CN103028048A - 一种石斛超微粉制备工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种石斛鲜品的加工方法，具体涉及一种石斛超微粉制备工艺。一种石斛超微粉制备工艺，包括以下步骤：选料、研磨打浆、预冻、冷冻干燥、打微粉。本发明通过加水研磨后预冻，将石斛药材在升华脱水前先经冻结，形成稳定“骨架”，后经低温负压脱水干燥，最后通过振动式超微粉碎研磨混炼机制备成石斛超微粉。通过本发明制备的石斛超微粉质量稳定，可在常温下长期保存，其复水性极好，能迅速吸水复原，其色泽、品质与鲜品基本相同。

Description

一种石斛超微粉制备工艺
技术领域
本发明涉及一种石斛鲜品的加工方法，具体涉及一种石斛超微粉制备工艺。
背景技术
现有技术在炮制石斛这一味中药时，通常是将其制成浸膏或者制成铁皮枫斗干品。现代研究表明，传统的炮制方法将损失不少的活性成分。
申请号为2004100173789的中国发明专利，公开了一种石斛鲜品的加工方法。该加工方法包括下列步骤：①将新鲜的石斛至于臭氧水中浸泡20～40分钟，然后用清水漂洗，漂洗完毕后将其晾干；②将晾干的石斛通过真空冷冻粉碎。申请号为2012100129901的中国发明专利，公开了一种石斛超微粉的制备方法，该方法具体步骤如下：①将石斛鲜品茎段洗净，沥干水分；②将沥干水分的石斛至于冷冻干燥设备中，在-30±5℃预冻1～3小时，当温度下降到-35℃时，恒温2～4小时；③在低温的情况下，将干燥过的石斛用纳米机械粉碎机粉碎，制备成纳米颗粒；颗粒尺寸95%分布在100～500纳米之间，达到全破壁，即得超微粉。显然，现有技术已经发展到了将石斛鲜品粉碎后进行冷冻干燥。然在冷冻干燥技术领域，目前，我国真空冷冻干燥设备趋于完善，但与发达国家相比，该技术基础理论的研究显得滞后和薄弱，阻碍了技术应用水平的提高。在申请号为2004100173789的中国发明专利中，冷冻干燥技术被直接地应用于石斛的超微粉制备，通过该方法制备得到的石斛超微粉，其活性成分相比传统的中药炮制方法并没有多大的提高。在申请号为2012100129901的中国发明专利中，冷冻干燥前的石斛鲜品是干燥的，冷冻干燥之前进行一次预冻，冷冻干燥的时间大约在2～4小时，冷冻干燥后将干燥过的石斛用纳米机械粉碎机粉碎。该方法相比现有技术在保留石斛活性成分方面有了极大的提高，但其复水性有待提高，迅速吸水复原后，其色泽、品质与鲜品基本差异较大。
发明内容
本发明的目的是为解决现有技术中石斛超微粉的活性成分保留不够高，石斛超微粉复水性不高的技术问题，提供一种石斛超微粉制备工艺。该方法能最大程度的保留石斛中的活性成分，而且制得的石斛超微粉复水性也得到极大的提高。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
一种石斛超微粉制备工艺，包括以下步骤：
①选料：取石斛，剪切成1～2mm的段；
②研磨打浆：加蒸馏水后研磨，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的0.8～1.5倍；
③预冻：预冻以冻成固体为标准，并且维持冻成的固体状态5～10小时；
④冷冻干燥：冷冻干燥的控制条件为-45～-50℃下，时间16～120小时；
⑤打微粉：采用振动式超微粉碎研磨混炼机进行研磨成微粉的操作。
作为上述技术方案的优选，步骤②中，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的0.8～1.2倍；步骤④中，冷冻干燥的控制条件为-45～-50℃下，时间16～32小时。
作为上述技术方案的优选，步骤②中，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的0.9～1.1倍；步骤④中，冷冻干燥的控制条件为-45～-50℃下，时间18～26小时。
作为上述技术方案的优选，步骤②中，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的0.95～1.15倍；步骤④中，冷冻干燥的控制条件为-45～-50℃下，时间20～24小时。
作为上述技术方案的优选，步骤②中，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的1.05～1.15倍；步骤④中，冷冻干燥的控制条件为-45～-50℃下，时间22～24小时。
石斛呈圆柱形或扁圆柱形，长约30cm，直径O.4～1.2cm。表面黄绿色，光滑或有纵纹，节明显，色较深，节上有膜质叶鞘。肉质多汁，易折断。气微，味微苦而回甜，嚼之有黏性。
中药在传统的炮制加工过程中，植物蛋白、多糖等有效成分会受到破坏。本发明通过加水研磨后预冻，将石斛药材在升华脱水前先经冻结，形成稳定“骨架”，后经低温负压脱水干燥，最后通过振动式超微粉碎研磨混炼机制备成石斛超微粉。通过本发明制备的石斛超微粉质量稳定，可在常温下长期保存，其复水性极好，能迅速吸水复原，其色泽、品质与鲜品基本相同。另外，通过体外溶出实验，可知单位质量下的药材，本发明方法制备的石斛超微粉比炮制后干燥石斛，含更多的有效成分。实验过程中还发现，本发明方法制备的石斛超微粉，经吸少量水复原后，呈粘稠状，而采用如申请号为2012100129901的中国发明专利的方法制备的石斛超微粉，用等量水复原后粘稠程度明显不足。可知通过本发明的方法，能更大程度地保留了石斛药材的活性成分。通过药效学研究发现，本发明方法制备的石斛超微粉，其较小剂量的药效可以等同于干石斛浸膏临床用药剂量的药效。
本发明具有以下技术效果：
（1）采用本发明方法制备的石斛超微粉，能够最大程度地保留石斛中的活性成分；
（2）采用本发明方法制备的石斛超微粉，其较小剂量的药效可以等同于干石斛浸膏临床用药剂量的药效；
（3）采用本发明方法制备的石斛超微粉，质量稳定，可在常温下长期保存；
（4）采用本发明方法制备的石斛超微粉，其复水性极好，能迅速吸水复原，其色泽、品质与鲜品基本相同。
具体实施方式
本具体实施方式仅仅是对本发明的解释，并不是对本发明的限制，本领域技术人员可以在阅读了本发明的说明书之后所作出的任何改变只要在本发明的权利要求所限定的范围之内，都将受到专利法的保护。
实施例一
一种石斛超微粉制备工艺，包括以下步骤：
①选料：取石斛，剪切成1～2mm的段；
②研磨打浆：加蒸馏水后研磨，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的0.8倍；
③预冻：预冻以冻成固体为标准，并且维持冻成的固体状态5小时；
④冷冻干燥：冷冻干燥的控制条件为-45℃下，时间16小时；
⑤打微粉：采用振动式超微粉碎研磨混炼机进行研磨成微粉的操作。
实施例二
一种石斛超微粉制备工艺，包括以下步骤：
①选料：取石斛，剪切成1～2mm的段；
②研磨打浆：加蒸馏水后研磨，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的0.85倍；
③预冻：预冻以冻成固体为标准，并且维持冻成的固体状态6小时；
④冷冻干燥：冷冻干燥的控制条件为-45℃下，时间18小时；
⑤打微粉：采用振动式超微粉碎研磨混炼机进行研磨成微粉的操作。
实施例三
一种石斛超微粉制备工艺，包括以下步骤：
①选料：取石斛，剪切成1～2mm的段；
②研磨打浆：加蒸馏水后研磨，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的0.9倍；
③预冻：预冻以冻成固体为标准，并且维持冻成的固体状态6小时；
④冷冻干燥：冷冻干燥的控制条件为-46℃下，时间22小时；
⑤打微粉：采用振动式超微粉碎研磨混炼机进行研磨成微粉的操作。
实施例四
一种石斛超微粉制备工艺，包括以下步骤：
①选料：取石斛，剪切成1～2mm的段；
②研磨打浆：加蒸馏水后研磨，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的0.95倍；
③预冻：预冻以冻成固体为标准，并且维持冻成的固体状态6小时；
④冷冻干燥：冷冻干燥的控制条件为-46℃下，时间26小时；
⑤打微粉：采用振动式超微粉碎研磨混炼机进行研磨成微粉的操作。
实施例五
一种石斛超微粉制备工艺，包括以下步骤：
①选料：取石斛，剪切成1～2mm的段；
②研磨打浆：加蒸馏水后研磨，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的1.0倍；
③预冻：预冻以冻成固体为标准，并且维持冻成的固体状态7小时；
④冷冻干燥：冷冻干燥的控制条件为-47℃下，时间28小时；
⑤打微粉：采用振动式超微粉碎研磨混炼机进行研磨成微粉的操作。
实施例六
一种石斛超微粉制备工艺，包括以下步骤：
①选料：取石斛，剪切成1～2mm的段；
②研磨打浆：加蒸馏水后研磨，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的1.1倍；
③预冻：预冻以冻成固体为标准，并且维持冻成的固体状态8小时；
④冷冻干燥：冷冻干燥的控制条件为-48℃下，时间32小时；
⑤打微粉：采用振动式超微粉碎研磨混炼机进行研磨成微粉的操作。
实施例七
一种石斛超微粉制备工艺，包括以下步骤：
①选料：取石斛，剪切成1～2mm的段；
②研磨打浆：加蒸馏水后研磨，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的1.2倍；
③预冻：预冻以冻成固体为标准，并且维持冻成的固体状态8小时；
④冷冻干燥：冷冻干燥的控制条件为-48℃下，时间36小时；
⑤打微粉：采用振动式超微粉碎研磨混炼机进行研磨成微粉的操作。
实施例八
一种石斛超微粉制备工艺，包括以下步骤：
①选料：取石斛，剪切成1～2mm的段；
②研磨打浆：加蒸馏水后研磨，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的1.4倍；
③预冻：预冻以冻成固体为标准，并且维持冻成的固体状态8小时；
④冷冻干燥：冷冻干燥的控制条件为-49℃下，时间48小时；
⑤打微粉：采用振动式超微粉碎研磨混炼机进行研磨成微粉的操作。
实施例九
一种石斛超微粉制备工艺，包括以下步骤：
①选料：取石斛，剪切成1～2mm的段；
②研磨打浆：加蒸馏水后研磨，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的1.4倍；
③预冻：预冻以冻成固体为标准，并且维持冻成的固体状态10小时；
④冷冻干燥：冷冻干燥的控制条件为-50℃下，时间60小时；
⑤打微粉：采用振动式超微粉碎研磨混炼机进行研磨成微粉的操作。
实施例十
一种石斛超微粉制备工艺，包括以下步骤：
①选料：取石斛，剪切成1～2mm的段；
②研磨打浆：加蒸馏水后研磨，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的1.5倍；
③预冻：预冻以冻成固体为标准，并且维持冻成的固体状态10小时；
④冷冻干燥：冷冻干燥的控制条件为-50℃下，时间120小时；
⑤打微粉：采用振动式超微粉碎研磨混炼机进行研磨成微粉的操作。
对比例
①将石斛鲜品茎段洗净，沥干水分；②将沥干水分的石斛至于冷冻干燥设备中，在-30±5℃预冻1～3小时，当温度下降到-35℃时，恒温2～4小时；③在低温的情况下，将干燥过的石斛用纳米机械粉碎机粉碎，制备成纳米颗粒；颗粒尺寸95%分布在100～500纳米之间，达到全破壁，即得超微粉。
 
供试品溶液制备：称取实施例五制备的石斛超微粉末2.0g, 用适量氨水润湿后加塞密闭放置30min, 加入氯仿10.0mL后称重。80℃水浴上热回流2h, 冷却后补足氯仿至原重,过滤。吸取续滤液1.0mL于10mL容量瓶中,以氯仿定容至刻度，再从中吸取2.0mL置25mL容量瓶中以氯仿定容, 摇匀作为样品液。
稳定性试验
取上述供试品溶液0、2、4、8、24、48h测定吸光度。计算相对标准偏差(RSD)，以考察该分析方法中样品的稳定性。
Figure 2012105690593100002DEST_PATH_IMAGE001
结果显示样品稳定性相对标准偏差（RSD）为2.52%，表明该样品在48h内稳定性好。
重现性实验
取供试品溶液平行制备6份，依次测定并计算含量，并计算其相对标准偏差，验证样品溶液批次差异是否在可信范围内。
Figure 499096DEST_PATH_IMAGE002
结果显示6批次样品重现性相对标准偏差为3.67%，各批次间差异性较小。
冷冻干燥石斛体外溶出度研究
分别取实施例六鲜干燥石斛超微粉10g、粗粉10g、浸膏100ml(相当于10g药材)精密称定，投入溶出仪中，按照中国药典(2010年版附录)溶出度测定浆法，以500ml水为介质，转速100r/min，浸膏组为400ml水，温度为(37±0.5)℃，分别于10、20、30、60、90、120min取样5mL，同时向溶出杯中补充相同温度和体积的水，滤过，取续滤液2mL至分液漏斗中，加氯仿至5.0mL, 再加入pH 值4.5的缓冲溶液2.5mL和0.04% 的溴甲酚绿溶液0.5mL后剧烈振摇3min,静置30m in, 用氯仿浸泡处理并用干燥的脱脂棉过滤, 取续滤液3.0mL,加0.01mol/L的NaOH无水乙醇溶液0.5mL,分别置于10ml容量瓶中，过微孔滤膜（0.45μm）。
按照石斛高效液相法中供试品配备的方法，10g石斛以上相同条件先在蒸馏水中超声处理，再经萃取，在615nm下，测得紫外吸光度A1=0.1543
在不同时间段取样，吸光度/A1，计算冷冻干燥石斛超微粉、粗粉及浸膏的溶出累积百分率。
Figure 2012105690593100002DEST_PATH_IMAGE003
本发明在实验设计过程中，以石斛主要成分石斛碱为指标，衡量其体外溶出度，实验中分别于10,20,30,60,90,120,进行溶出度的测定，表明超微粉在120min基本溶出，通过测定，比较与浸膏的溶出率，给临床药物用量做个参考。
石斛超微粉药效学研究
①小鼠免疫低下模型的建立
腹腔注射环磷酰胺50mg/kg，连续注射3天，制备免疫低下的小鼠模型
②给药剂量
石斛超微粉临床剂量组:              90mg/100g               
石斛超微粉1/2临床剂量组：          45mg/100g      
石斛超微粉1/4临床剂量组：          22.5mg/100g         
石斛超微粉1/6临床剂量组：          15mg/100g  
石斛普通粉组(过80目筛)：           90mg/100g         
（干）石斛浸膏组：                    90mg/100g(相当于浸膏浓度为45mg/ml,每只灌胃量为0.4ml)   
（冷冻干燥）石斛浸膏组：                  90mg/100g(相当于浸膏浓度为45mg/ml,每只灌胃量为0.4ml)
③分组与给药
对免疫力低下小鼠非特异性免疫功能的影响
　取108只小鼠,雌雄各半，随机分为9组,空白组和模型组给予0.9%生理盐水0.4ml，石斛超微粉临床剂量组,石斛超微粉1/2临床剂量组，石斛超微粉1/4临床剂量量组，石斛超微粉1/6临床剂量量组，石斛普通粉组，干石斛浸膏组，冷冻干燥石斛浸膏组，给药第1 d除空白组外每只小鼠腹腔注射环磷酰胺(Cy) 50 mg/kg,连续3 d,制备免疫功能低下的小鼠模型。连续给药10d,测各组的脾脏指数和胸腺指数。
④检测指标
脾脏指数（mg/10g）=（脾脏重量×1000/小鼠体重）×10 
胸腺指数（mg/10g）=（胸腺重量×1000/小鼠体重）×10 
⑤实验结果
Figure 416237DEST_PATH_IMAGE004
结果显示：免疫低下模型组与空白比较，胸腺指数明显低于空白组，造模成功，空白组的脾脏指数过小，考虑是实验称量误差等造成的影响，与冷冻干燥石斛浸膏比较，各个冷冻干燥石斛超微粉剂量的胸腺指数均高于浸膏组，实验得1/2临床剂量组、1/4临床剂量组、1/6临床剂量组的胸腺指数相近，所以没有增加用药剂量的必要，其中1/6临床剂量组的胸腺指数和脾脏指数与干浸膏的相近，即两者药效相近，与模型组比较，脾脏系数、胸腺系数比较有显著性差异(P<0．05)；上述结果表明，冷冻干燥石斛具有能增加正常小鼠免疫器官的重量，其中1/6临床剂量组最接近于干浸膏的疗效,干浸膏与冷冻干燥浸膏的药效相差不大。
含水率测定
将新鲜石斛，切成小段，用搅拌机加水研磨，研磨后预冻，真空冷冻干燥机中干燥，以含水量为指标，对干燥时间进行考察,在16h后，水分开始达到5%以下，结果见下表。
Figure 2012105690593100002DEST_PATH_IMAGE005
复水性测定
取实施例二和对比例的石斛超微粉各5克，将其分别均匀平摊地置于载玻片A和载玻片B上，各滴上20℃的纯水一滴，观察现象。试验发现，实施例二的石斛超微粉迅速吸水复原，呈粘稠状，其色泽、品质与鲜品基本相同，水被吸收后分布均匀；对比例的石斛超微粉，也能吸水复原，起先部分呈粘稠状，部分粉末漂浮在水滴上；然后水滴逐渐消失，水滴消失后，部分粉末呈润湿状，部分粉末呈糊状，部分呈粘稠状，以水滴为中心向外其含水率逐渐降低，即水被吸收后分布不均匀，以水滴为中心依次为润湿状、粘稠状、糊状，其吸水能力显著偏低，其色泽、品质与鲜品有明显差异。

Claims (9)

1.一种石斛超微粉制备工艺，包括以下步骤：
①选料：取石斛，剪切成1～2mm的段；
②研磨打浆：加蒸馏水后研磨，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的0.8～1.5倍；
③预冻；
④冷冻干燥：冷冻干燥的控制条件为-45～-50℃下，时间16～120小时；
⑤打微粉：采用振动式超微粉碎研磨混炼机进行研磨成微粉的操作。
2.根据权利要求1所述的一种石斛超微粉制备工艺，其特征在于：所述石斛为鲜石斛。
3.根据权利要求1所述的一种石斛超微粉制备工艺，其特征在于：步骤③中，预冻以冻成固体为标准，并且维持冻成的固体状态5～10小时，预冻温度-8～-18℃。
4.根据权利要求1所述的一种石斛超微粉制备工艺，其特征在于：步骤②中，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的0.8～1.2倍；步骤④中，冷冻干燥的控制条件为-45～-50℃下，时间16～32小时。
5.根据权利要求1所述的一种石斛超微粉制备工艺，其特征在于：步骤②中，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的0.9～1.1倍；步骤④中，冷冻干燥的控制条件为-45～-50℃下，时间18～26小时。
6.根据权利要求1所述的一种石斛超微粉制备工艺，其特征在于：步骤②中，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的0.95～1.15倍；步骤④中，冷冻干燥的控制条件为-45～-50℃下，时间20～24小时。
7.根据权利要求1所述的一种石斛超微粉制备工艺，其特征在于：步骤②中，蒸馏水的加入量为石斛原料质量的1.05～1.15倍；步骤④中，冷冻干燥的控制条件为-45～-50℃下，时间22～24小时。
8.根据权利要求1或2所述的一种石斛超微粉制备工艺，其特征在于：步骤⑤打微粉具体为，采用振动式超微粉碎研磨混炼机进行研磨成微粉的操作，使得微粉粒径95%以上达到10μm以下。
9.根据权利要求1或2所述的一种石斛超微粉制备工艺，其特征在于：所述石斛超微粉的含水率低于5%。
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