CN103168687B - 一种诱导烟草叶片丛生芽快速生根的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种诱导烟草叶片丛生芽快速生根的方法，选取生长均匀一致、苗高2.0~3.0cm烟草叶片的丛生芽剪下，去除底部叶片，保留顶部叶片和顶芽；用培养瓶盛装培养基，以顶部叶片接触诱导生根培养基的方式放置烟草叶片丛生芽，顶芽离培养基表面为0.5~1.0cm，在常规光照条件下恒温培养12~14d，培养温度为26~28℃，培养瓶内相对湿度为90%以上。本发明利用已驯化烟草叶片其吸收营养物质、生长物质极性运输的特性，取其丛生芽作为诱导生根材料，采用倒置培养方式，实现烟草叶片丛生芽的快速生根。与常规正向放置方式相比，提高了丛生芽生根的效率，缩短9~12天，节省了培养时间和培养空间，诱导所生根系不接触培养基省去了煅苗时洗根操作，节省了劳力，具有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物技术的组织培养技术领域，具体涉及一种诱导烟草叶片丛生芽快速生根的方法。
背景技术
烟草（Nicotiana tabacum）是最早开展组织培养的模式植物之一，20世纪90年代战淑敏（烟草叶组织培养直接获得再生植株，莱阳农学院学报，1993, 10(2):131~132）建立了采用叶片不经过愈伤组织直接诱导产生丛生芽、再诱导丛生芽生根的烟草组织快速培养方法，2003年施和平和黄群声（烟草叶片组织培养及植株再生，亚热带植物科学，2003,32(4):63）在烟草叶组织培养直接获得再生植株中发现培养基表面的根产生大量的白色根毛，发明人在利用抗病单株叶片培养进行再生植株时发现培养基表面的根产生大量白色根毛的类似现象。本领域内，诱导烟草叶片丛生芽生根是将丛生芽的茎栽入培养基的方式，但是，实际操作中发现这种诱导生根方式生根不整齐，生根时间较长，通常21~26天左右，而且丛生芽的根上会粘有大量的培养基，移栽煅苗时需要洗根，以防止根所带培养基繁殖微生物，影响根的生长，甚至引起烂根。为此，开发一种工艺简化、成株速度快、培养周期短、生产成本低的诱导烟草叶片丛生芽快速生根的方法，对于组织培养的发展非常有利。
发明内容
本发明的目的在于提供一种工艺简化、成株速度快、培养周期短、生产成本低的诱导烟草叶片丛生芽快速生根的方法。
除另有说明外，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。
本发明的目的是这样实现的，包括以下步骤：
A、选择丛生芽：选取生长均匀一致、苗高2.0~3.0cm烟草叶片的丛生芽剪下，去除底部叶片，保留顶部叶片和顶芽；所述的烟草叶片为已经驯化了的烟草叶片，所述的驯化是叶片不经过愈伤组织直接在叶片上分化为丛生芽；
B、诱导生根：用培养瓶盛装培养基，以顶部叶片接触诱导生根培养基的方式放置烟草叶片丛生芽，顶芽离培养基表面为0.5~1.0cm，在常规光照条件下恒温培养12~14d，培养温度为26~28℃，培养瓶内相对湿度为90%以上；所述的烟草叶片丛生芽是以顶部叶片直立或倾斜接触诱导生根培养基；所述的诱导生根培养基为加入了吲哚丁酸和蔗糖的MS培养基，吲哚丁酸的加入量为0.5~1.5mg/L，蔗糖的加入量为MS培养基的2~4%。
本发明利用已驯化烟草叶片其吸收营养物质、生长物质极性运输的特性，取其丛生芽作为诱导生根材料，采用倒置培养方式，实现烟草叶片丛生芽的快速生根。与常规的正向放置方式相比，提高了丛生芽生根的效率，缩短9~12天，节省了培养时间和培养空间，诱导所生根系不接触培养基省去了煅苗时洗根操作，节省了劳力，具有广泛的应用前景。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限定，任何基于本发明的技术思路的等同替换，均落入本发明的保护范围。
本发明所述的诱导烟草叶片丛生芽快速生根的方法，包括以下步骤：
A、选择丛生芽：选取生长均匀一致、苗高2.0~3.0cm烟草叶片的丛生芽剪下，去除底部叶片，保留顶部叶片和顶芽；
B、诱导生根：用培养瓶盛装培养基，以顶部叶片接触诱导生根培养基的方式放置烟草叶片丛生芽，顶芽离培养基表面为0.5~1.0cm，在常规光照条件下恒温培养12~14d，培养温度为26~28℃，培养瓶内相对湿度为90%以上。
所述的烟草叶片为已经驯化了的烟草叶片，所述的驯化是叶片不经过愈伤组织直接在叶片上分化为丛生芽。
所述的烟草叶片丛生芽保留顶部叶片2~3片。
所述的烟草叶片丛生芽是以顶部叶片直立或倾斜接触诱导生根培养基。
所述的烟草叶片丛生芽在诱导生根培养基上的放置量为10~30枝。
所述的诱导生根培养基为加入了吲哚丁酸（IBA）和蔗糖的MS培养基，吲哚丁酸的加入量为0.5~1.5mg/L，蔗糖的加入量为MS培养基的2~4%。作为优选方式，所述的吲哚丁酸的加入量为1.0mg/L，蔗糖的加入量为MS培养基的3%。
所述的培养瓶为兰花培养瓶、罐头瓶或三角瓶盛装。所述的诱导生根培养基厚度为1.0~2.0cm。
本发明的工作原理：
本发明利用已驯化烟草叶片其吸收营养物质、生长物质极性运输的特性，取其丛生芽作为诱导生根材料，采用倒置培养方式，实现烟草叶片丛生芽的快速生根。
实施例1
选取生长均匀一致、苗高2.0~3.0cm烟草叶片的丛生芽剪下，去除底部叶片，保留2~3片顶部叶片和顶芽；所述的诱导生根培养基为加入0.5mg/L吲哚丁酸和4%蔗糖的MS培养基，培养基由兰花培养瓶盛装，培养基厚度为1.0cm；烟草叶片丛生芽顶部叶片直立接触诱导生根培养基，放置量为10枝，顶芽离培养基表面为0.5~1.0cm，在常规光照条件下恒温培养12d，培养温度为26℃，培养瓶内相对湿度为91%。
实施例2
选取生长均匀一致、苗高2.0~3.0cm烟草叶片的丛生芽剪下，去除底部叶片，保留2~3片顶部叶片和顶芽；所述的诱导生根培养基为加入1.5mg/L吲哚丁酸和2%蔗糖的MS培养基，诱导生根培养基由罐头瓶，培养基厚度为2.0cm；烟草叶片丛生芽顶部叶片倾斜接触诱导生根培养基，放置量为30枝，顶芽离培养基表面为0.5~1.0cm，在常规光照条件下恒温培养14d，培养温度为28℃，培养瓶内相对湿度为92%。
实施例3
选取生长均匀一致、苗高2.0~3.0cm烟草叶片的丛生芽剪下，去除底部叶片，保留2~3片顶部叶片和顶芽；所述的诱导生根培养基为加入1.0mg/L吲哚丁酸和3%蔗糖的MS培养基，诱导生根培养基由三角瓶盛装，培养基厚度为1.5cm；烟草叶片丛生芽顶部叶片直立和倾斜接触诱导生根培养基，放置量为20枝，顶芽离培养基表面为0.5~1.0cm，在常规光照条件下恒温培养13d，培养温度为27℃，培养瓶内相对湿度为94%。
实施例4
选择了30个烟草叶片丛生芽样本，分别以正向放置方式和倒置培养方式培养，倒置培养方式按实施例1~3操作，对比两种培养方式的生根率效果。培养12天后统计诱导丛生芽生根情况，结果见表1。
表1 不同放置方式诱导生根12天时丛生芽生根情况比较
统计结果显示：以倒置培养方式12天，丛生芽生根效果可以达到组培苗移栽要求，比正向放置方式培养缩短了9~12天。两种诱导方式丛生芽生根率（100%×生根丛生芽数/试验丛生芽总数）差异显著，倒置培养方式比正向放置方式的高1.90~16.63倍，平均值的差异高达约4.12倍；此外，倒置培养方式，烟草叶片丛生芽的叶柄不与培养基接触，诱导所生的根不会粘附培养基，所以移栽时省去了正向放置方式的洗根操作。
Claims (6)
1.一种诱导烟草叶片丛生芽快速生根的方法，其特征在于包括以下步骤：
A、选择丛生芽：选取生长均匀一致、苗高2.0~3.0cm烟草叶片的丛生芽剪下，去除底部叶片，保留顶部叶片和顶芽；所述的烟草叶片为已经驯化了的烟草叶片，所述的驯化是叶片不经过愈伤组织直接在叶片上分化为丛生芽；
B、诱导生根：用培养瓶盛装培养基，以顶部叶片接触诱导生根培养基的方式放置烟草叶片丛生芽，顶芽离培养基表面为0.5~1.0cm，在常规光照条件下恒温培养12~14d，培养温度为26~28℃，培养瓶内相对湿度为90%以上；所述的烟草叶片丛生芽是以顶部叶片直立或倾斜接触诱导生根培养基；所述的诱导生根培养基为加入了吲哚丁酸和蔗糖的MS培养基，吲哚丁酸的加入量为0.5~1.5mg/L，蔗糖的加入量为MS培养基的2~4%。
2.根据权利要求1所述的诱导烟草叶片丛生芽快速生根的方法，其特征是：所述的烟草叶片丛生芽保留顶部叶片2~3片。
3.根据权利要求1或2所述的诱导烟草叶片丛生芽快速生根的方法，其特征是：所述的烟草叶片丛生芽在诱导生根培养基上的放置量为10~30枝。
4.根据权利要求1所述的诱导烟草叶片丛生芽快速生根的方法，其特征是：所述的吲哚丁酸的加入量为1.0mg/L，蔗糖的加入量为MS培养基的3%。
5.根据权利要求1所述的诱导烟草叶片丛生芽快速生根的方法，其特征是：所述的培养瓶为兰花培养瓶、罐头瓶或三角瓶盛装。
6.根据权利要求1所述的诱导烟草叶片丛生芽快速生根的方法，其特征是：所述的诱导生根培养基厚度为1.0~2.0cm。
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