CN101935631A

CN101935631A - 罗尔斯通氏菌株及其在石油污染盐碱土壤生物修复中的应用

Info

Publication number: CN101935631A
Application number: CN2010102162017A
Authority: CN
Inventors: 姚志刚; 王君; 范延辉
Original assignee: Binzhou University
Current assignee: Binzhou University
Priority date: 2010-07-02
Filing date: 2010-07-02
Publication date: 2011-01-05
Anticipated expiration: 2030-07-02
Also published as: CN101935631B

Abstract

本发明公开了一种罗尔斯通氏菌株(Ralstoniasp.)及其在石油污染盐碱土壤生物修复中的应用。该菌株的保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日：2009年11月04日，保藏号CGMCCNo.3389。该菌株在LB固体培养基上生长，形成的菌落特征为菌落呈白色，菌落为圆形、边缘规则、表面干燥、不透明，在显微镜下观察到菌落呈圆杆状，不产芽孢，革兰氏染色阴性，生长温度最高为50℃，NaCl耐受性0-5％。本发明还公开了该菌株的核苷酸序列，本发明的菌株可以在高盐环境中降解土壤中的石油烃和多环芳烃等污染物，对原油的降解率可达60.0%以上，可以应用在由多环芳烃和石油带来的土壤污染生物治理技术中。

Description

罗尔斯通氏菌株及其在石油污染盐碱土壤生物修复中的应用

技术领域

本发明属于微生物及微生物应用领域，具体涉及一种罗尔斯通氏菌株（Ralstonia sp.）及其在石油污染盐碱土壤生物修复中的应用。

背景技术

在石油及其产品的生产和使用过程中不可避免地会带来土壤污染问题，如我国石油企业每年产生的落地原油约700 kt，经回收处理后，仍有70 kt进入土壤环境。石油及石油产品中普遍含有多环芳烃(polycyclic aromatic hydrocarbons，PAHs)、苯、甲苯、乙苯、二甲苯和酚类等有毒有害物质，这些有毒有害物质中的大多被认为是具有“三致”（致癌、致畸、致突变）危害的物质，如何治理石油污染，特别是修复由多环芳烃造成的环境污染，已成为世界各国学者共同关注的课题。PAHs是一类持久性有机污染物，具有较强的致癌、致畸、致突变性，它给生态环境安全和人类健康带来了很大的威胁，世界上大多数国家都已将其列为优先控制污染物。环境中PAHs 绝大多数积累于土壤中，在适宜的情况下它们可能迁移到其他环境介质中，扩大污染范围并改变暴露途径，同时也可以通过生物链传递作用积累于人体内，直接危害人类的健康。所以说修复PAHs污染，尤其是修复被PAHs长期污染的土壤显得十分重要和迫切。

经过其他技术（如物理清除）处理后，总会留下大量不能完全清除的污染物。生物修复技术作用长期彻底，而且还具有价格低廉、无毒环保等诸多优势，所以采用生物技术促进有机物降解，是恢复生态环境的最佳途径。发展和推广有机物污染生物治理技术有着很广阔的应用前景。

土壤环境中持久性有机污染物的生物修复技术是国际污染环境修复领域研究的热点。其中，石油导致的土壤污染问题中PAHs 的生物修复技术是国际上研究的重点之一。PAHs在环境中的降解或消除途径主要包括挥发、光氧化、化学氧化、生物富集、土壤吸附及微生物降解等一些方式，微生物是自然环境中影响PAHs环境化学行为的关键因素之一，决定着PAHs的最终归宿。通常，PAHs污染土壤中存在大量可降解PAHs的微生物，微生物降解已成为PAHs污染土壤生物修复的重要技术手段。

PAHs污染土壤微生物修复技术的核心是选育PAHs高效降解微生物和充分发挥降解微生物的降解作用。被PAHs长期污染的土壤中存在PAHs高效降解菌，但由于土壤中残留PAHs浓度逐渐降低，且难以为生物所利用，高效降解菌数量少且活性低。因此，对于低浓度PAHs污染的土壤，可通过以下两种方法加强微生物对PAHs的降解：（1)改善微生物生存环境，保持微生物的长期活性；（2)提高污染物的生物可利用性。2004年，Xu和Obbard 对新加坡石油污染的海岸带进行了生物修复，发现45天以后在处理后的土壤中仅有9.3%的PHAs残留，在该区域中Alcanivorax borkumensis和Pseudomonas stutzeri 两株解烃菌始终是优势菌株。Robert 等使用白腐真菌(phanerochate chrysosporium) 处理受多环芳烃污染的土壤。起始土壤中多环芳烃为41g/kg。36 天后，低分子量多环芳烃的降解率为70％～100％，高分子量多环芳烃的降解率为50％～60％，土壤中多环芳烃降为18g/kg。

黄河三角洲地区拥有丰富的油气资源，这里油井分布广泛的同时污染也十分严重，一般井场污染范围在1000-2000 m² 之间。另外，近年来黄河断流影响了黄河三角洲湿地生态系统淡水水源的补给，破坏了湿地土壤中水盐的平衡，致使土壤的含盐量上升，土壤盐碱化现象日益严重。在高盐条件下，微生物既要忍受长期的高渗透压胁迫，又要承受短期的渗透冲击。当盐度>3%时，非嗜盐微生物的代谢会受到抑制，使其生物修复效率明显降低，甚至丧失修复能力。当盐度从0.5%升高至2%时，也会严重扰乱非嗜盐微生物的代谢活动。因此，传统的非嗜盐微生物并不适合对污染的高盐环境进行生物修复。盐碱地石油污染土壤治理给微生物修复技术带来了新的挑战。因此亟待找到一种耐盐碱菌对由石油污染的盐碱土壤进行生物修复。

嗜盐菌属于极端微生物中的一种，其结构与理化性质的研究受到国内外生物领域界的广泛关注。关于嗜盐菌的研究工作相对集中在自然环境嗜盐微生物方面，如崔恒林、潘海莲、柴丽红等人分别从新疆、内蒙古、青海等地的盐湖中，分离和研究了不同类群的嗜盐菌株。然而对人工环境中的嗜盐微生物，特别是嗜盐细菌的研究很少。

随着石油工业的发展，黄河三角洲地区石油污染日趋严重，该地盐渍化土地面积大，土壤含盐量高，迫切的需要通过生物技术来修复该地的土壤。因此有必要进一步研究，找到一种适合在高盐碱浓度下降解石油和多环芳烃等有毒有害物质的菌株，这对于生物修复技术具有很重要的理论价值和实际应用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种罗尔斯通氏菌株（Ralstonia sp.）及其在高盐碱浓度下降解石油中多环芳烃的应用，该菌株可在高盐碱浓度下有效的治理由石油及其产品所带来的土壤污染。

本发明提供的罗尔斯通氏（Ralstonia sp.）菌株，是烃降解菌株，于2009年11月04日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，其保藏号为CGMCC No.3389。

在微生物修复技术中经常用到的烃降解菌株，它们以自己的方式摄取烃类，然后参与自身代谢，最终生成小分子有机酸。目前所知的微生物细胞对于烷烃的摄取机制之一就是细胞与烃液滴直接作用：微生物细胞可吸附到比自己大得多的烃液滴表面，物质的运输主要靠被动扩散和主动运输。烃类物质的这种摄取方式，菌体细胞表面疏水性起到关键作用。

罗尔斯通氏菌（Ralstonia sp.）XB CGMCC No.3389的菌落特征：在LB平板上培养一天的菌落大小直径1-2mm，菌落较小，圆形、边缘规则、表面干燥、不透明，白色。

罗尔斯通氏菌（Ralstonia sp.）XB CGMCC No.3389的细胞形态特征：菌体呈圆杆状，较小，不产芽孢，革兰氏染色阴性。

罗尔斯通氏菌（Ralstonia sp.）XB CGMCC No.3389 的生理生化特征：生长温度最高50℃，NaCl耐受性0～5％；触酶，柠檬酸盐利用，V-P实验，吲哚实验，MR实验均为阳性，脲酶实验，淀粉水解，明胶液化，纤维素水解皆为阴性。能够利用果糖、葡萄糖产酸，不能利用山梨醇、乳糖、蔗糖、木糖醇、麦芽糖发酵产酸。能够降解原油和多环芳烃。

罗尔斯通氏菌（Ralstonia sp.）XB CGMCC No.3389的16S rDNA基因序列特征：CGMCC No.3389 接种于LB培养基，30℃摇床培养（130rpm）16h，离心收集菌体，重新悬浮，加溶菌酶和SDS破壁，由酚-氯仿法提取基因组DNA，并采用正相引物 27F（5’-GAGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’）和反向引物1541R（5’-AAGGAGGTGATCCA GCC-3’），用这对引物对其16S rDNA 基因进行PCR扩增，将扩增引物送北京三博公司进行测序。PCR条件为：94℃，10min；94℃，45s，55℃，45s，72℃ 90s，30个循环；72℃ 10min，4℃保存。16S rDNA 基因序列长度为1488bp，与Ralstonia pickettii strain ATCC 27511（登录号为AY741342）序列相似性为99%。其16S r DNA的序列如序列表所示。

参照《Bergey’s Mannual of Systematic Bacteriology》Vol.VIII的内容，根据其形态特征和生理生化特征，以及根据其16S rDNA 基因序列在GenBank中的搜索结果，经多项分类鉴定XB为一新菌，属于罗尔斯通氏菌属（Ralstonia sp.XB）。

罗尔斯通氏菌（Ralstonia sp.）XB CGMCC No.3389可以在营养培养基，如：普通牛肉汁、LB、营养琼脂中生长，也可以以多环芳烃或烷烃或原油为碳源生长。菌株在0～5%NaCl浓度之间的适宜浓度下兼性厌氧生长。

该菌具有在高盐条件下降解多环芳烃（PHAs）和石油烃的能力，在0～5% 的NaCl浓度范围内可降解萘、蒽、菲、芘及C12～C32的正构烷烃和原油。用XB生长细胞进行降解实验结果表明，在30℃下，往复摇床130rpm转速培养5～7d，对萘、蒽、菲、芘（50 mg/L）均有降解，其中对萘、菲的降解率较高，可达80%以上；降解5g/L的原油，降解率均可达60.0%以上，对不同碳数的烷烃降解率都在60.0%以上。

本发明提供的CGMCC No.3389菌对烃类物质有很强的表面疏水性，解烃菌摄取烃类物质首先得将烃运输进细胞中，通过三种方式：一是烃溶解在水相中，高可溶烃和气态烃的主要摄取机制；二是大的烃滴直接接触细胞，在接触位点通过扩散和主动运输摄取；三是溶解和提供较细胞小的多的烃。烃的摄取首先需要解烃菌与烃的接触，解烃菌疏水性越大与烃越容易接触，XB菌体细胞对烃的疏性很高。

本发明提供的CGMCC No.3389菌能够明显的促使石油污染盐碱土壤中石油烃和多环芳烃的降解。

本发明的有益效果在于：本发明提供的CGMCC No.3389菌株能够在高盐环境中降解多种多环芳烃、正构烷烃和原油，对原油的降解率可达60.0%以上，可以应用在由多环芳烃和石油带来的土壤污染生物治理技术中。

附图说明

图1 Ralstonia sp. XB CGMCC No.3389在不同NaCl浓度下对萘、蒽、菲、芘的降解；

图2 Ralstonia sp. XB CGMCC No.3389在不同NaCl浓度下对原油的降解率；

图3 Ralstonia sp. XB CGMCC No.3389对不同碳数正构烷烃的降解率；

图4 室内模拟菌株Ralstonia sp. XB对供试土壤中PAHs的总降解率；

图5 Ralstonia sp. XB CGMCC No.3389菌对1^#试验田生物修复效果。

具体实施方式

下面通过附图和具体实施例对本发明作更进一步的说明，但并不以此限制本发明。

实施例1：

本发明提供的罗尔斯通氏菌（Ralstonia sp.）XB菌株的分离筛选。

取黄河三角洲石油污染盐碱土壤土样1g，无菌接种至100ml无机盐液蜡培养基中。培养基组成：Na₂HPO₄ 1.5g；KH₂PO₄ 3.48g；MgSO₄ 0.7g； (NH₄)₂SO₄4g；酵母粉 0.01g；液体石蜡 2％（v/w），蒸馏水 1000ml；自然条件下的pH；121℃灭菌30min，30℃摇床往复振荡培养5d。将富集培养液充分混匀，取100μl涂布在1.5％LB固体平板上，30℃恒温培养箱中培养2-3d，观察生长出的菌落。挑取单菌落并用显微镜检验其纯度。将生长的各个菌落，接种至LB培养基中，培养至OD₆₃₀为0.8左右，作为种子液以10％（v/v）比例接入100ml无机盐液蜡培养基中，30℃摇床往复振荡培养5d。然后以此发酵液作为种子液，接种至新鲜的无机盐液蜡培养基，反复驯化菌种3～4次。

选取对液蜡乳化良好的菌种进行原油和多环芳烃降解试验。将菌落接种至液蜡培养基培养3d左右，作为种子以10％（v/v）的比例接入液接入到100ml原油培养基中，培养基组成：Na₂HPO₄ 1.5g；KH₂PO₄ 3.48g；MgSO₄ 0.7g； (NH₄)₂SO₄ 4g；酵母粉 0.01g；原油0.5%（w/w）或10mg/L的多环芳烃（PHAs），蒸馏水 1000ml；pH自然；121℃灭菌30min，30 ℃震荡培养5d后测定原油降解率和PHAs降解率。油类测定方法采用红外法，即发酵液用100ml四氯化碳萃取，用红外测油仪测定剩余原油的量，降解率（％）＝1－剩余原油的量/加入原油的量×100％。PHAs降解率采用紫外分光光度法，最终得到一株能够降解原油烃及PHAs的菌株 Ralstonia sp.XB。

实施例2

罗尔斯通氏菌（Ralstonia sp.）XB菌株的16SrDNA基因的PCR扩增和序列测定

CGMCC No.3389 接种于LB培养基，30℃摇床培养（130rpm）16h，离心收集菌体，重新悬浮，加溶菌酶和SDS破壁，由酚-氯仿法提取基因组DNA，并采用正相引物 27F（5’-GAG AGTTTGATCCTGGCTCAG-3’）和反向引物1541R（5’-AAG GAG GTG ATC CAG CC-3’），用这对引物对其16SrDNA 基因进行PCR扩增，将扩增引物送北京三博公司进行测序。PCR条件为：94℃，10min；94℃，45s，55℃，45s，72℃ 90s，30个循环；72℃ 10min，4℃保存。16S rDNA 基因序列长度为1488bp，与Ralstonia pickettii strain ATCC 27511（登录号为AY741342）序列相似性为99%。其16S r DNA的序列如序列表所示。

实施例 3

罗尔斯通氏菌（Ralstonia sp.）XB菌株在不同NaCl浓度下对多环芳烃（PHAs）降解

取该菌株的新鲜斜面菌种，接种一接种环于装有100ml含有萘、蒽、菲、芘各50mg/L的无机盐的培养基（培养基成分同实施例1）的三角瓶中，培养基中分别添加0-5%的NaCl，30℃摇床培养（130rpm）7d，采用气相色谱法（GC法）测定多环芳烃（PHAs）的降解率，结果如图1所示，菌株XB对萘的降解率最高可达到92.1%，在5%NaCl存在时，降解率仍有14.2%；对蒽的降解率可达57.8%，在5%NaCl存在时，降解率降至9.1%；对菲的降解率可达87.4%，随着NaCl浓度的升高，降解率无明显降低，NaCl浓度5%时，降解率为38.8%；对芘的降解率最高为17.3%。

实施例4

罗尔斯通氏菌（Ralstonia sp.）XB菌株在不同NaCl浓度下对原油的降解

将菌株在LB平板上进行活化，取单菌落接入5ml LB 液体培养基中过夜培养，以1%接种量接种至100 LB液体培养基中，30℃振荡培养8h至对数生长期，以10% 接种量接种至装有100ml含有原油为碳源的无机盐培养基（培养基组成同实施例1）的三角瓶中，培养基中分别添加0～5% 的NaCl，30℃振荡培养5d，用红外测油仪测定原油的降解率，结果如图2所示。菌株对不同碳数直链烷烃的降解，采用气相色谱法（GC法）测量，结果如图3所示。该菌株在0～5% NaCl浓度范围内对原油的降解率都在60.0%以上，对C12到C32的烷烃，降解率均在60.0%以上。

实施例5

罗尔斯通氏菌（Ralstonia sp.）XB菌株的细胞表面疏水性——对烃的粘附性测定

NaCl洗涤4次，将洗涤的菌体细胞悬浮于重蒸水中，将洗涤后的菌体细胞悬于重蒸水中。利用BATH方法对XB菌体细胞表面的疏水性进行测定，具体方法为：1mL菌悬液（测定OD₆₀₀定量）中加入200μl正十二烷或十六烷，混匀（不要剧烈）2min，静置15min，测定600nm的OD值计算出下层水相中的菌浓。CSH(cell surface hydrophobicity)= [(a-b)/a] ×100% （其中，a：初始菌液细胞浓度的OD值；b：终止时菌液细胞浓度的OD值。）根据文献报道BATH的测定结果，菌体表面疏水性范围大约为1.0～97.0％，大于80％即为强疏水性。实验结果如表1，菌株XB菌体表面对十二烷和十六烷的疏水性分别为88.5%和90.2%，这说明XB对正构烷烃有很强的疏水性。

表1 菌株XB对数生长期细胞对不同烷烃的疏水性测定

实施例6

罗尔斯通氏菌（Ralstonia sp.）XB菌株在室内模拟高盐度下多环芳烃（PHAs）污染土壤的修复作用

供试土壤样品是未受石油污染的农田盐碱土，掺杂萘、蒽、菲、芘等多环芳烃。供试土样去除石块、杂草研磨后过2 mm筛，置入烧杯中向其中添加购自上海生工的萘、蒽、菲、芘充分搅拌，浓度分别为（单位：mg/kg土样）：萘 50；蒽 50；菲 50；芘50。于阴暗处晾干后进一步研磨过2 mm筛，使土壤和PHAs混合均匀。采用超声提取法和GC法监测供试土壤中各种PHAs的含量，由于提取和测试误差的存在，实际测得供试土样中各种多环芳烃的量分别是（单位：mg/kg土样）：萘 46.8；蒽 40.1；菲 43.5；芘 42.6。

将Ralstonia sp. XB菌株在添加2%液蜡的无机盐培养基中培养（培养基成分同实施例1），菌浓达到10⁸个/ml。称取200 g供试土壤装于500 ml烧杯中，烧杯中加入200ml菌液，搅拌均匀，室温放置；设置对照组，对照组添加200ml无菌的培养基。实验组和对照组都保持土壤水分含量为25% ～30%，每天翻耕1次，所有处理均设置3个重复。间隔一段时间采样。土壤中的PAHs采用超声法和GC法测定，计算不同时期土壤样品中PAHs总含量，进而计算出PAHs的降解率，结果如图4所示。

在监测的30d内，土壤样品中PAHs总的降解率达到了77.9%，说明菌株XB可用于多环芳烃污染土壤的现场治理；对照组中由于土样中少量本源菌的激活也使得PAHs的量减少，但是不明显。

实施例7

本发明提供的Ralstonia sp. XB菌株对1#试验田石油污染土壤的生物修复能力将Ralstonia sp. XB菌株在添加2%液蜡的无机盐培养基中培养（培养基成分同实施例1），菌浓达到10⁸个/ml。将发酵液以250ml﹒kg^-1干土的投加量喷洒到石油污染的1^#试验田中，时间为6-8月份（平均温度约28℃，雨水充足）。设置对照田，即喷洒菌液。试验田和对照田均每周翻耕1次，间隔一段时间采样，采用GC法测定土壤中原油含量，气质联用（GC-MS）法分析多环芳烃（PHAs）含量，计算原油降解率和PHAs去除率。结果如图5所示，利用Ralstonia sp. XB菌株发酵液处理石油污染盐碱地，60d后土壤中原油去除率可达67.6%，PHAs总降解率达到76.8%，PHAs污染得到了有效的修复，而在不添加任何菌剂的对照田中，由于土壤微生物的降解作用，PHAs也有一定的减少（最高13.4%），但是远远低于1^#试验田。

实施例8

本发明提供的（Ralstonia sp.）XB菌株对2^#试验田石油污染土壤的生物修复能力。将Ralstonia sp. XB菌株在添加2%液蜡的无机盐培养基中培养（培养基成分同实施例1），菌浓达到10⁸个/ml。将发酵液以250ml﹒kg^-1干土的投加量喷洒到石油污染的1^#试验田中，时间为6-8月份（平均温度约28℃，雨水充足）。设置对照田，即喷洒菌液。试验田和对照田均每周翻耕1次，间隔一段时间采样，土壤中原油含量和PHAs测定同实施例7。利用Ralstonia sp. XB菌株发酵液处理石油污染的盐碱地60d后原油去除率为60.6%，芳香烃总降解率达到67.8%，多环芳烃污染得到了有效的修复。

以上列举的仅是本发明的一些具体实施例，显然本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的技术人员能够从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均认为是本发明的保护范围。

罗尔斯通氏菌（Ralstonia sp.）菌株XB CGMCC No.3389序列表

1488bp

Ralstonia sp.XB CGMCC No.3389 16s rDNA gene sequence

1 agattgaacg ctggcggcat gccttacaca tgcaagtcga acggcagcat gatctagctt

61 gctagattga tggcgagtgg cgaacgggtg agtaatacat cggaacgtgc cctgtagtgg

121 gggataacta gtcgaaagat tagctaatac cgcatacgac ctgagggtga aagtggggga

181 ccgcaaggcctcatgctata ggagcggccg atgtctgatt agctagttgg tgaggtaaag

241 gctcaccaag gcgacgatca gtagctggtc tgagaggacg atcagccaca ctgggactga

301 gacacggccc agactcctac cggaggcagc agtggggaat tttggacaat gggcgaaagc

361 ctgatccagc aatgccgcgt gtgtgaagaa ggccttcggg ttgtaaagca catttgtccg

421 gaaagaaatg gctctggtta atacctgggg tcgatgacgg taccggaaga ataaggaccg

481 gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtagggtcc aagcgttaat cggaattact

541 gggcgtaaag cgtgcgcagg cggttgtgca agaccgatgt gaaatccccg agcttaactt

601 gggaattgca ttggtgactg cacggctaga gtgtgtcaga cgggggtaga attccacgtg

661 tagcagtgaa atgcgtagag atgtggagga ataccgatgg cgaaggcagc cccctgggat

721 aacactgacg ctcatgcacg aaagcgtggg gagcaaacag gattagatac cctggtagtc

781 cacgccctaa acgatgtcaa ctagttgttg cggattcatt tccttagtaa cgtagctaac

841 gcgtgaagtt gaccgcctgg ggagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg

901 ggacccgcac aagcggtgga tgatgtggat taattcgatg caacgcgaaa aaccttacct

961 acccttgaca tgccactaac gaagcagaga tgcattaggt gctcgtaaga gaaagtggac

1021 acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac

1081 gagcgcaacc cttgtctcta gttgctacga aagggcactc tagagagact gccggtgaca

1141 aaccggagga aggtggggat gacgtcaagt cctcatggcc cttatgggta gggcttcaca

1201 cgtcatacaa tggtgcatac agagggttgc caagccgcga ggtggagcta atcccagaaa

1261 atgcatcgta gtccggatcg tagtctgcaa ctcgactacg tgaagctgga atcgctagta

1321 atcgcggatc agcatgccgc ggtgaatacg ttcccgggtc ttgtacacac cgcccgtcac

1381 accatgggag tgggctttac cagaagtagt tagcctaacc gcaaggaggg cgattaccac

1441 ggtagggttc atgactgggg tgaagtcgta acaaggtagc cgtatcgg

Claims

1.罗尔斯通氏菌株XB（Ralstonia sp.），其特征在于：该菌株于2009年11月04日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC No.3389，该菌株在LB固体培养基上生长，形成的菌落特征为菌落呈白色，菌落为圆形、边缘规则、表面干燥、不透明，在显微镜下观察到菌落呈圆杆状，不产芽孢，革兰氏染色阴性，该菌株的生理生化特征是：生长温度最高为50℃，NaCl耐受性0～5％；触酶，柠檬酸盐利用，V-P实验，吲哚实验，MR实验均为阳性，脲酶实验，淀粉水解，明胶液化，纤维素水解皆为阴性，能够利用果糖、葡萄糖产酸，不能利用山梨醇、乳糖、蔗糖、木糖醇、麦芽糖发酵产酸。

2.如权利要求1所述罗尔斯通氏菌株XB（Ralstonia sp.），保藏号为CGMCC No.3389的菌株的用途，其特征是该菌株在高盐浓度下降解多环芳烃的应用。

3.如权利要求1所述罗尔斯通氏菌株XB（Ralstonia sp.），保藏号为CGMCC No.3389的菌株的用途，其特征是该菌株在高盐浓度下降解原油的应用。