CN103045564B - 一种发酵生产β-甘露聚糖酶的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及微生物发酵领域，具体涉及一种发酵生产β-甘露聚糖酶的方法。所述方法包括宇佐美曲霉By247通过发酵表达β-甘露聚糖酶的步骤。本发明生产的甘露聚糖酶以棕榈粕作为发酵原料之一，动物试验结果表明其能够很好地分解非常规饲料中的棕榈粕的抗营养因子，能够显著地提高动物的生产性能。本发明生产的甘露聚糖酶的耐温性能、分解饲料和原料能力以及动物试验的效果都比其它市售β-甘露聚糖酶要好。

Description

一种发酵生产β-甘露聚糖酶的方法

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，具体涉及一种发酵生产β-甘露聚糖酶的方法。

背景技术

β-甘露聚糖酶是一类能够水解含有β-1,4-D-甘露糖苷键的内切酶，属于半纤维素酶类。它具有一般非淀粉多糖酶的作用——消除β-甘露聚糖的抗营养作用，促进动物对营养物质的消化吸收，提高饲料转化率和能量利用率；近来很多研究发现，β-甘露聚糖酶还是一种多功能的促生长剂，它可以促进类胰岛素生长因子IGF-Ⅰ的分泌，促进蛋白质的合成，提高瘦肉率；其产物甘露寡糖能改善肠道微生物环境，提高动物免疫功能。

β-甘露聚糖酶广泛存在于自然界中，在一些低等动物、植物和微生物都发现β-甘露聚糖酶活性的存在。而微生物则是β-甘露聚糖酶的主要来源，微生物来源的β-甘露聚糖酶具有很多优点，如酶活性高、提取方便，具有pH、温度作用范围广以及底物专一性较高等特点，因此已经在工业化生产和理论研究中得到广泛的应用。

β-甘露聚糖酶是一种诱导酶，利用微生物发酵生产β-甘露聚糖酶多以甘露聚糖作为碳源诱导酶的表达，是一种广泛使用的生产β-甘露聚糖酶的方法。宇佐美曲霉（CGMCC NO.4290）已在中国专利申请CN2010105440832中公开，其中复合菌株在300mL三角瓶中装入20g固体发酵培养基进行发酵，培养基包括麦麸17g，豆粕3g，硫酸铵0.5g，磷酸二氢钠0.2g，水25mL，121℃灭菌30min。多层曲盘发酵配制50kg干料发酵培养基（麦麸38Kg，豆粕6Kg，稻草粉6Kg，硫酸铵1Kg，磷酸二氢钠0.5Kg，硫酸镁0.1Kg），加自来水70Kg。但是随着生产原料（豆粕等）价格的不断上涨，酶制剂行业的成本压力越来越大，因此一种能够降低生产成本且能提高酶活性的固体发酵培养基能使企业在酶制剂行业竞争中处于不败之地。

由于魔芋粉中富含甘露聚糖，所以在固体发酵中常以魔芋粉作为生产β-甘露聚糖酶的碳源。本发明利用宇佐美曲霉进行固体发酵优化产酶培养基，找到了一种既可以代替部分豆粕作为氮源又可以作为碳源诱导物诱导酶表达的发酵原料，从而获得了一种既能高效表达β-甘露聚糖酶又能降低生产成本低的培养基，同时生产β-甘露聚糖酶的过程不产生废水废渣、无环境污染，适用于无污染、低成本的现代酶制剂生产。

发明内容

本发明的目的是提供一种发酵生产β-甘露聚糖酶的方法。

根据本发明的方法，包括使菌种宇佐美曲霉通过发酵高效表达甘露聚糖酶的步骤，其中，宇佐美曲霉By247，于2010年11月01日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为：CGMCC NO.4290，

（1）三角瓶固体发酵生产β-甘露聚糖酶

发酵培养基及发酵条件：

发酵培养基包括基料，每100g基料包括：麸皮60~80g，豆粕7~20g，棕榈粕13~20g，基于上述100g基料添加魔芋粉0.7~2.7g，（NH₄）₂SO₄1~3g，KH₂PO₄1~3g，水113~173mL；pH 3.0~8.0，灭菌，冷却后接种1~4mL宇佐美曲霉By247种子液，混合均匀，于培养箱31~33℃培养72~96h；

（2）曲盘固体发酵生产β-甘露聚糖酶

曲盘发酵培养基及培养条件：

发酵培养基包括基料，每100g基料包括：麸皮80g，豆粕7g，棕榈粕13g，基于上述100g基料添加魔芋粉50g，（NH₄）₂SO₄ 150g，KH₂PO₄ 75g，水11.5L，自然pH，混合均匀，分装、灭菌，冷却后接种7~15%（V/W）的宇佐美曲霉By247种子液，混合均匀，倒入曲盘，置于曲房中31~34℃培养72~96h。

根据本申请的具体实施方式：

（1）三角瓶固体发酵小试生产β-甘露聚糖酶

发酵培养基及发酵条件：300mL三角瓶装15g基料（麸皮9~12g，豆粕1~3g，棕榈粕2~3g），魔芋粉0.1~0.4g，（NH₄）₂SO₄ 0.15~0.45g，KH₂PO₄ 0.15~0.45g，水17~26mL，pH 3.0~8.0，灭菌，冷却后接种1~4mL种子液，混合均匀，于培养箱31~33℃培养72~96h；

（2）曲盘固体发酵中试生产β-甘露聚糖酶

曲盘发酵培养基及培养条件：麸皮6Kg，豆粕0.5Kg，棕榈粕1Kg，魔芋粉50g，（NH₄）₂SO₄ 150g，KH₂PO₄75g，水11.5L，自然pH，混合均匀，分装、灭菌，冷却后接种7~15%（V/W）的种子液，混合均匀，倒入曲盘，置于曲房中31~34℃培养72~96h。

根据本发明的具体实施方式，所述发酵生产β-甘露聚糖酶的方法包括以下步骤：

①三角瓶固体发酵小试生产β-甘露聚糖酶：

斜面种子培养基制备及菌种活化：称粉碎后的大麦芽70g，加300ml的水，在60℃的水浴锅内糖化3~4h，用4层纱布过滤，滤液煮沸后再用脱脂棉过滤即得到澄清的麦芽汁，调整其糖度为5~10，最后加5.5g琼脂粉，煮沸，吸10mL于各试管内，封好试管于121℃灭菌30min，放置斜面。冷却后于超净工作台接种宇佐美曲霉By247菌株，置培养箱32℃培养96h。

孢子悬浮液制备：吸取10mL无菌蒸馏水于已长好的宇佐美曲霉麦芽汁斜面培养基中，用灭菌接种环将孢子轻轻刮下，置于盛有玻璃珠的小三角瓶中，于往复式摇床上振荡5h（200r/min），使孢子充分分散活化，再经过无菌脱脂棉过滤即为孢子悬浮液，将孢子浓度稀释约至10⁶~10⁷个/mL。

10%麸皮提取液的制备：称取50g麸皮，加入700mL水，在沸水中煮沸20min，8层纱布过滤，定容至500mL，即为10%麸皮提取液，于4℃冰箱储存。

种子液制备：500mL三角瓶中加入50mL 10%麸皮提取液，60mL自来水，0.5g葡萄糖，4g豆粕粉（过80目），混合均匀于121℃灭菌30min。冷却后于超净工作台接种2mL孢子悬浮液，于摇床培养箱32℃、400r/min培养48h，即得种子液。使用前于超净工作台向种子液中加入灭菌转子，封好瓶口，于搅拌器上把菌体充分分开。

发酵培养基及发酵条件：300mL三角瓶装15g基料（其中：麸皮9~12g，豆粕1~3g，棕榈粕2~3g），魔芋粉0.1~0.4g，（NH₄）₂SO₄ 0.15~0.45g，KH₂PO₄ 0.15~0.45g，自来水17~26mL，pH 3.0~8.0。121℃灭菌30min，冷却后接种1~4mL种子液，混合均匀，于培养箱31~33℃培养72~96h，接种后20~24h和40~44h各扣瓶1次。

②曲盘固体发酵中试生产β-甘露聚糖酶：

菌种：与①中的菌种相同，即宇佐美曲霉By247。

种子液制备：与①中种子液制备方法相同。

曲盘发酵培养基及培养条件：麸皮6Kg，豆粕0.5Kg，棕榈粕1Kg，魔芋粉50g，（NH₄）₂SO₄ 150g，KH₂PO₄ 75g，自来水11.5L，自然pH。混合均匀，分装到8层纱布袋中，121℃灭菌30min。冷却后接种7~15%（V/W）的种子液，混合均匀，倒入曲盘（100cm×50cm×5cm）中，厚度2~5cm，盖上4层纱布，置于曲房中31~34℃培养72~96h，期间分别于20~24h和40~44h各翻曲1次并补加无菌水，使发酵曲握在手里既不松散又不出水为宜。

③体外酶解饲料

对照组：称取10.00g饲料（不添加任何酶）或饲料原料，按固液比为1：10加入pH 5.0的0.1mol/L乙酸-乙酸钠缓冲液，置于水浴摇床进行反应。酶解温度40℃，酶解时间5h，酶解开始后，每隔1小时振荡1次，每次10min，速度120r/min。酶解结束后加入5mL 10%三氯乙酸溶液，摇匀，静置5min，取出酶解液适量4000r/min离心10min，收集上清夜，测定还原糖含量。

加酶组：称取10.00g饲料（不添加任何酶）或饲料原料，加入β-甘露聚糖酶提取液，添加量为50U/g饲料（饲料原料）；按固液比为1：10加入pH 5.0的0.1mol/L乙酸-乙酸钠缓冲液，置于水浴摇床进行反应。酶解温度40℃，酶解时间5h，酶解开始后，每隔1小时振荡1次，每次10min，速度120r/min。酶解结束后加入5mL10%三氯乙酸溶液，摇匀，静置5min，取出酶解液适量4000r/min离心10min，收集上清夜，测定还原糖含量。

本发明的特点是：

1.利用廉价的麸皮、棕榈粕等农副产品作为固体发酵的主要原料，降低生产成本，充分利用自然界可再生资源，响应国家的可持续发展战略；

2.利用优化后的培养基进行三角瓶发酵和曲盘发酵产β-甘露聚糖酶活性比原发酵培养基产β-甘露聚糖酶活性分别提高了2.04和1.73倍；

3.本发明生产的β-甘露聚糖酶体外酶解饲料和原料中的甘露聚糖及其衍生物的能力比其它市售β-甘露聚糖酶的能力要强。

4.将本发明生产的β-甘露聚糖酶应用于动物试验表明动物的生产性能得到了显著的提高，即本发明生产的β-甘露聚糖酶能够很好地分解棕榈粕中的抗营养因子β-甘露聚糖及其衍生物；

5.本发明生产的β-甘露聚糖酶的耐温性能比其它市售β-甘露聚糖酶的耐温性能要好。

综上所述，棕榈粕和魔芋粉具有高含量的甘露聚糖，且价格比豆粕便宜得多，用两者代替部分豆粕既可以降低生产成本，又可以显著提高甘露聚糖酶的酶活性。目前常规饲料原料的价格普遍上涨，促使非常规饲料的应用，如在常规饲料中添加棕榈粕代替部分玉米或豆粕饲喂家禽，本发明生产的甘露聚糖酶以棕榈粕作为发酵原料之一，动物试验结果表明其能够很好地分解非常规饲料中的棕榈粕的抗营养因子，能够显著地提高动物的生产性能。本发明生产的甘露聚糖酶的耐温性能、分解饲料和原料能力以及动物试验的效果都比其它市售β-甘露聚糖酶要好。

附图说明

图1β-甘露聚糖酶的最适反应温度

图2β-甘露聚糖酶的热稳定性

图3pH对β-甘露聚糖酶活力的影响

图4pH对β-甘露聚糖酶稳定性的影响（在各pH缓冲溶液中40℃保温2h）

图5β-甘露聚糖酶70℃耐温性能的比较（①为本发明的β-甘露聚糖酶，②~⑤组为其它市售β-甘露聚糖酶）

具体实施方式

为了本领域的技术人员更了解本发明，下面通过实验步骤说明本发明，并结合具体实施例对本发明更进一步说明，但本发明并不限于所列的几个实施例。

1.试剂与溶液

1.1乙酸—乙酸钠缓冲溶液

称取无水醋酸钠16.06g，用800mL蒸馏水溶解，然后用醋酸溶液调整pH至4.8~5.0，最后定容至1000mL。

1.2DNS试剂

取酒石酸钾钠182g，溶于500mL蒸馏水中加热，于热溶液中依次加入3,5—二硝基水杨酸6.3g，氢氧化钠21g，苯酚5g，亚硫酸钠5g，搅拌至溶解，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色试剂瓶中，温室下放置15天以后使用，使用有效期一个半月。

1.3 0.5%槐豆胶溶液

用pH 4.8~5.0的乙酸-乙酸钠缓冲溶液配制。

1.41%甘露糖标准液

精确称取经105℃烘至恒重的甘露糖1.0000g，于容量瓶中用蒸馏水定容至100mL制成1%甘露糖标准液。

2.分析方法

2.1甘露糖标准曲线的绘制

分别吸取1%甘露糖标准溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL于50mL容量瓶中，用蒸馏水制成每mL分别含甘露糖200，400，600，800，1000，1200μg的标准液。各取不同浓度标准液0.5mL于25mL比色管中，加2mL pH 4.8~5.0的乙酸-乙酸钠缓冲溶液，加2.5mLDNS试剂煮沸5min。冷却后加水5mL，摇匀，520nm处测定光密度，以0.5mL水代替标准液作空白。以所得的光密度值为横坐标，以对应的标准甘露糖液浓度的二分之一的值（即：0.100，0.200，0.300，0.400，0.500，0.600，此为每管中甘露糖的mg数）为纵坐标，绘制标准曲线。

2.2待测酶液的制备

精确称取一定量的样品约1.000g于50mL比色管中，加入19mL蒸馏水于漩涡混合器中震荡至溶解，放于室温浸泡45min，浸提过程中每15min震荡一次。浸提后取上清液作为待测酶液，待测酶液稀释至适当倍数待用。

2.3β-甘露聚糖酶活性测定

于25mL比色管A、B中加入底物溶液2mL，55℃预热5min后在A管中加入0.5mL适当稀释的酶液，55℃水浴中精确反应10min，在A、B管中各加入2.5mL DNS试剂，B管中补加0.5mL酶液，立即煮沸5min，用冰水迅速冷却后加入蒸馏水5mL，振荡摇匀，于520nm出测定光密度（B管为空白对照），并从甘露糖标准曲线上查出相应的还原糖含量并折算成酶单位。[酶活定义：在55℃、pH4.8~5.0条件下，1min分解槐豆胶中的β-甘露聚糖产生具有还原能力相当于1μmol甘露糖所需的酶量，规定为1个酶活单位（实为国际单位IU），以μmol/min表示]。

2.4还原糖测定

吸取适量的上清液，置于25mL比色管中，补水至2.5mL，空白组加入2.5mL蒸馏水，各加入DNS溶液2.5mL，沸水显色5min，用冰水迅速冷却，加入5mL蒸馏水，振荡摇匀，于520nm处测定光密度，参照甘露糖标准曲线求出还原糖含量。

实施例1三角瓶固体发酵β-甘露聚糖酶1

基料（麸皮80g，豆粕7g，棕榈粕13g），魔芋粉0.7g，（NH₄）₂SO₄ 2g，KH₂PO₄1g，水153mL。

三角瓶固体发酵培养基：300mL三角瓶15g基料（其中：麸皮12g，豆粕1g，棕榈粕2g），魔芋粉0.1g，（NH₄）₂SO₄ 0.3g，KH₂PO₄ 0.15g，自来水23mL，pH 5.0。

发酵条件：121℃灭菌30min，冷却后接种2mL孢子悬浮液，混合均匀，于32℃培养96h，接种后22h和40h各扣瓶1次。

重复5批次三角瓶发酵试验结果表明，成熟发酵曲料经45~50℃鼓风烘箱烘干粉碎，β-甘露聚糖酶平均酶活性达到26072U/g干曲。

实施例2三角瓶固体发酵β-甘露聚糖酶2

三角瓶固体发酵培养基：300mL三角瓶15g基料（其中：麸皮11g，豆粕1.5g，棕榈粕2.5g），魔芋粉0.3g，（NH₄）₂SO₄ 0.45g，KH₂PO₄ 0.3g，自来水26mL，pH7.0。

发酵条件：121℃灭菌30min，冷却后接种4mL孢子悬浮液，混合均匀，于33℃培养84h，接种后20h和40h各扣瓶1次。

重复5批次三角瓶发酵试验结果表明，成熟发酵曲料经45~50℃鼓风烘箱烘干粉碎，β-甘露聚糖酶平均酶活性达到24867U/g干曲。

实施例3曲盘固体发酵β-甘露聚糖酶1

曲盘发酵培养基：麸皮6Kg，豆粕0.5Kg，棕榈粕1Kg，魔芋粉50g，（NH₄）₂SO₄ 150g，KH₂PO₄ 75g，自来水11.5L，自然pH。

发酵条件：混合均匀，分装到8层纱布中，121℃灭菌30min。冷却后接种10%种子液，混合均匀，倒入曲盘（100cm×50cm×5cm）中，厚度4cm，置于32℃曲房中培养96h，期间分别于22h和42h各翻曲1次并补加无菌水，使基料握在手里而不松散为宜。

重复5批次曲盘发酵试验结果表明，成熟发酵曲料经45~50℃热风烘干粉碎，β-甘露聚糖酶平均酶活性达到22041U/g干曲。

实施例4曲盘固体发酵β-甘露聚糖酶2

曲盘发酵培养基：麸皮6Kg，豆粕0.5Kg，棕榈粕1Kg，魔芋粉50g，（NH₄）₂SO₄ 150g，KH₂PO₄ 75g，自来水11.5L，自然pH。

发酵条件：混合均匀，分装到8层纱布中，121℃灭菌30min。冷却后接种13%种子液，混合均匀，倒入曲盘（100cm×50cm×5cm）中，厚度5cm，置于33℃曲房中培养88h，期间分别于24h和42h各翻曲1次并补加无菌水，使基料握在手里而不松散为宜。

重复5批次曲盘发酵试验结果表明，成熟发酵曲料经45~50℃热风烘干粉碎，β-甘露聚糖酶平均酶活性达到21108U/g干曲。

本发明利用诱变后的宇佐美曲霉By247菌株优化产酶培养基，三角瓶发酵培养基优化后生产的活性达到26072U/g干曲；曲盘发酵培养基优化后生产的β-甘露聚糖酶活性达到22041U/g干曲。分别比宇佐美曲霉By247菌株原固体发酵的酶活性（12763U/g干曲）提高了2.04倍和1.73倍。

三角瓶发酵是曲盘发酵的基础，以三角瓶发酵优化后的培养基扩大一定的倍数后进行曲盘发酵，在本实施例中三角瓶优化得到的培养基扩大发酵（曲盘发酵）生产β-甘露聚糖酶的酶活性损失不大。

对比实施例1

根据CN2010105440832公开的内容发酵比宇佐美曲霉By247菌株生产β-甘露聚糖酶，300mL三角瓶中装入20g固体发酵培养基进行发酵，培养基包括麦麸17g，豆粕3g，硫酸铵0.5g，磷酸二氢钠0.2g，水25mL，121℃灭菌30min。多层曲盘发酵配制50kg干料发酵培养基（麦麸38Kg，豆粕6Kg，稻草粉6Kg，硫酸铵1Kg，磷酸二氢钠0.5Kg，硫酸镁0.1Kg），加自来水70Kg。

实施例5本发明的β-甘露聚糖酶体外酶解试验

为了更好地显示本发明生产的酸性β-甘露聚糖酶的性能，本实施例采用本发明生产的酸性β-甘露聚糖酶、对比例生产的β-甘露聚糖酶以及其它市售酸性β-甘露聚糖酶进行体外酶解试验，比较它们之间酶解液中的还原糖生产量见下表1。

表1几种β-甘露聚糖酶对饲料、原料体外酶解结果比较

注：饲料为家禽料，来源于珠海盈盛饲料有限公司；玉米、豆粕、小麦60℃干燥5h，粉碎，过24目。

从表1可知，对比实施例生产的β-甘露聚糖酶体外酶解饲料、玉米、豆粕、小麦的还原糖含量比空白对照组的都高，与其它4组市售β-甘露聚糖酶比较有高有低，却比本发明实施例的都低。本发明生产的β-甘露聚糖酶体外酶解饲料、玉米、豆粕、小麦的还原糖含量除了比市售β-甘露聚糖酶2酶解豆粕的还原糖含量低之外，都比其它组的高。

综上所述，本发明生产的β-甘露聚糖酶分解饲料及原料的能力比市售β-甘露聚糖酶的能力要好；与对比实施例相比较，本发明生产的β-甘露聚糖酶分解饲料及原料的能力得到显著地提高。

实施例6本发明的β-甘露聚糖酶的动物试验

本发明所提供的β-甘露聚糖酶，能够显著提高动物的生产性能，即动物试验显示15%棕榈粕型日粮添加本发明实施例1-4生产的β-甘露聚糖酶后，动物的生产性能得到了显著的提高。

本实施例饲养4000只1日龄罗氏308白羽肉鸡，22-42日龄，随机分为10个处理，每个处理4个重复，每重复100只鸡。每重复、每处理间的初始重差异均不显著。试验设计分组见表2，试验日粮配方见表3，试验结果见表4。

表2试验分组

分组	日粮
		试验1组	玉米-豆粕型日粮
试验2组	15%棕榈粕日粮
		试验3组	15%棕榈粕日粮+100g/T本发明产甘露聚糖酶
试验4组	15%棕榈粕日粮+200g/T本发明产甘露聚糖酶
		试验5组	15%棕榈粕日粮+100g/T对比实施例产甘露聚糖酶
试验6组	15%棕榈粕日粮+200g/T对比实施例产甘露聚糖酶
		试验7组	15%棕榈粕日粮+100g/T市售甘露聚糖酶1
试验8组	15%棕榈粕日粮+200g/T市售甘露聚糖酶1
		试验9组	15%棕榈粕日粮+100g/T市售甘露聚糖酶2
试验10组	15%棕榈粕日粮+200g/T市售甘露聚糖酶2

表3试验日粮配方

表422－42日龄肉鸡生长性能指标

注：列中肩标有相同字母的数据为差异不显著（P>0.05），肩标有不同大写字母的为差异极显著（P<0.01）。

从表4可知22日龄分组后，试验各组肉鸡均只初重无统计学差异，符合试验要求。与其他试验组相比，试验2组的生长性能最差，且差异极显著（P<0.01）；试验3、4组的生产性能指标均达到试验1组水平，其中试验4组的生长性能最佳，差异不显著（P>0.05）。试验5~10组生产性能接近试验1组水平，与试验3、4组比较差异不显著（P>0.05），但总体试验效果比不上试验3、4组。

综上所述，本发明的β-甘露聚糖酶添加在15％棕榈粕日粮中可使中大鸡阶段的平均体重、料肉比等生产性能指标达到玉米豆粕型日粮的水平，比对比实施例生产的β-甘露聚糖酶和市售β-甘露聚糖酶的试验效果要好，且本发明200g/T添加量的生长性能水平优于玉米豆粕型日粮，证明本发明能很好地分解棕榈粕中的抗营养因子β-甘露聚糖及其衍生物（β-半乳甘露聚糖和β-葡萄糖甘露聚糖），可加大非常规饲料原料替代玉米的使用，饲养效果一致但成本大幅降低。

以上所述仅为本发明的最佳实例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种发酵生产β-甘露聚糖酶的方法，其特征在于，所述方法包括宇佐美曲霉By247通过发酵表达β-甘露聚糖酶的步骤，其中，宇佐美曲霉By247的保藏编号为：CGMCC NO.4290，

（1）三角瓶固体发酵生产β-甘露聚糖酶

发酵培养基及发酵条件：

发酵培养基包括基料，每100g基料包括：麸皮60~80g，豆粕7~20g，棕榈粕13~20g，基于上述100g基料添加魔芋粉0.7~2.7g，（NH₄）₂SO₄ 1~3g，KH₂PO₄ 1~3g，水113~173mL；pH 3.0~8.0，灭菌，冷却后接种1~4mL宇佐美曲霉By247种子液，混合均匀，于培养箱31~33℃培养72~96h；

（2）曲盘固体发酵生产β-甘露聚糖酶

曲盘发酵培养基及培养条件：

发酵培养基包括基料，每100g基料包括：麸皮80g，豆粕7g，棕榈粕13g，基于上述100g基料添加魔芋粉50g，（NH₄）₂SO₄ 150g，KH₂PO₄ 75g，水11.5L，自然pH，混合均匀，分装、灭菌，冷却后接种7~15%（V/W）的宇佐美曲霉By247种子液，混合均匀，倒入曲盘，置于曲房中31~34℃培养72~96h。

2.根据权利要求1所述的发酵生产β-甘露聚糖酶的方法，其特征在于，宇佐美曲霉By247种子液的制备过程如下：

（1）斜面种子培养基制备及菌种活化：称粉碎后的大麦芽70g，加300ml的水，在60℃的水浴锅内糖化3~4h，过滤，滤液煮沸后再过滤即得到澄清的麦芽汁，调整其糖度为5~10，最后加5.5g琼脂粉，煮沸，吸于各试管内，封好试管于121℃灭菌30min，放置斜面，冷却后接种宇佐美曲霉By247菌株，置培养箱32℃培养96h；

（2）孢子悬浮液制备：吸取无菌蒸馏水于已长好的宇佐美曲霉麦芽汁斜面培养基中，用灭菌接种环将孢子轻轻刮下，置于盛有玻璃珠的小三角瓶中，于往复式摇床上振荡5h，200r/min，使孢子充分分散活化，再经过滤即为孢子悬浮液，将孢子浓度稀释约至10⁶~10⁷个/mL；

（3）10%麸皮提取液的制备：称取50g麸皮，加入700mL水，在沸水中煮沸20min，8层纱布过滤，定容至500mL，即为10%麸皮提取液，于4℃冰箱储存；

（4）种子液制备：500mL三角瓶中加入50mL 10%麸皮提取液，60mL自来水，0.5g葡萄糖，4g豆粕粉，混合均匀于121℃灭菌30min，冷却后于超净工作台接种2mL孢子悬浮液，于摇床培养箱32℃、400r/min培养48h，即得种子液。