CN103045757A - 一种免抽提虹彩病毒pcr检测方法 - Google Patents
一种免抽提虹彩病毒pcr检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103045757A CN103045757A CN2012101535902A CN201210153590A CN103045757A CN 103045757 A CN103045757 A CN 103045757A CN 2012101535902 A CN2012101535902 A CN 2012101535902A CN 201210153590 A CN201210153590 A CN 201210153590A CN 103045757 A CN103045757 A CN 103045757A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pcr
- detection method
- irido virus
- extraction
- free
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明为一种免抽提虹彩病毒PCR检测方法。2XPCRMix为上海七海复泰生物科技有限公司产品。0.2mlPCR管中，加12.5ul2XPCRMix（或qPCRMix），各加0.75ul引物（10mM），补加11ul超纯水。扩增35个循环后，检测目的条带（图1）。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，是一种快捷方便的鱼虹彩病毒的检测方法。
背景技术
本发明是一种快捷方便的虹彩病毒PCR检测方法。虹彩病毒是造成渔业生产中巨大损失的一种致病病毒，致死率高达60%以上。及早发现并确诊虹彩病毒，可以预防并有的放矢的治疗鱼虹彩病毒感染疾病。这在渔业生产中具有非常大的意义。
虹彩病毒主要感染无脊椎动物和低等脊椎动物，是大型20面体状DNA病毒，分为虹彩病毒属(Iridovirus)，绿虹彩病毒属(Chloriridovirus)，淋巴囊肿病毒属(Lymphocystivirus)，蛙病毒属(Ranavirus)和细胞肿大病毒属(Megalocytivirus)。在水产业中造成巨大损失的虹彩病毒有红鲷鱼虹彩病毒(red sea bream iridovirus)、台湾石斑鱼虹彩病毒(Taiwan Grouper iridovirus)、传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus)、大黄鱼虹彩病毒(Large yellow croaker iridovirus)和大菱鲆红体病虹彩病毒(Turbot reddish body iridovirus)。
病毒类疾病没有有效的药物来控制，在目前阶段，早预防早发现尽早采取隔离和消毒手段是唯一有效的处理措施。
本发明是一种快捷简便的虹彩病毒检测方法。相关PCR试剂为上海七海复泰生物科技有限公司产品。病理组织不用经过提取DNA处理，直接PCR检测，半个小时即可得到检测结果。
发明内容
本发明的目的是建立一种新的DNA病毒检测方法。该方法能够经济、快速地检测出鱼类虹彩病毒。
本发明建立的新的PCR检测方法，包括以下内容：
a) PCR扩增目的片段；
b) 琼脂糖DNA电泳检测目的片段；
c) 或者在PCR反应体系中添加荧光染料SYBR GREE，用于实时定量PCR。
该虹彩病毒PCR检测方法与其他检测方法相比具有如下优点：
a) 简便，不需要处理病理组织，不需要抽提DNA；
b) 快捷， 30-60分钟便可得到结果；
c) 经济，节省了样本制备的费用；
d) 便于大规模样本筛查。
附图说明
以下结合附图说明本发明的特征和有益效果。
图1 1.2%琼脂糖电泳图。泳道1是DNA Marker DL2000，泳道2是空白对照，泳道3是扩增的PCR产物。
图2 RT-PCR图。图A是空白对照，图B是扩增的目的片段。
具体实施方式
实施例1：基于琼脂糖电泳的检测方法
0.2mL PCR管中，加12.5uL 2X PCR预混液（上海七海复泰生物科技有限公司生产），各加入0.75 uL正反向引物（sense primer: GGCCATGCCAATTTCGG, antisense primer: TGCTGCCGGGCATCAT, 扩增的目的片段是虹彩病毒主要衣壳蛋白上的一段序列），补加11uL 双蒸水，用平头灭菌牙签刮取病理组织，将牙签在PCR管中搅动混合。PCR管置于PCR仪上进行扩增，扩增程序为：94℃ 5min预变性，94℃ 10s；60℃ 10s；72℃，10s；扩增35个循环。取10uL扩增产物进行1.2%的琼脂糖凝胶电泳，电压200V，10分钟后，紫外凝胶成像系统下观测PCR产物（图1）。泳道1是DNA Marker DL2000，泳道2是空白对照，泳道3是扩增的PCR产物。
实施例2：实时定量PCR检测方法
0.2mL PCR管中，加12.5uL 2X qPCR 预混液（上海七海复泰生物科技有限公司），各加0.75 uL正反向引物（sense primer: GGCCATGCCAATTTCGG, antisense primer: TGCTGCCGGGCATCAT, 扩增的目的片段是虹彩病毒主要衣壳蛋白上的一段序列。），补加11uL ddH2O，用平头灭菌牙签刮取病理组织，将牙签在PCR管中搅动混合。PCR管置于荧光定量PCR仪上进行扩增，扩增程序为：94℃ 5min预变性，94℃ 10s；60℃ 10s；72℃，10s；扩增35个循环。分析扩增曲线（图2）。图A是空白对照，图B是扩增的目的片段。
Claims (4)
1.一种免抽提虹彩病毒PCR检测方法，其特征在于：
a) 病理组织样品不用处理；
b) 不用抽提病毒DNA。
2.如权利1所描述的虹彩病毒的PCR检测方法，扩增的目的片段可以是虹彩病毒基因组上的任一片段，也可以同时检测2个或者2个以上的目的片段，以长度在150bp到250bp的保守区域的序列为佳，如主要衣壳蛋白上的序列、ATPase上的序列等。
3.如权利1和2所描述的虹彩病毒PCR检测方法，其结果分析可以是琼脂糖凝胶电泳，也可以是荧光定量PCR。
4.如权利1、2和3所描述的检测方法，其PCR反应体系可以是任意体积，以25uL体系为佳。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012101535902A CN103045757A (zh) | 2012-05-17 | 2012-05-17 | 一种免抽提虹彩病毒pcr检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012101535902A CN103045757A (zh) | 2012-05-17 | 2012-05-17 | 一种免抽提虹彩病毒pcr检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103045757A true CN103045757A (zh) | 2013-04-17 |
Family
ID=48058617
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2012101535902A Pending CN103045757A (zh) | 2012-05-17 | 2012-05-17 | 一种免抽提虹彩病毒pcr检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103045757A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108707694A (zh) * | 2018-04-27 | 2018-10-26 | 浙江师范大学 | 棘胸蛙虹彩病毒一种raa诊断技术方法 |
| CN108823334A (zh) * | 2018-07-10 | 2018-11-16 | 中国农业科学院特产研究所 | 病毒检测的检测试剂与检测试剂盒及应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101805788A (zh) * | 2009-12-31 | 2010-08-18 | 大连水产学院 | 基于scar分子标记快速检测副溶血弧菌的pcr特异扩增引物及检测试剂盒 |
| CN101812542A (zh) * | 2010-04-28 | 2010-08-25 | 国家兽用生物制品工程技术研究中心 | 一种快速检测细胞内火鸡疱疹病毒的方法 |
| CN101948937A (zh) * | 2010-10-15 | 2011-01-19 | 国家海洋局第三海洋研究所 | 流行性造血器官坏死病毒的pcr检测试剂盒及检测方法 |
-
2012
- 2012-05-17 CN CN2012101535902A patent/CN103045757A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101805788A (zh) * | 2009-12-31 | 2010-08-18 | 大连水产学院 | 基于scar分子标记快速检测副溶血弧菌的pcr特异扩增引物及检测试剂盒 |
| CN101812542A (zh) * | 2010-04-28 | 2010-08-25 | 国家兽用生物制品工程技术研究中心 | 一种快速检测细胞内火鸡疱疹病毒的方法 |
| CN101948937A (zh) * | 2010-10-15 | 2011-01-19 | 国家海洋局第三海洋研究所 | 流行性造血器官坏死病毒的pcr检测试剂盒及检测方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| HUANG,S.M.等: "JF264352.1", 《GENBANK》, 13 September 2011 (2011-09-13) * |
| NEB: "Phire Animal Tissue Direct PCR Kit", 《NEB网站》, 31 October 2009 (2009-10-31) * |
| 陈文弦 等: "用聚合酶链反应检测鼻烟癌脱落细胞中EB病毒DNA", 《中华耳鼻咽喉科杂志》, vol. 29, no. 6, 31 December 1994 (1994-12-31), pages 327 - 329 * |
| 陈新华 等: "一种简便, 快速从病毒感染鱼, 虾组织中制备PCR 模板的方法", 《中国生物工程杂志》, vol. 23, no. 8, 31 August 2003 (2003-08-31), pages 66 - 68 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108707694A (zh) * | 2018-04-27 | 2018-10-26 | 浙江师范大学 | 棘胸蛙虹彩病毒一种raa诊断技术方法 |
| CN108823334A (zh) * | 2018-07-10 | 2018-11-16 | 中国农业科学院特产研究所 | 病毒检测的检测试剂与检测试剂盒及应用 |
| CN108823334B (zh) * | 2018-07-10 | 2021-10-26 | 中国农业科学院特产研究所 | 肉食兽阿留申病毒和猫泛白细胞细小病毒二联直接pcr检测试剂与检测试剂盒及应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106947838B (zh) | 非洲猪瘟病毒非结构基因实时荧光lamp检测引物组、试剂盒及检测方法 | |
| RU2680094C1 (ru) | Тест-система для выявления ДНК возбудителя лептоспироза (Leptospira spp.) у сельскохозяйственных животных | |
| CN106987653B (zh) | 一种马铃薯晚疫病菌lamp检测引物及其可视化检测方法 | |
| CN109486976A (zh) | 一种对虾肝肠微孢子虫病的高灵敏度的靶基因、引物对、试剂盒和检测方法 | |
| CN101613766B (zh) | 一种小反刍兽疫病毒的rt-lamp试剂盒 | |
| CN102242223A (zh) | 手足口病lamp检测试剂盒及其检测方法 | |
| CN105331743A (zh) | 一步快速检测甜瓜多种病毒的试剂盒及其快速检测方法 | |
| CN103045761A (zh) | 用于检测感染性眼病致病微生物的试剂盒及检测方法 | |
| CN112853004A (zh) | 对虾白斑综合症病毒lamp检测简并引物组、试剂盒及方法 | |
| CN110592268A (zh) | 罗湖病毒（TiLV）的RAA恒温荧光检测方法及试剂 | |
| CN108531657A (zh) | 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的荧光定量pcr检测引物组及检测试剂盒 | |
| CN105368948A (zh) | 尼罗罗非鱼性别鉴定用引物及pcr鉴定方法 | |
| CN106434935A (zh) | 鉴定猪多杀性巴氏杆菌和/或副猪嗜血杆菌组合物和方法 | |
| CN103045757A (zh) | 一种免抽提虹彩病毒pcr检测方法 | |
| CN103540687A (zh) | 对虾白斑综合症病毒（wssv）的lamp检测引物组及试剂盒 | |
| CN101845515B (zh) | 焦磷酸测序技术检测猪肉制品中猪甲型h1n1流感病毒的方法 | |
| CN105779443B (zh) | 鉴定或辅助鉴定牡蛎疱疹病毒的引物组合物 | |
| CN102816870A (zh) | 柯萨奇病毒a6型rt-lamp核酸检测引物及试剂盒 | |
| CN106868198B (zh) | 一种同时检测鲇形目鱼类四种致病菌的多重pcr引物组及监测方法 | |
| CN101942507B (zh) | 环介导恒温扩增技术快速检测链状亚历山大藻的方法 | |
| CN105331746A (zh) | 一种鸭黄病毒rt-lamp检测试剂盒 | |
| CN104531901A (zh) | 一种同时检测禽4种呼吸道疾病病原的pcr检测方法 | |
| CN109055613A (zh) | 鸡ⅰ型星状病毒环介导等温扩增检测引物组、试剂盒以及其检测方法 | |
| JP2015139434A5 (zh) | ||
| CN110079631B (zh) | 一种高通量检测8种疫霉菌的分子检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20130417 |