CN103087958B - 一株吡啶降解菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株吡啶降解菌及其应用。本发明提供了一种动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5，其保藏号为CGMCC No.7090。本发明还提供动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5在降解含氮杂环化合物中的应用。所述含氮杂环化合物为吡啶。所述含氮杂环化合物为污水中的吡啶。本发明的实验证明，本发明发现了一株新的动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5 CGMCC No.7090，其能够快速高效地降解吡啶，可用于含吡啶废水的生物降解处理过程。以上述动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5为活性成分的生物菌剂也属于本发明的保护范围；该菌剂中可根据需要，添加可接受的辅料。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一株吡啶降解菌及其应用。
背景技术
含氮杂环化合物广泛应用于石油、食品和医药工业，大都是有毒且难降解的有机物，不易受代谢过程的破坏，属于污染面广的难降解有机物，对生态系统和人类健康会产生潜在的长期危害。杂环类化合物是具有较大威胁的一类化合物，比对应的非杂环化合物的毒性高。
吡啶是一种典型的含氮杂环化合物，在化工、医药工业以及农药生产等行业中被广泛应用，吡啶毒性较大，具有致癌、致畸、致突变性和生物降解性差等特点。再加上吡啶的水溶性和扩散性较好，已成为土壤和废水中最常见的污染物之一，生物修复是解决该类问题的有效方法。利用从环境中筛选出的微生物能够有效去除环境中的吡啶等污染物。
发明内容
本发明的一个目的是提供一株动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5。
本发明提供的动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5，其保藏号为CGMCCNo.7090。
上述的动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5在如下1）-3）中任一应用也是本发明保护的范围：
1）在降解含氮杂环化合物中的应用；
2）在提高降解含氮杂环化合物速率中的应用；
3）在缩短降解含氮杂环化合物时间中的应用。
上述应用中，所述提高降解含氮杂环化合物速率通过缩短降解含氮杂环化合物时间体现；所述含氮杂环化合物具体为吡啶。
上述应用中，所述含氮杂环化合物为污水中的吡啶。
本发明的另一个目的是提供一种降解吡啶的方法。
本发明提供的方法，包括如下步骤：将上述的动胶菌样申氏菌（Shinellazoogloeoides）P5接种在含有吡啶的体系中培养，实现降解吡啶。
上述方法中，所述培养的温度为30-35℃；所述培养的体系的pH值为4-9；所述含有吡啶的体系的吡啶浓度为0-2500mg/L，且不为0；在本发明的实施例中，所述培养的温度为30℃；所述培养的体系的pH值为5；所述含有吡啶的体系的吡啶浓度为0-1000mg/L，且不为0；所述含有吡啶的体系的吡啶浓度具体为300-1000mg/L。
上述含有吡啶的体系为含有吡啶的污水或者含有吡啶的培养基。
在本发明的实施例中培养基为液体培养基或者无机盐培养基，具体配方见实施例。
动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5已于2013年01月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC No.7090。
本发明的实验证明，本发明发现了一株新的动胶菌样申氏菌（Shinellazoogloeoides）P5CGMCC No.7090，其能够快速高效地降解吡啶，可用于含吡啶废水的生物降解处理过程。以上述动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5为活性成分的生物菌剂也属于本发明的保护范围；该菌剂中可根据需要，添加可接受的辅料。
附图说明
图1为P5菌对吡啶的生物降解
图2为P5菌在加大投菌量并去除菌表面吸附杂质情况下对吡啶的生物降解
图3为P5菌在不同吡啶初始浓度下的生长与降解曲线
图4为P5菌在不同温度下的生长与降解曲线
图5为P5菌在不同pH下的生长与降解曲线
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中如无声明采用的培养基如下：
液体培养基：每L含量:Na2HPO41.42g、KH2PO41.36g、MgSO4·7H2O0.216g、CaCl20.006g、微量元素1ml，用水定容至1L，pH自然，121℃湿热灭菌20min，取出。其中，微量元素每L含量：MnSO4·H2O1.69g、CoCl2·6H2O0.24g、H3BO31.16g、NaMoO4·2H2O0.024g、FeSO4·7H2O2.78g、ZnSO4·7H2O1.15g、CuSO4·5H2O0.38g，pH7.0，用水定容至1L。
固体培养基：上述液体培养基添加1.5%琼脂。
实施例1、动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5CGMCC No.709的分离、纯化及鉴定
动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5是从中原大化甲醇事业部装罐区附近的土壤取样，经过驯化、分离及纯化得到的一株革兰氏阴性杆菌。具体步骤如下：
无菌条件下，取样品10g，溶于90ml无菌水中，摇匀，吸取10ml加入到90ml含起始吡啶浓度50mg/L的液体培养基中，30℃，摇床180r/min条件下培养，待液体培养基浑浊，明显长出菌体，取10ml该培养基转接到90ml吡啶初始浓度为100mg/L的液体培养中，如此重复，逐步提高吡啶浓度，直到吡啶初始浓度达到500mg/L，驯化结束，得到驯化后的液体培养液。
将驯化后的液体培养液梯度稀释10-1–10-5倍，取10-1、10-3、10-5倍各20μL于固体培养基上涂布分离，30℃恒温培养，待菌落长出后，挑取不同颜色、外观的菌落分别划线纯化，得到18株菌，编号P1–P18。
通过接下来的降解实验，发现P5可以利用吡啶为唯一的碳氮源进行生长，具有较高的吡啶降解能力。
P5菌株的鉴定工作由中科院普通微生物菌种保藏管理管理中心完成，生理生化实验结果如表1所示，16S rRNA基因的核苷酸序列如序列表中序列1所示（以P5菌株基因组DNA为模板，用27F：5’AGAGTTTGATCATGGCTCAG3’、1492R：5’TACGGTTACCTTGTTACGACTT3’为引物进行PCR扩增，得到的产物为16S rRNA基因）。
根据细胞显微形态、生理生化数据和16S rRNA基因序列数据，将菌株P5鉴定为动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides），该菌已于2013年01月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC No.7090。
表1为P5菌株的生理生化特征
实施例2、动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5CGMCC No.7090对吡啶的降解效果检测
在吡啶作为唯一碳、氮源的条件下，检测了菌株P5对吡啶的降解效果。
一、动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5CGMCC No.7090对吡啶的生物降解能力检测
1、方法一
种子液制备：无菌条件下挑取固体培养基上的动胶菌样申氏菌（Shinellazoogloeoides）P5CGMCC No.7090，接种到装100ml LB培养基的体积为250ml锥形瓶中，LB培养基30℃，摇床180r/min条件下培养，生长到对数期，得到P5种子液。
发酵：实验组：无菌条件下取种子液1ml接种到99ml含有终浓度为500mg/L吡啶的液体培养基中；空白对照组为未加菌的含有初始终浓度为500mg/L吡啶的液体培养基100ml。30℃，摇床180r/min条件下培养，每4小时取培养液检测吡啶含量和菌体生长变化。
菌密度检测：用752型紫外可见分光光度计，在吸收波长为602nm处检测菌液吸光度。
吡啶浓度检测：发酵液样品由0.22μm微孔滤膜过滤后，用752型紫外可见分光光度计，在吸收波长为256nm处检测吡啶吸光度。
结果如图1所示，图1中A为空白对照组中吡啶浓度的变化曲线；图1中B为实验组中吡啶浓度的变化曲线；图1中C为实验组中菌株P5的生长变化曲线；
实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的吡啶浓度分别为503.83、404.54、152.06、6.11、4.06、4.34、3.49、4.27、2.71、4.55、4.84、5.76、4.06mg/L；
空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的吡啶浓度分别为529.10、524.30、501.55、511.58、528.83、503.25、498.89、462.50、480.27、436.06、450.02、432.02、426.26mg/L；
实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28小时培养液中的菌体的OD602分别为0.02、0.116、0.234、0.31、0.322、0.313、0.31；
由图1可以看出，对照组的吡啶含量变化较小，实验组中吡啶浓度随着菌体密度的增加而降低，这表明菌株P5可以利用吡啶作为唯一的碳、氮源进行生长，在20小时左右即可将吡啶降解到理想的浓度。。
2、方法二
检测动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5在加大投菌量并去除菌表面吸附杂质情况下对吡啶的生物降解能力检测：
1）培养菌：取2mL培养至对数期的动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5的LB培养基，收集菌体沉淀，接种到装有200mL无机盐培养基（每L中含Na2HPO4·12H2O1.42g、KH2PO41.36g、MgSO4·7H2O0.216g、CaCl20.006g、MnSO4·H2O1.69g、CoCl2·6H2O0.00024g、H3BO30.00116g、NaMoO4·2H2O0.000024g、FeSO4·7H2O0.00278g、ZnSO4·7H2O0.00115g、CuSO4·5H2O0.00038g）的三角瓶中，培养至对数期菌液待用。
2）种子液的制备：离心对数期菌液，所得动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5菌体沉淀用无机盐培养基重悬，离心三次以去除动胶菌样申氏菌（Shinellazoogloeoides）P5菌表面吸附的杂质，再转移到一定体积的灭菌无机盐液体培养基中，制备成菌液OD602为1-2的动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5菌悬液，作为降解实验的种子液，同时用干重法测定实际接种量。
3）发酵：将步骤2）制备的动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5菌悬液以干菌体接种量为0.1g/L(干重法测定)接种于100mL含有400mg/L吡啶的无机盐培养基中，30℃，180r/min摇床培养。每2小时取样检测吡啶浓度和菌体生长变化。以未接种的含有400mg/L吡啶的无机盐培养基为对照。
菌密度检测：在吸收波长为602nm处检测菌液吸光度。
吡啶浓度检测：发酵液样品由0.22μm微孔滤膜过滤后，经高效液相色谱（岛津LC10ADVP，SPD10AVPUV-Vis Detector；DiamonsilC18色谱柱，250*4.6mm，5um）检测吡啶浓度。
结果如图2所示，图2中A为空白对照组中吡啶浓度的变化曲线，B为实验组中吡啶浓度的变化曲线，C为实验组中菌株P5的生长变化曲线；
实验组在接种后2、4、6、8、10、12、14、16、18小时培养液中的吡啶浓度分别为382.83、346.54、246.06、78.11、22.06、9.34、3.11、4.13、4.62mg/L；
空白对照组在接种后2、4、6、8、10、12、14、16、18小时培养液中的吡啶浓度分别为412.10、398.15、411.27、381.25、388.26、393.36、378.26、398.05、381.8mg/L；
实验组在接种后2、4、6、8、10、12、14、16、18小时培养液中的菌体的OD602分别为0.056、0.132、0.296、0.369、0.391、0.416、0.396、0.404、0.398；
从图中可以看出，在加大投菌量并去除菌表面吸附杂质以后，菌体生长未表现出适应期，直接进入对数生长期，伴随着菌体的快速生长，吡啶浓度迅速降低，12小时左右即可达到理想效果。这说明加大投菌量并去除菌表面吸附杂质，可以加快菌株P5降解吡啶的速度，这在实际应用中十分有利。
二、动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5在不同吡啶初始浓度下的降解特性
种子液制备：无菌条件下挑取固体培养基上的动胶菌样申氏菌（Shinellazoogloeoides）P5CGMCC No.7090，接种到250ml锥形瓶中，装100mlLB培养基，30℃，摇床180r/min条件下培养，生长到对数期，得到P5种子液。
发酵：准备6个装有99ml含有不同初始终浓度的吡啶的液体培养基的250ml锥形瓶，分别加入1ml种子液，不同吡啶初始终浓度分别是300mg/L、500mg/L、1000mg/L、1500mg/L、2000mg/L、2500mg/L，以未接种含有不同终浓度的吡啶的液体培养基为对照。30℃，摇床180r/min条件下培养，每4小时取培养液检测吡啶含量和菌体生长变化。
菌密度检测：用752型紫外可见分光光度计，在吸收波长为602nm处检测菌液吸光度。
吡啶浓度检测：发酵液样品由0.22μm微孔滤膜过滤后，用752型紫外可见分光光度计，在吸收波长为256nm处检测吡啶吸光度。
结果如图3所示，A为菌体生长曲线，B为吡啶浓度变化曲线，C为吡啶标准曲线（256nm）；
吡啶初始终浓度是300mg/L：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的吡啶浓度分别为278.30、184.68、16.48、0.87、1.43、0.72、0.72、1.22、0.87、0.94、0.94、1.65、1.01mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的吡啶浓度分别为302.27、300.91、284.33、298.65、283.21、271.42、260.30、268.10、280.64、261.06、252.41、243.13、246.76mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28小时培养液中的菌体的OD602分别为0.02、0.075、0.199、0.202、0.189、0.181、0.17；
吡啶初始终浓度是500mg/L：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的吡啶浓度分别为489.65、398.79、267.16、23.83、4.13、3.42、2.92、3.13、2.99、2.71、2.57、4.06、3.35mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的吡啶浓度分别为529.10、524.30、501.55、511.58、528.83、503.25、498.89、462.50、480.27、436.06、450.02、432.02、426.26mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28小时培养液中的菌体的OD602分别为0.017、0.067、0.185、0.254、0.266、0.28、0.269；
吡啶初始终浓度是1000mg/L：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的吡啶浓度分别为854.18、540.71、408.79、198.87、3.12、5.40、5.12、5.12、5.90、6.82、5.76、6.04、7.67mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的吡啶浓度分别为1001.47、998.38、998.13、987.18、966.52、952.36、932.91、960.22、896.04、922.16、882.42、872.33、860.04mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28小时培养液中的菌体的OD602分别为0.019、0.074、0.233、0.324、0.36、0.362、0.346；
吡啶初始终浓度是1500mg/L：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的吡啶浓度分别为1490.33、1471.00、1398.01、1119.72、905.53、281.42、14.62、13.28、18.95、16.11、12.19、7.13、7.36mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的吡啶浓度分别为1492.33、1476.00、1498.38、1482.26、1467.87、1456.57、1462.65、1451.21、1407.42、1436.28、1382.95、1402.11、1368.01mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的菌体的OD602分别为0.018、0.059、0.187、0.252、0.333、0.39、0.478、0.557、0.554、0.523、0.494、0.473、0.473；
吡啶初始终浓度是2000mg/L：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的吡啶浓度分别为1923.97、1849.36、1834.47、1666.38、1260.26、1057.87、560.57、264.11、21.72、25.76、14.60、6.04、4.67mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的吡啶浓度分别为1986.00、1998.01、1969.72、1956.58、1923.83、1973.25、1932.87、1886.57、1849.11、1880.64、1843.06、1800.41、1826.19mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的菌体的OD602分别为0.017、0.05、0.147、0.191、0.27、0.313、0.389、0.442、0.5、0.556、0.637、0.68、0.68；
吡啶初始终浓度是2500mg/L：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的吡啶浓度分别为2488.51、2466.38、2387.09、2172.20、1981.35、1614.75、1549.50、1177.87、892.14、42.07、21.44、11.51、6.36mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的吡啶浓度分别为2483.35、2492.93、2448.58、2463.55、2392.48、2419.87、2356.43、2402.72、2378.25、2298.89、2262.50、2309.27、2286.50mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52小时培养液中的菌体的OD602分别为0.018、0.054、0.101、0.145、0.195、0.229、0.253、0.337、0.368、0.432、0.544、0.612、0.702；
如图3中B所示，由图3中B可以看出在在吡啶初始浓度为300-2500mg/L的液体培养基中，菌株P5都可以在不同程度上降解吡啶。吡啶初始浓度小于1000mg/L时，菌株P5几乎没有表现出抑制期。随着吡啶初始浓度的升高，抑制期时间变长，说明高浓度的吡啶对于菌株P5的抑制作用较大。但是一旦进入降解期，吡啶初始浓度高的处理中，菌株P5对吡啶的降解速率更快，这一点可以从图中曲线斜率的绝对值得以体现。
如图3中A所示，从图3中A可以发现，各浓度下的菌体密度都随着吡啶浓度的降低而升高，在吡啶初始浓度小于1000mg/L时，菌株P5很快进入稳定期，随着吡啶初始浓度的升高，实验初期菌株生长变慢，吡啶降解速率也比较慢，但随着吡啶浓度的降低，吡啶对于菌株P5的抑制作用也逐渐减弱，菌株P5进入对数生长期。
三、动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5在不同温度下的降解特性
种子液的制备：同上述二。
准备3个装有99ml液体培养基的250ml锥形瓶，分别加入1ml种子液，吡啶浓度均是1000mg/L，以未接种装有100ml含吡啶的液体培养基的250ml锥形瓶为对照。分别置于25℃、30℃、35℃，摇床180r/min条件下培养，每4小时取样检测。
菌密度检测和吡啶浓度检测方法及吡啶标准曲线同上述二。
结果如图4所示，图4中A为菌株P5的生长变化曲线；图4中4为实验组中吡啶浓度的变化曲线；
25℃培养：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44小时培养液中的吡啶浓度分别为977.59、969.08、966.52、952.36、932.91、920.36、866.95、649.93、574.04、327.94、169.08mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44小时培养液中的吡啶浓度分别为998.13、987.18、966.52、952.36、932.91、960.22、896.04、922.16、882.42、872.33、860.04mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44小时培养液中的菌体的OD602分别为0.023、0.029、0.035、0.042、0.061、0.068、0.071、0.089、0.119、0.139、0.187；
30℃培养：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44小时培养液中的吡啶浓度分别为994.61、1011.00、990.35、929.93、738.58、543.55、131.49、2.64、2.78、2.39、2.96mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44小时培养液中的吡啶浓度分别为998.13、987.18、966.52、952.36、932.91、960.22、896.04、922.16、882.42、872.33、860.04mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44小时培养液中的菌体的OD602分别为0.026、0.044、0.051、0.072、0.136、0.212、0.23、0.259、0.28、0.281、0.279；
35℃培养：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44小时培养液中的吡啶浓度分别为1001.24、956.37、898.16、740.30、406.67、7.52、4.91、3.84、4.38、3.77、4.38mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44小时培养液中的吡啶浓度分别为998.13、987.18、966.52、952.36、932.91、960.22、896.04、922.16、882.42、872.33、860.04mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44小时培养液中的菌体的OD602分别为0.025、0.052、0.075、0.119、0.228、0.28、0.285、0.272、0.276、0.262、0.26；
从图中可以，25℃时的菌体生长与吡啶的降解速度最慢，30℃时的速度稍快一些，35℃时菌体生长与吡啶的降解速度最快。这说明菌株P5的最适生长、降解温度可能处于30-35℃之间，且在此条件下对吡啶的降解速度最快，但考虑到成本及实际工艺问题，选择30℃会比较合理。
四、动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5在不同pH下的降解特性
种子液的制备：同上述二。
准备6个装有99ml液体培养基的250ml锥形瓶，分别加入1ml种子液，吡啶浓度均是500mg/L，pH分别为4、5、6、7、8、9。以未接种装有100ml含吡啶的液体培养基的250ml锥形瓶为对照。30℃，摇床180r/min条件下培养，每4小时取样检测。
菌密度检测和吡啶浓度检测方法及吡啶标准曲线同上述二。结果如图5所示，图5中A为菌株P5的生长变化曲线；图5中B为实验组中吡啶浓度的变化曲线；
pH值为4：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的吡啶浓度分别为509.50、255.60、7.94、4.91、4.20、3.91、3.49、4.48、4.27、5.12、5.55、4.62mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的吡啶浓度分别为529.10、524.30、501.55、511.58、528.83、503.25、498.89、462.50、480.27、436.06、450.02、432.02mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24小时培养液中的菌体的OD602分别为0.021、0.173、0.279、0.294、0.292、0.289；
pH值为5：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的吡啶浓度分别为503.83、152.06、6.11、4.06、4.34、3.49、4.27、2.71、4.55、4.84、5.76、4.06mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的吡啶浓度分别为529.10、524.30、501.55、511.58、528.83、503.25、498.89、462.50、480.27、436.06、450.02、432.02mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24小时培养液中的菌体的OD602分别为0.02、0.234、0.31、0.322、0.313、0.31；
pH值为6：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的吡啶浓度分别为530.16、196.03、46.95、3.99、3.28、3.35、3.49、3.70、3.49、3.42、4.13、3.77mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的吡啶浓度分别为529.10、524.30、501.55、511.58、528.83、503.25、498.89、462.50、480.27、436.06、450.02、432.02mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24小时培养液中的菌体的OD602分别为0.022、0.161、0.28、0.312、0.297、0.293；
pH值为7：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的吡啶浓度分别为529.10、343.55、274.04、254.37、187.30、58.44、12.21、3.21、2.99、4.13、3.42、3.56mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的吡啶浓度分别为529.10、524.30、501.55、511.58、528.83、503.25、498.89、462.50、480.27、436.06、450.02、432.02mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的菌体的OD602分别为0.021、0.046、0.08、0.111、0.124、0.192、0.219、0.26、0.253、0.259、0.244、0.255；
pH值为8：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的吡啶浓度分别为516.27、371.91、284.33228.65、243.21、241.42、230.30、186.10、150.64、91.06、62.41、3.13mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的吡啶浓度分别为529.10、524.30、501.55、511.58、528.83、503.25、498.89、462.50、480.27、436.06、450.02、432.02mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的菌体的OD602分别为0.036、0.053、0.056、0.074、0.073、0.076、0.073、0.117、0.119、0.148、0.166、0.218；
pH值为9：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的吡啶浓度分别为506.13、410.22、366.24、320.85、316.38、296.03、295.18、231.49、153.48、102.06、15.04、3.91mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的吡啶浓度分别为529.10、524.30、501.55、511.58、528.83、503.25、498.89、462.50、480.27、436.06、450.02、432.02mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的菌体的OD602分别为0.03、0.051、0.062、0.067、0.065、0.081、0.071、0.11、0.116、0.141、0.183、0.243、0.03、0.051、0.062、0.067、0.065、0.081、0.071、0.11、0.116、0.141、0.183、0.243；
pH值为10：实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的吡啶浓度分别为536.25、424.40、409.55、387.52、306.17、235.74、230.14、197.45、113.76、35.74、17.18、5.12mg/L；空白对照组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的吡啶浓度分别为529.10、524.30、501.55、511.58、528.83、503.25、498.89、462.50、480.27、436.06、450.02、432.02mg/L；实验组在接种后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48小时培养液中的菌体的OD602分别为0.039、0.054、0.051、0.068、0.086、0.098、0.089、0.141、0.165、0.199、0.219、0.214；
分析结果可以看出，在各pH环境下，菌株P5都可以进行生长，并在一定程度上对吡啶进行降解，但在酸性条件下的生长与降解效果更为理想，最佳为pH5。当pH≥7时，抑制期变长，这说明碱性环境对于菌株P5的生长有一定的抑制作用，从而抑制菌株P5对吡啶的降解。
Claims (8)
1.动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5，其保藏号为CGMCC No.7090。
2.权利要求1所述的动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5在如下1）-3）中任一应用：
1）在降解含氮杂环化合物中的应用；
2）在提高降解含氮杂环化合物速率中的应用；
3）在缩短降解含氮杂环化合物时间中的应用；
所述含氮杂环化合物为吡啶。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述提高降解含氮杂环化合物速率通过缩短降解含氮杂环化合物时间体现。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述含氮杂环化合物为污水中的吡啶。
5.一种降解吡啶的方法，包括如下步骤：将权利要求1所述的动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides）P5接种在含有吡啶的体系中培养，实现降解吡啶。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述培养的温度为30-35℃；所述培养的体系的pH值为4-9；所述含有吡啶的体系的吡啶浓度为0-2500mg/L，且不为0。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述培养的温度为30℃；所述培养的体系的pH值为5；所述含有吡啶的体系的吡啶浓度为0-1000mg/L，且不为0。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述含有吡啶的体系的吡啶浓度为300-1000mg/L。
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