CN103184292A

CN103184292A - 一种枣实蝇快速鉴定的方法

Info

Publication number: CN103184292A
Application number: CN201310121895XA
Authority: CN
Inventors: 程晓甜; 张伟; 阿地力·沙塔尔
Original assignee: Xinjiang Agricultural University
Current assignee: Xinjiang Agricultural University
Priority date: 2013-04-10
Filing date: 2013-04-10
Publication date: 2013-07-03

Abstract

本发明公开一种枣实蝇快速鉴定的方法，通过首次应用分子生物学方法对吐鲁番枣实蝇幼虫mtDNA COI基因序列进行DNA检测分析，采用形态学观察与PCR技术相结合的方法对枣实蝇Carpomya vesuviana Costa幼虫和蛹进行快速鉴定；最终首次测出枣实蝇mtDNA COI基因序列，同时证实本发明提供的枣实蝇快速鉴定的方法具有普遍性，为检验检疫部门提供非常快捷实用的方法，具有广泛的实用性。

Description

一种枣实蝇快速鉴定的方法

发明领域

本发明属于检疫性害虫检测领域，具体的，本发明涉及一种检疫性害虫枣实蝇的检测技术领域。

背景技术

枣实蝇(Carpomya vesuviana Costa)是一种入侵重大检疫性害虫，属双翅目Diptera实蝇科Tephritidae实蝇亚科Trypetinae实蝇族Trypetini咔实蝇属Carpomya Costa，原产于印度，是枣属植物的重要蛀果害虫，被列入我国“进境植物检疫性有害生物名录”。2007年首次在新疆吐鲁番地区的鄯善县，托克逊县及吐鲁番市发现，发生面积为1029.42hm²，导致果实产量及品质下降，丧失其经济价值，且造成的落果率高达70-90％，销毁有虫枣果2233.8t，对该地区1的枣果业造成了毁灭性的危害，严重影响农民种植红枣的积极性，农林外来入侵生物的传入给农林产业带来严重的经济损失。

枣实蝇(Carpomya vesuviana Costa)害虫主要以幼虫蛀食果肉，成虫不危害枣果，通常可造成的产量损失高达20％以上，发生严重的可以导致全部枣果受到危害，从而严重影响到红枣的产品质量及其整体的商品价值。随着经济的高速发展，无论是国内地区间还是国际间的商业贸易与人员往来都日渐频繁，实蝇的扩散几率也越来越高。枣实蝇的入侵可能对我国枣产业生产构成毁灭性危害，枣实蝇目前主要分布在意大利、高加索、毛里求斯、巴基斯坦、泰国、阿富汗等国家，在中国仅分布在新疆的吐鲁番地区，且疫情有向其它地区扩散的趋势。可见，当前最大的问题如何实现枣实蝇的快速检测鉴定。迄今为止，实蝇类害虫的种的鉴定主要依据成虫的形态特征，而卵、幼虫、蛹由于其特征差异小，且有些特征在其不同的发育时期不够稳定，因此依据形态学鉴定方法很难保证鉴定的准确度。即使枣实蝇的幼虫能依据形态学进行鉴定，但很大程度上依赖鉴定人员丰富的鉴定经验，这就制约了不同地区相关工作的进一步开展。在口岸检疫工作中，通常要将幼虫培养到成虫再进行鉴定，整个检疫鉴定过程时间长达数周，无法适应实际工作需要。显然，仅仅依靠形态学分析进行实蝇的系统发育关系与种类鉴定的研究，不能与日益增长的水果蔬菜贸易发展相协调，也不利于建立一个高效快速的检疫性实蝇的检测技术体系。从而造成检疫和防控工作具有相当大的困难。因此，非常有必要研究枣实蝇快速鉴定的新方法，特别是枣实蝇幼虫、蛹等未成熟虫态的快速鉴定方法。

目前，检验检疫部门对枣实蝇的鉴定主要以成虫的外部形态特征作为依据。但是，截获的往往是卵、幼虫或蛹等虫态，传统方法是对其进行室内饲养，待成虫羽化后再进行鉴定，这需要5d-15d的检测周期，无法适应检验检疫的快速验放要求。在检疫截获未成熟虫态(幼虫或蛹)的几率较大，一般情况下室内饲养至成虫大约需5d-15d左右的时间，检测周期较长，不能满足贸易性果蔬现场检疫快速通关的需求，因此利用分子生物学技术快速检疫鉴定害虫种类已成为趋势。

发明内容

针对现有技术中未见报道专门针对检疫性害虫枣实蝇的检测的技术现状。本发明为了提供了一种针对枣实蝇的快速鉴定方法，能够准确及时对截获的疑似枣实蝇的卵、蛹、幼虫、成虫及残体等进行鉴定。

本发明的技术方案：本发明首次应用分子生物学方法对吐鲁番枣实蝇幼虫、蛹、成虫等mtDNA COI基因序列进行DNA检测分析，采用形态学观察与PCR技术相结合的方法对新疆吐鲁番地区的枣实蝇Carpomya vesuviana Costa幼虫、蛹、成虫等进行快速鉴定；最终首次测出枣实蝇mtDNA COI基因序列，并且设计出一对枣实蝇COI特异性引物，同时通过形态学鉴定确认的七种实蝇标本进行验证，证实本发明提供的枣实蝇快速鉴定的方法具有普遍性，为检验检疫部门提供非常快捷实用的方法。

本发明具体提供了一种针对枣实蝇快速鉴定的方法，其具体步骤如下：

(1)枣实蝇形态鉴定：对枣实蝇幼虫和蛹进行形态学观察，解剖镜下观察幼虫的头部特征、气门形状、尾部特征，蛹的气门特征等，并进行拍照，同时对多余的幼虫和蛹进行室内培养；枣实蝇标本的鉴定根据枣实蝇的形态学特征，用体式显微镜观察各鉴定部位包括头部、复眼、喙、中胸背板、翅脉、臀条、腹部、雌雄虫生殖器、根据外部形态进行鉴定，从而确定所用的材料均为枣实蝇。

(2)选用枣实蝇的标本，采用试剂盒推荐的方法来提取基因组DNA和测序：取四头枣实蝇的蛹放入冰浴预冷的收集管(collection Tube)中，用研磨棒快速研磨成糊状，加入350μl的SolutionA和0.9μl的RnaseAI后用研磨棒加速研磨成匀浆，再加入350μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入collection Tube中，充分振荡混匀后65℃保温5min后，加入4μl的试剂B，经充分混匀后，加入1ml事先在4℃冰箱里预冷的溶液SolutionC，充分混合后12000rpm离心3min，除去上面一层清液，再加入1ml事先在4℃冰箱里预冷的溶液SolutionC，震荡混合后12000rpm离心2min；除去上面一层带有蓝色有机相清液，然后将无色下层的水相溶液转置于collection Tube上面的Filter cup中，12000rpm离心1min，除去Filter cup，在滤液中加入DB buffer400μl并充分混匀，将试剂盒中的Spincolumn安放于collection Tube上，12000rpm离心1min，除去过滤后剩余的液体；将500μl的RinseA加入至Spin column中12000rpm离心30sec，除去过滤后剩余的液体；在Spin column中加入700μl的RinseB进行离心12000rpm30sec，除去过滤后剩余的液体；试剂盒中的Spin column安置于collection Tube上，12000rpm离心1min，除去过滤后剩余的液体；将Spin column安置于1.5ml的离心管上，静置几分钟，等酒精挥发完后，将60-100μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer在Spin column膜的中央处加入，在室温条件下放置1min，经12000rpm离心1min，洗脱DNA。

(3)PCR扩增：目标片段PCR扩增的引物分别为Uea7和Uea10；PCR反应体系：PCR扩增在定量梯度PCR仪上进行，反应体系：10mmol/L10×Buffer，0.25mmol/LMg²⁺，0.25mmol/LdNTP，上下游引物各0.2μmol/L，1UTaq酶(Takara)，模板DNA1μL，加水至总体积25μL，反应条件为94℃/5min，95℃/40s，55℃/30s，72℃/1min，30个循环，最后72℃延伸7min。PCR反映结束后，分别提取PCR产物5μL在含溴化已锭的1.5％琼脂凝胶多功能电泳仪上电泳30min(90V)，数字图像分析仪上检测结果，观察扩增带的大小和宽度。

(4)采用试剂盒的方法快速提取实蝇基因组DNA，经PCR扩增并测序，利用引物Uea7/Uea10分别测定了吐鲁番地区的鄯善县，托克逊县及吐鲁番市枣实蝇的线粒体DNA细胞色素氧化酶I(COI)从M7至COOH之间约700bp片段序列，共获得COI基因序列4条片段长度为666bp的序列；将PCR产物基因序列进行比较，即将枣实蝇mtDNACOI基因序列比较分析，将测得的基因序列选用Clustal X多序列对位排列程序进行多序列对位排列可知序列完全相同，并且进行人工校对，将枣实蝇mtDNACOI基因序列录入GenBank数据库，序列号为HQ687210；经测序比较发现，扩增产物目的基因序列完全相同，将试验所得序列与本发明测出的枣实蝇模式标本基因序列比较分析确定为枣实蝇。

通过实施本发明具体的发明内容，可以达到以下有益效果。

(1)本发明首次应用分子生物学方法对吐鲁番枣实蝇幼虫、蛹、成虫等mtDNA COI基因序列进行DNA检测分析，最终首次测出枣实蝇mtDNA COI基因序列，通过对枣实蝇幼虫、蛹、成虫等进行形态鉴定的同时进行了PCR检测，6h内可对疑似枣实蝇完成检疫鉴定，不仅适用于枣实蝇成虫的比较鉴定而且能快速比对鉴定幼虫、蛹和卵等虫态，而且首次将枣实蝇序列录入GenBank数据库，序列号为HQ687210，验证了分子检测方法的准确性和可靠性，能够准确及时对截获的实蝇幼虫进行鉴定，供检验检疫部门参考应用。

(2)本发明打破了现有技术常规仅仅依靠形态学鉴定枣实蝇的方法，而是建立了从分子方面快速检测枣实蝇的技术，为检疫性害虫枣实蝇的检疫提供了一种新的方法；本发明提供建立的分子生物学方法不仅能鉴定实蝇的完整的、活的卵、幼虫、蛹、成虫而且能快速鉴定幼虫、蛹和卵等虫态死亡、不完整的各虫态虫体，使实蝇的鉴定从局限的完整成虫虫体到不限虫态、完整度，大幅度减少检疫难度，同时鉴定周期从传统的形态学鉴定所需时间缩短到5-15d(天)以内。

附图说明

图1所示为采用引物Uea7和Uea10的PCR模板DNA质量电泳图。图中，M为DL2000DNA Marker；1为吐鲁番市枣实蝇幼虫Carpomya vesuvianaCosta；2为吐鲁番市枣实蝇蛹Carpomya vesuviana Costa；3为鄯善县枣实蝇蛹Carpomya vesuviana Costa；4为托克逊县枣实蝇蛹Carpomya vesuviana Costa；5为阴性对照。

图2为PCR产物目的基因的序列比较图。图中，“.”代表相同的碱基；1为吐鲁番市枣实蝇幼虫Carpomya vesuviana Costa；2为吐鲁番市枣实蝇蛹Carpomya vesuviana Costa；3为鄯善县枣实蝇蛹Carpomya vesuviana Costa；4为托克逊县枣实蝇蛹Carpomya vesuviana Costa。

具体实施方式

下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。本发明中设备和材料有：

枣实蝇标本分别采自吐鲁番地区的鄯善县，托克逊县及吐鲁番市不同地区地点，试验的标本用100％酒精浸泡并保存于4℃冰箱。采用枣实蝇对照标准标本采用中国科学院动物所提供。

采用的酶及其他试剂：采用的Solution A、SolutionC、RnaseAI、试剂B、Filter cup、DB buffer、Spin column、RinseA、RinseB均包含Takara试剂盒其中，都购自宝生物工程(大连)有限公司，Taq酶、PCR反应体系试剂(dNTP、10×buffer和Mg²⁺)、琼脂糖、EB、2000bp Ladder Marker均购自宝生物工程(大连)有限公司。

主要仪器：定量梯度PCR仪(Biometra)、高速冷冻离心机(CF16R×II型)、多功能电泳仪、数字图像分析仪(Alphal220V型)、核酸蛋白检测仪、全自动高压灭菌仪、全温水浴锅、超低温冰箱等。

本发明中选用的所有试剂、仪器及原辅材料都为本领域熟知选用的，但不限制本发明的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施。

实施例一：新疆吐鲁番地区枣实蝇的快速鉴定

新疆吐鲁番地区枣实蝇快速鉴定方法的具体步骤如下：

(2)选用枣实蝇的标本，采用试剂盒推荐的方法来提取基因组DNA和测序：取四头枣实蝇的蛹放入冰浴预冷的收集管(collection Tube)中，用研磨棒快速研磨成糊状，加入350μl的Solution A和0.9μl的RnaseAI后用研磨棒加速研磨成匀浆，再加入350μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入collection Tube中，充分振荡混匀后65℃保温5min后，加入4μl的试剂B，经充分混匀后，加入1ml事先在4℃冰箱里预冷的溶液SolutionC，充分混合后12000rpm离心3min，除去上面一层清液，再加入1ml事先在4℃冰箱里预冷的溶液SolutionC，震荡混合后12000rpm离心2min；除去上面一层带有蓝色有机相清液，然后将无色下层的水相溶液转置于collection Tube上面的Filter cup中，12000rpm离心1min，除去Filter cup，在滤液中加入DB buffer400μl并充分混匀，将试剂盒中的Spincolumn安放于collection Tube上，12000rpm离心1min，除去过滤后剩余的液体；将500μl的RinseA加入至Spin column中12000rpm离心30sec，除去过滤后剩余的液体；在Spin column中加入700μl的RinseB进行离心12000rpm30sec，除去过滤后剩余的液体；试剂盒中的Spin column安置于collection Tube上，12000rpm离心1min，除去过滤后剩余的液体；将Spin column安置于1.5ml的离心管上，静置几分钟，等酒精挥发完后，将60-100μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer在Spin column膜的中央处加入，在室温条件下放置1min，经12000rpm离心1min，洗脱DNA。

通过上述提供的分子生物学方法对吐鲁番枣实蝇幼虫mtDNACOI基因序列进行DNA检测分析，最终首次测出枣实蝇mtDNA COI基因序列，通过对枣实蝇幼虫、蛹进行形态鉴定的同时进行了PCR检测，6h内可完成检疫鉴定，不仅适用于枣实蝇成虫的比较鉴定而且能快速比对鉴定幼虫、蛹和卵等虫态，而且首次将枣实蝇序列录入GenBank数据库，序列号为HQ687210，验证了分子检测方法的准确性和可靠性，能够准确及时对截获的实蝇幼虫进行鉴定，供检验检疫部门参考应用。

上述提供的新疆吐鲁番地区枣实蝇快速鉴定方法，不仅能鉴定实蝇的成虫而且能快速鉴定幼虫、蛹和卵等虫态，使实蝇的鉴定周期从传统的形态学鉴定所需20天时间缩短到一天以内，这也是首次从分角度鉴定枣实蝇，在植物检疫检疫性实蝇的日常鉴定中有极大的优势。

实施例二：枣实蝇的形态鉴定

对枣实蝇幼虫和蛹进行形态学观察，解剖镜下观察幼虫的头部特征、气门形状、尾部特征，蛹的气门特征等，并进行拍照，同时对多余的幼虫和蛹进行室内培养。枣实蝇标本的鉴定根据枣实蝇的形态学特征，用体式显微镜观察各鉴定部位包括头部、复眼、喙、中胸背板、翅脉、臀条、腹部、雌雄虫生殖器、根据《实蝇类重要害虫鉴定图册》外部形态进行鉴定，从而确定本发明所用的材料均为枣实蝇。

实施例三：采用实蝇模式标本试剂盒的方法来提取枣实蝇基因组DNA

取四头枣实蝇的蛹放入冰浴预冷的收集管(collection Tube)中，用研磨棒快速研磨成糊状，加入350μl的Solution A和0.9μl的RnaseAI后用研磨棒加速研磨成匀浆，再加入350μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入collection Tube中，充分振荡混匀后65℃保温5min后，加入4μl的试剂B，经充分混匀后，加入1ml事先在4℃冰箱里预冷的溶液SolutionC，充分混合后12000rpm离心3min，除去上面一层清液，再加入1ml事先在4℃冰箱里预冷的溶液SolutionC，震荡混合后12000rpm离心2min；除去上面一层带有蓝色有机相清液，然后将无色下层的水相溶液转置于collection Tube上面的Filter cup中，12000rpm离心1min，除去Filter cup，在滤液中加入DB buffer400μl并充分混匀，将试剂盒中的Spincolumn安放于collection Tube上，12000rpm离心lmin，除去过滤后剩余的液体；将500μl的RinseA加入至Spin column中12000rpm离心30sec，除去过滤后剩余的液体；在Spin column中加入700μl的RinseB进行离心12000rpm30sec，除去过滤后剩余的液体；试剂盒中的Spin column安置于collection Tube上，12000rpm离心1min，除去过滤后剩余的液体；将Spin column安置于1.5ml的离心管上，静置几分钟，等酒精挥发完后，将60-100μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer在Spin column膜的中央处加入，在室温条件下放置1min，经12000rpm离心1min，洗脱DNA。

上述步骤中，因为上层(有机相)带有蓝色，必须除尽。为了防止DNA结合到DNA制备膜上，不必考虑相间沉淀，在过滤时将会被去除。

上述步骤中，请确认是否已将指定体积的无水乙醇加入RinseB中。加入时应沿着Spin column管壁四周，这样可以完全将粘附在管壁上的盐分冲洗干净。

上述步骤中，应将Elution Buffer或者灭菌后的蒸馏水加热至65℃，这样使用时有利于提高洗脱效率。

实施例四：PCR扩增、产物纯化

对模式标本基因组DNA进行PCR扩增，其扩增引物和测序引物：目标片段PCR扩增的引物分别为Uea7和Ueal0。

PCR反应体系：PCR扩增在定量梯度PCR仪上进行，反应体系：10mmol/L10×Buffer，0.25mmol/LMg²⁺，0.25mmol/LdNTP，上下游引物各0.2μmol/L，1UTaq酶(Takara)，模板DNA1μL，加水至总体积25μL，反应条件为94℃/5min，95℃/40s，55℃/30s，72℃/1min，30个循环，最后72℃延伸7min。PCR反映结束后，分别提取PCR产物5μL在含溴化已锭的1.5％琼脂凝胶多功能电泳仪上电泳30min(90V)，数字图像分析仪上检测结果，观察扩增带的大小和宽度，确切的DNA浓度通过核酸蛋白检测仪测定。

PCR扩增结果：PCR反应结束后，经1.5％琼脂糖凝胶电泳显示，枣实蝇模板DNA扩增结果中可以看出500-750bp之间大约700bp目标片段的位置有一条扩增带，亮度差异表示模板浓度的差异，DNA确切浓度和纯度通过核酸蛋白检测仪来测定，参见附图1。

将50μL的DNA样品用含溴化已锭的1.5％琼脂凝胶上电泳30min(90V)电泳分离，电泳缓冲体系为TBE，回收700bp片段DNA。

实施例五：测序及分子鉴定

COI基因组成：分别对已测定的4条序列的COI基因蛋白编码区第1位-666位点666bp进行排列，3个不同地方的枣实蝇COI基因序列碱基T、C、A、G的含量均为38.6％，14.6％，32.6％，14.3％，A+T含量为71.2％。

序列比较：利用引物Uea7/Uea10分别测定了吐鲁番地区的鄯善县，托克逊县及吐鲁番市枣实蝇的线粒体DNA细胞色素氧化酶I(COI)从M7至COOH之间约700bp片段序列，共获得COI基因序列4条片段长度为666bp的序列；将PCR产物基因序列进行比较，即将枣实蝇mtDNACOI基因序列比较分析，将测得的基因序列选用Clustal X多序列对位排列程序进行多序列对位排列，参见附图2可知四者的序列完全相同，并且进行人工校对，将枣实蝇mtDNACOI基因序列录入GenBank数据库，序列号为HQ687210。具体引用的序列引物和序列可参见附后提供的SEQUENCE LISTING(序列表)。

引物采用2对引物分别为UEA7/UEA10和UEA7/UEA10，其中can-F和can-R用于质量检测，UEA7和UEA10用于目标片段扩增，见表1。

表1：PCR引物(从5’到3’端)

引物名称	引物序列
		can-F	AAGAGCGACGGGCGATG
can-R	CTAGGATTAGATACCCTATT
		UEA7	TACAGTTGGAATAGACGTTGATAC
UEA10	TCCAATGCACTAATCTGCCATATTA

由表1可知四者的序列完全相同，证明了本发明提供的枣实蝇快速鉴定的方法不受虫态和地理来源的限制，具有普遍性的实用性。

Claims

1.一种枣实蝇快速鉴定的方法，其特征在于，具体鉴定方法步骤如下：

(1)枣实蝇形态鉴定：对枣实蝇幼虫和蛹进行形态学观察，解剖镜下观察幼虫的头部特征、气门形状、尾部特征，蛹的气门特征等，并进行拍照，同时对多余的幼虫和蛹进行室内培养；枣实蝇标本的鉴定根据枣实蝇的形态学特征，用体式显微镜观察各鉴定部位包括头部、复眼、喙、中胸背板、翅脉、臀条、腹部、雌雄虫生殖器、根据外部形态进行鉴定，从而确定所用的材料均为枣实蝇；

(2)选用枣实蝇的标本，采用试剂盒推荐的方法来提取基因组DNA和测序：取四头枣实蝇的蛹放入冰浴预冷的收集管(collection Tube)中，用研磨棒快速研磨成糊状，加入350μl的SolutionA和0.9μl的RnaseAI后用研磨棒加速研磨成匀浆，再加入350μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入collection Tube中，充分振荡混匀后65℃保温5min后，加入4μl的试剂B，经充分混匀后，加入1ml事先在4℃冰箱里预冷的溶液SolutionC，充分混合后12000rpm离心3min，除去上面一层清液，再加入1ml事先在4℃冰箱里预冷的溶液SolutionC，震荡混合后12000rpm离心2min；除去上面一层带有蓝色有机相清液，然后将无色下层的水相溶液转置于collection Tube上面的Filter cup中，12000rpm离心1min，除去Filter cup，在滤液中加入DB buffer400μl并充分混匀，将试剂盒中的Spincolumn安放于collection Tube上，12000rpm离心1min，除去过滤后剩余的液体；将500μl的RinseA加入至Spin column中12000rpm离心30sec，除去过滤后剩余的液体；在Spin column中加入700μl的RinseB进行离心12000rpm30sec，除去过滤后剩余的液体；试剂盒中的Spin column安置于collection Tube上，12000rpm离心1min，除去过滤后剩余的液体；将Spin column安置于1.5ml的离心管上，静置几分钟，等酒精挥发完后，将60-100μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer在Spin column膜的中央处加入，在室温条件下放置1min，经12000rpm离心1min，洗脱DNA；

(3)PCR扩增：目标片段PCR扩增的引物分别为Uea7和Uea10；PCR反应体系：PCR扩增在定量梯度PCR仪上进行，反应体系：10mmol/L10×Buffer，0.25mmol/LMg²⁺，0.25mmol/LdNTP，上下游引物各0.2μmol/L，1UTaq酶(Takara)，模板DNA1μL，加水至总体积25μL，反应条件为94℃/5min，95℃/40s，55℃/30s，72℃/1min，30个循环，最后72℃延伸7min。PCR反映结束后，分别提取PCR产物5μL在含溴化已锭的1.5％琼脂凝胶多功能电泳仪上电泳30min(90V)，数字图像分析仪上检测结果，观察扩增带的大小和宽度；

(4)采用试剂盒的方法快速提取实蝇基因组DNA，经PCR扩增并测序，利用引物Uea7/Uea10分别测定了吐鲁番地区的鄯善县，托克逊县及吐鲁番市枣实蝇的线粒体DNA细胞色素氧化酶I(COI)从M7至COOH之间约700bp片段序列，共获得COI基因序列4条片段长度为666bp的序列；将PCR产物基因序列进行比较，即将枣实蝇mtDNACOI基因序列比较分析，将测得的基因序列选用ClustalX多序列对位排列程序进行多序列对位排列可知序列完全相同，并且进行人工校对，将枣实蝇mtDNACOI基因序列录入GenBank数据库，序列号为HQ687210；经测序比较发现，扩增产物目的基因序列完全相同，将试验所得序列与测出的枣实蝇模式标本基因序列比较分析确定为枣实蝇。