CN103040748A

CN103040748A - 一种培美曲塞二钠脂质体注射剂

Info

Publication number: CN103040748A
Application number: CN2012105513781A
Authority: CN
Inventors: 王平
Original assignee: HAINAN BAISITE PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: HAINAN SHENGXIN MEDICAL TECHNOLOGY CO., LTD.
Priority date: 2012-12-18
Filing date: 2012-12-18
Publication date: 2013-04-17
Anticipated expiration: 2032-12-18
Also published as: CN103040748B

Abstract

本发明公开了一种培美曲塞二钠脂质体注射剂，该脂质体注射剂由培美曲塞二钠、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、PEG600、胆固醇和甘露醇制成。本发明的脂质体注射剂具有脂质体粒径小且分布均匀、包封率高、渗漏率低、稳定性好，提高了培美曲塞二钠的溶解度和制剂产品的质量，减少了毒副作用，提高了疗效。

Description

一种培美曲塞二钠脂质体注射剂

技术领域

本发明涉及一种脂质体注射剂及其制法，具体涉及一种培美曲塞二钠脂质体注射剂及其制法，属于医药技术领域。

背景技术

本文所述的培美曲塞二钠，化学名称为N-[4-[2-(2-氨基-4，7-二氢-4-羰-1H-吡咯[1,3-d]-嘧啶-5-基)乙基]苯甲酰]-L谷氨酸二钠盐2.5水合物，或称为培美曲塞二钠2.5水合物。分子式为C₂₀H₁₉N₅Na₂O₆·2.5H₂O结构式如下：

培美曲塞是一种结构上含有核心为吡咯嘧啶基团的抗叶酸制剂，通过破坏细胞内叶酸依赖性的正常代谢过程，抑制细胞复制，从而抑制肿瘤的生长。外体研究显示，培美曲塞能够抑制胸苷酸合成酶、二氢叶酸还原酶和甘氨酰胺核苷酸的生物再合成过程。从培美曲塞的作用机制推测，其应为一种广谱抗肿瘤药物。临床前和临床研究显示亦表明，除已批准的2个适应症外，培美曲塞对其它多种实体瘤也有一定的疗效。而且，培美曲塞与多种其他抗癌药联用均具有协同增效作用，并可以降低毒性，这给某些因耐药问题而苦于无合适药物的患者带来了希望。培美曲塞二钠的稳定性较差，在高温、氧化条件下易发生降解，产生可能引发毒副作用的杂质，不适合制成需要高温灭菌的注射液，因而培美曲塞二钠通常制成冻干粉针剂，但现有的培美曲塞二钠的冻干粉针剂在运输和贮藏的过程中，也常因为温度控制不严格而导致冻干粉针剂中杂质含量明显增加，而现有技术和公共常识也没有公开改善上述缺陷的建议。

关于原料药物，Taylor等在US5248775中首先报道了培美曲塞及其合成方法，WO0114379A公开了2.5水合物晶型，CN102050825A公开了一种制备培美曲塞二钠2.5水结晶的方法，包括如下步骤：(1)将原料培美曲塞二钠溶于水中；(2)将得到培美曲塞二钠的水溶液滴加到能与水互溶的有机溶剂中，进行析晶；(3)过滤，收集滤饼，干燥，得目标产物。另有报道高分子微球偶联固定的培美曲塞二钠。

CN102106833A公开一种培美曲塞二钠冻干粉针剂及其制备方法，该培美曲塞二钠冻干粉针剂由培美曲塞二钠和甘露醇组成，所述甘露醇和培美曲塞二钠的质量比为0.6～2.0∶1。CN101411710A公开了一种培美曲塞二钠冻干粉针剂及其制法，该粉针剂由培美曲塞二钠、甘露醇和亚硫酸钠组成，其中原料质量份配比：培美曲塞二钠50，甘露醇10～50，亚硫酸钠0.1～1；所述的培美曲塞二钠冻干粉针剂的pH值为7.0～8.0。亚硫酸钠为常用的抗氧剂，具有较强的活血活性，对主药有一定的影响。

在药物载体输送系统中，脂质体的研究较为广泛，脂质体在体内具有良好的靶向性和生物相容性。作为一种新型药物制剂，脂质体制剂具有以下优点：（1）具有缓释作用：活性成分缓慢释放，延缓肾排泄和代谢，从而延长作用时间，提高质量效果；（2）降低药物毒性；（3）增加药物的溶解性，提高制剂质量；（4）具有靶向性：脂质体所载的药物在肝、脾网状内皮系统脏器局部维持高浓度，从而起到药物器官靶向性作用；（5）具有对活性药物成分的保护作用。

随着生物技术的不断进展，脂质体制备工艺逐步完善，脂质体作用机制进一步阐明，加之脂质体适合体内降解、无毒性和无免疫原性，特别是大量试验数据证明脂质体作为药物载体可以改变药物在体内的分布，增加药物在靶器官的分布量，提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用，并减少药物剂量等优点。

由于培美曲塞二钠注射剂的不足，目前对于培美曲塞二钠脂质体注射剂存在需求。

发明内容

脂质体的稳定性是长期以来限制脂质体广泛应用的重要问题，脂质体普遍存在容易聚集、融合，导致包封药物泄漏，因此在工业上制备符合稳定性要求的药物脂质体实非易事，制药领域具有一般经验的技术人员清楚地知道在制备药物脂质体方面面临各种技术困难，所有这些绝非现有的理论可以预期解决的，需要克服许多技术难题。因此需要想方设法地寻找优化的脂质体处方，以获得稳定性优良的培美曲塞二钠脂质体注射剂。

一般而言，对于大多数的脂质体药物制剂而言，被包裹的药物的药学性质主要由脂类组成和浓度所控制。为了形成品质优良的培美曲塞二钠脂质体注射剂，重要的是寻找能与培美曲塞二钠良好相容从而将其良好包封且不渗漏的并提供适当释放度的成膜材料，以及寻找能使脂质体形成稳定注射剂的赋形剂成分。

本发明人经过锐意研究发现，通过选用特定重量配比的培美曲塞二钠、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、PEG600、胆固醇和甘露醇，可以形成品质优异的培美曲塞二钠脂质体注射剂，从而完成本发明。

为了实现上述目的，本发明人进行的大量研究和实验，发现特定重量配比的培美曲塞二钠、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、PEG600、胆固醇甘露醇能制成优异的培美曲塞二钠脂质体注射剂，其中，与现有技术中的培美曲塞二钠注射剂或者一般常规制备的脂质体相比，作为药物活性成分的培美曲塞二钠的包封率高，脂质体粒径小且分布均匀，本发明制剂的药物活性成分在体循环中的保留时间显著延长，药物的生物相容性高，生物利用度明显提高，疗效明显提高。

一方面，本发明提供一种培美曲塞二钠脂质体注射剂，其脂质体主要由以下重量配比的成分制成：

作为用于形成脂质体的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。所述磷脂包括磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰胆碱、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢化卵磷脂、卵磷脂酰甘油、卵磷脂酰丝氨酸、卵磷脂酰肌醇、二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱（DLPC)、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)和聚乙二醇衍生化磷脂例如二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000；二软酯酰胆磷脂-聚乙二醇2000；氢化大豆磷脂酰胆碱-聚乙二醇2000；二油酰磷脂酰胆碱-聚乙二醇2000等。附加剂一般选用胆固醇、维生素E、十八胺、磷酸二鲸蜡酯。在本发明中，作为药物活性成分的培美曲塞二钠，其水溶性良好，脂溶性差。针对培美曲塞二钠的特点，本发明人通过研究发现二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油和胆固醇组合应用特别适于作为基础磷脂成膜材料。

二棕榈酰磷脂酰胆碱容易获得，价格低廉，二棕榈酰磷脂酰胆碱的相变温度较高，易于形成稳定的脂质体膜。为了改善脂质体的稳定性等性质，所用二棕榈酰磷脂酰胆碱的纯度为98%以上，优选99%以上。本发明人在大量的筛选实验时意外发现，当使用二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油和胆固醇组合之外的任何磷脂和或胆固醇组合时，均没有获得品质优良的脂质体，所得脂质体在高温40℃、相对湿度75%±5%的加速试验下，包封率、稳定性、和渗漏率等性质较差。

在本发明的培美曲塞二钠脂质体注射剂中，相对于1重量份的培美曲塞二钠（以培美曲塞计）而言，二棕榈酰磷脂酰胆碱的用量为4-60重量份。如果二棕榈酰磷脂酰胆碱的用量低于4重量份，则无法形成稳定的脂质体；反之，如果二棕榈酰磷脂酰胆碱的用量的用量高于60重量份，则作为药物活性成分的培美曲塞二钠的包封率下降，注射剂的品质以及疗效降低。

在本发明的脂质体中，二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)为本发明优选的负电荷磷脂，二硬脂酰磷脂酰甘油与二棕榈酰磷脂酰胆碱相结合使用特别适于作为基础磷脂成膜材料，二硬脂酰磷脂酰甘油有效地增大了脂质体表面的Zeta电位的绝对值，使脂质体表面的静电斥力增大，有效地抑制脂质体的聚集。在冻干粉针制备过程中，预冻阶段随着脂质体外水相冰析出，脂质体不断被浓缩，聚集的趋势增大，而加入负电荷磷脂可以有效地阻止此时脂质体的聚集，保证冻干复水后脂质体粒径稳定在一定范围内。

在本发明的培美曲塞二钠脂质体注射剂中，相对于1重量份的培美曲塞二钠而言，二硬脂酰磷脂酰甘油的用量为1-15重量份。如果二硬脂酰磷脂酰甘油的用量低于1重量份，则由于其用量过低导致对培美曲塞二钠脂质体注射剂的稳定性改进不够，反之，如果二硬脂酰磷脂酰甘油的用量高于15重量份，则用于其用量过高而导致脂质体Zeta电位过高，体内释放不易控制，不利于提高生物利用度。

在本发明的脂质体的一方面，其Zeta电位为-10～-50mV，优选为-20～-40mV，最优选为-30mV。

优选地，本发明的培美曲塞二钠脂质体注射剂，其脂质体主要由以下重量配比的成分制成：

优选地，二硬脂酰磷脂酰甘油的重量与二棕榈酰磷脂酰胆碱之间的重量比为1∶1-1∶8，更优选地，二硬脂酰磷脂酰甘油的重量与二棕榈酰磷脂酰胆碱之间的重量比为1∶4。

进一步优选地，本发明的培美曲塞二钠脂质体注射剂，其脂质体主要由以下重量配比的成分制成：

在本发明的培美曲塞二钠脂质体注射剂中，胆固醇用于调节脂质体的膜稳定性和通透性，以获得稳定的培美曲塞二钠脂质体注射剂和适当的培美曲塞二钠释放。胆固醇是一种很好的脂质膜稳定剂，胆固醇可阻止其凝聚成晶体结构。胆固醇掺入二棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰甘油的双层，能提高该双层膜之间的化学能，从而提高脂质体在水性液体中的化学稳定性，进而提高培美曲塞二钠脂质体注射剂的稳定性。胆固醇能使脂质体双分子层膜固化，从而减少自由基的生成，降低氧化水平，使脂质体稳定性显著增强。

本发明人研究发现，在本发明的培美曲塞二钠脂质体注射剂中，相对于1重量份的培美曲塞二钠（以培美曲塞计）而言，胆固醇的适宜用量为1-15份，优选为2-7重量份，所形成的培美曲塞二钠脂质体注射剂的稳定性最好。

在本发明的培美曲塞二钠脂质体注射剂中，优选进一步使用PEG600来提高培美曲塞二钠包封率，并修饰膜的稳定性和通透性。不受理论限制，本发明人令人惊奇地发现，加入PEG600可以改变培美曲塞二钠及其脂质体的药学性质，聚乙二醇600有一定粘度和表面活性作用，可提高培美曲塞二钠的包封率，可降低脂质体与胃肠道黏液之间的表面张力，促进药物进入胃肠黏膜，从而提高生物利用度和治疗效果。经研究，发明人发现PEG600优于PEG400、PEG800或PEG1000等其他聚乙二醇。

本发明人研究发现，在本发明的培美曲塞二钠脂质体注射剂中，相对于1重量份的培美曲塞二钠（以培美曲塞计）而言，PEG600的适宜用量为1-10份，优选为2-5重量份，所形成的培美曲塞二钠脂质体注射剂的包封率最高。

本发明人经过研究发现，当二硬脂酰磷脂酰甘油的重量与二棕榈酰磷脂酰胆碱之间的重量比为1∶1-1∶8时，能形成稳定的培美曲塞二钠脂质体。当二硬脂酰磷脂酰甘油的重量与二棕榈酰磷脂酰胆碱重量比低于1∶1时，膜稳定性降低，培美曲塞二钠易于渗漏；当二硬脂酰磷脂酰甘油的重量与二棕榈酰磷脂酰胆碱重量比高于1∶8时，培美曲塞二钠脂质体膜Zeta电位过高，体内释放不易控制，不利于提高生物利用度，并导致培美曲塞二钠脂质体稳定性降低。此外，研究发现，当二硬脂酰磷脂酰甘油的重量与二棕榈酰磷脂酰胆碱重量比为1∶1-1∶8时，所形成的脂质体毒性低。

研究表明，脂质体的稳定性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高，生物利用度越高。因此，本发明的培美曲塞二钠脂质体注射剂的稳定性高，是导致药物生物利用度高的因素之一。

另一方面，本发明人研究发现，在本发明的培美曲塞二钠脂质体注射剂中，相对于1重量份的培美曲塞二钠（以培美曲塞计）而言，二棕榈酰磷脂酰胆碱的用量为8-28重量份，二硬脂酰磷脂酰甘油为2-7重量份，胆固醇为2-7重量份，PEG600为2-5重量份，且二硬脂酰磷脂酰甘油的重量与二棕榈酰磷脂酰胆碱重量比为1∶1-1∶8优选为1∶4时，所形成的培美曲塞二钠脂质体注射剂的包封率高。

研究发现，当使用上述特定量的培美曲塞二钠、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、PEG600和胆固醇时，可以得到品质优良的培美曲塞二钠脂质体，其包封率和稳定性都很高，毒性低，生物利用度高。

在本发明的培美曲塞二钠脂质体注射剂中，进一步优选使用甘露醇作为赋形剂，用于形成稳定的注射剂，其能有效保护脂质体颗粒的形态和稳定性，进一步提高脂质体注射剂的稳定性。

本发明的培美曲塞二钠脂质体注射剂，其培美曲塞二钠（以培美曲塞计）的规格可以为0.1g、0.2g或0.5g，本文中培美曲塞二钠（即培美曲塞二钠2.5水合物）的重量均按照培美曲塞计算。

一方面，本发明提供一种培美曲塞二钠脂质体注射剂，其主要由以下重量配比的成分制成：

进一步优选地，本发明的培美曲塞二钠脂质体注射剂，主要由以下重量配比的成分制成：

优选地，二硬脂酰磷脂酰甘油的重量与二棕榈酰磷脂酰胆碱之间的重量比为1∶1-1∶8，更优选地，二硬脂酰磷脂酰甘油的重量与二棕榈酰磷脂酰胆碱之间的重量比为1∶8。

另一方面，本发明还提供一种培美曲塞二钠脂质体注射剂的制备方法，具体包括如下制备步骤：

（1）将二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇溶解于有机溶剂中，搅拌使其溶解；将上述溶液置于茄形瓶中，60℃水浴减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明薄膜；

（2）在氮气保护下，向瓶中加入含有培美曲塞二钠和PEG600的水溶液，搅拌，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，水化完全后在200bar到800bar做梯度均质4～6遍优选5遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得培美曲塞二钠脂质体；

（3）无菌条件下，将处方量的甘露醇溶于注射用水中，然后加入到培美曲塞二钠脂质体中，加注射用水定容，经0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，然后进行冻干，即得培美曲塞二钠脂质体注射剂。

上述所述的制备方法，其中步骤（1）中所述的有机溶剂选自乙醇、氯仿、二氯甲烷、甲醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、苯甲醇、叔丁醇、乙腈、正己烷中的一种或几种，优选体积比为2∶1的乙醇和叔丁醇的混合有机溶剂。

上述所述的制备方法，其中步骤（2）中在200bar到800bar做梯度均质5遍。

上述所述的制备方法，其中步骤（3）中所述的冻干的过程为：在-60~-75℃预冻2～4小时，接着在-40℃～-50℃冷冻16～18小时，再经12～18小时升华至20℃～25℃，最后在30℃～35℃干燥1～3小时。

另一优选方面，本发明还提供一种培美曲塞二钠脂质体注射剂的制备方法，具体包括如下制备步骤：

（1）将二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇溶解于体积比为2：1的乙醇和叔丁醇的混合有机溶剂中，搅拌使其溶解；将上述溶液置于茄形瓶中，60℃水浴减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明薄膜；

（2）在氮气保护下，向瓶中加入含有培美曲塞二钠和PEG600的水溶液，搅拌，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，水化完全后在200bar到800bar做梯度均质5遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得培美曲塞二钠脂质体；

（3）无菌条件下，将处方量的甘露醇溶于注射用水中，然后加入到培美曲塞二钠脂质体中，加注射用水定容，经0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，然后在-60~-75℃预冻2～4小时，接着在-40℃～-50℃冷冻16～18小时，再经12～18小时升华至20℃～25℃，最后在30℃～35℃干燥1～3小时，即得培美曲塞二钠脂质体注射剂。

有益效果

本发明的脂质体注射剂减少了毒副作用，提高了制剂产品质量，具有良好的制剂稳定性，冷冻过程中脂质体不会因脱水、融合、冰晶等发生破裂，长期储存后，脂质体同样保持良好的包封率和较低的渗漏率。

通过本发明方法制得的培美曲塞二钠脂质体注射剂，具有良好的包封率和较低的渗漏率，提高了培美曲塞二钠的溶解度和稳定性，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，疗效明显提高；并且制备方法简单，适合于工业化大生产。

附图说明

图1是实施例1、2、3及对比例1、2、3中制备的培美曲塞二钠脂质体注射剂的血药浓度-时间曲线。

其中：

具体实施方式

以下通过具体优选的实施例对本发明进行进一步说明。这些实施例仅是说明性的，并不应理解为对本发明的限制。

实施例1培美曲塞二钠脂质体注射剂的制备

所用成分及其重量如下：

采用如下工艺制备培美曲塞二钠脂质体注射剂：

（1）将70g二硬脂酰磷脂酰甘油、280g二棕榈酰磷脂酰胆碱和70g胆固醇溶于1000ml体积比为2∶1的乙醇和叔丁醇的混合有机溶剂中，搅拌使其溶解；将上述溶液置于茄形瓶中，60℃水浴减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明薄膜；

（2）在氮气保护下，向瓶中加入含有10g培美曲塞二钠（以培美曲塞计）和50gPEG600的水溶液5000ml，搅拌，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，水化完全后在200bar到800bar做梯度均质5遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得培美曲塞二钠脂质体；

（3）无菌条件下，将200g甘露醇溶于注射用水1000ml中，然后加入到培美曲塞二钠脂质体中，加注射用水定容，经0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，然后在-60℃预冻2小时，接着在-40℃冷冻16小时，再经12小时升华至20℃，最后在30℃干燥1小时进行冻干，即得100瓶培美曲塞二钠脂质体注射剂。

实施例2培美曲塞二钠脂质体注射剂的制备

所用成分及其重量如下：

采用如下工艺制备培美曲塞二钠脂质体注射剂：

（1）将80g二硬脂酰磷脂酰甘油、320g二棕榈酰磷脂酰胆碱和80g胆固醇溶于1000ml体积比为2∶1的乙醇和叔丁醇的混合有机溶剂中，搅拌使其溶解；将上述溶液置于茄形瓶中，60℃水浴减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明薄膜；

（2）在氮气保护下，向瓶中加入含有20g培美曲塞二钠（以培美曲塞计）和60gPEG600的水溶液5000ml，搅拌，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，水化完全后在200bar到800bar做梯度均质5遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得培美曲塞二钠脂质体；

（3）无菌条件下，将300g甘露醇溶于注射用水1000ml中，然后加入到培美曲塞二钠脂质体中，加注射用水定容，经0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，然后在-67℃预冻3小时，接着在-45℃冷冻17小时，再经15小时升华至22℃，最后在32℃干燥2小时进行冻干，即得100瓶培美曲塞二钠脂质体注射剂。

实施例3培美曲塞二钠脂质体注射剂的制备

所用成分及其重量如下：

采用如下工艺制备培美曲塞二钠脂质体注射剂：

（1）将100g二硬脂酰磷脂酰甘油、400g二棕榈酰磷脂酰胆碱和100g胆固醇溶于1000ml体积比为2：1的乙醇和叔丁醇的混合有机溶剂中，搅拌使其溶解；将上述溶液置于茄形瓶中，60℃水浴减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明薄膜；

（2）在氮气保护下，向瓶中加入含有50g培美曲塞二钠（以培美曲塞计）和100g PEG600的水溶液8000ml，搅拌，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，水化完全后在200bar到800bar做梯度均质5遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得培美曲塞二钠脂质体；

（3）无菌条件下，将500g甘露醇溶于注射用水1500ml中，然后加入到培美曲塞二钠脂质体中，加注射用水定容，经0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，然后在-75℃预冻4小时，接着在-50℃冷冻18小时，再经18小时升华至25℃，最后在35℃干燥3小时进行冻干，即得100瓶培美曲塞二钠脂质体注射剂。

对比例1-3培美曲塞二钠脂质体注射剂的制备

分别采用与实施例1-3中相同的生产工艺，将如下表1中所示的对比例1-3中的成分分别制成培美曲塞二钠脂质体注射剂：

表1对比例1-3中所用成分

其中，“/”表示未使用。

试验例1脂质体粒径的测定

室温条件下，取实施例1-3和对比例1-3中的培美曲塞二钠脂质体注射剂，置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态，结果示于下表2中。

表2脂质体粒径检测结果

从表2可知，实施例1-3制得的脂质体粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-3制得的脂质体粒径分布不均匀，形状不定，大小不一。

具体而言，即使在采用同样的生产工艺时，对比实施例1用二硬脂酰磷脂酰胆碱代替二棕榈酰磷脂酰胆碱，用PEG800代替PEG600；对比实施例2用二棕榈酰磷脂酰甘油代替二硬脂酰磷脂酰甘油，用海藻糖代替甘露醇，并减少PEG600的用量，其用量为本发明范围外的较低份量0.75份；对比实施例3不用PEG600，并用二硬脂酰磷脂酰胆碱代替二棕榈酰磷脂酰胆碱，用二棕榈酰磷脂酰甘油代替二硬脂酰磷脂酰甘油；实施例1-3中所得培美曲塞二钠脂质体的颗粒外观及其平均粒径分布均匀明显优于对比例1-3中所得的培美曲塞二钠脂质体。在对比例1-3中对比例3的粒径范围最大，说明脂质材料的组合选用具有重要影响。以上结果，说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得培美曲塞二钠脂质体的外观劣于本发明，粒径范围很大，影响释放均匀度。

试验例2包封率的测定

将实施例1-3和对比例1-3中制备的培美曲塞二钠脂质体以5000r/min的转速高速离心，离心20分钟，取上清液，用甲醇溶解，HPLC法测培美曲塞二钠含量，计算包封率，结果示于下表3中。

表3包封率测定结果

由表3可知，实施例1-3制备的脂质体制剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂质体制剂的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得脂质体的脂质体包封率低于本发明。在对比例1-3中对比例3的包封率最低，对比例2最高，说明PEG600对培美曲塞脂质体制剂的包封率优显著改进效果。

试验例3稳定性考察

将本发明实施例1-3制备的样品和上市注射用培美曲塞二钠冻干粉针（批号：20100526，江苏奥赛康药业股份有限公司）分别置于高温40℃、相对湿度75%的条件下 6个月，进行加速试验考察，实验结果示于下表4中。

表4加速试验结果

由表4可知，加速6月时，上市制剂和对比例1-3的含量降低，有关物质升高；而本发明的样品性状、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。

具体而言，对比实施例1-3也优于上市制剂，其中稳定性方面对比实施例3在对比实施例1-3中最差，说明脂质材料和PEG600的组合具有重要影响。

试验例4渗漏率试验

取实施例1-3和对比例1-3制备的样品，在室温条件下，分别于0天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封的药量比较，计算渗漏率，结果示于下表5中。

表5渗漏率试验结果

时间	实施例1	实施例2	实施例3	对比例1	对比例2	对比例3
							0天	0.31%	0.34%	0.33%	0.90%	0.87%	0.93%
30天	0.34%	0.38%	0.39%	1.39%	1.56%	1.81%
							60天	0.44%	0.50%	0.49%	3.65%	3.34%	4.34%
90天	0.50%	0.57%	0.56%	6.41%	4.57%	7.62%
							180天	0.68%	0.74%	0.78%	7.88%	6.39%	11.77%

由表5可知，长期储存时，本发明实施例1-3中制备的培美曲塞二钠脂质体注射剂渗漏率变化不大，而对比例1-3中制备的注射剂渗漏率逐渐增大，脂质体渗漏严重，其中稳定性方面对比实施例3在对比实施例1-3中最差，说明脂质材料和PEG600的组合具有重要影响，这说明本发明制备的培美曲塞二钠脂质体注射剂具有更高的稳定性，获得了意外的技术效果。

试验例5血药浓度的测定

将70只大鼠随机分成7组，每组分别注射给药实施例1、2、3及对比例1、2、3中制备的注射剂，以及市售培美曲塞二钠注射剂（批号：20100526，江苏奥赛康药业股份有限公司），注射量为0.5g培美曲塞二钠（以培美曲塞计）。给药后分别于0.5h、1h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、16h和24h，采血，血样经处理后，以HPLC-MS法测定血药浓度。绘制实施例1、2、3中制备的培美曲塞二钠脂质体注射剂、对比例1-3中制备的培美曲塞二钠脂质体注射剂的血药浓度与时间的关系曲线，示于附图1中，由于市售培美曲塞二钠注射剂代谢迅速，血药浓度有效时间短，没有缓释作用，故没有在图1中给出其常见的血药曲线。

由图1可知，本发明具有缓释效果和生物利用度高，与对比例1、2、3中制备的培美曲塞二钠脂质体注射剂相比，本发明实施例制备的培美曲塞二钠脂质体注射剂具有以下优点：在体内的消除速度减缓，在体循环中分布时间延长，达到了部分缓释效果，生物利用度增加。

上述对比实施例从不同方面证实了本发明实施例1-3中制备的脂质体注射剂具有优异的制剂学特征，取得了意外的技术效果，解决了制剂学技术问题，证实了本发明组分之间彼此具有协同作用。

工业实用性

由上述实施例以及实验例的结果可知，本发明的培美曲塞二钠脂质体具有良好的外观，颗粒小，粒径均匀，包封率高，稳定性高，渗漏率低，在体内的停留时间长，生物利用度高，具有良好的工业应用价值。

以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换，这些均因落入本发明的保护范围内。

本申请中提及或引用的各个参考文献，在此全文引入作为参考。

Claims

1.一种培美曲塞二钠脂质体注射剂，其特征在于脂质体主要由以下重量配比的成分制成：

2.根据权利要求1所述的培美曲塞二钠脂质体注射剂，其特征在于主要由以下重量配比的成分制成：

3.根据权利要求2所述的培美曲塞二钠脂质体注射剂，其特征在于主要由以下重量配比的成分制成：

4.根据权利要求1-3中任一项所述的培美曲塞二钠脂质体注射剂，其特征在于其中所述的二硬脂酰磷脂酰甘油的重量与二棕榈酰磷脂酰胆碱之间的重量比为1∶1-1∶8，优选地，二硬脂酰磷脂酰甘油的重量与二棕榈酰磷脂酰胆碱之间的重量比为1∶4。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的培美曲塞二钠脂质体注射剂，其特征在于注射用培美曲塞二钠（以培美曲塞计）的规格为0.1g、0.2或0.5g。

6.一种制备权利要求1-5任一项所述的培美曲塞二钠脂质体注射剂的方法，其特征在于包括如下步骤：

（2）在氮气保护下，向瓶中加入含有培美曲塞二钠和PEG600的水溶液，搅拌，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，水化完全后在500bar到800bar做梯度均质4～6遍优选5遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得培美曲塞二钠脂质体；

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，其中步骤（1）中所述的有机溶剂选自乙醇、氯仿、二氯甲烷、甲醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、苯甲醇、叔丁醇、乙腈、正己烷中的一种或几种，优选体积比为2：1的乙醇和叔丁醇的混合有机溶剂。

8.根据权利要求6所述的培美曲塞二钠脂质体注射剂的制备方法，其特征在于步骤（3）中所述的冻干的过程为：在-60~-75℃预冻2～4小时，接着在-40℃～-50℃冷冻16～18小时，再经12～18小时升华至20℃～25℃，最后在30℃～35℃干燥1～3小时。

9.根据权利要求1-5任一项所述的培美曲塞二钠脂质体注射剂在制备抗肿瘤药中的应用。