CN103120798A

CN103120798A - 一种具有抗氧化应激作用的磷脂复合物制备方法及其应用

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Publication number: CN103120798A
Application number: CN2013100095346A
Authority: CN
Inventors: 施冬云; 刘珊林; 谢飞舟
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2013-01-10
Filing date: 2013-01-10
Publication date: 2013-05-29

Abstract

本发明公开了一种由原花青素、类胡萝卜素或富含原花青素、类胡萝卜素的提取物与磷脂在乙醇、丙酮等脂溶性溶剂中反应形成的磷脂复合物。该磷脂复合物可与医药学中接受的辅料一起加工成软胶囊、硬胶囊、片剂、颗粒剂、粉剂或口服液，用于预防或治疗氧化应激引起的肿瘤、糖尿病、动脉粥样硬化、心肌梗塞、脂肪肝和脑梗塞疾病。

Description

一种具有抗氧化应激作用的磷脂复合物制备方法及其应用

技术领域

本发明属医药领域，具体涉及一种由原花青素、类胡萝卜素或富含原花青素、类胡萝卜素的提取物与磷脂在脂溶性溶剂中反应形成磷脂复合物。该磷脂复合物具有显著的抗氧化应激作用。

背景技术

原花青素(Proanthocyanidins)是由黄烷-3-醇聚合而成的一类多酚物质。根据分子的聚合程度，原花青素可分为单体、寡聚体和多聚体，目前研究最广的葡萄籽提取物以寡聚体(OPC)为主，通常由两类原花青素单体组成，即儿茶素(catechin)和表儿茶素(epicatechin)。此外松树皮、桑葚、山楂、银杏、沙棘、越橘、蓝莓、莲房等也含有丰富的原花青素。原花青素具有极强的抗氧化作用，可以抵御自由基对人体的损伤，具有延缓衰老、美容护肤、抗辐射、抗视力退化及抗动脉硬化和血栓形成的作用，也可以预防诸如关节炎、癌症、糖尿病和心脏病等多种疾病。

类胡萝卜素(carotenoids)是一类天然色素的总称，广泛存在于自然界动物、植物、真菌、藻类和细菌中，是包含在很多植物中的一种有色物质。到上世纪末，已发现类胡萝卜素有700多种，人体血浆中发现有20多种。类胡萝卜素是含40个碳(C)的类异戊烯聚合物，即四萜化合物。在植物界有很多化合物的碳架结构是重复缩合异戊二烯五碳单位而构成的。类胡萝卜素是含有八个异戊二烯单位的四萜化合物，由两个二萜(C)“头对头”缩合而成。类胡萝卜素可分3类：①胡萝卜素，羟类化合物，特点是溶于石油醚。最常见的有蕃茄红素和α、β、γ-胡萝卜素；②叶黄素，亦称胡萝卜醇，是胡萝卜素的非酸性氧衍生物。含氧基团有羟基、酮基、醚基、环氧基和呋喃基。常见的有隐黄质、新黄质、柠黄质、玉米黄质、叶黄素、辣椒红素、辣椒玉红素、虾青素、虾红素、海胆烯酮、蒲公英黄质、紫菌红素丁等；③类胡萝卜素酸，胡萝卜素的羧酸衍生物，能溶于碱溶液。例如：西红花酸、胭脂树橙和红酵母红素等。类胡萝卜素具有显著的抗氧化作用，其中番茄红素具有淬灭单线态氧、清除体内自由基、阻断亚硝胺形成、抑制细胞增殖、诱导细胞分化、增强免疫力、减少DNA损伤以及增强细胞间隙连接通讯等方面的作用。在人体健康及疾病防治等方面发挥了重要的作用。

虽然原花青素和类胡萝卜素具有显著的抗氧化作用，但是由于生物利用度低，尤其是属于多酚类范畴的花青素类物质，非常容易与蛋白质、多糖等大分子物质发生聚合反应，影响了吸收，故能吸收进入血液而发挥作用的比例很小，因而降低了抗氧化作用的发挥。

磷脂是含磷酸根的脂类物质的总称，包括有大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、磷脂酰胆碱、多稀磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸等，它们广泛存在于自然界的动、植物的种子中，具有来源广、无毒等优点。磷脂是生物膜的基本成分，更是大脑细胞和神经系统不可缺少的物质，是健脑佳品、血管的“清道夫”和肝脏的保护神。药物制剂中常用的磷脂主要是属于天然磷脂类的大豆磷脂和蛋黄磷脂。磷脂分子具有一个亲水性的头部和两条疏水长链，由于其两亲性而具有乳化、分散、助渗、润湿等特性，并与细胞表面有较强的亲和性，在药剂中用作分散剂、表面活性剂、稳定剂、药物载体等，可作为药物辅料来增强药物活性，降低药物毒性，提高药物稳定性，使药物靶向释放到病灶区，延长药效，利于药物吸收，提高生物利用度的作用。

磷脂复合物即是以磷脂为载体的一种药物传递系统，从固体制剂角度看来，磷脂复合物是一种较为特殊的固体分散体。许多研究发现，很多类型的天然活性成分与磷脂之间具有特殊的亲和力，主要认为是以氢键相结合，结构比较复杂。这类磷脂复合物被命名为Phytosome，不过国内外仍有很多文献将其称为固体分散体或Solid dispersion。

近年来许多国外文献报道，磷脂复合物(phytosomes)的理化性质和生物特性较原化合物均有不同程度的改变，具有较强的亲脂性。通过与磷脂复合而形成载体系统，能改善一些药物在胃肠道中或经皮吸收，可有效地提高天然活性成分的体内吸收，可获得较高的血药浓度且体内消除较慢，使生物利用度显著提高。关于天然活性成分磷脂复合物生物利用度的研究，有水溶性及脂溶性均不佳的灯盏花素、人参皂苷、水飞蓟素、甘草酸、银杏酮酯、黄芪皂苷磷脂复合物等。经文献检索，目前尚未见有关原花青素、类胡萝卜素与磷脂组成复合物的报道，更无原花青素、类胡萝卜素与磷脂反应生成磷脂复合物的报道。

发明内容

本发明的特征是将原花青素、类胡萝卜素或富含原花青素、类胡萝卜素的提取物与磷脂在脂溶性溶剂中反应形成磷脂复合物，其中原花青素与类胡萝卜素的摩尔比为1∶0.1～10，原花青素和类胡萝卜素之和与磷脂的摩尔比为1∶0.5～3。

磷脂复合物的制备方法包括下述顺序的步骤：

(1)取花青素和类胡萝卜素溶于脂溶性溶剂中，得澄明液体；

(2)加入相当于花青素和类胡萝卜素0.5～3倍量的磷脂，接回流装置，20～70℃搅拌至溶液澄明；

(3)40-80℃减压浓缩，真空干燥至干，粉碎，即得磷脂复合物。

步骤(1)所述原花青素选自葡萄原花青素、松树皮原花青素、桑葚原花青素、山楂原花青素、银杏原花青素、沙棘原花青素、越橘原花青素、蓝莓原花青素和莲房原花青素。所述类胡萝卜素选自α、β、γ-胡萝卜素、叶黄素、虾青素、番茄红素、西红花苷、西红花酸、栀子黄素、玉米黄素、隐黄质、新黄质、柠黄质、辣椒红素、辣椒玉红素、虾红素、海胆烯酮、蒲公英黄质、紫菌红素丁、胭脂树橙和红酵母红素。所述脂溶性溶剂是指丙酮、乙醇、氯仿、甲醇，优选无水乙醇。

步骤(1)所述磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、磷脂酰胆碱、多稀磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸。优选大豆卵磷脂、多稀磷脂酰胆碱。取磷脂复合物适量，溶于乙醇，用激光粒度测定仪测定复合物的粒径，结果磷脂复合物的粒径分布范围为6～600nm。

此磷脂复合物可以制成片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、粉剂、颗粒剂和口服液后，通过口服途径给药。

附图说明

图1为实施例4各组大鼠第28天血清的MDA含量。NC：正常对照组；DM：糖尿病组；AO：糖尿病抗氧化组(原花青素西红花酸磷脂复合物干预组)；*与DM组比较，P＜0.05。表明可促使糖尿病鼠体内脂质过氧化MDA水平降低。

图2为实施例4各组大鼠第28天血清的总抗氧化能力T-AOC。NC：正常对照组；DM：糖尿病组；AO：糖尿病抗氧化组(原花青素西红花酸磷脂复合物干预组)；*与DM组比较，P＜0.05。表明采用磷脂复合物干预可促使糖尿病鼠体内总抗氧化T-AOC水平明显提高

图3为实施例5原花青素叶黄素磷脂复合物和环磷酰胺干预前后小鼠皮下肿瘤重量的变化。NS：空白对照组；CTX：环磷酰胺阳性对照组；磷脂复合物：原花青素叶黄素磷脂复合物干预组(AO)；*与NS组比较，P＜0.05

图4为实施例6脂肪肝细胞加入原花青素西红花酸磷脂复合物前后用油红染色后镜下观察脂变细胞的比例。*表示与FFA组相比p＜0.05。

图5为实施例6原花青素西红花酸磷脂复合物干预前后脂肪肝细胞内相对于正常细胞的TG含量变化。*表示磷脂复合物组与FFA组相比p＜0.05。

图6为实施例6原花青素西红花酸磷脂复合物干预前后脂肪肝细胞内相对于正常细胞的ROS含量变化。*表示磷脂复合物组与FFA组相比p＜0.05。

图7为实施例6原花青素西红花酸磷脂复合物干预前后脂肪肝细胞内相对于正常细胞的MDA含量变化。*表示磷脂复合物组与FFA组相比p＜0.05。即与对照组FFA比较，脂质过氧化MDA指标明显降低。

图8为实施例6原花青素西红花酸磷脂复合物干预前后脂肪肝细胞内相对于正常细胞的GSH含量变化。磷脂复合物组与FFA脂肪肝细胞对照组相比GSH抗氧化水平明显提高。p＜0.05。

图9为实施例6原花青素西红花酸磷脂复合物干预前后脂肪肝细胞内SOD活性变化。*表示磷脂复合物组与FFA组相比p＜0.05。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。

实施例1

取2kg多稀磷脂酰胆碱溶解在40升乙醇中，加入1kg葡萄籽花青素和1kgβ-胡萝卜素，于40℃搅拌溶解至澄清，60℃真空浓缩、真空干燥，粉碎即得。取产品适量，溶于乙醇，用激光粒度测定仪测定复合物的粒径，结果平均粒径为88nm。

实施例2

取2.2kg大豆卵磷脂溶解在44升甲醇中，加入0.6kg松树皮提取物和6.0kg玉米黄素，于20℃搅拌溶解至澄清，80℃真空浓缩、真空干燥，粉碎即得。取产品适量，溶于乙醇，用激光粒度测定仪测定复合物的粒径，结果平均粒径为6nm。

实施例3

取2.2kg磷脂酰乙醇胺溶解在66升乙醇中，加入1kg蓝莓花青素和0.1kg西红花提取物，于70℃搅拌溶解至澄清，40℃真空浓缩、真空干燥，粉碎即得。取产品适量，溶于乙醇，用激光粒度测定仪测定复合物的粒径，结果平均粒径为600nm。

实施例4

原花青素β-胡萝卜素磷脂复合物抗氧化应激改善糖尿病研究

(1)材料和仪器

健康雄性Wistar大鼠(购自复旦大学动物房)，葡萄籽原花青素β-胡萝卜素磷脂复合物(按实施例1的方法制备得到)。

微量血糖仪(稳捷Ⅱ型，Johnson产品)，荧光分光光度计(HITACHIF-2500)，722s分光光度计，SN-6930A型液闪仪与SN-6100型γ计数器(上海核所日环光电公司)

(2)方法

(a)模型的建立和分组

取健康雄性Wistar大鼠40只，体重140-170g之间，随机分四4组，每组10只，设正常对照组(NC组)、普通糖尿病组(DM组)、和糖尿病抗氧化干预组(AO组)，普通饲食三天后，DM、AO三组均腹腔注射STZ 50mg/kg，NC组注射剂量相当的pH4.4柠檬酸缓冲液。注射后NC和DM组给予普通饲料及普通饮水，AO抗氧化干预组给予普通饲料，以及葡萄籽花青素β-胡萝卜素磷脂复合物(grape seed proanthocyanidins extract-carotene nanoparticles，GSPE-C)200mg·kg-1·d-1(使用时用生理盐水配成1％的浓度)平均分两次灌胃治疗，其余组每次等量生理盐水溶液灌胃，在GSPE-C治疗期间，全部大鼠都用常规饲料喂养，自由饮水。

(b)血样及组织标本的采集

注射STZ后3d、14d、28d空腹采鼠尾部血，用于检测血糖、SOD、胰岛素；其中28d大鼠麻醉处死后再心脏采血1ml，用于测血浆MDA及总抗氧化能力(T-AOC)。

(c)生化指标观察

血糖测定：取STZ注射后3d、14d、28d的空腹全血检测。

胰岛素测定：取注射STZ后3d、14d、28d的血清，严格按胰岛素放射免疫分析试剂盒操作说明测定胰岛素。

T-AOC的测定：用Fe³⁺还原法测定T-AOC的含量，严格按照试剂盒操作说明书进行测定。

SOD的测定：用黄嘌呤氧化酶生物学化发光法测定血液样品红细胞SOD的活性。

MDA的测定：用硫代戊巴比妥酸荧光法测定MDA。

(d)数据分析

所有计量资料均用±s表示，用SPSS10.0软件进行统计分析。

(3)结果

(a)空腹血糖

注射STZ后，各试验组与对照组相比，空腹血糖都呈升高趋势(表1)，AO组的血糖28d较14d明显下降，并显著低于同时间点的DM组，表明采用葡萄籽花青素β-胡萝卜素磷脂复合物抗氧化干预对DM鼠血糖升高具有一定抑制作用。

表1各组大鼠空腹血糖(mmol/L)

	0day	3day	14day	28day
					NC	4.3±0.38	3.9±0.75	4.2±0.54	3.8±0.59
DM	3.9±0.32	6.2±1.56	18.5±1.8	17.2±2.56
					AO	4.4±0.46	7.2±2.54	14±3.95^*	8.5±2.98^*

NC：正常对照组；DM：糖尿病组；AO：糖尿病抗氧化组(原花青素西红花酸磷脂复合物干预组)；^*与DM组比较，P＜0.05

(b)胰岛素测定值

注射STZ后14d各试验组胰岛素检测值明显升高，然后稍呈下降趋势(表2)。反映胰岛素分泌功能对氧化应激较敏感，加重应激可能会致胰岛β细胞氧化损伤而抑制胰岛素分泌。采用葡萄籽花青素β-胡萝卜素磷脂复合物干预后，胰岛素分泌比DM鼠明显降低。

表2各组大鼠胰岛素变化值(μIU/mL)

	0day	3day	14day	28day
					NC	7.41±1.51	7.13±1.43	7.26±1.12	7.51±1.91
DM	7.16±1.13	7.31±1.56	16.21±1.82	15.13±1.51
					AO	6.82±1.42	7.59±1.72	10.14±1.03^*	9.43±1.58^*

(c)SOD活性

注射STZ后，DM组大鼠的SOD活力明显低于正常对照组，各组SOD活力按NC＞AO＞DM而呈逐渐降低趋势(表3)。采用葡萄籽花青素β-胡萝卜素磷脂复合物抗氧化干预后，SOD活力比DM鼠明显升高。

表3各组大鼠SOD变化值(u/mL)

(d)MDA和T-AOC的水平变化

28d各试验组大鼠MDA均明显高于正常对照组，而T-AOC则明显低于正常对照组。各组MDA的变化趋势为NC＜AO＜DM(图1)；T-AOC的变化趋势相反，为NC＞AO＞DM(图2)。表明葡萄籽花青素β-胡萝卜素磷脂复合物抗氧化干预可以降低体内脂质过氧化程度，并可提高总的抗氧化水平。

本实验表明糖尿病大鼠模型中抗氧化酶SOD活性明显降低，脂质过氧化代谢产物MDA水平明显升高。而采用本方法制备的葡萄籽花青素β-胡萝卜素磷脂复合物干预后可有效改善糖尿病大鼠的氧化应激状态。经灌服葡萄籽花青素β-胡萝卜素磷脂复合物后，在干预后14天，AO组大鼠血液中SOD酶活性比DM组明显升高，干预后28天总的抗氧化水平(T-AOC)明显增加，而反映自由基损伤程度指标的脂质过氧化代谢产物MDA水平明显降低。同时，干预后14及28天，胰岛素分泌接近正常对照，血糖指标明显改善。

糖尿病是体内以葡萄糖代谢发生紊乱为主的一种内分泌疾病。实验结果证明本方法制备的原花青素西红花酸磷脂复合物通过其抗氧化的功效可有效改善诱发糖尿病大鼠过程中大鼠体内的氧化应激状态，对胰岛素抵抗和胰岛细胞损伤具有一定防护作用，并降低糖尿病大鼠的血糖水平，显著减缓糖尿病大鼠的诱发进程。提示本方法制备的原花青素西红花酸磷脂复合物干预可有助于对糖尿病病程的控制，对于糖尿病具有一定防治作用。

实施例5

原花青素叶黄素磷脂复合物抗氧化应激抑制肿瘤增殖的研究

(1)材料和仪器

H22肿瘤细胞株(中科院上海药物所)。

(2)方法

昆明小鼠80只，体重22-26g，空白对照组为生理盐水组(NS)，另外设阳性对照组(CTX)和实验组(AO)，每组十只小鼠。在无菌条件下，抽取腹水型小鼠腹腔保种的肿瘤细胞(H22)，用生理盐水稀释，在小鼠腋下接种0.2ml相同细胞数悬液(2×10⁶/ml)，接种前7d，空白对照组每天灌服生理盐水(10ml/kg.bw)，实验组每天分别灌服含抗氧化成分的原花青素叶黄素磷脂复合物(proanthocyanidin-lutein，300mg/kg.bw)。阳性对照组在接种后每天灌服环磷酰胺(CTX，15mg/kg.bw)。二周后处死小鼠，取腋下肿瘤块称重。

(3)结果

原花青素叶黄素磷脂复合物干预对小鼠皮下肿瘤生长的影响，各组小鼠皮下肿瘤块称重，如图3所示，干预后的实验组(AO)平均值全部低于生理盐水对照组(NS)，肿瘤抑制率接近阳性对照组。

实施例6

原花青素西红花酸磷脂复合物抗氧化应激改善脂肪肝细胞学的研

(1)材料和仪器，

L02人肝细胞株(浙江大学自由基生命科学研究中心馈赠)，TG试剂盒、GSH试剂盒(南京建成公司)，ROS试剂盒、GSH试剂盒(碧云天生物技术研究所)，烟酰胺、鲁米诺、TBA、6PD、G6P(SIGAMA公司)。

倒置相差显微镜(OLYMPUS CK40)，多功能酶标仪(ELX800.BIO-TEK INSTRUMENTS)，荧光分光光度计(HITACHI F-2500)，生物化学发光仪(SHG-1，上海检测技术研究所)

(2)方法

(a)脂肪肝细胞模型的建立：培养液内加入0.5mmol/L脂肪酸混合液FFA(由油酸和棕榈酸按2∶1的比例配置而成)，培养48小时。

(b)药物处理：细胞接种于6孔板内，每孔细胞数为10⁵个/ml。分为①空白组(正常培养液培养72小时)，②脂肪酸(FFA)组(接种24 小时后，加入0.5mmol/L的FFA混合液培养48小时)，③加药组(接种12小时后加入原花青素西红花酸磷脂复合物，使终浓度为200μg/ml，培养12小时后再加入0.5mmol/L的FFA混合液，培养48小时)。

(c)细胞活性的测量：MTT法：选择490nm波长，在酶联免疫检测仪测定各管吸光度。细胞存活率＝实验组吸光度/对照组吸光度×100％。

(d)甘油三酯(TG)测量：细胞消化，离心收集后，使细胞破碎。震荡混匀，离心10000rpm，5min。吸取上清，利用甘油三酯试剂盒(南京建成公司)进行测定。

(e)活性氧族(ROS)与GSH的测量：按照试剂盒的说明书操作。

(f)SOD的测量：采用连苯三酚自氧化方法。

(g)脂质过氧化物(MDA)的测量：采用硫代巴比妥酸(TBA)荧光法。发射光(EM)为553nm，激发光(EX)为515nm测定。

(3)结果

(a)干预对脂肪肝细胞脂滴含量的影响如图4所示，加入FFA的细胞，脂变细胞比率为29.8％，加入原花青素西红花酸磷脂复合物后脂变细胞比率下降为14.1％。

(b)原花青素西红花酸磷脂复合物干预后脂肪肝细胞内TG含量的变化，甘油三酯TG是细胞内脂含量的重要指标，图5显示FFA处理后，导致细胞内TG的含量明显上升，增加了372％；而原花青素西红花酸纳米粒干预后可使已上升的TG含量显著降低。

(c)原花青素西红花酸磷脂复合物干预后脂肪肝细胞内氧化应激水平的变化

图6显示，加入FFA后，ROS明显增高，升高了48％，说明细胞的氧化水平增高；加入原花青素西红花酸磷脂复合物后细胞的ROS含量降低，干预组相对于正常细胞ROS值仅上升10％。

MDA是脂质过氧化物的产物，当加入原花青素西红花酸磷脂复合物后细胞内的MDA含量比脂肪酸细胞组明显降低(图7)。表明原花青素西红花酸磷脂复合物干预能够减轻细胞内脂质过氧化的水平。(d)原花青素西红花酸磷脂复合物干预后脂肪肝细胞内抗氧化水平的变化。细胞内还原型谷胱甘肽GSH水平可反映细胞内一些系统的还原水平状态，以及清除脂质过氧化的能力。FFA处理细胞后，细胞内GSH显著下降，降到只有原来的12％，而原花青素西红花酸磷脂复合物干预后GSH水平比FFA组明显上升，接近正常组(图8)。

超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内主要的抗氧化酶，能特异的清除超氧阴离子，从而减少羟自由基等更具毒素作用的物质产生，在防御氧的毒性、抑制老年疾病以及预防衰老等方面起着重要作用。实验结果表明，原花青素西红花酸磷脂复合物干预组的SOD水平比FFA组明显上升，见图9。

实验结果证明本方法制备的原花青素西红花酸磷脂复合物通过其抗氧化的功效可有效改善脂肪肝细胞的氧化应激状态。也提示本方法制备的原花青素西红花酸磷脂复合物对于脂肪肝变化具有一定的防治作用。

Claims

一种具有抗氧化应激作用的磷脂复合物制备方法及其应用

1.一种由原花青素、类胡萝卜素或富含原花青素、类胡萝卜素的提取物与磷脂反应形成的磷脂复合物。
2.如权利要求1所述的磷脂复合物，其特征是所述原花青素与类胡萝卜素的重量比为1∶0.1～10，原花青素和类胡萝卜素之和与磷脂的重量比为1∶0.5～3。
3.如权利要求3所述的磷脂复合物，其特征是所述原花青素与类胡萝卜素的重量比为1∶0.5～5，原花青素和类胡萝卜素之和与磷脂的重量比为1∶0.8～1.5。
4.如权利要求1～3所述的磷脂复合物，其特征是，所述原花青素选自葡萄原花青素、松树皮原花青素、桑葚原花青素、山楂原花青素、银杏原花青素、沙棘原花青素、越橘原花青素、蓝莓原花青素、莲房原花青素。
5.如权利要求1～3的磷脂复合物，其特征是所述类胡萝卜素选自α、β、γ-胡萝卜素、叶黄素、虾青素、番茄红素、西红花苷、西红花酸、栀子黄素、玉米黄素、隐黄质、新黄质、柠黄质、辣椒红素、辣椒玉红素、虾红素、海胆烯酮、蒲公英黄质、紫菌红素丁、胭脂树橙和红酵母红素。
6.如权利要求1～3的磷脂复合物，其特征是所述磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸。
7.如权利要求1～3的磷脂复合物，其特征是所述磷脂复合物的粒径在6～600nm。
8.如权利要求1所述复合物的制备方法，包括下述顺序的步骤：

(1)取原花青素和类胡萝卜素溶于20～70℃的脂溶性溶剂中，得澄明液体；

(2)加入相当于原花青素和类胡萝卜素0.5～3倍量的磷脂，接回流装置，搅拌至溶液澄明；

(3)40～80℃减压浓缩，真空干燥至干，粉碎，即得磷脂复合物。
9.如权利要求8所述磷脂复合物的制备方法，其特征是，步骤(1)所述脂溶性溶剂是指丙酮、乙醇、氯仿、甲醇。
10.如权利要求8所述磷脂复合物的制备方法，其特征是，步骤(1)所述脂溶性溶剂优选无水乙醇。
11.如权利要求1的磷脂复合物，其特征是具有显著的抗氧化应激作用，可制备用于预防或治疗氧化应激引起的肿瘤、糖尿病、动脉粥样硬化、心肌梗塞、脂肪肝和脑梗塞疾病。
12.如权利要求11的磷脂复合物，其特征是与医药学中接受的辅料一起加工成软胶囊、硬明胶、片剂、颗粒剂、粉剂或口服液。