CN103124566B - 使用恶臭冲消剂制备和/或处理生物样品的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于制备和/或处理生物样品的生物技术方法，特别涉及用于从所述生物样品中分离至少一种目标生物分子的生物技术方法，其特征在于，使用至少一种恶臭冲消剂来阻挡、减少、遮盖和/或抑制所述生物样品的制备和/或处理过程中的恶臭和/或恶臭形成。

Description

使用恶臭冲消剂制备和/或处理生物样品的方法

本发明涉及制备和/或处理样品的生物技术领域，特别涉及从生物样品分离生物分子(例如核酸)的生物技术领域。

发明背景

用于具有恶臭气味的核酸、蛋白或其它目标分子的制备或者在其制备和/或处理过程中生成的某一种的起始材料有很多种。此外，在生物样品的制备和/或处理过程中，常用的化学品也促成恶臭气味。

该恶臭是从事个别样品和/或化学品的人们(例如实验室技术员)的烦恼，特别是在制备和/或处理大量(数量/体积)样品的时候。

因此，我们的目标是为制备和/或处理生物样品，特别是为分离核酸、蛋白或其它目标分子提供改进的方法，这样做可减轻由在制备和/或处理生物技术领域中的样品的过程中的恶臭生成而强加的负担。

发明内容

本发明基于恶臭冲消剂可用于在制备和/或处理生物样品的过程中阻挡、减轻、遮盖和/或抑制恶臭的发现。所述样品本身可具有强烈臭味的性质和/或可在其制备和/或处理(例如大肠杆菌(E.coli)培养、粪便或尿液样品)过程中产生强烈臭味的性质，和/或所述样品的制备/处理过程中可能存在具有恶臭性质的物质(例如β-巯基乙醇或苯酚)。如本发明所述，使用至少一种恶臭冲消剂中和、减轻、抑制、平衡、去臭和/或遮盖存在于和/或在所述制备和/或处理过程中产生的恶臭。我们吃惊地发现，通过选择正确的恶臭冲消剂，其使用不会对所述生物样品的制备和/或处理(例如用于分离核酸时)产生不良影响。通过为待处理和/或制备的生物样品选择合适的恶臭冲消剂来实现这些优点。另外，选择合适的包装和恶臭冲消剂各自的呈现形式也是重要的，以防止其影响所述生物样品的制备和/或处理，特别防止所述恶臭冲消剂污染所述样品。本发明描述本发明的一般概念，以及生物样品和恶臭冲消剂的特定合适的结合，来中和、阻挡、抑制、减轻和/或遮盖存在于和/或产生于所述生物样品的制备和/或处理过程中的恶臭。

本发明的第一方面涉及用于制备和/或处理生物样品的方法，其特征在于，使用至少一种恶臭冲消剂来阻挡、减轻、遮盖和/或抑制所述生物样品的制备和/或处理过程中的恶臭和/或恶臭形成。

本发明的第二方面涉及至少一种恶臭冲消剂的应用，所述应用用于阻挡、减轻、遮盖和/或抑制生物样品的制备和/或处理过程中的恶臭和/或恶臭形成。

本发明的第三方面涉及含有生物样品的实验室器皿，其中，所述容器包括至少一种恶臭冲消剂。

根据下述说明和附加权利要求，本发明的其它目的、特征、优点和方面对本领域技术人员而言是显而易见的。然而，应理解，尽管下述说明、附加权利要求和特定实施例表示所述应用的优选实施方式，其也仅以说明方式给出。通过阅读下文，落在所述公开的发明的精神和范围内的不同变化和修改对于本领域技术人员而言是显而易见的。

发明详述

本发明基于以下发现，即能够利用恶臭冲消剂来阻挡、减轻、抑制、中和和/或遮盖生物技术领域中生物样品的制备和/或处理过程中的恶臭和分别的恶臭形成，特别是在培养和/或处理所述生物样品用于从中分离生物目标分子时(例如核酸、蛋白和/或其它生物分子如脂质)。通过选择不影响所需生物样品的制备和/或处理的恶臭冲消剂，提供新的概念，所述概念有以下优点：让从事生物样品的制备和/或处理的人员(例如实验室技术员)不受恶臭、恶臭形成的困扰。如上所述，生物样品的处理和/或制备过程中的恶臭或者恶臭形成对于从事相应样品，特别是所从事的工作包括处理和/或制备大量样品的人员(如实验室技术员)来说是很大的困扰。因此，本发明指导在生物样品的制备和/或处理过程中使用恶臭冲消剂的概念提供了新颖的方法，因为恶臭冲消剂长期未用于所述目的。此外，发明人还发现为有关样品分别选择正确的恶臭冲消剂是重要的，以避免所述恶臭冲消剂对所需生物样品的制备和/或处理产生不良影响。此外，还发现没有任何香料能中和任何生物样品的恶臭(例如，通过遮盖所述恶臭)，某些香料甚至增加所述恶臭的气味。因此，选择合适的恶臭冲消剂，以及所述恶臭冲消剂和有关样品的配合是重要的。

用于分离核酸、蛋白或其它目标分子的很多类型的起始材料(例如生物样品)具有和/或在其制备和/或处理过程中产生难闻的、恶臭的气味。而且，在相应样品的制备和/或处理过程中，特别是在分离核酸、蛋白和/或其它目标分子时涉及难闻 气味的化学品的使用，从而导致恶臭。此外，在处理和/或制备过程中(例如由于化学反应)也会产生恶臭的物质。通过使用如本发明所述的恶臭冲消剂能遮盖、消除、抑制和/或至少减少该难闻、恶臭的气味。

因此，在第一方面中，提供了用于制备和/或处理生物样品的方法，其特征在于，使用至少一种恶臭冲消剂来阻挡、减少、遮盖和/或抑制所述生物样品的制备和/或处理过程中的恶臭和/或恶臭形成。

在本发明所述的方法中可使用的生物样品包括但不限于真核细胞、原核细胞、细胞培养物、细菌细胞培养物、病毒颗粒、微生物、粪便、大便、血液、体液、临床样品、尿液、拭子、组织和衍生自其中的样品，以及具有或在其制备和/或处理过程中可产生恶臭的任何样品。

根据一个实施方式，所述样品具有或在其处理和/或制备过程中(例如，在其培养或分解过程中)产生恶臭。相关样品的一个例子包括细菌培养物(例如大肠杆菌培养物)，所述细菌培养物在其生长过程中以及制备过程中(例如在分解过程中和/或从其中分离核酸或其它生物分子时)都产生强烈恶臭气味。

根据一个实施方式，所述生物样品的制备和/或处理过程中(特别是在核酸或蛋白分离过程中)的恶臭和/或恶臭形成至少部分可归因于具有或在其使用过程中产生难闻气味的至少一种物质的使用。相应的物质可包含在以下物品中：例如用于制备和/或处理所述生物样品的化学品、用于从所述样品分离生物分子(例如核酸或蛋白)的化学品。此外，恶臭物质还可产生于制备和/或处理过程中，例如，归因于所用化学贫和所述样品的化学反应。具有恶臭或在生物样品的制备和/或处理过程中产生恶臭的相应恶臭物质的例子包括但不限于硫醇例如β巯基乙醇、恶臭杂环芳族胺、恶臭杂环胺、恶臭杂环脂族胺、恶臭脂肪伯二胺、恶臭羧酸及其盐和酯，例如丁酸、乙酸、蚁酸和乙酸盐、恶臭脂肪酸、恶臭醇类、乙醇、苯酚、二硫苏糖醇(DTT)、异丙醇和其它醇类。

在若干可能情况下，在所述生物样品的制备和/或处理过程中包括并使用所述恶臭冲消剂。

可在有形成恶臭的风险的情况下添加所述恶臭冲消剂，例如，在细胞培养物(例如细菌细胞培养物)接种时、在其生长时、在所述细胞的收获前或收获中、在所述制备前和/或在制备所述样品材料和/或处理所述样品的其它步骤中，特别是在从所述生物分子培养物分离生物分子(例如核酸)时。还可在储存所述起始材料(通常是生物样品)之前添加所述恶臭冲消剂。

就恶臭冲消剂而言，可单独或联合使用一种或多种物质作为恶臭冲消剂。因此，可使用能够中和所述恶臭从而能够阻挡、抑制、减少、遮盖或消除所述恶臭或所述恶臭形成的所述任何物质或组成物来作为恶臭冲消剂。根据一个实施方式，所述恶臭冲消剂是香料，可使用任何合适的香料，所述香料不影响所需生物样品的制备和/或处理或后续使用。一般而言，香料主要通过以怡人的气味遮盖恶臭来中和所述恶臭。然而，所述恶臭冲消剂还可以是本身无香的化学物质或材料，但可以是这样一种：例如与恶臭发生物质相互反应，从而去除和/或减少所述恶臭和/或所述恶臭形成。

根据一个实施方式，使用包含或由恶臭冲消剂组成的组成物。如上所述，各自化合物物质的混合物也可用来作为恶臭冲消剂。优选地，使用组成物，所述组成物包含或由以下物质组成：

-至少一种香料，所述香料主要遮盖、或覆盖所述恶臭和/或

-与所述恶臭发生物质或其前体相互反应的至少一种化学物质或材料，从而至少减少所述恶臭和/或所述恶臭的形成。

优选地，所述恶臭冲消剂是可蒸发的或可在环境空气中分散的，并且能够中和存在于和/或产生于所述生物样品的制备和/或处理过程中的恶臭(见上文，例如，通过阻挡、遮盖、减少、抑制所述恶臭或所述恶臭的形成)。如上所述，所述生物样品本身可具有恶臭或在其制备和/或处理过程中可产生恶臭。此外，所述恶臭的形成可归因于使用或其自身存在具有难闻、恶臭气味的一种或多种化学物质(例如苯酚或β-巯基乙醇)。

如上所述，重要的是，所述恶臭冲消剂不影响所需生物样品的制备/处理，尤其是在分离生物目标分子时不影响所需分离过程。因此，根据一个实施方式，不使用有机体作为恶臭冲消剂。根据所述实施方式，特别地，不使用产生孢子的细菌作为恶臭冲消剂。避免恶臭冲消剂是有机体(例如特定细菌)具有以下优点：所述生物样品在其制备和/或处理过程中不受来自用作恶臭冲消剂的所述有机体的生物分子污染。因此，根据一个实施方式，使用化学化合物或化合物的混合物作为恶臭冲消剂。若结合恰当的样品，下文描述的合适的实施例即能抑制所述恶臭的形成而不影响所述样品的制备和/或处理。

可用来作为恶臭冲消剂的合适的香料包括选自以下几类的香料，如酸、酯、醇、醛、酮、内酯、腈、醚、乙酸盐、烃，含硫化、氮化和氧化的杂环、多环和大环化合物，以及天然或合成来源的精油。已有文献描述这种香料材料，例如，在 S.Arctander,《香水香料与化学品》(Perfume Flavors and Chemicals)卷1和2,美国新泽西州蒙特克莱尔（Montclair,NJUSA）Arctander出版社1969.所述香料可选包含无嗅液体，例如苯酸苄酯、十四酸异丙酯和烃衍生物，例如来自埃克森公司(Exxon)的Isopar或者来自陶式化学公司(Dow Chemical)的醚。也可使用相应化合物的混合物。

根据一个实施方式，合适的恶臭冲消剂包括香料化合物，例如所述酯、醚、醛、酮、醇和烃类的合成产物。酯类的香料化合物是，例如，乙酸苄酯、异丁酸苯氧基乙酯、乙酸对叔丁基环己酯、乙酸芳樟酯、乙酸二甲基苄基原酯、乙酸苯乙酯、苯甲酸芳樟酯、甲酸苄酯、乙基甲基苯基甘氨酸酯、菠萝酯、丙酸苏合香酯和苄基水杨酸酯。所述醚包括，例如，苄基乙基醚；所述醛包括，例如，含8～18个碳原子的直链正构醛、柠檬醛、香茅醛、香茅基氧基乙醛、仙客来醛、羟基香茅醛、铃兰醛和波洁洪醛；所述酮包括，例如紫罗兰酮、[α]-异甲基紫罗兰酮和甲基柏木酮；所述醇包括茴香脑、香茅醇、丁子香酚、香叶醇、里哪醇、苯乙醇和萜品醇；所述烃包括萜烯等，例如柠檬油精和蒎烯。不过，也可使用一起产生好闻香料的各种香料的混合物作为恶臭冲消剂。还可使用香油，所述香油还可包含天然香料混合物。

根据一个实施方式，可使用有香料的醇作为恶臭冲消剂。本文所用术语“有香料的醇”特别指的是R'-OH化学式的任何化合物或化合物的混合物，其称为香料或者芳香料，其中R'是合成香料或香味成分的残基，其能够与疏水递送载剂物理结合或共价结合，无关所述香料化合物的进一步的结构。有香料的醇的非限制性例子可在以下文献中找到：SteffanArctander,《香水和香料化学品(合成香料)》("Perfume and Flavor Chemicals(AromaChemicals)"),卷1和2,(1969)；Bauer,K.等人《常见芳香和香料材料》("Common Fragranceand Flavor Materials"),Wiley-VCH出版社(1997)；Guenther Ohloff,《气味和芳香》("Scent and Fragrances"),Springer-Verlag出版社(1994)；以及《香水：工艺、科学和技术》("Perfumes:Art,Science,and Technology"),Mueller,P.M.l和Lamparsky,D编，Blackie学术科学出版社（Blackie Academic and Professional）(1994)，所述公开部分全部通过引用纳入本文。优选有香料的醇包括：10-十一烯-1-醇、2,6-二甲基-2-庚醇、2-甲基丁醇、2-甲基戊醇、2-苯氧基乙醇、2-苯基丙醇、2-叔丁基环已醇、3,3,5-三甲基环己醇、3-己醇、3-甲基-5-苯基戊醇、3-辛醇、3-苯基丙醇、4-庚烯醇、4-异丙基环己醇、4-叔丁基环己醇、6,8-二甲基-2-壬醇、6-壬烯-1-醇、9-癸烯-1-醇、α-甲基苄基醇、α-萜品醇、水杨酸戊酯、苄基醇、苄基水杨酸酯、β-萜品醇、丁基水杨酸酯、香茅 醇、环己基水杨酸酯、癸醇、二氢月桂烯醇、二甲基苄基原醇、二甲基庚醇、二甲基辛醇、乙基水杨酸酯、乙基香兰素、丁香酚、法尼醇、香叶醇、庚醇、己基水杨酸酯、异冰片、异丁子香酚、异番薄荷醇、里哪醇、薄荷醇、桃金娘醇、正乙醇、橙花醇、壬醇、辛醇、顺-4-(1-甲基乙基)环己醇（p-methan-7-ol）、苯乙醇、苯基水杨酸酯、四氢香叶醇、四氢芳樟醇、百里酚、反式-2-间-6-壬二烯醇、反式-2-壬烯-1-醇、(S)-2-辛烯醇、十一烷醇、香草醛、四氢月桂烯醇、各种天然和合成的檀香醇、反式-2-己烯-1-醇、顺-2-己烯-1-醇、1-辛烯-3-醇和肉桂醇。相应的有香料的醛也是合适的。也可使用分别化合物的混合物。

根据一个实施方式，可使用挥发性的香料作为恶臭冲消剂。所述高度挥发性香料的例子包括但不限于茴香脑、苯醛、醋酸苄酯、苄醇、甲酸苄酯、乙酸异冰片酯、莰烯、顺式柠檬醛(橙花醛)、香茅醛、香茅醇、香茅醇乙酸酯、对伞花烃、癸醛、二氢芳樟醇、二氢月桂烯醇、二甲基苯基甲醇、桉试、牦牛儿醛、牦牛儿醇、乙酸香叶酯、牦牛儿腈、乙酸叶醇酯、羟基香茅醛、右旋烯、里哪醇、氧化里哪醇、乙酸里哪酯、丙酸芳樟酯、邻氨基苯甲酸甲酯、α-鸢尾酮、甲基壬乙醛、乙酸苏合香酯、左旋乙酸薄荷酯、薄荷酮、异薄荷酮、月桂烯、乙酸月桂烯酯、月桂烯醇、橙花醇、橙花醇乙酸酯、乙酸壬酯、苯乙醇、α-蒎烯、β-蒎烯、γ-萜品烯、α-萜品醇、β-萜品醇、乙酸萜品酯和乙酸对叔丁基环己酯(对-3-丁基乙酸环己酯)。也可使用分别化合物的混合物。所述相关的有香料的醛也是合适的。

根据一个实施方式，使用中等挥发性的香料作为恶臭冲消剂。中等挥发性的香料的例子包括但不限于戊基肉桂醛、水杨酸异戊酯、β-丁子香烯、雪松烯、肉桂醇、香豆素、乙酸二甲基苄基原酯、乙基香兰素、丁子香酚、异丁子香酚、乙酸三环癸烯酯、天芥菜精、3-顺式-水杨酸己烯酯、水杨酸己酯、铃兰醛(对-叔丁基-α-甲基苯丙醛)、γ-甲基紫罗兰酮、橙花叔醇、绿叶醇、苯乙醇、β-蛇床烯、乙酸三氯甲基苯基原酯、柠檬酸三乙酯、香草醛和藜芦醛。柏木油萜烯主要由α-雪松烯、β-雪松烯和其它C₁₅H₂₄倍半萜组成。也可使用分别化合物的混合物。

根据一个实施方式，使用低挥发性的香料作为恶臭冲消剂。所述低挥发性的香料的例子包括但不限于苯甲酮、水杨酸苄酯、麝香-T、加乐麝香(1,3,4,6,7,8-六氢-4,6,6,7,8,8-六甲基-环戊并-γ-2-苯并吡喃)、己基肉桂醛、新铃兰醛(4-(4-羟基-4-甲基戊基)-3-环己烯-10-甲醛)、甲基雪松酮、二氢茉莉酮酸甲酯、甲基-β-萘基酮、麝香茚酮、麝香酮、西藏麝香和苯乙酸苯乙酯。也可使用分别化合物的混合物。

根据一个实施方式，所述香料选自α-异甲基紫罗兰酮、戊基肉桂醛、戊基肉 桂醇、茴香醇、苄醇、苯(甲)酸苄酯、肉桂酸苄酯、水杨酸苄酯、丁苯基甲基丙醛、亚肉桂基、桂醇、柠檬醛、包括柠檬醛A和柠檬醛B、香茅醇、香豆素、二戊烯、丁香酚、法呢醇、香叶醇、己基肉桂醛、羟基香茅醛、羟基异己基3-环己基甲醛、异丁子香酚、二戊烯、里哪醇、辛酸甲酯。也可使用分别化合物的混合物。

根据一个实施方式，所述恶臭冲消剂选自水杨酸苄酯、柠檬醛、包括柠檬醛A和柠檬醛B、香茅醇、香豆素、香叶醇、柠檬油精、里哪醇、桉试、羟基香茅醛和反式薄荷脑。根据一个实施方式，使用香豆素、香茅醇、里哪醇、水杨酸苄酯的混合物。

根据一个实施方式，所述香料具有柑橘和/或酸橙的气味。分别的恶臭冲消剂特别适合在处理和/或制备细菌(如大肠杆菌)时使用，例如在其生长过程中和从中分离核酸时使用。根据一个实施方式，使用常用在洗碟用除臭剂中的香料，所述洗碟用洗涤剂的例子有“亮碟光洁剂(Calgonit finish)”除臭剂(市售可得产品-柑橘和酸橙气味)，还优选使所述除臭剂中和细菌细胞(例如大肠杆菌细胞)形成的恶臭。

根据一个实施方式，使用选自里哪醇、柠檬油精、二戊烯、柠檬醛、香茅醇和香茅醛，优选自柠檬油精和柠檬醛的至少一种香料。也可使用相应化合物的混合物。

根据一个实施方式，使用选自草甘磷、松油醇和柠檬醛的至少一种香料。

所述香料优选以浓缩方式使用，其中，所述香料在所述样品的制备和/或处理过程中使用时产生怡人的气味。

根据一个实施方式，所述恶臭冲消剂和/或包含或由所述恶臭冲消剂组成的组合物不与所述样品物理接触。这降低了所述生物样品受到所述恶臭冲消剂和/或所述组合物污染的风险，因此，所述恶臭冲消剂和/或包含或由所述恶臭冲消剂组成的组合物影响所需样品的制备和/或处理(例如核酸分离过程)的风险降低了。

根据另一个实施方式，所述恶臭冲消剂和/或包含或由所述恶臭冲消剂组成的组合物与所述样品物理接触。该实施方式合适于应用，其中，所述恶臭冲消剂和/或包含或由所述恶臭冲消剂组成的组合物不影响所需生物样品的制备和/或处理。例如，可为所述恶臭冲消剂(也可是上述化合物的混合物)提供载体，例如在制备和/或处理过程中添加至所述样品的过滤器或膜。

根据一个实施方式，包含或由所述恶臭冲消剂组成的组合物(优选是香料)包含在容器中。这样做具有以下好处：所述恶臭冲消剂和/或包含或由所述恶臭冲消剂组成的组合物易于手持，也与所述生物样品保持分离。

根据一个实施方式，所述恶臭冲消剂可缓慢释放，即，其以可长期释放的形式保留在所述容器中。该目的可以通过任何合适的方式实现，技术人员能容易地想到很多合适的方法来实现该目的。例子包括吸收在固体多孔物质或任何其它合适的基质上或内以蒸发或释放所述恶臭冲消剂、混合包在胶体内、保持在膜或者装置后，所述膜或装置适合于供所述恶臭冲消剂和/或包含或由所述恶臭冲消剂组成的组合物缓流通过并在其表面蒸发。这样做具有以下优点：在所述生物样品的制备和/或处理过程中长期有效地抑制/遮盖所述恶臭的发生。所述缓慢释放可通过任何合适的方式实现，技术人员可容易地想到合适的方法来达到该目的。

根据一个实施方式，所述容器包括可供所述恶臭冲消剂通过释放的至少一个端口。供所述恶臭冲消剂释放的端口可以是任何适合的开口，所述容器也可包含多于一个的端口。

根据一个实施方式，所述容器包含供所述恶臭冲消剂释放的端口，所述端口的开口的长度是可控的，其中，所述香料和/或包含或由所述香料组成的组合物优选包含在容器中，例如在容器中放置的起泡。所述起泡可由如下所述的多孔膜生成。

根据一个实施方式，所述恶臭冲消剂和/或包含或由所述恶臭冲消剂组成的组合物包含在作为容器的筒内。筒具有以下优点：它是可替代的，因此，在一个筒已用光并释放完所述恶臭冲消剂的情况下可以将其换掉。

根据一个实施方式，包含或由所述恶臭冲消剂组成的组合物包含在至少允许所述恶臭冲消剂透过的装置中。优选所述装置是膜。根据一个实施方式，所述膜是多孔的。所述膜可以是非水可溶的膜。根据一个实施方式，所述膜具有少于500μm的厚度，更优选厚度少于200μm，最优选厚度少于120μm。根据一个实施方式，所述膜的厚度在15和100μm之间。根据一个实施方式，所述膜的孔尺寸允许小于5kD的分子扩散和/或通过，优选分子小于2kD，更优选小于500Da。

根据一个实施方式，使用非水溶性膜。所述膜可包含聚合物，所述聚合物选自聚氨基甲酸酯、聚醚酰胺、聚乙烯-丙烯酸共聚物、聚环氧乙烷、聚乳酸、聚酰胺、聚酯、磺化聚酯、聚醚酯嵌段共聚物、聚丙烯酸酯、聚丙烯酸、聚乙烯-乙酸乙烯酯聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚-2-乙基唑啉、聚烯吡酮、纤维素衍生物、共聚物和其混合物。

所述膜还可包括填充材料和/或增强材料。为了该目的，可以使用例如在洗碟用除臭剂或类似使用香料的产物中也使用的任何合适的膜。该实施方式尤其适合于处理和/或制备细菌。

根据一个实施方式，含所述恶臭冲消剂和/或包含或由所述恶臭冲消剂组成的组合物的容器的位置处于含有样品的器皿内。相应器皿的例子包括但不限于样品贮存器皿或样品处理器皿、反应和手机器皿、Eppendorf管、多孔板、深孔板、瓶、锥形瓶、离心柱、过滤嘴和分液器吸头、吸液管吸头、管、小瓶、试管、烧杯、滚筒、量杯、量筒、离心瓶和一次性塑料容器。

可使包含所述恶臭冲消剂的容器固定或安装至相应器皿，比如夹至相应器皿上。此外，可使用粘合剂连接例如纸带或其它释放所述恶臭冲消剂至所述器皿壁的固体基质。例如，可将包含所述恶臭冲消剂(也可是上述化合物的混合物)的标签贴至所述器皿(例如，内部或外部)。优选将其贴在所述器皿的外表面。所述标签适合于释放所述恶臭冲消剂。例如，可在生产过程中为所述冲消剂加上标签，例如喷涂上标签。如本文所述的用于为恶臭冲消剂提供标签合适的方法是技术人员已知的，因此不需在此详细描述。此外，所述器皿可包括接收容器，供所述容器插入。如上所述，所述容器可以是筒，从而其是可移动的，因此一旦所述恶臭冲消剂用完，可从所述器皿的接收容器将其替换。这种做法允许所述器皿的再利用，通过插入包含恶臭冲消剂的新的容器，所述器皿特别适用于本发明所述方法。本发明涉及相应的可再利用的器皿和制造来仅供一次使用的器皿。

根据一个实施方式，所述容器适合于浸没在所述样品中。在该实施方式中，所述容器接触所述样品。所述相应的容器可以是磁性的(例如)，以供更容易地从所述样品移除所述容器。

包含所述恶臭冲消剂的组合物可包含额外添加剂来制定所述恶臭冲消剂，例如以胶或糊的形式。现有技术中，合适的添加剂是已知的，例如来自洗碟用除臭剂制品或其它恶臭冲消剂例如在其它清洁剂、卫生间清洁剂、马桶塞或漂白塞中使用的香料。如上所述，包含所述恶臭冲消剂的组合物优选有不影响所需生物样品的制备和/或处理或后续使用的组合物。是否具有分别干扰的风险取决于所处理的样品、使用的恶臭冲消剂、用于制定所述恶臭冲消剂的组合物、所述恶臭冲消剂的包装/容器，乙基所述恶臭冲消剂或所述组合物是否直接接触所述样品，或如上文所述的优选情况，所述组合物不与所述样品物理接触。如上所述，可通过以下方式实现不与所述样品物理接触地使用所述恶臭冲消剂：例如，通过将所述恶臭冲消剂或包含所述恶臭冲消剂的组合物置于容器中(所述容器位于含有或应含有生物样品的器皿中)，不使所述容器与所述样品物理接触。如上所述，所述器皿可以包括接收容器(例如)以接收包含所述恶臭冲消剂和/或所述组合物的容器或筒。然而，所述接收容器也可直接接纳所述恶臭冲消剂或包含所述恶臭冲消剂的组合物。优选地，所述接收容器这样放置：在所述器皿中放置或处理所述样品时，所述恶臭冲消剂或包含或由所述恶臭冲消剂组成的组合物不与所述样品物理接触。因此，可以安全地阻挡所述样品直接接触所述恶臭冲消剂或包含或由所述恶臭冲消剂组成的组合物。

根据一个实施方式，直接添加所述恶臭冲消剂至所述化学品，所述化学品用于处理和/或制备所述生物样品，例如用于提取核酸或其它目标分子的缓冲液和/或组合物。若所述恶臭冲消剂不影响所需的下游应用，该实施方式是可行的。

此外，本发明涉及至少一种恶臭冲消剂在阻挡和/或抑制在制备和/或处理生物样品时的恶臭形成中的应用，其中，所述制备和/或处理优选自细胞培养、样品分解、生物分子分离、核酸纯化、蛋白变性和蛋白纯化。本发明还提供用于从生物样品分离生物分子(优选核酸或蛋白)的方法，其特征在于，使用至少一种恶臭冲消剂来阻挡和/或抑制在制备和/或处理生物样品过程中的恶臭形成。上文描述了关于所述恶臭冲消剂的细节和本发明的具体的实施方式，其参考上文的公开内容。

本发明还提供含有和/或处理生物样品的实验室器皿，其中所述器皿包含至少一种恶臭冲消剂。上文一并描述了关于所述器皿和所述包含的恶臭冲消剂的细节以及方法，其也总结在权利要求中。其涉及相应的公开内容。

实施例

下文提供的实施例是本发明所述的实施方式中的一些的例证，但并不对其限制，其在从细菌培养物分离核酸的过程中可用作恶臭冲消剂，作为生物分子分离的一个例子。此外，所述实施例证明选择使恶臭冲消剂和生物样品正确地结合与匹配对达到有效抑制恶臭，而不影响所需生物样品的处理/制备是重要的，尤其是在从中分离生物分子(如核酸)时。

实施例1

为鉴别和评价不同可用材料和化合物作为恶臭冲消剂，特别是香料、空气清新剂或卫生物品的潜力，用以减少在实验室规模的大肠杆菌培养物样品处理过程中产生的恶臭困扰，而不影响细菌生长或后续的DNA分离及质量，进行了以下实验。

1.使含有质粒pCMVβ的大肠杆菌DH5α的小规模过夜培养物在含有抗生素的LB培养基中生长过夜。

然后，在常规培养瓶中以1:1000(v/v)的比例接种所述小规模培养物至500ml、250ml和200ml LB培养基。

2.将待测的材料和化合物(可行时)浸入空茶包或置入空茶包，然后将所述茶包置入分别的培养瓶。然后用胶带使所述茶包附着于所述培养烧瓶(在开口正下方)，所述胶带也用于封住烧瓶口。所述茶包不直接接触所述培养物。表1A总结了用来作为恶臭冲消剂的所述材料和化合物的概述以及各自测试的进一步细节，还包括了分别受试的恶臭冲消剂的主要发现的简述。使用其中不添加恶臭冲消剂的培养物作为参考(“参比培养物”)。

3.然后，使所述培养物于37°C，在轨道振荡器上以160rpm生长过夜。

4.次日，在生长后立即检测培养物的光密度(OD₆₀₀)和恶臭形成。然后，通过离心(见下文)使细菌沉淀成团，弃去上清，检测细菌团的气味。

5.为测定所测恶臭冲消剂影响细菌生长，从而影响DNA产量的程度，进行核酸分离。采取4×1.5mL的各培养物用于DNA制备，使用恰根质粒小抽(“QIAprep SpinMiniprep”)试剂盒，按照试剂盒中提供的说明书操作。以50mL等分剩余的液体培养物并将其储存在-20°C形成团块。

6.图1和图2显示过夜大肠杆菌培养物的OD₆₀₀读数结果和DNA制备物的光度测量定量结果。

7.对于确定的下游应用例如体外和体内的基因转移(例如，转染)，DNA的质量是重要的。因此，评价受试的恶臭冲消剂对质粒DNA质量的影响。与开环(oc)和线性DNA拓扑结构相比，质粒的ccc DNA拓扑结构对体外和体内基因递送是最有效的。用于测试范围，通过凝胶电泳目测观察各制备物中显示的“ccc”(环状共价闭合（circular covalently closed))形式的质粒DNA的相对量来估定DNA质量，其示例在图4-7中显示。

在表1A和图1～7中显示受试恶臭冲消剂的细节和实施例1的结果，并结合所述表和图例进一步详细讨论。

总结在表1A中的结果证明，不是所有恶臭冲消剂都适合尤其是同等适合于抑制恶臭形成。受试化合物中，在气味方面，洗碟用香料、黑莓香料洗碟用中和剂、小便池块(以恰当浓度)和空气清新剂显示最好结果，洗碟用香料是最好的。在其它测试特征方面，发现能有效减少气味的受试恶臭冲消剂中的成分中的一些对所述样品的制备和/或处理有不良影响。例如，小便池块引起发泡，影响所述团块也降低DNA产量。因此，对于明显地还包含发泡剂的制剂，优选仅使用其中的香料而不是其整个制剂。洗碟用香料对测试性质无任何不良影响，因此特别适合于在细菌培 养物(例如大肠杆菌培养物)的制备和/或处理过程中抑制恶臭形成。此外，表1A还显示，对各个样品使用恰当的恶臭冲消剂是重要的，因为不是所有恶臭冲消剂在抑制恶臭形成上都同等有效，并且还能够影响所需的下游应用。

实施例2

根据表1B，评估第二组物质作为恶臭冲消剂的能力。在实施例2中，所述化合物不在分别培养物的生长过程中使用，而是直接添加在用于质粒DNA制备(恰根质粒小抽(“QIAprep Spin Miniprep”))的试剂盒的重悬缓冲液中。因此，使所述恶臭冲消剂直接接触所述样品。

首先，评估表1B中所列的香料对质粒DNA产量的影响。带有pCMVβ质粒的细菌的5mL过夜细菌培养物用于各DNA制备。“恰根质粒小抽(QIAprep Spin Miniprep)”试剂盒与试剂盒中提供的缓冲液一同用于DNA纯化。向250μl重悬缓冲液P1中加入如下量的物质：30μL空气清新剂、0.0671g香豆素溶于1mL P1，然后使用其中的250μL；30μL香茅醇、30μL里哪醇、30μL水杨酸苄酯、1mLP1中0.0623g香豆素和各30μL的香茅醇、里哪醇、水杨酸苄酯的混合物(从此处开始称为“混合物”)，然后使用其中的250μL。使用不添加香料的制备物作为参比。

实施例2显示，所有受试的恶臭冲消剂都能够抑制在缓冲液P1中重悬过程中产生的恶臭。结合生物量团块以及在添加P2之后，向P1添加所有维持香料气味的样品。与参比和P1中含有空气清新剂与水杨酸苄酯的样品相比，在P1中含香豆素、受试混合物、香茅醇和里哪醇的样品在添加P2后显示(蓝色是由于添加了LysisBlue)较浅的蓝色。然而，在添加N3(其含有离液盐)后，一些化合物无法作为恶臭冲消剂。在添加N3后，仅有包含混合物、香茅醇和里哪醇的样品保持怡人香气。其它所有样品的N3气味占优势。此外，所述化合物对染色体DNA的沉淀以及通过添加缓冲液N3造成的细胞碎片影响不同。该结果显示在表1B中。特定化合物与重悬缓冲液P1的混合能力是造成其更具恶臭冲消剂功能的其它因素，如表1B所示。

接下来，在评估所述物质的恶臭冲消剂潜力之后，如之前所做的那样(见图8、9)通过光度分析和凝胶电泳其对DNA产量和质量结果的影响。与参比相比，包含空气清新剂、香豆素和P1中有香豆素、香茅醇、里哪醇和水杨酸苄酯的混合物的样品显示减少的DNA产量。与参比相比，P1中包含香豆素、里哪醇和水杨酸苄酯的样品在DNA产量方面没有显示任何显著差异。此外，在质量方面也没有见到差异。所有样品在oc条带上显示轻度模糊，并在ccc和oc之间显示额外的弱条带。此外，所有样品显示额外的迁移至ccc形式正下方的条带。

此外，在DNA测序反应中分析DNA质量，所述反应在分子生物学中是常见的后续下游应用。这里，评估各个样品的所得测序运行的长度和各四种核碱基的平均信号强度(见图10、11)。表2列出测序反应的原始数据和所述化合物对测序反应和测序凝胶运行的影响的观察结果。虽然表1B中列出的所有物质和其混合物造成大约相等的测序运行长度，所述化合物中的一些显示抑制个别测序反应的信号强度(见图11)。此外，添加至P1的恶臭冲消剂对所述序列有影响，其中，测序的开始受到延迟。

因此，必须谨慎挑选恶臭冲消剂，以避免对下游应用的影响，所述下游应用包括酶促反应，例如测序。其它下游应用的例子可以包括但不限于：聚合酶链式反应、体外翻译、限制性酶消化或用于转基因动物生殖的前核注射。

表2提供关于测序运行和所述恶臭冲消剂香料对测序反应的影响的信息。应注意，一些化合物不影响可阅读测序信息的起始。尤其是当使用香茅醇时，测序反应的起始点推后。然而，所述测序运行的整体质量与参比质粒DNA的质量相当。

实施例3

在第三组实验中，将恶臭冲消剂(见表3)施加至过滤器，并在样品检查过程中包含在所述生物量团块中，使所述恶臭冲消剂直接接触所述生物团块。

实施例3显示，所有受试的恶臭冲消剂都能抑制所述团块发出的恶臭，但抑制程度不同。香豆素、香茅醇、里哪醇、水杨酸苄酯的混合物在抑制恶臭方面更为有效，而香豆素和液体空气清新剂的有效性则较低。

使用所述恶臭冲消剂混合物能在整个检查过程中抑制恶臭，在结束时仅有缓冲液N3(恰根公司(QIAGEN))的轻度嗅味，而仍能闻到混合物的气味。使用液体空气清新剂几乎与使用恶臭冲消剂同样有效，但是，在添加N3后，空气清新剂不再保持，而是从样品散发缓冲液N3的轻度嗅味。单独使用香豆素在抑制恶臭上的有效性较低。尽管有所改善，在添加滤纸至细菌团块后，以及在重悬、后续添加缓冲液P2(恰根公司(QIAGEN))和N3(恰根公司(QIAGEN))的过程中仍闻到轻度细菌嗅味。

此外，检测所述恶臭冲消剂对所述溶解产物离心后所得团块的影响。所有样品在具有一些涂污的溶解产物离心后都显示紧实的沉淀。此外，测试其对所得DNA产量和质量的影响。与参比相比，所述具有液体空气清新剂的样品在DNA产量方面没有显示任何不同。与参比相比，所述具有香豆素的样品和所述混合物仅显示轻度减少的产量，然而仍是可接受的。

图1：

在表1A中所列物质存在下过夜培养物中的细菌生长的比较。OD₆₀₀值显示两个独立测量值的平均值。

在图1中，在一个实验中生长并表征的培养物囊括在中括号中。如果有必要，以1:10的比例稀释过夜培养物用于检测，并且OD₆₀₀值受到外推。结果显示，与参比培养物相比，某些材料和化合物确实影响细菌培养物的光密度，即，法呢醇、小便池块、过氧化氢、活性炭，特别是猫砂(小颗粒进入培养物)确实影响过夜培养物的光密度。

图2：

集中4×1.5mL过夜培养物所获的DNA产量使用恰根质粒小抽(“QIAprep SpinMiniprep”)试剂盒制备。光度计测定所述样品的核酸浓度。个别培养物的光密度(图1)和所述培养物的相应DNA产量(图2)的比较显示，受试材料和化合物对OD₆₀₀和DNA产量的影响不同。例如，在猫砂存在下生长的培养物在λ＝600nm处显示最高光密度，也许最主要是由于猫砂在细菌培养物中分解，而其DNA产量却是受试条件中最低的。其它受试的物质，例如法呢醇显示对细菌生长有中等影响，而不影响相应培养物的DNA产量。

图3：

为了更好地呈现并综合所给物质或化合物对DNA产量、光密度和嗅味的影响，引入一个无量纲因子，其通过下式计算：

Q=[DNA产量]/OD₆₀₀×f，其中嗅味与参比培养物相似的样品的f=1，

嗅味轻度加强的样品的f=1.5，或

不具有大肠杆菌嗅味的样品的f=2。

通过该“Q因子”可更好地比较受试物质，比较显示，使用洗碟用清新剂在DNA产量、细菌生长和恶臭困扰的排除方面不能实现最理想的结果。其它物质，例如小便池块和其片段确实抑制大肠杆菌的嗅味，但是该培养物的DNA产量较低，从而其Q因子与相应参比培养物的Q因子的值近似相同。所述Q因子也显示猫砂作为恶臭冲消剂的整体表现不佳。

由于所述Q因子还反应所给培养物的DNA产量，因此希望用来作为“起始培养物”的“参比培养物I”的Q因子应小于实验中使用的其它参比培养物的Q因子。应注意，Q因子仅对在相当条件下生长的细菌培养物中有效，最重要的是培养物体积、温度和培养时间。因此，“参比培养物II”和“参比培养物”特别受到关 注，用于比较受试材料和化合物的影响。像之前那样，相当生长条件由中括号表示。

图4：

DNA质量对于如体内或体外基因递送的应用而言是重要的。因此，评估获自各个制备物的DNA质量是重要的。为评估由在表1A中列出的物质的存在下生长的培养物制备的质粒DNA的质量，用大约100mg未切质粒DNA在1%琼脂糖凝胶上上样，来评估ccc质粒DNA的与oc或线性质粒DNA的相对量。在1×TAE缓冲液中，以100V跑胶75分钟，并在跑胶过程中溴化乙锭染色。

箭头表示ccc DNA拓扑结构同种型，其在施加电场中比oc或线性质粒DNA拓扑结构迁移得快。与pCMVβ标准(泳道1-5)和参比培养物II(泳道28、29)相比，样品6-27中的ccc质粒DNA的相对量与对照相当，表示相似的DNA产量。

按照如下顺序在胶上上样：

图5：

由在葫芦[6]烷(curcubit[6]ane)、法呢醇或小便池块存在下生长的“参比培养物I”制备的质粒DNA的质量评估。1%琼脂糖凝胶在1×TAE缓冲液中，以100V跑胶75分钟，在跑胶过程中溴化乙锭染色，如图所示约有100ng的未切质粒DNA上样(见凝胶上样顺序)。样品6-21中的ccc质粒DNA的相对丰度显示相当的DNA质量。

凝胶的上样顺序如下所列：

图6：

由在杯[6]芳烃(calix[6]arene)、黑莓香料、空气清新剂或洗碟用清新剂存在下生长的培养物制备的质粒DNA的质量评估，与“参比培养物II”和pCMVβ标准品相比较。1%琼脂糖凝胶在1×TAE缓冲液中，以100V跑胶75分钟，并在跑胶 过程中溴化乙锭染色。

按照以下顺序，根据各泳道上的数字在凝胶上上样：

图7：

测试不同量的小便池块对细菌生长和质粒DNA质量的影响。过夜培养物在不同量的小便池块(见下表)存在下生长，并对其DNA分离和定量。按照下表在胶上上样，各泳道质粒DNA上样量为约100ng，除非另外表示。由在不同量的小便池块存在下生长的培养物制备的质粒DNA的质量评估。1%琼脂糖凝胶在1×TAE缓冲液中，以100V跑胶75分钟，并在跑胶过程中溴化乙锭染色。泳道6-29的质粒DNA上样量为大约100ng。样品中显示相当量的ccc质粒DNA表明DNA质量相似。

按照以下顺序根据各泳道上方数字凝胶上样：

图8：

图8显示实施例2在DNA产量方面的结果。光度定量DNA产量，就参比培养物而言显示两个独立测量值的平均值，就各受试物质而言显示三个独立测量值的平均值。误差棒表示标准偏差。与前述实施例不同，向重悬缓冲液P1中直接添加该恶臭冲消物质。

图9：

如前述实施例中所述，通过凝胶电泳评估DNA质量，来定量超螺旋ccc质粒DNA。除了第8泳道，各泳道的DNA上样量为大约100ng。如图所示，增加量的pCMVβ上样作为标准。

1%琼脂糖凝胶在1×TAE缓冲液中，以100V跑胶75分钟，并在跑胶过程中溴化乙锭染色用于显色。

按照如下顺序，根据各泳道上方的数字凝胶上样：

泳道	样品	泳道	样品
				1	pCMVβ标准品，60ng	14	使用香豆素的培养物，3
2	pCMVβ标准品，90ng	15	使用混合物的培养物，1
				3	pCMVβ标准品，120ng	16	使用混合物的培养物，2
4	pCMVβ标准品，150ng	17	使用混合物的培养物，3
				5	pCMVβ标准品，180ng	18	使用香茅醇的培养物，1
6	参比培养物，1	19	使用香茅醇的培养物，2
				7	参比培养物，2	20	使用香茅醇的培养物，3
8	参比培养物，3(*)	21	使用里哪醇的培养物，1
				9	使用空气清新剂的培养物，1	22	使用里哪醇的培养物，2
10	使用空气清新剂的培养物，2	23	使用里哪醇的培养物，3
				11	使用空气清新剂的培养物，3	24	使用水杨酸苄酯的培养物，1
12	使用香豆素的培养物，1	25	使用水杨酸苄酯的培养物，2
				13	使用香豆素的培养物，2	26	使用水杨酸苄酯的培养物，3

(*)由少于5mL的细菌培养物制备参比培养物3，从而其仅用于质粒DNA的质量评估目的。

图10：

作为在表1B中列出的物质存在下制备的DNA质量评估的额外标准，对所得DNA测序。所示线图表示所获测序运行长度的平均值。误差棒表示标准偏差。

所有测序反应造成大约相等长度的运行，表示包含在缓冲液P1中的恶臭冲消剂气味，不影响DNA质量。

图11：

通过点出各样品的各核碱基的平均信号强度，比较各样品在G-A-T-C上分辨 的信号强度，来评估不论相当的测序运行长度，所用化合物是否也不影响总体信号强度。线图显示，所有受试样品中，总体信号强度分布相似，但是，香豆素以及1mL P1中0.0671g香豆素和各30μL香茅醇、里哪醇和水杨酸苄酯所得的“混合物”造成总体信号强度的减少。

Claims (11)

1.至少一种恶臭冲消剂在阻挡、减少、遮盖和/或抑制从生物样品分离至少一种目标生物分子的过程中的恶臭和/或恶臭形成中的应用，所述恶臭冲消剂选自香茅醇，里哪醇，香豆素、香茅醇、里哪醇和水杨酸苄酯的混合物，所述目标生物分子是质粒DNA。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述样品选自真核细胞、原核细胞、真菌、细胞培养物、粪便、大便、血液、血浆、血清、体液、身体排泄物、唾液、尿液、拭子、组织、临床样品组织和衍生自其中的样品。

3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，在所述分离过程中存在至少一种恶臭化合物，其可选自硫醇、恶臭杂环芳族胺、恶臭杂环胺、恶臭杂环脂族胺、恶臭脂族伯二胺、恶臭羧酸及其盐和酯、恶臭醇类。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，使用包含或由恶臭冲消剂组成的组合物，所述组合物包含或由以下成分组成：恶臭冲消剂和/或与引起恶臭的物质或其混合物相互作用的化学物质或材料，从而减少所述恶臭和/或所述恶臭形成。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述恶臭冲消剂可蒸发和/或能在环境空气中分散。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述组合物不与所述样品物理接触，或者所述组合物与所述样品物理接触。

7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述恶臭冲消剂包含在容器内。

8.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述恶臭冲消剂包含在至少可透过所述恶臭冲消剂的装置内。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，将所述容器置于含有所述样品的器皿内。

10.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述恶臭羧酸是恶臭脂肪酸。

11.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述装置是膜。