CN103114122B - 利用游动放线菌制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法 - Google Patents
利用游动放线菌制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103114122B CN103114122B CN201210593725.7A CN201210593725A CN103114122B CN 103114122 B CN103114122 B CN 103114122B CN 201210593725 A CN201210593725 A CN 201210593725A CN 103114122 B CN103114122 B CN 103114122B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- aminomethyl
- trans
- naphthenic acid
- actinoplanes
- zjb
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 42
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 241000187844 Actinoplanes Species 0.000 claims description 23
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 18
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 14
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 14
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 14
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 13
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 9
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 9
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 9
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 9
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 9
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 7
- 229960000935 dehydrated alcohol Drugs 0.000 claims description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 7
- 229960004756 ethanol Drugs 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 241000187712 Actinoplanes sp. Species 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 5
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 5
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 5
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 5
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 claims description 5
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 claims description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 4
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 19
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 abstract description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 abstract description 2
- 241001052560 Thallis Species 0.000 abstract 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 abstract 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- HGCIXCUEYOPUTN-UHFFFAOYSA-N cyclohexene Chemical compound C1CCC=CC1 HGCIXCUEYOPUTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000006345 epimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 229940122816 Amylase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010008570 Chloasma Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 101710196208 Fibrinolytic enzyme Proteins 0.000 description 1
- 206010018276 Gingival bleeding Diseases 0.000 description 1
- 208000024283 Gingival haemorrhages Diseases 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 208000003351 Melanosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 229960003375 aminomethylbenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- QCTBMLYLENLHLA-UHFFFAOYSA-N aminomethylbenzoic acid Chemical compound NCC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 QCTBMLYLENLHLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003392 amylase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- HVGQWHMSVYODLJ-GFCCVEGCSA-N melanochrome Natural products CC1(C)Oc2cc3OC(=CC(=O)c3c(O)c2C[C@H]1O)CO HVGQWHMSVYODLJ-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229940034610 toothpaste Drugs 0.000 description 1
- 239000000606 toothpaste Substances 0.000 description 1
- GYDJEQRTZSCIOI-LJGSYFOKSA-N tranexamic acid Chemical compound NC[C@H]1CC[C@H](C(O)=O)CC1 GYDJEQRTZSCIOI-LJGSYFOKSA-N 0.000 description 1
- 229960000401 tranexamic acid Drugs 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用游动放线菌ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，所述的方法以游动放线菌ZJB-08196经发酵培养后获得的湿菌体为催化剂，以顺反式-4-氨甲基-环己烷甲酸为底物，在pH 6.5~8.5的水或缓冲液构成的转化体系中进行转化反应，反应完全后，将转化液离心，取上清液即获得含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的反应液，将反应液分离纯化，获得所述反式-4-氨甲基-环己烷甲酸；本发明合成反应条件温和，环境友好、操作流程简单，具有良好的应用前景。
Description
（一）技术领域
本发明涉及一种利用生物催化方法制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，特别涉及一种游动放线菌（Actinoplanes sp.）ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法。
（二）背景技术
反式-4-氨甲基-环己烷甲酸（I）又称氨甲环酸、止血环酸，是一种作用于纤维蛋白溶解酶系统的止血药，临床上主要用于急性或慢性、局限性或全身纤维蛋白溶解亢进所致的各种出血。也能够竞争性地抑制酪氨酸与酪氨酸酶结合，减少黑色素的生成，而被用于黄褐斑的治疗。添加于化妆品中能阻断消弭紫外线照射导致的黑色素恶化的进程。加入牙膏可以防止牙龈出血。
目前反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的规模化生产均采用化学法：
1.环己烯法合成反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的工艺路线（式（1））
式（1）
2.对氨甲基苯甲酸法合成反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的工艺路线（式（2））
式（2）
环己烯法和对氨基苯甲酸法工艺路线中都要先合成顺反式-4-氨甲基-环己烷甲酸（顺式：反式=65:35），所得混合物再在强碱性条件下经高温高压转化成反式-4-氨甲基-环己烷甲酸，转化条件苛刻，转化不彻底，后处理复杂，成本高，污染大。
近年来，以生物体或酶为基础的生物催化技术因高度的化学、区域选择性、立体选择性温和的反应条件备受关注。但目前还没有利用生物催化技术制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的报道。生物催化法转化顺反式-4-氨甲基-环己烷甲酸制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸具有反应条件温和、转化彻底、易操作等优点，具有良好的工业应用前景。
（三）发明内容
本发明目的是提供一种差向异构化顺式-4-氨甲基-环己烷甲酸制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，即利用游动放线菌（Actinoplanes sp.）ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸中的方法。
本发明采用的技术方案是：
一种利用游动放线菌ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，所述的方法以游动放线菌（Actinoplanes sp.）ZJB-08196经发酵培养后获得的湿菌体为催化剂，以顺反式-4-氨甲基-环己烷甲酸为底物，在pH6.5～8.5的水或缓冲液构成的转化体系中进行转化反应，反应完全后，将转化液离心，取上清液即获得含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的反应液，将反应液分离纯化，获得所述反式-4-氨甲基-环己烷甲酸。
进一步，所述转化体系中底物初始浓度为0.2～20g/L。
进一步，所述转化体系中湿菌体添加量为10～200g/L，所述湿菌体的含水量为80～90%。
进一步，所述转化反应是在20～40℃下转化反应2～48小时，反应完全后，将转化液离心，取上清液即获得含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的反应液。
进一步，所述含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的反应液分离纯化的方法为：将反应液加入活性炭，煮沸脱色，过滤，滤液浓缩，取浓缩液加入无水乙醇至乙醇体积终浓度95%析晶，冷却至0℃、过滤，晶体用无水乙醇洗涤、过滤，干燥，获得所述反式-4-氨甲基-环己烷甲酸。
进一步，所述催化剂按如下步骤制备：
（1）斜面菌种培养：将游动放线菌ZJB-08196接种于斜面培养基，于20～37℃下培养至菌落长出，获得斜面活化菌种；所述斜面培养基终浓度组成为：蔗糖5～30g/L，蛋白胨1～5g/L，酪氨酸0.5～2g/L，K2HPO4·3H2O0.5～2g/L，KCl0.5～2g/L，MgSO4·7H2O0.5～2g/L，FeSO4·7H2O0.1～1g/L，琼脂15～20g/L，溶剂为水，初始pH6.0～7.5；
（2）种子培养：从斜面活化菌种挑取一接种环接种于种子培养基，在摇床转速150～250rpm、20～37℃条件下培养48～60小时，得到种子液；所述的种子培养基的终浓度组成为：玉米淀粉5～20g/L，黄豆饼粉20～60g/L，甘油5～20g/L，碳酸钙1～5g/L，CaCl21～10g/L，K2HPO4·3H2O0.5～2g/L，溶剂为水，初始pH6.0～7.5；
（3）发酵培养：将种子液按照体积比1～15%接入发酵培养基中，在20～37℃、摇床转速150～250rpm条件下培养1～7天，取发酵液于4000～12000rpm离心，弃上清液，收集湿菌体；所述发酵培养基的终浓度组成为：麦芽糖10～120g/L，葡萄糖10～50g/L，黄豆饼粉5～25g/L，碳酸钙2～10g/L，甘油1～10g/L，谷氨酸钠2～10g/L，溶剂为水，初始pH6.0～7.5。
更进一步，所述利用游动放线菌ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法按如下步骤进行：将游动放线菌ZJB-08196经发酵培养后获得的湿菌体和顺反式-4-氨甲基-环己烷甲酸混合，用pH7.0～8.2水或缓冲液构成的转化体系，在25～37℃下转化反应2～36h，反应完全后，将转化液离心，取上清液即获得含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的反应液，将反应液加入活性炭，煮沸脱色，过滤，滤液浓缩，取浓缩液加入无水乙醇至乙醇体积终浓度95%析晶，冷却、过滤，晶体用无水乙醇洗涤、过滤，干燥，获得所述反式-4-氨甲基-环己烷甲酸；所述转化体系中底物初始浓度为0.2～20g/L，所述转化体系中湿菌体添加量为10～200g/L，所述湿菌体的含水量为80～90%。
更具体的，推荐本发明所述方法按如下步骤进行：
（1）种子培养
游动放线菌ZJB-08196接种于斜面培养基，于30℃下培养72小时，获得斜面菌体；斜面培养基配方为：蔗糖30.0g/L，蛋白胨2.0g/L，L-酪氨酸1.0g/L，K2HPO41.0g/L，KCl0.5g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，FeSO4·7H2O0.1g/L，琼脂20.0g/L，pH自然。
（2）种子培养基：将斜面培养的菌体接种于种子培养基中，在30℃，200r/min条件下培养60小时，获得种子液。种子培养基的配方为：玉米淀粉16.0g/L，黄豆饼粉40.0g/L，甘油20.0g/L，CaCO32.0g/L，K2HPO40.5g/L，pH自然。
（3）发酵培养
将培养好的种子液按照10%的体积比接种到发酵培养基中，以在30℃、摇床转速200r/min条件下培养168小时，将培养液离心，收集湿菌体，用生理盐水洗涤两次后，离心收集菌体，冷藏备用，获得湿菌体；发酵培养基的配方为：葡萄糖40.0g/L，麦芽糖80g/L，黄豆饼粉17.0g/L，谷氨酸钠3.0g/L，CaCO32.5g/L，CaCl22.5g/L，FeCl30.5g/L，K2HPO41.0g/L，甘油2.0g/L，用1M盐酸溶液或1M氢氧化钠溶液调节初始pH7.0。
（4）生物转化
以顺反式-4-氨甲基-环己烷甲酸为底物，以游动放线菌ZJB-08196菌体细胞为催化剂，在pH值为7.0的蒸馏水构成的转化体系中，在30℃下转化反应20小时，反应完全后，将转化液离心，取上清液即获得含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的反应液，将反应液加入活性炭，煮沸脱色，过滤，滤液浓缩，取浓缩液加入无水乙醇至乙醇体积终浓度95%析晶，冷却至0℃、过滤，晶体用无水乙醇洗涤、过滤，干燥，获得所述反式-4-氨甲基-环己烷甲酸；所述转化体系中底物浓度为1g/L，湿菌体添加量为100g/L，湿菌体的含水量为80～90%。
本发明所述游动放线菌（Actinoplanes sp.）ZJB-08196，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学430072，保藏编号CCTCC NO：M209022，保藏日期2009年2月16日，是在筛选淀粉酶抑制剂产生菌过程中筛选到的（ZL201010605912.3）。
本发明中底物和产物采用高效液相色谱测定，方法如下：
反应结束后，转化液经离心分离去除菌体细胞，上清液用0.45μm微滤膜过滤，滤液用装有SPD-20A紫外-可见光检测器的岛津LC-20AT高效液相色谱仪进行检测，流动相为0.1M pH2.6磷酸盐缓冲液：甲醇=60:40（v/v）；并采用超声波脱气。HPLC分析条件：Diamonsil C18ODS柱（250mm×4.6mm×5μm），柱温39℃，流速1.0mL/min，检测波长220nm，进样量20μL。
本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了一种利用游动放线菌ZJB-08196生物催化顺式-4-氨甲基-环己烷甲酸差向异构制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸中的方法，该合成反应条件温和，环境友好、操作流程简单，具有良好的应用前景。
（四）具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1：游动放线菌ZJB-08196湿菌体的制备
(1)斜面培养：将游动放线菌ZJB-08196接种于斜面培养基，于30℃下培养144小时，获得斜面菌体。斜面培养基配方为：蔗糖30.0g/L，蛋白胨2.0g/L，L-酪氨酸1.0g/L，K2HPO41.0g/L，KCl0.5g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，FeSO4·7H2O0.1g/L，琼脂20.0g/L，pH自然。
(2)种子培养：用接种铲从斜面菌体铲取约1cm2菌苔接种于种子培养基，30℃，180r/min条件下培养60小时，获得种子液。种子培养基的配方为：玉米淀粉16.0g/L，黄豆饼粉40.0g/L，甘油20.0g/L，CaCO32.0g/L，K2HPO40.5g/L，pH自然。
(3)发酵培养：将培养好的种子液按照10%的体积比接种到发酵培养基中，在30℃、摇床转速200r/min条件下培养168小时，获得含菌细胞发酵液。将培养液离心，收集湿菌体，用生理盐水洗涤两次后，离心收集菌体，获得湿菌体，湿菌体的产量为250g/L，湿菌体含水量为85%。发酵培养基的配方为：葡萄糖40.0g/L，麦芽糖80g/L，黄豆饼粉17.0g/L，谷氨酸钠3.0g/L，CaCO32.5g/L，CaCl22.5g/L，FeCl30.5g/L，K2HPO41.0g/L，甘油1.0g/L，用1M盐酸溶液或1M氢氧化钠溶液调节初始pH7.0。
实施例2游动放线菌ZJB-08196湿菌体的制备
(1)斜面培养：同实施例1。
(2)种子培养：同实施例1。
(3)发酵培养：将培养好的种子液按照5%的体积比接种到发酵培养基中，在28℃、摇床转速180r/min条件下培养144小时，获得含菌细胞发酵液。将发酵液离心，收集湿菌体，用生理盐水洗涤两次后，离心收集菌体，获得湿菌体，湿菌体的产量为237g/L，湿菌体含水量为90%。发酵培养基的配方为：葡萄糖60.0g/L，麦芽糖100g/L，黄豆饼粉10.0g/L，谷氨酸钠5.0g/L，CaCO35g/L，CaCl25g/L，FeCl31.0g/L，K2HPO42.0g/L，甘油5.0g/L，用1M盐酸溶液或1M氢氧化钠溶液调节初始pH7.0。
实施例3反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的制备
湿菌体的制备同实施例1。在转化瓶中加入100mL蒸馏水，其中含有湿菌体20g，底物顺反式-4-氨甲基-环己烷甲酸0.2g，在28℃恒温水浴搅拌反应16小时。反应结束后，转化液经离心分离去除菌体细胞，上清液用0.45μm微滤膜过滤，滤液采用HPLC分析，顺式-4-氨甲基-环己烷甲酸已检测不到，反式-4-氨甲基-环己烷甲酸含量为0.18g，底物转化率为90%。将离心上清液96mL（含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸0.18g），加活性炭5g，煮沸脱色，室温下过滤，滤液蒸发浓缩至6mL（含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸0.17g），加无水乙醇至95%（v/v）析晶，冷却至0℃，过滤，结晶用无水乙醇洗涤、过滤、干燥，获得所述反式-4-氨甲基-环己烷甲酸（0.16g），总提取收率88.9%。
实施例4反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的制备
湿菌体的制备同实施例2。在转化瓶中加入100mL磷酸钠缓冲溶液（pH8.0，0.1M），其中含有湿菌体15g，底物顺反式-4-氨甲基-环己烷甲酸0.5g，在32℃恒温水浴搅拌反应24小时。反应结束后，转化液经离心分离去除菌体细胞，上清液用0.45μm微滤膜过滤，滤液采用岛津HPLC分析，顺式-4-氨甲基-环己烷甲酸已完全检测不到，反式-4-氨甲基-环己烷甲酸含量为0.42g，底物转化率为84%。将离心上清液98mL（含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸0.42g），加活性炭7.5g，煮沸脱色。室温下过滤，滤液蒸发浓缩至5mL（含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸0.35g），加无水乙醇至乙醇终浓度95%（v/v）析晶。冷却至0℃，过滤，结晶用无水乙醇洗涤、过滤、干燥，获得所述反式-4-氨甲基-环己烷甲酸（0.33g），总提取收率78.6%。
Claims (5)
1.一种利用游动放线菌ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，其特征在所述的方法以游动放线菌（Actinoplanes sp.）ZJB-08196经发酵培养后获得的湿菌体为催化剂，以顺反式-4-氨甲基-环己烷甲酸为底物，在pH6.5～8.5的水或缓冲液构成的转化体系中进行转化反应，反应完全后，将转化液离心，取上清液即获得含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的反应液，将反应液分离纯化，获得所述反式-4-氨甲基-环己烷甲酸；所述转化体系中底物初始浓度为0.2～20g/L；所述转化体系中湿菌体添加量为10～200g/L，所述湿菌体的含水量为80～90%。
2.如权利要求1所述利用游动放线菌ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，其特征在所述转化反应是在20～40℃下转化反应2～48小时，反应完全后，将转化液离心，取上清液即获得含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的反应液。
3.如权利要求1所述利用游动放线菌ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，其特征在所述反应液分离纯化的方法为：将反应液加入活性炭，煮沸脱色，过滤，滤液浓缩，取浓缩液加入无水乙醇至乙醇体积终浓度95%析晶，冷却、过滤，晶体用无水乙醇洗涤、过滤，干燥，获得所述反式-4-氨甲基-环己烷甲酸。
4.如权利要求1所述利用游动放线菌ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，其特征在所述催化剂按如下步骤制备：
（1）斜面菌种培养：将游动放线菌ZJB-08196接种于斜面培养基，于20～37℃下培养至菌落长出，获得斜面活化菌种；所述斜面培养基终浓度组成为：蔗糖5～30g/L，蛋白胨1～5g/L，酪氨酸0.5～2g/L，K2HPO4·3H2O0.5～2g/L，KCl0.5～2g/L，MgSO4·7H2O0.5～2g/L，FeSO4·7H2O0.1～1g/L，琼脂15～20g/L，溶剂为水，初始pH6.0～7.5；
（2）种子培养：从斜面活化菌种挑取一接种环接种于种子培养基，在摇床转速150～250rpm、20～37℃条件下培养48～60小时，得到种子液；所述的种子培养基的终浓度组成为：玉米淀粉5～20g/L，黄豆饼粉20～60g/L，甘油5～20g/L，碳酸钙1～5g/L，CaCl21～10g/L，K2HPO4·3H2O0.5～2g/L，溶剂为水，初始pH6.0～7.5；
（3）发酵培养：将种子液按照体积比1～15%接入发酵培养基中，在20～37℃、摇床转速150～250rpm条件下培养1～7天，取发酵液于4000～12000rpm离心，弃上清液，收集湿菌体；所述发酵培养基的终浓度组成为：麦芽糖10～120g/L，葡萄糖10～50g/L，黄豆饼粉5～25g/L，碳酸钙2～10g/L，甘油1～10g/L，谷氨酸钠2～10g/L，溶剂为水，初始pH6.0～7.5。
5.如权利要求1所述利用游动放线菌ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，其特征在所述方法按如下步骤进行：将游动放线菌ZJB-08196经发酵培养后获得的湿菌体和顺反式-4-氨甲基-环己烷甲酸混合，用pH7.0～8.2水或缓冲液构成的转化体系，在25～37℃下转化反应2～36h，反应完全后，将转化液离心，取上清液即获得含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的反应液，将反应液加入活性炭，煮沸脱色，过滤，滤液浓缩，取浓缩液加入无水乙醇至乙醇体积终浓度为95%析晶，冷却至0℃、过滤，晶体用无水乙醇洗涤、过滤，干燥，获得所述反式-4-氨甲基-环己烷甲酸；所述转化体系中底物初始浓度为0.2～20g/L，所述转化体系中湿菌体添加量为10～200g/L，所述湿菌体的含水量为80～90%。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210593725.7A CN103114122B (zh) | 2012-12-31 | 2012-12-31 | 利用游动放线菌制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210593725.7A CN103114122B (zh) | 2012-12-31 | 2012-12-31 | 利用游动放线菌制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103114122A CN103114122A (zh) | 2013-05-22 |
| CN103114122B true CN103114122B (zh) | 2014-06-11 |
Family
ID=48412539
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210593725.7A Expired - Fee Related CN103114122B (zh) | 2012-12-31 | 2012-12-31 | 利用游动放线菌制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103114122B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110156620B (zh) * | 2019-07-02 | 2022-04-15 | 中节能万润股份有限公司 | 一种氨甲环酸的制备方法 |
| WO2024005155A1 (ja) * | 2022-06-30 | 2024-01-04 | キリンホールディングス株式会社 | ４－（アミノメチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸の製造方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102127508A (zh) * | 2010-12-25 | 2011-07-20 | 浙江工业大学 | α-淀粉酶抑制剂产生菌及其筛选方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101236142B1 (ko) * | 2010-09-30 | 2013-02-21 | 경북대학교 산학협력단 | 가돌리늄 착물을 함유하는 ｍｒｉ조영제 |
-
2012
- 2012-12-31 CN CN201210593725.7A patent/CN103114122B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102127508A (zh) * | 2010-12-25 | 2011-07-20 | 浙江工业大学 | α-淀粉酶抑制剂产生菌及其筛选方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| DUNN C. J.等.Tranexamic acid : A review of its use in surgery and other indications.《Drugs》.1999,第57卷(第6期),第1005-1032页. |
| Tranexamic acid : A review of its use in surgery and other indications;DUNN C. J.等;《Drugs》;19991231;第57卷(第6期);第1005-1032页 * |
| 孙家亮.氨甲环酸原料药合成工艺研究.《中国实用医药》.2011,第6卷(第17期),第160-162页. |
| 氨甲环酸原料药合成工艺研究;孙家亮;《中国实用医药》;20110718;第6卷(第17期);第160-162页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103114122A (zh) | 2013-05-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103665371B (zh) | 一种利用超滤纳滤技术精制生物发酵液中聚谷氨酸的方法 | |
| CN100562581C (zh) | 一种生产γ-氨基丁酸的方法及其专用反应柱 | |
| CN100577793C (zh) | 微生物转化d-果糖制备d-阿洛酮糖的菌种和方法 | |
| CN105838622B (zh) | 黑曲霉hc306及在转化柚皮苷制备柚皮素中的应用 | |
| CN107418995B (zh) | 一种石榴皮单宁液态发酵制备的鞣花酸及其制备方法 | |
| CN104498563A (zh) | 一种江蓠菜琼胶寡糖及其制备方法 | |
| CN102851333A (zh) | 一种生物催化合成β-丙氨酸的方法 | |
| CN103992953B (zh) | 一株转化甘草酸生成甘草次苷的东乡野生稻内生真菌 | |
| CN102168036B (zh) | 微生物转化制备r-4-氯-3-羟基丁酸酯和s-3-羟基丁内酯及菌株 | |
| CN101085989A (zh) | 一种利用细菌发酵生产番茄红素的方法 | |
| CN102337313B (zh) | 一种制备海藻糖的方法 | |
| CN103114122B (zh) | 利用游动放线菌制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法 | |
| CN104357332A (zh) | 黑曲霉jh-2及在生物转化合成积雪草酸中应用 | |
| CN101805756B (zh) | 生物催化法生产他汀类药物中间体 | |
| CN102994429B (zh) | 微生物催化制备(S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸酯的方法及菌株 | |
| CN103045504B (zh) | 微生物催化制备(2s, 3r)-2-苯甲酰氨甲基-3-羟基丁酸酯及菌株 | |
| CN105543108A (zh) | 紫变青霉ql-9204及在转化根皮苷制备根皮素中的应用 | |
| CN103451251A (zh) | 利用粗毛韧革菌菌体作为催化剂制备银杏内酯b的方法 | |
| CN103131649A (zh) | 荧光假单胞菌及其在制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸中的应用 | |
| CN111117893B (zh) | 一种产生4-o-去甲基巴尔巴地衣酸的土曲霉菌株极其应用 | |
| CN109666707B (zh) | 利用土曲霉菌株生产4-o-去甲基巴尔巴地衣酸进而合成合成橡苔的方法 | |
| CN103451250A (zh) | 银耳菌体在制备银杏内酯b中的应用 | |
| CN111116370B (zh) | 利用4-o-去甲基巴尔巴地衣酸合成2,4-二羟基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯的方法 | |
| CN103981104A (zh) | 一株内生真菌及其生物转化甘草酸为甘草次苷的方法 | |
| CN102174194B (zh) | 从发酵液中提取γ-聚二氨基丁酸和聚赖氨酸的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20140611 Termination date: 20171231 |