CN103060403A - 一种从蛋黄粉提取燕窝酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从蛋黄粉提取燕窝素的方法，本发明的技术特征，是使用特定的菠萝蛋白酶水解蛋黄粉，然后使用D型树酯脱去蛋白脂，纯化提取燕窝酸。本发明与先有的方法比较，去除了酸水解污染的问题，克服了酶水解蛋黄粉脱脂困难和过滤问题。使用本方法提取的燕窝素(唾液酸sialic acid)，工艺简单，使用方便，提取成本低，有工业化生产的实用价值。
Description
技术领域
本发明涉及生物产品提取及其应用
背景技术
燕窝酸也称唾液酸(sialic acid)，是一种神经氨酸，是细胞蛋白质的重要组成物，广泛存在于动物脑组织细胞中，最近的研究认为燕窝酸是预防老年人痴呆症，提高免疫力的一种神经营养品，燕窝酸联接于细胞蛋白糖脂末端组织，提高脑细胞识别能力，促进肠道吸收矿物质和维生素，对早期癌变及转移有显著的抑制作用。燕窝酸的药用前景非常广泛，也是近年来生物制药领域中的重点项目。
燕窝酸的提取工艺，有文献报道，从乳清及蛋黄粉中提取，如US 5233033，US 5270462，CN 02110607X。这些方法中，生产中有许多的困难不能解决，如脱脂困难，有些工艺需要大量有机溶媒，会污染产品并对生产环境有破坏影响，不适宜工业化生产。在专利CN02110607X中是用酸水解蛋黄粉的方法，该法有工艺步骤繁杂，水解温度高，产品收率低等缺陷。
发明内容
本发明的技术特征，是有效，快速的，高质量，高收率的从蛋黄粉中提取燕窝酸的生产方法。使用全脂蛋黄粉，先用特定的菠萝蛋白酶水解蛋黄粉，与先有的方法比较，去除了酸水解污染的问题。酶水解蛋黄粉的困难是脱脂和过滤问题，本发明使用树酯脱脂和去蛋白方法，克服了上述工艺不足。本发明技术关键是，将蛋黄粉先用去离子水浸泡30min，然后加入菠萝蛋白酶，搅拌10-15min，控制温度25-30℃，放置时间12-18hr，在加入去离子水和藻酸钠，搅拌10min，离心过滤，取上清液。用酸调PH值到4-5，过大孔树脂柱D105，收集洗脱液，过离子交换树脂，氢阳离子交换110型，在过铵型阳离子125型，水洗，PH3-4值梯度洗脱，收集PH4洗脱液，调PH值6-8，静置，过滤，母液冷冻，浓缩结晶，烘干得到成品。
上述工艺步骤中，其特征是所述去离子水与蛋黄粉的重量比例：1∶5-8，优选1∶7。蛋黄粉与菠萝蛋白酶的重量比例为：10-14∶1-5，优选12∶1。树脂用量是蛋黄粉重量的2-5倍，优选3倍，氢阳离子交换用量是蛋黄粉的1-3倍，优选2倍，铵型阳离子用量是蛋黄粉的2-4倍，优选3倍。本发明中使用的微量酸是醋酸，也可用盐酸或硫酸或磷酸或碳酸，优选是碳酸。浓度为，5-10％，优选7％，调节PH6-8使用碳酸氢钠或碳酸钠，优选是碳酸钠，浓度10-20％。工艺中使用的海藻酸钠分子量为10-15万。
与现有技术相比，本发明的技术特征，使用菠萝蛋白酶解蛋黄粉，是本发明人筛选的特有技术，使用这种酶解工艺，配合上大孔树酯脱脂工艺，克服了酶解蛋黄粉脱脂难的问题，本发明的工艺简单，无环境污染，提取燕窝酸收率高，产品含量高，是一种适合工业化大规模生产的方法。
实施方法
例1、取蛋黄粉100kg，用去离子水650kg浸泡，温度25度，搅拌30min，加入菠萝蛋白酶1kg，搅拌10min，控制温度27℃，放置时间15hr，搅拌后加入分子量10万15％海藻酸钠100kg，搅拌均匀，静置30min，用离心机过滤处沉淀物，取过滤液，加入6％醋酸调PH4，过大孔树酯柱(250kg)，收集洗脱液，在过氢阳型离子交换柱(100kg)，收集酸性洗脱液，过铵型阳离子交换柱(200kg)，梯度洗脱，收集PH3洗脱液，用10％碳酸钠调PH7。离心过滤，放入-5℃，12hr，去沉淀后，浓缩结晶，干燥得燕窝酸产品，收率22.5％。如果产品颜色深，可用5％活性碳脱色处理。
例2、取蛋黄粉200kg，用去离子水1500kg浸泡，温度25度，搅拌30min，加入菠萝蛋白酶0.7kg，搅拌15min，控制温度25℃，放置时间18hr，搅拌后加入分子量15万15％海藻酸钠200kg，搅拌均匀，静置30min，用离心机过滤处沉淀物，取过滤液，加入8％醋酸调PH4，过大孔树酯柱(300kg)，收集洗脱液，在过氢阳型离子交换柱(200kg)，收集酸性洗脱液，过铵型阳离子交换柱(300kg)，梯度洗脱，收集PH4洗脱液，用15％碳酸钠调PH7。离心过滤，放入-5℃，15hr，去沉淀后，浓缩结晶，干燥得燕窝酸产品。收率27％。
例3、质量检测
1.2 方法
1.2.1 色谱条件 色谱柱：Symmetry C18柱(4.6mm×250mm，5μml)；柱温：35℃；流动相：1.0％四氢呋喃水溶液(含0.2％磷酸)-乙腈(92∶8)；检测波长：230nm；流速：1.0ml/min；进样体积：10μl
1.2.2 样品溶液的制备 精确称量燕窝酸产品1.0mg，用注射水100ml溶解，然后加入10mg/ml邻苯二氨盐酸盐溶液1ml，置于80℃水浴中加热40min，备用。
1.2.3 对照品溶液的制备取N-乙酰神经氨酸(唾液酸)对照品溶液2ml，再加入10mg/ml邻苯二氨盐酸盐溶液1ml，置于80℃水浴中加热40min，取出后冷却，经0.45μm膜过滤后精密吸取上述溶液与对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录峰面积。结果见表1。
HPLC检测燕窝酸含量(外标法)
Claims (5)
1.一种从蛋黄粉提取燕窝素的方法，其特征，将蛋黄粉先用去离子水浸泡30min，然后加入菠萝蛋白酶(bromelain)，搅拌10-15min，控制温度25-30℃，放置时间12-18hr，在加入去离子水和藻酸钠，搅拌10min，离心过滤，取上清液。用酸调PH值到4-5，过大孔树脂柱D105，收集洗脱液，过离子交换树脂，氢阳离子交换110型，在过铵型阳离子125型，水洗，PH3-4值梯度洗脱，收集PH4洗脱液，调PH值6-8，静置，过滤，母液冷冻，浓缩结晶，烘干得到成品。
2.如权利要求1所述的方法，其特征是去离子水与蛋黄粉的比例：1∶5-8。所述蛋黄粉与菠萝蛋白酶的重量比例为：10-14∶1。
3.如权利要求1所述的方法，其特征酸是使用树脂用量是蛋黄粉重量的2-5倍，氢阳离子交换用量是蛋黄粉的1-3倍，铵型阳离子用量是蛋黄粉的2-4倍。
4.如权利要求1所述的方法，其特征是使用酸为：醋酸 或盐酸 或硫酸 或磷酸 或碳酸，浓度为5-10％，调节PH6-8使用碳酸氢钠或碳酸钠，浓度为1-20％。
5.如权利要求1所述的方法，其特征海藻酸钠分子量为10-15万。
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