CN103040807A

CN103040807A - 去-o-甲基毛狄泼老素在制备治疗高血压药物中的应用

Info

Publication number: CN103040807A
Application number: CN2012105275618A
Authority: CN
Inventors: 张爱华; 黄松明
Original assignee: Nanjing Children's Hospital Affiliated To Nanjing Medical University
Current assignee: Nanjing Children's Hospital Affiliated To Nanjing Medical University; Nanjing Childrens Hospital of Nanjing Medical University
Priority date: 2012-12-10
Filing date: 2012-12-10
Publication date: 2013-04-17

Abstract

本发明公开了去-O-甲基毛狄泼老素在制备治疗高血压药物中的应用，经实验研究表明，去-O-甲基毛狄泼老素能很好的降低SHR大鼠的尾动脉血压、中心动脉收缩压、中心动脉舒张压、中心动脉平均压和脉搏波速度及改善动脉弹性功能，并且还能降低主动脉中层厚度及血管壁胶原纤维，增加血管内径，具有很好的防治高血压的功效。且实验过程中未见明显不良反应，有望开发成新一代安全有效防治高血压的药物。

Description

去-O-甲基毛狄泼老素在制备治疗高血压药物中的应用

技术领域

本发明涉及去-O-甲基毛狄泼老素化合物，特别涉及去-O-甲基毛狄泼老素在制备治疗高血压药物中的应用。

背景技术

高血压是最常见的慢性病，已成为全球主要的公共卫生问题。据WHO 2004年的研究表明，全球每年由高血压死亡的人数为750万例，其引起的伤残调整寿命年损失排在第5位。在过去几十年中，我国高血压的患病率正在快速增加，尤其是改革开放以来，随着人们生活方式的变化和老龄化进程的加速，高血压患病率增长速度加快。我国成年人中估计的高血压人数已经从1960年的3000万增加到1980年的5900万，而后又增加到1991年的9400万以及2004年的1.6亿，每年新增高血压患者1000多万。2010年中国慢性病监测在国家疾病监测点系统（DSP系统）所覆盖的162个监测点，共调查了98548名18岁以上常住居民，结果发现，高血压的患病率为38%，据此估计，我国目前有3.3亿成年人患高血压。WHO发布的《2012年世界卫生统计》数据显示，全球三分之一成年人患有高血压，我国成年人高血压的患病率已高于全球平均水平，这些数字显示我国成为世界上高血压危害最严重的国家之一。高血压是目前公认的脑卒中、冠心病等心脑血管疾病最重要的独立危险因素。长期慢性压力超负荷必将引起心脏、血管结构和功能的改变。目前抗高血压的药物较多，但大多存在较大的不良反应，且需长期用药。

去-O-甲基毛狄泼老素（DML），是从紫草中提取的小分子化合物，其分子式为C₁₅H₂₀O₄，分子量为264.32。中国专利200810200074.4公开了苯并大环内酯类化合物(3R)-去-O-甲基毛狄泼老素、其衍生物及其制备方法和用途；201110079284.4公开了3R-去-O-甲基毛狄泼老素在制备预防或治疗抑郁症的药物中的用途；但其对高血压的治疗作用还没有研究报道。

发明内容

发明目的：本发明的目的是为了克服现有技术的不足，在去-O-甲基毛狄泼老素原有功效的基础上，开发其新的临床用途，提供去-O-甲基毛狄泼老素在治疗高血压中的应用，实验结果表明，其具有很好的防治高血压的作用，且无不良反应。

技术方案：为了实现以上目的，本发明提供的去-O-甲基毛狄泼老素（以下简称DML），其结构式为：

本发明通过大量实验研究表明，去-O-甲基毛狄泼老素具有很好的治疗高血压的作用，可用于制备治疗高血压药物中的应用。

作为优选方案，本发明所述的去-O-甲基毛狄泼老素在制备治疗原发性高血压药物中的应用。

作为另一优选方案，本发明所述的去-O-甲基毛狄泼老素在制备治疗继发性高血压药物中的应用。

作为优选方案，本发明所述的去-O-甲基毛狄泼老素在制备治疗高血压药物中的应用，将去-O-甲基毛狄泼老素和药学上可接受的载体制成胶囊剂、颗粒剂、喷雾剂、粉针剂、注射剂、微囊、片剂、软膏剂或透皮控释贴剂剂型的药物。

本发明提供的去-O-甲基毛狄泼老素制成胶囊剂时把去-O-甲基毛狄泼老素和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。

将本发明提供的去-O-甲基毛狄泼老素制成片剂时，把去-O-甲基毛狄泼老素和乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。

本发明提供的去-O-甲基毛狄泼老素制成颗粒剂时，把去-O-甲基毛狄泼老素和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。

本发明提供的去-O-甲基毛狄泼老素制成注射液时，取去-O-甲基毛狄泼老素加入生理盐水溶解然后加入活性碳，搅拌均匀，80℃加热30分钟，过滤，调节pH值，用垂熔玻璃漏斗或其它滤器过滤至澄明，灌装，在100至115℃灭菌30分钟制成注射液。

本发明提供的去-O-甲基毛狄泼老素除热原之后，经无菌过滤，冷冻干燥，得到注射用粉针剂。

有益效果：本发明在去-O-甲基毛狄泼老素原有功效的基础上进行新的用途开发，实验研究表明去-O-甲基毛狄泼老素具有很好的治疗高血压的作用，对原发性和继发性高血压，及其高血压相关性疾病均具有非常好的治疗效果，且实验过程中，未表现出副作用等不良反应，有望开发成为新一代安全有效，用于防治高血压的药物。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施例1：去-O-甲基毛狄泼老素（DML）对高血压的药理作用

1、动物模型制备及实验分组

动物模型的建立与分组：13周龄SD大鼠（220-250g），腹腔注射戊巴比妥（40mg/Kg BW）麻醉，腹部正中切口，分离并结扎左侧肾动脉、肾静脉和输尿管后，行左侧肾脏切除术，并逐层关闭腹腔，术后恢复1周。实验中左肾切除后存活的大鼠38只，随机分为4组，对照组（n=8）：饮自来水；模型组（n=10）以及去-O-甲基毛狄泼老素低剂量和高剂量治疗组（每组各10只）：将200mg/Kg醋酸去氧皮质酮（DOCA）与硅胶制成的橡皮介质放置在大鼠两侧肩胛骨之间的皮下，给予1%NaCl饮水；去-O-甲基毛狄泼老素低剂量和高剂量治疗组大鼠分别给予20和40mg·Kg^-1·d^-1，灌胃，对照组和模型组大鼠给予等量的蒸馏水灌胃，1次/天，共4周。

2、实验方法

2.1大鼠收缩压测量

采用尾动脉测压法，每周测收缩压（SBP）一次，每只大鼠测3次，取平均值。

2.2大鼠中心动脉压和脉搏波速度（PWV）测定

造模完成后，大鼠经戊巴比妥（40mg/Kg BW）腹腔注射麻醉，固定于37°C恒温板上以保持体温。于左侧颈动脉和左侧股动脉分别插入1.4Fr Millar压力传感器，导管顶端（传感器）分别置于降主动脉和腹主动脉分叉处上方，同时记录两点动脉内压力曲线，采用Foot-to-Foot法分别确定降主动脉和腹主动脉处的舒张压（血压最低值），计算脉搏波在亮点间的传播时间（T）。数据采集完成后，处死大鼠，打开腹腔，将丝线置于两导管尖端的主动脉上，直接测量两点间的距离（D）。PWV=D/T（m/s）。取插管20min后数据，采集10-20个心动周期，得出平均PWV，以备后续数据处理。以降主动脉处的动脉内压力曲线记录中心动脉收缩压（cSBP）和中心动脉舒张压（cDBP），并计算得出中心平均脉压（cPP，cPP=cSBP-cDBP）及中心平均血压（cMBP，cMBP=cDBP+cPP/3）。

2.3病理检测

钝性分离胸主动脉约2cm，PBS清洗，4%中性福尔马林固定，石蜡包埋，制备5μm切片，HE染色。光镜下观察主动脉中层血管平滑肌细胞（VSMC）、弹力纤维的形态学变化，并测量主动脉中层厚度（MT）、血管内径（LD）。

2.4统计学方法

结果以均数±标准差表示，采用SPSS 11.5统计软件进行统计学分析。组间比较采用单因素方差分析，多个均数之间的比较采用q检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

3、实验结果

3.1去-O-甲基毛狄泼老素（DML）对DOCA-盐大鼠尾动脉血压的影响：各组大鼠在左侧肾脏切除术一周后，尾动脉血压均在正常范围，模型组大鼠从实验第2周开始血压明显增高，且随着时间延长，血压逐渐升高，至实验第4周时血压最高，达到（178±19）mmHg。经本发明去-O-甲基毛狄泼老素治疗后，治疗组大鼠血压较模型组显著降低，且呈剂量依赖性，具体实验结果如表1所示。

表1各组大鼠尾动脉血压的动态变化（mmHg）

与对照组比较，^*P＜0.05；与模型组相比较，^◆P＜0.05。

3.2去-O-甲基毛狄泼老素对DOCA-盐大鼠中心动脉压的影响：实验结束时采用导管法测定大鼠中心动脉压，结果表明模型组中心动脉收缩压、中心动脉舒张压和中心动脉平均血压均较对照组显著升高，经本发明去-O-甲基毛狄泼老素治疗后，中心动脉收缩压、中心动脉舒张压和中心动脉平均血压均明显下降，且随着药物剂量增加，其降压作用更为显著，具体实验结果如表2所示。

表2各组大鼠中心动脉压的变化（mmHg）

与对照组比较，^*P＜0.05；与模型组相比较，^◆P＜0.05。

3.3去-O-甲基毛狄泼老素对DOCA-盐大鼠大动脉僵硬度的影响：实验结束时采用导管法测定大鼠脉搏波速度（PWV）来反应大动脉僵硬度。实验结果表明，模型组PWV显著高于对照组，本发明去-O-甲基毛狄泼老素可呈剂量依赖性的降低大鼠PWV值，表明去-O-甲基毛狄泼老素可改善大动脉的僵硬度，具体实验结果如表3所示。

表3各组大鼠脉搏波速度、主动脉中层厚度和血管内径的变化

与对照组比较，^*P＜0.05；与模型组相比较，^◆P＜0.05。

3.4去-O-甲基毛狄泼老素对DOCA-盐大鼠主动脉中层厚度的影响：分别取各组大鼠胸主动脉切片行HE染色，观察主动脉中层血管平滑肌细胞和弹力纤维的形态学变化。结果表明，模型组大鼠血管平滑肌细胞明显肥大并伴有弹力纤维增厚，主动脉中层厚度显著增厚，而血管内径则明显下降。经本发明去-O-甲基毛狄泼老素治疗后血管平滑肌细胞无明显肥大，主动脉中层厚度显著下降，而血管内径明显增加，且该作用呈剂量依赖性，随剂量增加，其作用更为显著，具体实验结果如表3所示。

醋酸去氧皮质酮（DOCA）－盐高血压是一种继发性高血压模型，与人类高血压中的原发性醛固酮增多症相类似，以大动脉和阻力小血管明显增生肥厚为特征，表现为血管平滑肌细胞肥大及纤维结缔组织增生，血管中层厚度显著增加，血管内径降低。以上实验结果表明，去-O-甲基毛狄泼老素可通过抑制血管平滑肌细胞肥大，降低主动脉中层厚度，从而扩大血管内径，降低中心动脉压及外周血压，具有很好的抗高血压的功效。

实施例2去-O-甲基毛狄泼老素对自发性高血压大鼠的降压作用

一、材料和方法

1、实验动物分组：雄性自发性高血压大鼠（SHR）30只（16周龄，体重280-320g），随机分为3组，每组10只，分别为SHR对照组、去-O-甲基毛狄泼老素低剂量治疗组和高剂量治疗组。10只同年龄同体重的健康雄性Wistar-Kyoto（WKY）大鼠为正常血压对照组。去-O-甲基毛狄泼老素低剂量治疗组和高剂量治疗组分别给予20和40mg·Kg^-1·d^-1，灌胃，1次/天，SHR对照组和WKY正常血压对照组每日同时给予同量的蒸馏水灌胃，连续8周。

2、大鼠收缩压测量：采用尾动脉测压法，每周测收缩压（SBP）一次，每只大鼠测3次，取平均值。

3、大鼠中心动脉压和脉搏波速度（PWV）测定：造模完成后，大鼠经戊巴比妥（40mg/KgBW）腹腔注射麻醉，固定于37°C恒温板上以保持体温。于左侧颈动脉和左侧股动脉分别插入1.4Fr Millar压力传感器，导管顶端（传感器）分别置于降主动脉和腹主动脉分叉处上方，同时记录两点动脉内压力曲线，采用Foot-to-Foot法分别确定降主动脉和腹主动脉处的舒张压（血压最低值），计算脉搏波在亮点间的传播时间（T）。数据采集完成后，处死大鼠，打开腹腔，将丝线置于两导管尖端的主动脉上，直接测量两点间的距离（D）。PWV=D/T（m/s）。取插管20min后数据，采集10-20个心动周期，得出平均PWV，以备后续数据处理。以降主动脉处的动脉内压力曲线记录中心动脉收缩压（cSBP）和中心动脉舒张压（cDBP），并计算得出中心平均脉压（cPP，cPP=cSBP-cDBP）及中心平均血压（cMBP，cMBP=cDBP+cPP/3）。

4、病理检测：钝性分离胸主动脉约2cm，PBS清洗，4%中性福尔马林固定，石蜡包埋，制备5μm切片，HE染色。光镜下观察主动脉中层血管平滑肌细胞（VSMC）、弹力纤维的形态学变化，并测量主动脉中层厚度（MT）、血管内径（LD）。

5、主动脉胶原纤维面积测量：切片经Masson三色改良法染色，光镜下胶原纤维呈墨绿色，肌纤维呈红色。采用Motic 6.0数码图像分析系统进行图像分析，测量血管胶原纤维面积百分比，每一个标本测量5个横切面，取其均值。

6、统计学方法：结果以均数±标准差表示，采用SPSS 11.5统计软件进行统计学分析。组间比较采用单因素方差分析，多个均数之间的比较采用q检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

二、实验结果

1、去-O-甲基毛狄泼老素（DML）对自发性高血压大鼠尾动脉血压的影响：给药前SHR各组大鼠尾动脉血压无显著差异，且均高于WKY正常对照组；给药后去-O-甲基毛狄泼老素低剂量及高剂量治疗组大鼠尾动脉血压均较模型组显著降低，且呈剂量依赖性，具体实验结果如表4所示。

表4各组大鼠尾动脉血压的动态变化（mmHg）

与对照组比较，^*P＜0.05；与模型组相比较，^◆P＜0.05。

2、去-O-甲基毛狄泼老素对自发性高血压大鼠中心动脉压的影响：实验结束时采用导管法测定大鼠中心动脉压，结果表明SHR对照组中心动脉收缩压、中心动脉舒张压和中心动脉平均血压均较WKY对照组显著升高，去-O-甲基毛狄泼老素治疗后，中心动脉收缩压、中心动脉舒张压和中心动脉平均血压均明显下降，且随着药物剂量增加，其降压作用更为显著，具体实验结果如表5所示。

表5各组大鼠中心动脉压的变化（mmHg）

与对照组比较，^*P＜0.05；与模型组相比较，^◆P＜0.05。

3、去-O-甲基毛狄泼老素对自发性高血压大鼠大动脉僵硬度的影响：实验结束时采用导管法测定大鼠脉搏波速度（PWV）来反应大动脉僵硬度。结果发现，与WKY对照组相比，各组SHR大鼠PWV均显著增快。与SHR对照组相比，去-O-甲基毛狄泼老素可呈剂量依赖性的降低SHR大鼠PWV值，表明去-O-甲基毛狄泼老素可改善大动脉的僵硬度，具体实验结果如表6所示。

表6各组大鼠脉搏波速度、主动脉中层厚度和血管内径的变化

与对照组比较，^*P＜0.05；与模型组相比较，^◆P＜0.05。

4、去-O-甲基毛狄泼老素对DOCA-盐大鼠主动脉中层厚度的影响：分别取各组大鼠胸主动脉切片行HE染色，观察主动脉中层血管平滑肌细胞和弹力纤维的形态学变化。结果表明，与WKY大鼠相比，SHR大鼠血管平滑肌细胞明显肥大并伴有弹力纤维增厚，主动脉中层厚度显著增厚，血管壁胶原纤维含量显著增加，而血管内径则显著下降。去-O-甲基毛狄泼老素治疗后血管平滑肌细胞肥大受到显著抑制，主动脉中层厚度及血管壁胶原纤维含量显著下降，而血管内径明显增加，且该作用呈剂量依赖性，随剂量增加，其作用更为显著，如表6所示。

自发性高血压大鼠（SHR）是目前国际上公认的最接近于人类原发性高血压的动物模型，该大鼠于生后3-4周血压开始升高，12-24周时达到高峰。本研究选用16周龄的SHR大鼠，动态观察了不同剂量的去-O-甲基毛狄泼老素对SHR大鼠的降压作用。结果表明，SHR大鼠尾动脉血压、中心动脉收缩压、中心动脉舒张压和中心动脉平均压均显著升高，去-O-甲基毛狄泼老素可呈剂量依赖性的降低SHR大鼠的尾动脉血压、中心动脉收缩压、中心动脉舒张压和中心动脉平均压。

动脉弹性功能减退、僵硬度增加是高血压患者未来心血管病事件的独立危险因素，改善动脉弹性功能是目前抗高血压治疗的靶标之一。高血压时动脉弹性功能下降，即使治疗后血压得到控制，其危险性也并没有有效降低。脉搏波速度（PWV）已经成为心血管疾病预后的最佳预测指标，是脑血管疾病、糖尿病和肾脏病等多种疾病的重要预后指标。本研究发现，SHR大鼠PWV较WKY大鼠显著增加，提示SHR大鼠动脉弹性功能减退，而经去-O-甲基毛狄泼老素治疗能够显著降低SHR大鼠PWV，改善动脉弹性功能，去-O-甲基毛狄泼老素治疗后主动脉中层厚度及血管壁胶原纤维含量显著下降，而血管内径明显增加，可改变动脉壁弹性硬蛋白与胶原的比例，增加动脉顺应性。

以上实验结果表明，本发明去-O-甲基毛狄泼老素具有很好的防治原发性和继发性高血压及其相关疾病的功效，且化学成分清楚，不良反应低，有望开发成新的抗高血压的功效。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.去-O-甲基毛狄泼老素在制备治疗高血压药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的去-O-甲基毛狄泼老素在制备治疗高血压药物中的应用，其特征在于，去-O-甲基毛狄泼老素在制备治疗原发性高血压药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的去-O-甲基毛狄泼老素在制备治疗高血压药物中的应用，其特征在于，去-O-甲基毛狄泼老素在制备治疗继发性高血压药物中的应用。

4.根据权利要求1至3任一项所述的去-O-甲基毛狄泼老素在制备治疗高血压药物中的应用，其特征在于，将去-O-甲基毛狄泼老素和药学上可接受的载体制成胶囊剂、颗粒剂、喷雾剂、注射剂、微囊、片剂、软膏剂或透皮控释贴剂剂型的药物。