量较低的浸膏，安全性稳定性都难以控制。为了提高红景天苷的药物安全性，并实现药物效用的最大化，提高原料药中红景天苷含量成为必然趋势。近年来，有关红景天苷提取分离的研究也很活跃，开发了很多思路和方法，发表了很多文献和专利。而大孔吸附树脂作为20世纪70年代发展起来的新技术，具有吸附快、解吸率高、吸附容量大、洗脱率高、树脂再生简便等优点。其应用到中药有效成分的分离过程已经被广泛地研究。已有很多以大孔树脂为主要分离方法分离红景天苷的报道出现，如邰韧辉(邰韧辉.高纯度红景天苷的制备工艺研究.现代中药研究与实践.2004年第18卷第4期，58-59)探索了用溶剂萃取结合大孔吸附树脂分离，然后用硅胶柱精致得到较高含量的红景天苷。但是其工艺缺乏必备的放大参数，无法直接用于大规模生产，而且硅胶柱层析过程中可能残留有机溶剂。王化田等(王化田，龚刚明.大孔树脂纯化红景天苷工艺的研究.食品科学.2007，Vol.28，No.02，117-120)以超临界CO₂萃取后的红景天干粉乙醇常温浸提液中的红景天苷为纯化对象，采用大孔树脂为分离介质，并对纯化工艺进行了系统研究，得出初步纯化红景天苷的最佳工艺路线；经此纯化工艺可将红景天苷初步纯化到40％。然而，其分离过程中采用了二氯甲烷这种有毒性的有机溶剂作为解吸附剂，同样埋下安全隐患。

发明内容

本发明的目的是提供一种红景天提取物及其制备方法。

本发明提供的制备红景天提取物的方法，包括如下步骤：

1)将红景天块根粉碎后，用水煎煮后合并煎煮液，过滤，将所得滤液浓缩得到浸膏I；

2)向所述步骤1)所得浸膏I中加入乙醇，混匀后冷藏，过滤，将所得沉淀用乙醇水溶液I溶解，过滤后合并所得滤液，将所得滤液浓缩得到浸膏II；

3)向所述步骤2)所得浸膏II中加入乙醇，混匀后冷藏，过滤，将所得沉淀用乙醇水溶液II溶解，过滤后合并所得滤液并调节pH值至8～8.5，冷藏过滤后，将所得滤液浓缩得到浸膏A；

4)将所述步骤3)所得浸膏A溶于水，得到浸膏A的水溶液，将所述浸膏A的水溶液上样于大孔树脂柱中，依次用水、乙醇水溶液a和乙醇水溶液b进行洗脱，收集洗脱液，浓缩得到浸膏B；

5)将所述步骤4)所得浸膏B溶于水，得到浸膏B的水溶液，将所述浸膏B的水溶液上样于大孔树脂柱中，依次用水、乙醇水溶液c和乙醇水溶液d进行洗脱，收集洗脱液，浓缩、烘干后得到浸膏C；

6)将所述步骤5)所得浸膏C溶于水，得到浸膏C的水溶液，将所述浸膏C的水溶液上样于大孔树脂柱中，依次用乙醇水溶液e和乙醇水溶液f进行洗脱，浓缩、烘干后得到所述红景天提取物。

上述方法的步骤1)用水煎煮步骤中，每次煎煮步骤中水的用量为所述红景天质量的4-8倍，优选6倍，时间为1.5至3小时，优选2小时，次数为2-4次，优选3次；所述浸膏I在50℃的相对密度为1.15-1.20。

所述步骤2)中，向所述浸膏I中加入乙醇步骤中，乙醇在由所述浸膏I和乙醇组成的混合液中的质量百分比为60-80％，优选70％；所述冷藏步骤中，温度为5-10℃，优选5℃，时间为12-36小时，优选24小时；所述将所得沉淀用乙醇水溶液I溶解步骤中，所述乙醇水溶液I的体积百分浓度为60-80％，优选70％，次数为1-2次，优选1次；所述浸膏II在50℃的相对密度为1.15-1.20。

所述步骤3)中，向所得浸膏II中加入乙醇步骤中，乙醇在由所述浸膏II和乙醇组成的混合液中的质量百分比为80-90％，优选85％；所述冷藏步骤中，温度均为5-10℃，优选5℃，时间为12-24小时，优选12小时；所述将所得沉淀用乙醇水溶液II溶解步骤中，所述乙醇水溶液II的体积百分浓度为80-90％，优选85％，次数为1-2次，优选1次；所述调节pH值步骤中，pH值为8.0；所述浸膏A在50℃的相对密度为1.15-1.20。

所述步骤4)中，所述大孔树脂注中的大孔树脂型号为SP825；所述乙醇水溶液a的体积百分浓度为3-6％，优选5％，乙醇水溶液b的体积百分浓度为8-12％，优选10％；所述浸膏B在50℃的相对密度为1.20-1.30；所述水的用量为所述大孔树脂柱体积的4-10倍，优选8倍；所述乙醇水溶液a的用量为所述大孔树脂柱体积的2-5倍，优选3倍；所述乙醇水溶液b的用量为所述大孔树脂柱体积的6-10倍，优选8倍：所述洗脱步骤中，洗脱速率均为1-3BV/h，优选2BV/h。所述大孔树脂柱的径高比为1∶6-10，具体可为1∶6-8或1∶8-10，优选1∶10；所述浸膏A的水溶液的浓度为15-60mg/ml，具体可为，优选60mg/ml；所述浸膏A的水溶液中红景天苷的质量与所述大孔树脂的质量比为28-56mg∶1g，具体为28-42.5mg∶1g、31.1-41.1mg∶1g、31.25-38mg∶1g、33-36.25mg∶1g或28-35.6mg∶1g，优选45mg∶1g。所述大孔树脂柱的径高比中，径为该树脂柱的内径，高为树脂柱内的大孔树脂填充高度。

所述步骤5)中，所述大孔树脂柱中的大孔树脂型号为SP825；所述乙醇水溶液c的体积百分浓度为3-6％，优选5％，所述乙醇水溶液d的体积百分浓度为8-12％，优选10％；所述浸膏C在50℃的相对密度为1.20-1.30；所述水的用量为所述大孔树脂柱体积的4-10倍，优选8倍；所述乙醇水溶液c的用量为所述大孔树脂柱体积的2-4倍，优选3倍；所述乙醇水溶液d的用量为所述大孔树脂柱体积的6-10倍，优选8倍；所述洗脱步骤中，洗脱速率均为1-3BV/h，优选2BV/h。所述大孔树脂柱的径高比为1∶6-10，具体可为1∶6-8或1∶8-10，优选1∶10；所述浸膏B的水溶液的浓度为15-60mg/ml，具体可为，优选60mg/ml；所述浸膏B的水溶液中红景天苷的质量与所述大孔树脂的质量比为28-56mg∶1g，优选45mg∶1g。所述大孔树脂柱的径高比中，径为该树脂柱的内径，高为树脂柱内的大孔树脂填充高度。

所述步骤6)中，所述大孔树脂注中的大孔树脂型号为SP825；所述乙醇水溶液e的体积百分浓度为1-5％，优选3％，所述乙醇水溶液f的体积百分浓度为12-16％，优选15％；所述乙醇水溶液e的用量为所述大孔树脂柱体积的2-5倍，优选4倍；所述乙醇水溶液f的用量为所述大孔树脂柱体积的6-10倍，优选8倍；所述洗脱步骤中，洗脱速率均为1-3BV/h，优选2BV/h：所述烘干步骤中，温度为50-80℃，优选60℃，时间为6-10小时，优选8小时。所述大孔树脂柱的径高比为1∶6-10，具体可为1∶6-8或1∶8-10，优选1∶10；所述浸膏C的水溶液的浓度为15-60mg/ml，具体可为，优选60mg/ml；所述浸膏C的水溶液中红景天苷的质量与所述大孔树脂的质量比为28-56mg∶1g，优选45mg∶1g。所述大孔树脂柱的径高比中，径为该树脂柱的内径，高为树脂柱内的大孔树脂填充高度。

上述步骤4)-6)中，所用大孔树脂柱均为同一根大孔树脂柱。为进一步提高分离效果，可在步骤4)-6)每次洗脱步骤之后进行如下处理：利用3倍柱体积的体积百分浓度为95％的乙醇水溶液将树脂柱中的脂溶性杂质洗脱干净，再用纯水冲柱至无醇味，并用HPLC全程监测其中含有红景天苷的洗脱液，将所有含有红景天苷的洗脱液汇集，再按照步骤4)-6)的洗脱步骤进行洗脱。

另外，按照上述方法制备所得红景天提取物，也属于本发明的保护范围。

本发明提供的制备红景天提取物的方法，工艺简便，且过程中避免了有毒的有机溶剂，所得红景天提取物中红景天苷的纯度大于90％，由于该制备方法每次分离步骤中杂质部分亦含有红景天苷，将杂质在每次分离步骤中重复上样，可使最终提取物中红景天苷的产率进一步提高，可达95％以上，从而进一步降低了原料红景天中红景天苷的提取损失率，故该方法具有重要的应用价值。

附图说明

图1为红景天苷提取分离工艺简图。

图2为实施例2红景天苷提取分离过程中对照品的HPLC色谱图。

图3为实施例2红景天苷提取分离过程中药材的HPLC色谱图。

图4为实施例2红景天苷提取分离过程中浸膏A的HPLC色谱图。

图5为实施例2红景天苷提取分离过程中终产品的HPLC色谱图。

图6为实施例2提取所得红景天苷与红景天苷对照品红外光谱图。(上为样品、下为对照品)

图7为实施例2提取所得红景天苷与红景天苷对照品核磁氢谱图。(上为样品、下为对照品)

图8为红景天苷溶液高效液相色谱峰面积对浓度线性回归图。

图9为红景天苷对照品溶液(100μg/ml)的高效液相色谱图。

图10为红景天苷对照品溶液(200μg/ml)的高效液相色谱图。

图11为红景天苷对照品溶液(300μg/ml)的高效液相色谱图。

图12为红景天苷对照品溶液(350μg/ml)的高效液相色谱图。

图13为红景天苷对照品溶液(400μg/ml)的高效液相色谱图。

图14为红景天苷对照品溶液(500μg/ml)的高效液相色谱图。

图15为红景天苷注射用原料含量测定用对照品的HPLC色谱图。

图16为红景天苷注射用原料HPLC色谱图a。

图17为红景天苷注射用原料HPLC色谱图b。

图18为红景天苷注射用原料HPLC色谱图c。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。下述实施例中所述方法如无特别说明，均为常规方法。下述实施例步骤6)所得红景天苷的产率均按照如下公式计算而得：

步骤6)所得红景天提取物的质量乘以纯度，所得数值除以步骤3)所得浸膏A中红景天苷的质量再乘以100％。如实施例1中红景天苷的产率的计算过程如下：114乘以94％除以170乘以100％，得到产率为63％。

下述实施例中红景天苷的含量均参照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)进行测定：

(a)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱分析柱；以乙腈-水(90∶10)为流动相；检测波长为275nm。理论塔板数按红景天苷峰计算应不低于2000。

(b)对照品溶液的制备：取红景天苷对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含0.3mg的溶液，即得。

(c)供试品溶液的制备：取精密称取注射用红景天苷原料适量，加水制成每1ml含红景天苷0.3mg的溶液，即得。

(d)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

上述测定红景天苷的含量时，所用标准曲线是按照如下线性试验而得：

称取红景天苷对照品25mg，置25ml容量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀，得每1ml含1mg红景天苷对照品溶液。精密量取该溶液1ml、2ml、3ml、3.5ml、4ml、5ml，分别置10ml容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀，备测。用高效液相色谱仪测定各溶液中红景天苷峰面积(进样量为20μl)，结果见表1，以峰面积积分值为纵坐标，以对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，见图8。由图可知，红景天苷在100.0～500.0μg/ml范围内呈线性关系，其回归方程为：y＝5.7687x+31.031(r＝0.9993)，色谱图见图9-14。其中，图9中保留时间为7.751min，峰面积为612.7；图10中保留时间为7.737min，峰面积为1164.2；图11中保留时间为7.752min，峰面积为1777.3；图12中保留时间为7.752min，峰面积为2077.1；图13中保留时间为7.745min，峰面积为2309.2；图14中保留时间为7.721min，峰面积为2917.8；

表1、线性关系考察

由于红景天中所含活性成分红景天苷可溶于水和乙醇等溶剂，因此本发明人首先进行了红景天苷提取溶剂的选择试验，具体实验方法为：选用水及体积百分浓度分别为40％、60％和80％的乙醇水溶液作为提取溶媒，并加以比较进行优选。取红景天块根，粉碎成粗粒，分别取4份，各100g，一份用水提三次，每次2小时；另3份，分别用上述各浓度的乙醇水溶液回流提取三次，每次1小时，溶媒量均为药材的8倍。水煎液减压浓缩成浸膏，醇提液回收乙醇并浓缩成浸膏，比较不同溶媒提取红景天苷的提取量，结果见表1。

表1、几种溶媒提取红景天苷的提取量(n＝3)

提取溶媒	水	40％乙醇	60％乙醇	80％乙醇
					100g药材中红景天苷的提取量	0.151g	0.156g	0.167g	0.159g

结果显示，尽管用水比用不同浓度的乙醇作溶媒提取的红景天苷量略低一些，但无明显差异，如果重复提取，则此差异将进一步变小。考虑到用乙醇提取成本高，故本发明选用水作为提取溶剂。

下述实施例中所述浸膏I和浸膏II均为浸膏，所述乙醇水溶液a-f均为乙醇水溶液。

实施例1

按照如下步骤制备红景天提取物：

1)将红景天块根115kg用水煎煮后合并煎煮液，过滤，将所得滤液浓缩得到浸膏I；

用水煎煮步骤中，每次煎煮步骤中水的用量为红景天质量的6倍，时间为2小时，次数为3次；浸膏I在50℃的相对密度为1.15。

2)向步骤1)所得浸膏I中加入乙醇，混匀后在5℃冷藏12小时，过滤，将所得沉淀用体积百分浓度为70％的乙醇水溶液I溶解1次，过滤后收集所得滤液，将所得滤液浓缩得到浸膏II；

向浸膏I中加入乙醇步骤中，乙醇在由浸膏I和乙醇组成的混合液中的质量百分比为70％；浸膏II在50℃的相对密度为1.15。

3)向步骤2)所得浸膏II中加入乙醇，混匀后5℃冷藏12小时，过滤，将所得沉淀用体积百分浓度为85％的乙醇水溶液II溶解1次，过滤后收集所得滤液并调节pH值至8.0，5℃冷藏12小时过滤后，将所得滤液浓缩得到浸膏A；

向所得浸膏II中加入乙醇步骤中，乙醇在由浸膏II和乙醇组成的混合液中的质量百分比为85％，浸膏A在50℃的相对密度为1.15。

4)将步骤3)所得浸膏A溶于水，得到浸膏A的水溶液(浓度为15mg/mL)，将该浸膏A的水溶液12L(其中，红景天苷为170g)上样于介质为SP825树脂的大孔树脂柱(干重为4kg)中，依次用水、体积百分浓度为5％的乙醇水溶液a和体积百分浓度为10％的乙醇水溶液b进行洗脱，收集洗脱液，浓缩得到浸膏B；

浸膏B在50℃的相对密度为1.20；上样步骤中，洗脱速率为1BV/h；洗脱步骤中，水的用量为大孔树脂柱体积的8倍，乙醇水溶液a的用量为大孔树脂柱体积的3倍，乙醇水溶液b的用量为大孔树脂柱体积的8倍，洗脱速率均为1BV/h，该大孔树脂柱的径高比为1∶10。

5)将步骤4)所得浸膏B溶于水，得到浸膏B的水溶液(浓度为15mg/mL)，将该浸膏B的水溶液10L(其中，红景天苷为145mg)上样于介质为SP825树脂的大孔树脂柱(干重为4kg)中，依次用水、体积百分浓度为5％的乙醇水溶液c和体积百分浓度为10％的乙醇水溶液d进行洗脱，收集洗脱液，浓缩得到浸膏C；

浸膏C在50℃的相对密度为1.20；上样步骤中，洗脱速率为1BV/h；洗脱步骤中，水的用量为大孔树脂柱体积的8倍，乙醇水溶液c的用量为大孔树脂柱体积的3倍，乙醇水溶液d的用量为大孔树脂柱体积的8倍，洗脱速率均为1BV/h，该大孔树脂柱的径高比为1∶10。

6)将步骤5)所得浸膏C溶于水，得到浸膏C的水溶液(浓度为15mg/mL)，将该浸膏C的水溶液8L(其中，红景天苷为125g)上样于介质为SP825树脂的大孔树脂柱(干重为4kg)中，依次用体积百分浓度为3％的乙醇水溶液e和体积百分浓度为15％的乙醇水溶液f进行洗脱，浓缩、80℃烘干6小时后得到红景天提取物。

上样步骤中，洗脱速率为1BV/h；洗脱步骤中，乙醇水溶液e的用量为大孔树脂柱体积的2倍，乙醇水溶液f的用量为大孔树脂柱体积的8倍，洗脱速率均为1BV/h，该大孔树脂柱的径高比为1∶10。

按照上述方法制备所得产物的HPLC鉴别检测如图15、16所示，可知，该产物为红景天苷。

按照该方法制备所得红景天提取物为114g，纯度为94％，红景天苷的产率为63％。

另外，在步骤4)-6)每次洗脱步骤之后，进行如下处理：利用3倍柱体积的体积百分浓度为95％的乙醇水溶液将树脂柱中的脂溶性杂质洗脱干净，再用纯水冲柱至无醇味，并用HPLC全程监测其中含有红景天苷的洗脱液，将所有含有红景天苷的洗脱液汇集，再按照步骤4)-6)的洗脱步骤进行洗脱，从而将步骤4)-6)杂质中的红景天苷亦提取出来，与前述步骤6所得红景天提取物混合，按照与前相同方法测定可得，该红景天提取物的纯度为94％，产率提高至95％。

实施例2

按照如下步骤制备红景天提取物：

1)将红景天块根249kg用水煎煮后合并煎煮液，过滤，将所得滤液浓缩得到浸膏I；

用水煎煮步骤中，每次煎煮步骤中水的用量为红景天质量的4倍，时间为3小时，次数为4次；浸膏I在50℃的相对密度为1.15。

2)向步骤1)所得浸膏I中加入乙醇，混匀后10℃冷藏36小时，过滤，将所得沉淀用体积百分浓度为60％的乙醇水溶液I溶解2次，过滤后合并所得滤液，将所得滤液浓缩得到浸膏II；

向浸膏I中加入乙醇步骤中，乙醇在由浸膏I和乙醇组成的混合液中的质量百分比为60％；浸膏II在50℃的相对密度为1.15。

3)向步骤2)所得浸膏II中加入乙醇，混匀后10℃冷藏24小时，过滤，将所得沉淀用体积百分浓度为80％的乙醇水溶液II溶解2次，过滤后合并所得滤液并调节pH值至8.3，10℃冷藏24小时过滤后，将所得滤液浓缩得到浸膏A；

向所得浸膏II中加入乙醇步骤中，乙醇在由浸膏II和乙醇组成的混合液中的质量百分比为80％，浸膏A在50℃的相对密度为1.15。

4)将步骤3)所得浸膏A溶于水，得到浸膏A的水溶液(浓度为30mg/mL)，将该浸膏A的水溶液12.5L(其中，红景天苷为380g)上样于介质为SP825树脂的大孔树脂柱(干重为10kg)中，依次用水、体积百分浓度为3％的乙醇水溶液a和体积百分浓度为8％的乙醇水溶液b进行洗脱，收集洗脱液，浓缩得到浸膏B；

浸膏B在50℃的相对密度为1.25；上样步骤中，洗脱速率为1BV/h；洗脱步骤中，水的用量为大孔树脂柱体积的4倍，乙醇水溶液a的用量为大孔树脂柱体积的4倍，乙醇水溶液b的用量为大孔树脂柱体积的10倍，洗脱速率均为3BV/h，该大孔树脂柱的径高比为1∶10。

5)将步骤4)所得浸膏B溶于水，得到浸膏B的水溶液(浓度为30mg/mL)，将该浸膏B的水溶液11L(其中，红景天苷为330g)上样于介质为SP825树脂的大孔树脂柱(干重为10kg)中，依次用水、体积百分浓度为3％的乙醇水溶液c和体积百分浓度为8％的乙醇水溶液d进行洗脱，收集洗脱液，浓缩得到浸膏C；

浸膏C在50℃的相对密度为1.25；上样步骤中，洗脱速率为1BV/h；洗脱步骤中，水的用量为大孔树脂柱体积的4倍，乙醇水溶液c的用量为大孔树脂柱体积的4倍，乙醇水溶液d的用量为大孔树脂柱体积的10倍，洗脱速率均为3BV/h，该大孔树脂柱的径高比为1∶10。

6)将步骤5)所得浸膏C溶于水，得到浸膏C的水溶液(浓度为30mg/mL)，将该浸膏C的水溶液9L(其中，红景天苷为280g)上样于介质为SP825树脂的大孔树脂柱(干重为10kg)中，依次用体积百分浓度为1％的乙醇水溶液e和体积百分浓度为12％的乙醇水溶液f进行洗脱，浓缩、70℃烘干7小时后得到红景天提取物。

上样步骤中，洗脱速率为1BV/h；洗脱步骤中，乙醇水溶液e的用量为大孔树脂柱体积的5倍，乙醇水溶液f的用量为大孔树脂柱体积的10倍，洗脱速率均为3BV/h，该大孔树脂柱的径高比为1∶10。

按照上述方法制备所得产物的HPLC鉴别检测如图15、17所示，可知，该产物为红景天苷。

按照该方法制备所得红景天提取物为243g，纯度为95％，红景天苷的产率为61％。

另外，在步骤4)-6)每次洗脱步骤之后，进行如下处理：利用3倍柱体积的体积百分浓度为95％的乙醇水溶液将树脂柱中的脂溶性杂质洗脱干净，再用纯水冲柱至无醇味，并用HPLC全程监测其中含有红景天苷的洗脱液，将所有含有红景天苷的洗脱液汇集，再按照步骤4)-6)的洗脱步骤进行洗脱，从而将步骤4)-6)杂质中的红景天苷亦提取出来，与前述步骤6所得红景天提取物混合，按照与前相同方法测定可得，该红景天提取物的纯度为95％，产率提高至96％。

实施例3

按照如下步骤制备红景天提取物：

1)将红景天块根230Kg用水煎煮后合并煎煮液，过滤，将所得滤液浓缩得到浸膏I；

用水煎煮步骤中，每次煎煮步骤中水的用量为红景天质量的8倍，时间为1.5小时，次数为2次；浸膏I在50℃的相对密度为1.17。

2)向步骤1)所得浸膏I中加入乙醇，混匀后5℃冷藏24小时，过滤，将所得沉淀用体积百分浓度为80％的乙醇水溶液I溶解2次，过滤后合并所得滤液，将所得滤液浓缩得到浸膏II；

向浸膏I中加入乙醇步骤中，乙醇在由浸膏I和乙醇组成的混合液中的质量百分比为80％；浸膏II在50℃的相对密度为1.18。

3)向步骤2)所得浸膏II中加入乙醇，混匀后5℃冷藏12小时，过滤，将所得沉淀用体积百分浓度为90％的乙醇水溶液II溶解1次，过滤后收集所得滤液并调节pH值至8.5，5℃冷藏12小时过滤后，将所得滤液浓缩得到浸膏A；

向所得浸膏II中加入乙醇步骤中，乙醇在由浸膏II和乙醇组成的混合液中的质量百分比为90％，浸膏A在50℃的相对密度为1.18。

4)将步骤3)所得浸膏A溶于水，得到浸膏A的水溶液(浓度为60mg/mL)，将该浸膏A的水溶液6.3L(其中，红景天苷为370g)上样于介质为SP825树脂的大孔树脂柱(干重为9kg)中，依次用水、体积百分浓度为6％的乙醇水溶液a和体积百分浓度为12％的乙醇水溶液b进行洗脱，收集洗脱液，浓缩得到浸膏B；

浸膏B在50℃的相对密度为1.30；上样步骤中，洗脱速率为1BV/h；洗脱步骤中，水的用量为大孔树脂柱体积的10倍，乙醇水溶液a的用量为大孔树脂柱体积的4倍，乙醇水溶液b的用量为大孔树脂柱体积的10倍，洗脱速率均为2BV/h，该大孔树脂柱的径高比为1∶10。

5)将步骤4)所得浸膏B溶于水，得到浸膏B的水溶液(浓度为60mg/mL)，将该浸膏B的水溶液5.3L(其中，红景天苷为320g)上样于介质为SP825树脂的大孔树脂柱(干重为9kg)中，依次用水、体积百分浓度为6％的乙醇水溶液c和体积百分浓度为12％的乙醇水溶液d进行洗脱，收集洗脱液，浓缩得到浸膏C；

浸膏C在50℃的相对密度为1.30；上样步骤中，洗脱速率为1BV/h；洗脱步骤中，水的用量为大孔树脂柱体积的10倍，乙醇水溶液c的用量为大孔树脂柱体积的4倍，乙醇水溶液d的用量为大孔树脂柱体积的10倍，洗脱速率均为2BV/h，该大孔树脂柱的径高比为1∶10。

6)将步骤5)所得浸膏C溶于水，得到浸膏C的水溶液(浓度为60mg/mL)，将该浸膏C的水溶液4.5L(其中，红景天苷为280g)上样于介质为SP825树脂的大孔树脂柱(干重为9kg)中，依次用体积百分浓度为5％的乙醇水溶液e和体积百分浓度为16％的乙醇水溶液f进行洗脱，浓缩、60℃烘干10小时后得到红景天提取物。

上样步骤中，洗脱速率为1BV/h；洗脱步骤中，乙醇水溶液e的用量为大孔树脂柱体积的2倍，乙醇水溶液f的用量为大孔树脂柱体积的6倍，洗脱速率均为2BV/h，该大孔树脂柱的径高比为1∶10。

按照上述方法制备所得产物的HPLC鉴别检测如图15、18所示，可知，该产物为红景天苷。

按照该方法制备所得红景天提取物为240g，纯度为93％，红景天苷的产率为60％。

另外，在步骤4)-6)每次洗脱步骤之后，进行如下处理：利用3倍柱体积的体积百分浓度为95％的乙醇水溶液将树脂柱中的脂溶性杂质洗脱干净，再用纯水冲柱至无醇味，并用HPLC全程监测其中含有红景天苷的洗脱液，将所有含有红景天苷的洗脱液汇集，再按照步骤4)-6)的洗脱步骤进行洗脱，从而将步骤4)-6)杂质中的红景天苷亦提取出来，与前述步骤6所得红景天提取物混合，按照与前相同方法测定可得，该红景天提取物的纯度为93％，产率提高至97％。

Claims (8)

1.一种制备红景天提取物的方法，包括如下步骤：

1)将红景天块根用水煎煮后合并煎煮液，过滤，将所得滤液浓缩得到浸膏I；

2)向所述步骤1)所得浸膏I中加入乙醇，混匀后冷藏，过滤，将所得沉淀用乙醇水溶液I溶解，过滤后合并所得滤液，将所得滤液浓缩得到浸膏II；

所述乙醇水溶液I的体积百分浓度为60-80％；

3)向所述步骤2)所得浸膏II中加入乙醇，混匀后冷藏，过滤，将所得沉淀用乙醇水溶液II溶解，过滤后合并所得滤液并调节pH值至8.0-8.5，冷藏过滤后，将所得滤液浓缩得到浸膏A；

所述乙醇水溶液II的体积百分浓度为80-90％；

4)将所述步骤3)所得浸膏A溶于水，得到浸膏A的水溶液，将所述浸膏A的水溶液上样于大孔树脂柱中，依次用水、乙醇水溶液a和乙醇水溶液b进行洗脱，收集洗脱液，浓缩得到浸膏B；

所述乙醇水溶液a的体积百分浓度为3-6％，乙醇水溶液b的体积百分浓度为8-12％；

所述大孔树脂柱中的介质为SP825树脂；

5)将所述步骤4)所得浸膏B溶于水，得到浸膏B的水溶液，将所述浸膏B的水溶液上样于大孔树脂柱中，依次用水、乙醇水溶液c和乙醇水溶液d进行洗脱，收集洗脱液，浓缩得到浸膏C；

所述乙醇水溶液c的体积百分浓度为3-6％，所述乙醇水溶液d的体积百分浓度为8-12％；

所述大孔树脂柱中的介质为SP825树脂；

6)将所述步骤5)所得浸膏C溶于水，得到浸膏C的水溶液，将所述浸膏C的水溶液上样于大孔树脂柱中，依次用乙醇水溶液e和乙醇水溶液f进行洗脱，浓缩、烘干后得到所述红景天提取物；

所述乙醇水溶液e的体积百分浓度为1-5％，所述乙醇水溶液f的体积百分浓度为12-16％；

所述大孔树脂柱中的介质为SP825树脂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)用水煎煮步骤中，每次煎煮步骤中水的用量为所述红景天质量的4-8倍，时间为1.5-3小时，次数为2-4次；所述浸膏I在50℃的相对密度为1.15-1.20。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，向所述浸膏I中加入乙醇步骤中，乙醇在由所述浸膏I和乙醇组成的混合液中的质量百分比为60-80％；

所述冷藏步骤中，温度为5-10℃，时间为12-36小时；

所述将所得沉淀用乙醇水溶液I溶解步骤中，次数为1-2次；

所述浸膏II在50℃的相对密度为1.15-1.20。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，向所得浸膏II中加入乙醇步骤中，乙醇在由所述浸膏II和乙醇组成的混合液中的质量百分比为80-90％；

所述冷藏步骤中，温度均为5-10℃，时间均为12-36小时；

所述将所得沉淀用乙醇水溶液II溶解步骤中，次数为1-2次；

所述调节pH值步骤中，pH值为8.0；

所述浸膏A在50℃的相对密度为1.15-1.20。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤4)中，

所述上样步骤中，洗脱速率为1BV/h；

所述大孔树脂柱的径高比为1∶6-10；

所述浸膏A的水溶液的浓度为15-60mg/ml；

所述浸膏A的水溶液中红景天苷的质量与所述大孔树脂的质量比为28-56mg∶1g；

所述洗脱步骤中，所述水的用量为所述大孔树脂柱体积的4-10倍；所述乙醇水溶液a的用量为所述大孔树脂柱体积的2-4倍；所述乙醇水溶液b的用量为所述大孔树脂柱体积的6-10倍；洗脱速率均为1-3BV/h；

所述浸膏B在50℃的相对密度为1.20-1.30。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述步骤5)中，

所述上样步骤中，洗脱速率为1BV/h；

所述大孔树脂柱的径高比为1∶6-10；

所述浸膏B的水溶液的浓度为15-60mg/ml；

所述浸膏B的水溶液中红景天苷的质量与所述大孔树脂的质量比为28-56mg∶1g；

所述洗脱步骤中，所述水的用量为所述大孔树脂柱体积的4-10倍；所述乙醇水溶液c的用量为所述大孔树脂柱体积的2-4倍；所述乙醇水溶液d的用量为所述大孔树脂柱体积的6-10倍；洗脱速率均为1-3BV/h；

所述浸膏C在50℃的相对密度为1.20-1.30。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤6)中，

所述上样步骤中，洗脱速率为1BV/h；

所述大孔树脂柱的径高比为1∶6-10；

所述浸膏C的水溶液的浓度为15-60mg/ml；

所述浸膏C的水溶液中红景天苷的质量与所述大孔树脂的质量比为28-56mg∶1g；

所述洗脱步骤中，所述乙醇水溶液e的用量为所述大孔树脂柱体积的2-5倍；所述乙醇水溶液f的用量为所述大孔树脂柱体积的6-10倍；洗脱速率均为1-3BV/h；

所述烘干步骤中，温度为60-80℃，时间为6-10小时。

8.权利要求1-7任一所述方法制备所得红景天提取物。

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