CN103185757B - 一种莫西沙星(r，r)-异构体的检测方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种莫西沙星(R，R)-异构体的检测方法，该检测方法采用高效液相色谱仪进行检测，其条件如下：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为含有L-亮氨酸和金属离子的溶剂，其中所述金属离子为Cu²⁺、Zn²⁺或其混合离子，所述溶剂包含水和有机溶剂，水和有机溶剂的体积比为77～82∶23～18。本发明提供的检测方法具有较高的灵敏度和专属性，操作简捷，可快速准确的检测出莫西沙星的(R，R)-异构体，可用于莫西沙星的质量控制，并为此类化合物的研究开发及质量检测奠定了基础，具有现实意义。

Description

一种莫西沙星(R，R)-异构体的检测方法及其应用

技术领域

本发明涉及一种莫西沙星(R，R)-异构体的检测方法及其应用，属于药物分析技术领域，是关于莫西沙星及其相关制剂的(R，R)-异构体的检测方法。

背景技术

莫西沙星，通用名为Moxifloxacin，化学名为1-环丙基-6-氟-1，4-二氢-8-甲氧基-7-[(4aS，7aS)-八氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6-基]-4-氧代-3-喹啉羧酸，其结构如式I所示。

莫西沙星制剂是德国拜耳公司推出的产品，其活性成分为莫西沙星或其药学上可接受的盐或其水合物，属于第四代喹诺酮类药物，具有广谱的抗菌活性。莫西沙星具有两个手性中心，其(R，R)-异构体如式II所示。

莫西沙星制剂以式I所示的莫西沙星为活性成分，但是制剂中经常会含有少量的(R，R)-异构体，莫西沙星(R，R)-异构体不是其有效成分，它的存在，会影响制剂中有效物质的含量计算，需要对莫西沙星制剂中莫西沙星(R，R)-异构体进行检测。但是，由于莫西沙星制剂中莫西沙星(R，R)-异构体的含量低，莫西沙星与其(R，R)-异构体的分离度要求在1.5以上。因此，需要建立一种检测莫西沙星(R，R)-异构体且分离度符合标准的方法。

发明内容

因此，本发明的目的是提供一种莫西沙星(R，R)-异构体的检测方法及其应用。

本发明目的是通过以下技术方案实现的。

本发明提供一种莫西沙星(R，R)-异构体的检测方法，该检测方法采用高效液相色谱仪进行检测，其色谱条件如下：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为含有L-亮氨酸和金属离子的溶剂。

所述金属离子为Cu²⁺、Zn²⁺或其混合离子。

所述溶剂包含水和有机溶剂，水和有机溶剂的体积比为77～82∶23～18。

根据本发明提供的检测方法，其中，所述流动相中所述L-亮氨酸的浓度为0.01～0.1mol/L，优选为0.025～0.075mol/L，例如浓度为0.05mol/L。

根据本发明提供的检测方法，其中，所述流动相中所述Cu²⁺离子是以硫酸铜或氯化铜，优选为硫酸铜的形式加入的。

所述流动相中所述Zn²⁺离子是以硫酸锌或氯化锌的形式加入的。

根据本发明提供的检测方法，其中所述流动相中所述金属离子的浓度为0.01～0.1mol/L，优选为0.025～0.075mol/L，例如浓度为0.05mol/L。

根据本发明提供的检测方法，其中，所述有机溶剂选自甲醇、乙腈和四氢呋喃中的一种或多种，优选为乙腈。

根据本发明提供的检测方法，其中，所述流动相的流速为0.2～2.0ml/min，优选为0.8～1.2ml/min，例如1.0ml/min。

根据本发明提供的检测方法，其中，所述色谱柱的理论塔板数按莫西沙星计算不低于5000；

优选地，所述色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18或ZORBAX EclipseXDB-C18。

根据本发明提供的检测方法，其中，所述色谱柱的柱温为20～60℃，优选为30～40℃，例如柱温为35℃。

根据本发明提供的检测方法，其中，所述高效液相色谱仪的检测波长为200～300nm，优选为280～300nm，例如，检测波长为293nm。

本发明还提供一种上述检测方法在莫西沙星制剂检测中的应用，其中，所述莫西沙星制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、控释制剂或缓释制剂的形式。

本发明中所述分离度(简称为R)也叫分辨率，是指相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值，其计算公式为R＝2(tR2-tR1)/(W1+W2))。

式中，tR1和tR2为相邻两峰的保留时间；

W1和W2为其相应的峰宽。

分离度表示相邻两峰的分离程度，R越大，表明相邻两组分分离越好。一般说当R＜1时，两峰有部分重叠；当R＝1.0时，分离度可达98％；当R＝1.5时，分离度可达99.7％。通常用R＝1.5作为相邻两组分已完全分离的标志。当R＝1时，称为4σ分离，两峰基本分离，裸露峰面积为95.4％，内侧峰基重叠约2％。R＝1.5时，称为6σ分离，裸露峰面积为99.7％。R≥1.5称为完全分离。《中国药典》规定R应大于1.5。

本发明提供的莫西沙星(R，R)-异构体的检测方法采用高效液相色谱法实现了莫西沙星(R，R)-异构体的快速准确测定，具有较高的灵敏度和专属性，操作简捷，分离度符合标准(即，分离度均大于1.50)，可用于莫西沙星的质量控制，并为此类化合物的研究开发及质量检测奠定了基础，具有现实意义。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1是实施例1-3的高效液相色谱图；

图2是实施例3中莫西沙星峰面积与进样量的关系曲线图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

实施例1

1)仪器与检测条件

美国安捷伦公司生产的Agilent 1260高效液相色谱仪，由安捷伦科技有限公司生产的ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(色谱柱规格为：4.6×250mm，5μm)；检测波长：293nm；流动相：添加L-亮氨酸和硫酸铜的溶剂，溶剂由水和乙腈组成，其比例待选，L-亮氨酸和硫酸铜的浓度为0.05mol/L；流速：1ml/min；色谱柱的柱温：35℃；进样量：20μl。

2)实验步骤

取由莫西沙星和莫西沙星(R，R)-异构体组成的混合物适量，加流动相溶解，配制成浓度为0.005mg/ml的测试溶液，并取莫西沙星及各光学异构体的标准品配置成标准溶液作为对照。

分别称取测试溶液注入液相色谱仪，调整溶剂中水和乙腈的体积比，记录色谱图。其中，实施例1-3的谱图如图1所示，通过与标准品的色谱图对比，莫西沙星的保留时间为15.607min，莫西沙星(R，R)-异构体的保留时间为13.612min，计算莫西沙星与其(R，R)-异构体的分离度为2.85。

流动相中不同体积比的水和乙腈混合溶液及与其对应的分离度详见表1。

表1流动相比例筛选

	水∶乙腈(体积比)	分离度
			实施例1-1	70∶30	1.06
实施例1-2	75∶25	1.45
			实施例1-3	77∶23	1.55
实施例1-4	80∶20	2.85
			实施例1-5	82∶18	1.52
实施例1-6	85∶15	1.25
			实施例1-7	90∶10	0.90

从表1可以看出，当水和乙腈的体积比为80∶20时，莫西沙星与其(R，R)-异构体的分离度高达2.85，分离效果最佳。

实施例2

以水为溶剂，称取莫西沙星样品，配制浓度为1mg/ml的溶液作为供试品溶液，然后分别进行以下实验，以测试本发明方法的专属性：

1)取10ml供试品溶液置于具塞试管中，加1ml浓度为0.1mol/L的盐酸溶液，在90℃水浴中加热1小时，放置自然冷却，用浓度为0.1mol/L氢氧化钠溶液调至中性；

2)取10ml供试品溶液置于具塞试管中，加1ml浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液，在90℃水浴中加热1小时，放置自然冷却，用浓度为0.1mol/L的盐酸溶液调至中性；

3)取10ml供试品溶液置于具塞试管中，在90℃水浴中加热1小时，放置自然冷却，进行测定；

4)取10ml供试品溶液置具于塞试管中，加30％过氧化氢溶液1ml，振摇后放置30分钟；

5)取供试品溶液密封后置4000lx灯光下照射3天。

取上述各实验后的溶液20μl注入液相色谱仪进行测试，记录色谱图，并计算分离度，其中，流动相中水和乙腈的体积比为80∶20，其余检测条件与实施例1相同。

结果显示，供试品溶液经酸、碱以及氧化破坏后，不稳定；在常规的加热、光照破坏下，较稳定，分解出来的杂质与主成分峰之间的分离良好，分离度大于1.5，本试验表明该方法的专属性好。

实施例3

1)仪器与检测条件：美国安捷伦公司生产的Agilent 1260高效液相色谱仪，由安捷伦科技有限公司生产的色谱柱ZORBAX Eclipse Plus C18(色谱柱规格为：4.6×250mm，5μm)；检测波长：293nm；流动相：添加手性试剂L-亮氨酸和硫酸铜的溶剂，溶剂由水和乙腈组成，体积比为80∶20，L-亮氨酸和硫酸铜的浓度为0.05mol/L；流速：1ml/min；柱温：35℃。

2)溶液的配制：

精密称取10mg莫西沙星样品加入到10ml量瓶中，用纯水超声溶解并稀释至刻度，作为样品溶液。

另外，精密称取10mg莫西沙星标准品加入到10ml量瓶中，用纯水超声溶解并稀释至刻度，精密移取1ml至100ml容量瓶中，用纯水稀释至刻度，作为标准溶液。

重复性试验

分别取20μl样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，连续测定6次，结果见表2。

表2重复性试验结果

进样次数	莫西沙星峰面积
		1	61724.2
2	61717.8
		3	61754.4
4	61758.4
		5	61746.3
6	61747.9

平均值	61741.5
		相对标准偏差RSD(％)	0.03

实验结果表明，样品溶液的进样重复性良好。

稳定性试验

将样品溶液分别放置0、2、4、12和24小时后进行测定，实验结果见表3。

表3溶液稳定性试验

结果表明，本样品溶液在24h内基本稳定。

线性关系试验

分别取样品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl、30μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以莫西沙星峰面积为Y，进样量为X，进行线性回归。结果见表4和图2。

表4线性关系试验结果

实验结果表明，样品在0.005mg～0.03mg浓度范围内线性关系良好。

对比例1

1)仪器与检测条件

美国安捷伦公司生产的Agilent 1260高效液相色谱仪，由安捷伦科技有限公司生产的ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(色谱柱规格为：4.6×250mm，5μm)；检测波长：293nm；流动相：添加L-苯丙氨酸和金属离子Cu²⁺的溶剂，溶剂由水和乙腈组成，其比例待选，L-亮氨酸和硫酸铜的浓度为0.05mol/L；流速：1ml/min；色谱柱的柱温：35℃；进样量：20μl。

2)实验步骤

取莫西沙星和莫西沙星(R，R)-异构体的混合物适量，加流动相溶解，配置成浓度为0.005mg/ml的测试溶液，并取莫西沙星及各光学异构体的标准品配置成标准溶液作为对照。

分别称取测试溶液注入液相色谱仪，调整溶剂中水和乙腈的体积比，记录色谱图。流动相中不同体积比的水和乙腈混合溶液及与其对应的分离度详见表5。

表5流动相比例筛选

	水∶乙腈	分离度
			对比例1-1	70∶30	1.06
对比例1-2	75∶25	1.24
			对比例1-3	80∶20	1.42
对比例1-4	85∶15	1.25
			对比例1-5	90∶10	0.90

从表5可以看出，当水和乙腈的体积比为80∶20时，莫西沙星与其(R，R)-异构体的分离度仅为1.42，但未达到分离度为1.50的要求。

Claims (17)

1.一种莫西沙星(R,R)-异构体的检测方法，该检测方法采用高效液相色谱仪进行检测，其色谱条件如下：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为含有L-亮氨酸和金属离子的溶剂；

所述金属离子为Cu²⁺、Zn²⁺或其混合离子；

所述溶剂包含水和有机溶剂，水和有机溶剂的体积比为77～82:23～18。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述流动相中所述L-亮氨酸的浓度为0.01～0.1mol/L。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述流动相中所述L-亮氨酸的浓度为0.025～0.075mol/L。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中，所述流动相中所述Cu²⁺离子是以硫酸铜或氯化铜的形式加入的；

所述流动相中所述Zn²⁺离子是以硫酸锌或氯化锌的形式加入的。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中，所述流动相中所述金属离子的浓度为0.01～0.1mol/L。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中，所述流动相中所述金属离子的浓度为0.025～0.075mol/L。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中，所述有机溶剂选自甲醇、乙腈和四氢呋喃中的一种或多种。

8.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中，所述有机溶剂为乙腈。

9.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中，所述流动相的流速为0.2～2.0ml/min。

10.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中，所述流动相的流速为0.8～1.2ml/min。

11.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中，所述色谱柱的理论塔板数按莫西沙星计算不低于5000。

12.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中，所述色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18或ZORBAX Eclipse XDB-C18。

13.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中，所述色谱柱的柱温为20～60℃。

14.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中，所述色谱柱的柱温为30～40℃。

15.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中，所述高效液相色谱仪的检测波长为200～300nm。

16.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中，所述高效液相色谱仪的检测波长为280～300nm。

17.权利要求1至16中任一项所述的检测方法在莫西沙星制剂检测中的应用，其中，所述莫西沙星制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、控释制剂或缓释制剂的形式。