CN103012359A - (2′s)-南五味子木质素j及其制备方法 - Google Patents

(2′s)-南五味子木质素j及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103012359A
CN103012359A CN2012105600101A CN201210560010A CN103012359A CN 103012359 A CN103012359 A CN 103012359A CN 2012105600101 A CN2012105600101 A CN 2012105600101A CN 201210560010 A CN201210560010 A CN 201210560010A CN 103012359 A CN103012359 A CN 103012359A
Authority
CN
China
Prior art keywords
medicinal extract
compound
organic solvent
formula
elutriant
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2012105600101A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103012359B (zh
Inventor
何风雷
杨能英
郭钟慧
钟连瑜
王冰
苏赟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GUANGZHOU CHENLIJI PHARMACEUTICAL FACTORY
Original Assignee
GUANGZHOU CHENLIJI PHARMACEUTICAL FACTORY
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to CN201110461090.0 priority Critical
Priority to CN201110461090 priority
Priority to CN2011104610900 priority
Application filed by GUANGZHOU CHENLIJI PHARMACEUTICAL FACTORY filed Critical GUANGZHOU CHENLIJI PHARMACEUTICAL FACTORY
Priority to CN201210560010.1A priority patent/CN103012359B/zh
Publication of CN103012359A publication Critical patent/CN103012359A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103012359B publication Critical patent/CN103012359B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Abstract

本发明公开了一种(2′S)-南五味子木质素J及其制备方法。该化合物的结构式如式I所示,其制备方法包括下述步骤:1)将粉碎后的药材黑老虎Kadsura Coccinea用有机溶剂进行提取,收集提取液并浓缩,得到浸膏1;2)向浸膏1中加入热水并超声,过滤,收集滤渣;将滤渣用三氯甲烷溶解,过滤,收集三氯甲烷液并浓缩,得到浸膏2;3)将浸膏2用石油醚进行洗涤至石油醚洗涤液接近无色,并挥干浸膏2中的石油醚;4)将步骤3)处理后的浸膏2进行硅胶柱层析,分段收集洗脱液,合并含式I所示化合物的洗脱液,挥干溶剂,重结晶得到目标化合物。体外药效实验证明,(2′S)-南五味子木质素J对肝癌细胞具有较好的抑制作用。

Description

(27 S)-南五味子木质素J及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种(2' S)-南五味子木质素J及其制备方法。
背景技术
[0002] 黑老虎为五味子科南五味子属植物冷饭团Kadsura coccinea(Lem. )A. C. Smith的干燥根,别名过山龙、大钻、臭饭团、钻地风等,主要分布于我国江西、湖南、福建、广西、四川、云南等地。味辛、微苦、性温。具有行气活血,祛风止痛的功效,主要用于治疗风湿痹痛、跌打损伤、痛经、脘腹疼痛等。现代医学研究表明黑老虎具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抗肝纤维化等作用。黑老虎的主要生理活性成分为木脂素和三萜酸。其中木脂素结构类型较多,立体化学复杂,而且具有抗肝炎、抗艾滋病毒和抗肿瘤等活性。
发明内容
[0003] 本发明的目的是提供一种联苯环辛烯类木脂素化合物及其制备方法。
[0004] 本发明所提供的化合物的结构式如式I所示:
[0005]
Figure CN103012359AD00041
[0006](式 I)
[0007] 其中文名为(2' S)-南五味子木质素J;英文名为(2' S)-KadsuralignanJ;系统名为(7R,8R,8 ' R, Sax) -3 ' , 7-dihydroxy-3,4 1 ,5 1 -trimethoxy-4,5-methylenedioxy-2, 2' -cyclolignan。
[0008] 式I所示化合物是从中药黑老虎中提取分离得到的,具体方法包括下述步骤:
[0009] I)将粉碎的黑老虎根木部用有机溶剂或有机溶剂的水溶液进行提取,收集提取液并浓缩得到浸膏,记为浸膏I;
[0010] 或将粉碎的黑老虎根皮部加水蒸馏,弃去挥发油,水提液过滤,分别收集滤液和滤渣;将所述滤液浓缩得到浸膏;将所述滤渣用有机溶剂或有机溶剂的水溶液进行提取,收集提取液并浓缩得到浸膏;合并所述浸膏得到浸膏I;
[0011] 或将粉碎的黑老虎根皮部加水蒸馏,弃去挥发油,水提液过滤,分别收集滤液和滤渣;将所述滤液浓缩得到浸膏;将所述滤渣和粉碎的黑老虎根木部混合用有机溶剂或有机溶剂的水溶液进行提取,收集提取液并浓缩得到浸膏;合并所述浸膏得到浸膏I;
[0012] 2)向所述浸膏I中加入90°C以上的热水并超声分散,过滤,收集滤渣;将滤渣用三氯甲烷溶解,过滤,收集三氯甲烷液并浓缩,得到浸膏2 ;
[0013] 3)将浸膏2用石油醚进行洗涤至石油醚洗涤液接近无色,并挥干浸膏2中的石油醚;
[0014] 4)将步骤3)处理后的浸膏2进行硅胶柱层析,收集含式I所示化合物的洗脱液,挥干溶剂,得到式I所示化合物。
[0015] 其中,步骤I)中所述有机溶剂为乙醇、丙酮或甲醇,所述有机溶剂的水溶液中有机溶剂的体积含量为50-95% ;所述黑老虎根木部与有机溶剂或有机溶剂的水溶液的配比为lg: (4-20)ml ;所述滤渣与有机溶剂或有机溶剂的水溶液的配比为Ig : (4-20)ml ;所述滤渣和粉碎的黑老虎根木部的混合物与有机溶剂或有机溶剂的水溶液的配比为 Ig : (4-20)ml;所述提取为回流提取,所述回流提取至少进行2次,每次提取的时间为1-5小时。
[0016] 对粉碎的黑老虎根皮部加水蒸馏时,粉碎的黑老虎皮部与水的配比可为Ikg : (3000-20000)ml ο
[0017] 步骤2)中所述浸膏I与热水的配比为Ig : (l_4)ml。所述滤渣与三氯甲烷的配比为 Ig : (l-10)ml。
[0018] 步骤4)中所述硅胶柱层析的洗脱条件为:以石油醚和乙醚体积比为(2 : 1)-(4 : I)的混合溶剂为洗脱剂进行等度洗脱;
[0019] 步骤4)中进行硅胶柱层析时,分段收集洗脱液,将洗脱液用薄层色谱法或高效液相色谱法检测,合并含式I所示化合物的洗脱液。
[0020] 其中,所述薄层色谱法检测的条件如下:用收集的洗脱液点样,采用硅胶GF254薄层板,以石油醚(沸程30〜60°C)_甲酸乙酯-甲酸体积比为15 : 5 : I的混合液的上层溶液为展开剂,合并Rf值O. 60〜O. 70的洗脱液。
[0021] 所述高效液相色谱法检测的色谱条件如下:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱;流动相为甲醇-水体积比为80 : 20的混合溶剂或乙腈-水体积比为70 : 30的混合溶剂;检测波长为214nm,合并保留时间t为16〜17min的洗脱液。
[0022] 为了得到纯度较高的式I化合物,所述方法还包括对步骤4)得到的式I所示化合物进行纯化的步骤,具体方法如下:将式I所示化合物进行硅胶柱层析,分段收集洗脱液,将洗脱液用高效液相色谱法检测,合并式I所示化合物的纯度大于90%的洗脱液,挥干溶齐U,得到纯化后的式I所示化合物;
[0023] 在纯化步骤中硅胶柱层析的洗脱条件为:以石油醚和乙醚体积比为(5 :1)〜(20 : I)的混合溶剂为洗脱剂进行等度洗脱。
[0024] 此外,为了进一步提高目的产物的纯度,还可对纯化的产物进行重结晶。所采用的溶剂为乙醚或石油醚和乙醚体积比为(50 : 50)-(O : 100)的混合溶剂。
[0025] 采用本发明方法提取分离的化合物,经结构鉴定其确为目标化合物(2' S)-南五味子木质素。纯度可达98%以上,且提取率可达到50%以上。
[0026] 本发明的再一个目的是提供上述(2' S)-南五味子木质素J的应用。
[0027] 本发明所提供的(2' S)-南五味子木质素J的应用包括两方面:1)在制备真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂中的应用;2)制备预防和/或治疗肿瘤的产品中的应用。
[0028] 所述广品可为药品和/或保健品。[0029] 在应用I)中,所述真核生物为哺乳动物;所述肿瘤细胞为癌细胞;所述癌细胞可为肝癌细胞。所述肝癌细胞具体包括人肝癌细胞SMMC-7721、H印G2等。
[0030] 在应用2)中,所述肿瘤为癌;所述癌为肝癌。
[0031] 本发明还保护一种真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂,它的有效成分为(2' S)-南五味子木质素J。
[0032] 此外,以(2' S)-南五味子木质素J为有效成分制备的预防和/或治疗肿瘤的药物,也属于本发明的保护范围。
[0033] 所述药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织;或是被其他物质混合或包裹后导入机体。 [0034] 需要的时候,在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
[0035] 用(2' S)-南五味子木质素J制备的预防和/或治疗肿瘤的药物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
[0036] 体外药效实验证明,本发明提供的化合物(2' S)-南五味子木质素J对肝癌细胞具有较好的抑制作用。
附图说明
[0037] 图1. MTT法检测化合物{2, S)-南五味子木质素J作用48h时对SMMC-7721细胞的生长抑制作用。
[0038] 图2. MTT法检测化合物(2' S)-南五味子木质素J作用48h时对!fepG2细胞的生长抑制作用。
具体实施方式
[0039] 下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明,但本发明并不局限于此。
[0040] 下述实施例中所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法;所述试剂和材料,如无特殊说明,均可从商业途径获得。
[0041] 下述实施例中所用的药材黑老虎符合《广东省中药材标准》(第一册)2004版第188页黑老虎项下的有关规定。投料前,通过鉴定,药材实物与名称相符,质量符合标准。药材黑老虎是指黑老虎的干燥根,其包括黑老虎根木部和根皮部。
[0042] 实施例1、提取分离(2' S)-南五味子木质素J
[0043] 一、制备方法:
[0044] 取粉碎的黑老虎木部(过二号筛)2. OKg,加体积浓度为95%乙醇12000ml回流提取2次,每次2小时,过滤,合并滤液,回收乙醇,得浸膏I (1178g)。向所得浸膏I中加2000ml热水(90°C以上),超声分散10分钟(超声功率300W,频率50kHz),过滤,得沉淀。用三氯甲烷4000ml将沉淀溶解,超声分散10分钟(超声功率300W,频率50kHz),粗滤,去掉较大块的滤渣,滤液离心10分钟,去掉溶液上层漂浮物,再过滤,得三氯甲烷液,回收三氯甲烷,得浸膏2(65. Sg)。将浸膏2用适量石油醚(沸程60〜90°C)反复多次洗涤至石油醚液近无色,挥掉石油醚,加适量三氯甲烷将浸膏2溶解,加入25g硅胶(粒度:200目〜300目)拌样,装样品柱,通过制备色谱硅胶柱(内径为3cm,柱高为45cm,硅胶粒度为200目〜300目)进行硅胶柱层析,溶剂洗脱条件为:洗脱剂为石油醚(沸程60〜90°C):乙醚=2 : I (v/v),按体积收集洗脱液,每IOOml为I个洗脱组份,共收集30个洗脱组份。每个组份通过TLC检测,合并Rf值约O. 65的洗脱组份,回收溶剂,得浸膏3,再加适量三氯甲烷将浸膏3(11. 2g)溶解,加入20g硅胶拌样,装样品柱,通过制备色谱硅胶柱(内径为3cm,柱高为45cm,硅胶粒度为300目〜400目)进行硅胶柱层析,溶剂洗脱条件为:洗脱剂为石油醚(沸程60〜90°C ):乙醚=7 : I (v/v),按体积收集洗脱液,每IOOml为I个洗脱组份,共收集20个洗脱组份,每个组份通过HPLC检测,合并保留时间t为(16〜17min)处峰面积相对较大(纯度大于90%)的洗脱组份,回收溶剂,得浸膏4。用乙醚或石油醚(沸程60〜90°C)_乙醚(I : 1,v/v)的混合溶剂对浸膏4反复重结晶,得到纯度在98%以上的 式I化合物即(2' S)-南五味子木质素J。结晶余液还可以继续进行硅胶柱层析,洗脱条件同上。按照上述提取分离方法得到(2' S)-南五味子木质素J的纯品约为3. 06g,其提取率达到53%。
[0045] 上述TLC检测方法如下:
[0046] 直接用收集液点样,点于硅胶GF254薄层板上,以石油醚(沸程30〜60°C )_甲酸乙酯-甲酸(15 : 5 : 1,v/v/v)放置后的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯(254nm)下检视。在Rf值约O. 65处可以看到很明显的荧光斑点。将符合上述条件的洗脱组分合并。
[0047] 上述HPLC检测方法如下:
[0048] 色谱条件:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱;流动相为甲醇-水(80 : 20,v/v)或者乙腈-水(70 : 30, v/v);检测波长为214nm。
[0049] 供试液制备:分别从每组份中吸取1ml,置蒸发皿中,挥干溶剂,用甲醇2ml溶解,滤过,即得。
[0050] 测定法:分别精密吸取供试品溶液5 μ 1,注入液相色谱仪,测定,即得。
[0051] 测定结果判定:供试品色谱中,保留时间t为(16〜17min)处有相对应的色谱峰,合并峰面积相对较大(纯度大于90% )的洗脱组份。
[0052] 二、化合物结构鉴定:
[0053]1、紫外光谱(UV)
[0054]仪器:Perkin_Elmer Lambda 25 紫外光谱仪;
[0055] ittg:UV(MeOH)XMxnm(loge) :214 (4. 68),254 (sh),283 (3. 57);
[0056] 2、红外光谱(IR)
[0057]仪器:WQF_410 FT-1R
[0058] 测定方法:KBr压片;
[0059]数据:IR (KBr) V眶3523 (OH) ,1741 (C = O),1617,1573,1504 (Ar. ),1469,1421,1365,1263,1236,1180,1151,1095,1054,1028cml。
[0060] 3、核磁共振谱(NMR)
[0061] 仪器:Bruker DRX-400型超导核磁共振仪;
[0062] 溶剂:氘代三氯甲烷(⑶Cl3);[0063] 数据:如表I所示;
[0064] 无畸变极化转移增强核磁共振碳谱(DEPT):
[0065]表1: (2' S)-南五味子木质素 J 的 1H NMR(400MHz, CDCl3)和 13C NMR(100MHz,CDCl3)数据
[0066]
Figure CN103012359AD00081
[0068] 4、质谱(MS)
[0069]仪器:MDS SCIEX API 2000 LC/GC/MS ;
[0070] 测定方法:直接进样;ESI源,正离子模式;
[0071]数 =ESIMS m/z( % ) :995 [2M+Na]+,509 [M+Na]+,469 [Μ-0Η]+,385 [M-C2H5 (CH3) CHCO2]+。
[0072] 5、熔点
[0073]仪器:Yanagimoto 显微熔点测定仪(Yanagimoto, Kyoto, Japan)
[0074]熔点:110_112°C
[0075] 6、比旋光值
[0076]仪器:Perkin_Elmer 341 polarimeter
[0077] 比旋光值:[a ]D20+49. 8 (c 2. O, MeOH),+54. 4 (c1. O, MeOH)。
[0078] 7、(2' S)-南五味子木质素J的水解
[0079] {2' S)-南五味子木质素J样品(90mg)溶于质量浓度4% NaOH甲醇水(1: 1,v/v)溶液(IOmL),加热回流12小时,减压浓缩除去甲醇,加入5mL7jC,用乙酸乙酯萃取三次,将乙酸乙酯萃取液减压浓缩至干,再溶于甲醇,将甲醇溶液通过强酸性阳离子交换树脂柱,将流出液浓缩至干,得到水解产物la(27mg)。将乙酸乙酯萃取后的水相用质量浓度I %HCl调pH值至6,用乙酸乙酯萃取三次,乙酸乙酯萃取液以无水硫酸钠干燥后在30°C下减压浓缩,再溶于甲醇,将甲醇溶液通过强酸性阳离子交换树脂柱,将流出液在30 V下减压浓缩至干,得到水解产物lb(9mg)。
[0080]水解产物 Ia 结构鉴定:白色粉末,[a ]D2°-11. 7(c 5. 0,CHCl3)。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ :6. 41 (1Η, s’ Η_4),6· 38 (1Η,s’ H-ll),5· 97、5· 95 (各 1Η, d, J =1. 5Hz, H2-19),4. 63 (1Η, br s, Η_9),3. 90 (3Η, s,2_0CH3),3. 88 (3Η, s,3_0CH3),3. 87 (3Η, s, H-OCH3),2. 63 (2Η, m, Η2_6),2. 06 (1Η, m, Η_7),1. 91 (1Η, m, Η_8),1. 16 (3Η, d, J = 7. 3Hz, H3-18),
O. 93(3Η,d,J = 7· 5Ηζ,Η3-17)。数据与日本南五味子素甲(Ookawa et al.,1981) —致。
[0081]水解产物 Ib 结构鉴定:无色油状物,[a ]D20+15. 5(c O. 4,MeOH) NMR(400MHz,CD3OD) δ :2.32(lH,m,H-2),1.62(lH,m,H-3a),1.44(lH,m,H-3b),l· 12(3H,d,J = 7.0Hz,H3-5) ,0. 92 (3H, t, J = 7.0Hz, H3_4)。数据与(S) -2-甲基丁酸((S)-2-Methylbutanoicacid) 一致。
[0082] 三、综合结构解析
[0083] 正离子ESMS给出了 m/z 995 [2M+Na] +和509 [M+Na] +准分子离子峰以及m/z469[M-0H]+和385 [M-C2H5 (CH3) CHCO2]+碎片离子峰,显示其分子量为486。核磁共振碳谱(13C NMR)显示该化合物含27个碳原子。根据其分子量和所含碳原子数可推定该化合物的分子式为C27H3408。该化合物的1H NMR和13C NMR谱(表I)除给出了与日本南五味子素甲(Ookawa N. , Ikeya Y., Taguchi H. , Yosioka 1,1981. The consitituentsof Kadsurajaponica Dunal.1. The structures of three new lignans, acetyl-, angeloyl—andcaproyl-binankadsurin A. Chem. Pharm. Bull. , 29 (I) : 123-127.)相似的质子和碳信号外,还存在下列基团信号:一个伯碳甲基[δΗ0.81(3Η,t,J = 7.2Hz) ; δ cll. 4]、一个仲碳甲基[δΗ0· 93(3H,d,J = 7. 2Hz) ; δ c16. 7]、一个亚甲基[δ Η1· 58 和1. 42(各 lH,m) ; δ c26. 7]、一个次甲基[δ η2· 41 (lH,m) ; δ c41. 3]、一个酯羰基(δ c176. 3)。这些信号说明在该化合物分子中存在一个2-甲基丁酰氧基。另外,与日本南五味子素甲的1H和13C NMR谱比较,该化合物的1H匪R谱中未出现日本南五味子素甲的1-0H质子信号,其13CNMR谱中的C-1向高场位移而C-2和C-16向低场位移,提示2-甲基丁酰氧基连在C-1位。基于上述分析,推定该化合物即为南五味子木质素J(Kadsuralignan J) (Li et al.,2007)。该化合物的光谱数据与南五味子木质素J的文献(Li et al. ,2007)报道数据完全一致。但文献(Li etal.,2007)未报道南五味子木质素J的C-2'位构型,为了确定C-2'位构型,对该化合物进行了碱水解,获得了二个水解产物Ia和lb。产物Ia的1HNMR数据与日本南五味子素甲一致;产物Ib的1H NMR数据、比旋光度值与(S)-2-甲基丁酸吻合,据此确定C-2'位为S构型。因此,确定该化合物为(2' S)-南五味子木质素J。
[0084] 实施例2、提取分离(2' S)-南五味子木质素J
[0085] 取粉碎的黑老虎根皮部(过二号筛)2.0Kg,加水12000ml,蒸馏,得挥发油(弃之),水提液过滤,滤液蒸干得浸膏a,滤渣加12000ml乙醇回流提取2次,每次2小时,过滤,合并滤液,回收乙醇后得浸膏b,将浸膏a、b合并得浸膏1,并向其中加2000ml热水(90°C以上),超声10分钟(超声功率300W,频率50kHz),过滤,得沉淀。其余同实施例1。
[0086] 按照上述提取分离方法得到(2' S)-南五 味子木质素J的纯品约为1. 48g。[0087] 化合物结构鉴定结果同实施例1。
[0088] 实施例3、提取分离(2' S)南五味子木质素J
[0089] 取粉碎的黑老虎根木部(过三号筛)2. OKg,加体积浓度为85%丙酮12000ml回流提取3次,每次2小时,过滤,合并滤液,回收溶剂后得浸膏,其余同实施例1。
[0090] 按照上述提取分离方法得到(2' S)-南五味子木质素J的纯品约为2. 54g。 [0091] 化合物结构鉴定结果同实施例1。
[0092] 实施例4、提取分离(2' S)-南五味子木质素J
[0093] 取粉碎的黑老虎根木部(过二号筛)2. OKg,加体积浓度为50%乙醇溶液40000ml回流提取2次,每次5小时,过滤,合并滤液,回收溶剂后得浸膏1,向浸膏I中加4000ml热水(90°C以上),超声10分钟(超声功率300W,频率50kHz),过滤,得沉淀。其余同实施例1o
[0094] 按照上述提取分离方法得到南五味子木质素J的纯品约为2. 36g。
[0095] 化合物结构鉴定结果同实施例1。
[0096] 实施例5、化合物(2' S)-南五味子木质素J抗肝癌细胞活性研究
[0097]1.材料与仪器
[0098]1.1细胞株:人肝癌细胞(SMMC-7721,H印G2)。
[0099]1. 2仪器和设备:Thermo医用型净化工作台,离心机(上海医疗器械厂),CO2恒温细胞培养箱(Thermo公司),倒置相差微镜(日本尼康公司),全自动酶标仪(Bio-Rad公司)。
[0100]1. 3主要试剂
[0101] 化合物(2' S)-南五味子木质素J (分子量486. 55)用DMSO溶解,配成IOOmM储存液,置于-20°C保存,临用时用无血清培养基稀释。
[0102] DMSO购自sigma公司,RPM1-1640培养基,胎牛血清,100X氨苄青霉素和链霉素(10000U/mL 和 10000 μ g/mL)均购于美国 Gibco 公司。
[0103] DMEM培养基购自德国PAA公司
[0104] 2.实验方法
[0105] 2.1细胞培养:人肝癌细胞SMMC-7721、!fepG2均为贴壁生长细胞,以适量浓度接种于培养皿中,加入含10%胎牛血清、10(^/1111青霉素、100 μ g/ml链霉素的RPMI1640或DMEM完全培养液,置于371:恒温、5% CO2的培养箱中培养,取对数生长期的细胞进行实验。
[0106] 2. 2细胞毒性实验(MTT法):培养细胞经胰酶消化后,接种于96孔培养板中,每孔体积100 μ 1,培养24小时后,弃掉培养液,分别加入含不同浓度化合物的无血清培养基,以不加化合物的培养基为对照组。化合物& S)-南五味子木质素J对HepG2作用细胞浓度分别为 O μ Μ、5 μ M、10 μ Μ、20 μ Μ、30 μ Μ、40 μ Μ、50 μ Μ、60 μ M和 80 μ Μ,对 SMMC-7721 作用浓度为O μ Μ、2 μ Μ、5 μ Μ、10 μ Μ、20 μ Μ、40 μ Μ,每组设3个复孔。继续培养48小时后,每孔加MTT溶液(5g/L)20l·! 1,孵育4h,吸弃孔内上清液,每孔加100 μ I DMS0,充分震荡IOmin,使结晶物充分溶解。用酶标仪(波长490nm)测定各孔的吸光度(OD)值,按下列公式计算细胞生长抑制率,对数法计算IC50值。抑制率(% ) = (1-实验组OD值/对照组OD值)X 100%
[0107] 3.实验结果
[0108] 不同浓度的化合物(2^ S)-南五味子木质素J分别给药48小时后,对SMMC-7721细胞生长呈明显抑制作用,化合物(2' S)-南五味子木质素J浓度为20 μ M时,即对细胞产生明显抑制作用,随着浓度的增大,抑制效果越明显;当药物浓度达到60 μ M时,48小时抑制率为65.90%。化合物(2' S)-南五味子木质素J作用48小时IC50值为36. 19 μ Μ。(结果如图1所示)
[0109] 不同浓度的化合物(2' S)-南五味子木质素J分别给药48小时后,对H印G2细胞生长呈抑制作用,抑制作用随着药物浓度的增大而增大,药物浓度为40 μ M时,抑制率为34. 93%,化合物(2' S)-南五味子木质素J作用48小时的IC50值大于40 μ Μ,按斜率推算IC50值约为70μΜ。(结果如图2所示)
[0110] 以上结果表明,化合物(2' S)-南五味子木质素J对H印G2细胞、SMMC-7721细胞生长有明显的抑制作用,且抑制率呈明显的量效关系,其中化合物(2' S)-南五味子木质 素J对HepG2细胞作用更强,给药48小时IC50值为36. 19 μ Μ,提示该化合物体外有一定的抗肝癌细胞活性。

Claims (10)

1.式I所示化合物:
Figure CN103012359AC00021
(式 I)。
2.制备式I所示化合物的方法,包括下述步骤: 1)将粉碎的黑老虎根木部用有机溶剂或有机溶剂的水溶液进行提取,收集提取液并浓缩得到浸膏,记为浸膏I; 或将粉碎的黑老虎根皮部加水蒸馏,弃去挥发油,水提液过滤,分别收集滤液和滤渣;将所述滤液浓缩得到浸膏;将所述滤渣用有机溶剂或有机溶剂的水溶液进行提取,收集提取液并浓缩得到浸膏;合并所述浸膏得到浸膏I ; 或将粉碎的黑老虎根皮部加水蒸馏,弃去挥发油,水提液过滤,分别收集滤液和滤渣;将所述滤液浓缩得到浸膏;将所述滤渣和粉碎的黑老虎根木部混合用有机溶剂或有机溶剂的水溶液进行提取,收集提取液并浓缩得到浸膏;合并所述浸膏得到浸膏I ; 2)向所述浸膏I中加入90°C以上的热水并超声分散,过滤,收集滤渣;将滤渣用三氯甲烷溶解,过滤,收集三氯甲烷液并浓缩,得到浸膏2 ; 3)将浸膏2用石油醚进行洗涤至石油醚洗涤液接近无色,并挥干浸膏2中的石油醚; 4)将步骤3)处理后的浸膏2进行硅胶柱层析,收集含式I所示化合物的洗脱液,挥干溶剂,得到式I所示化合物。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:步骤I)中所述有机溶剂为乙醇、丙酮或甲醇,所述有机溶剂的水溶液中有机溶剂的体积含量为50-95% ; 所述黑老虎根木部与有机溶剂或有机溶剂的水溶液的配比为Ig : (4-20)ml ;所述滤渣与有机溶剂或有机溶剂的水溶液的配比为Ig : (4-20)ml ;所述滤渣和粉碎的黑老虎根木部的混合物与有机溶剂或有机溶剂的水溶液的配比为Ig : (4-20)ml ;所述提取为回流提取,所述回流提取至少进行2次,每次提取的时间为1-5小时。
4.根据权利要求2或3所述的方法,其特征在于:步骤I)所述蒸馏中,粉碎的黑老虎根皮部与水的配比为Ikg : (3000-20000)ml ; 步骤2)中所述滤渣与三氯甲烷的配比为Ig : (l-10)ml ;步骤2)中所述浸膏I与热水的配比为Ig : (1-4)ml ; 步骤4)中所述硅胶柱层析的洗脱条件为:以石油醚和乙醚体积比为(2 : 1)(4 :1)的混合溶剂为洗脱剂进行等度洗脱。
5.根据权利要求24中任一项所述的方法,其特征在于:所述方法还包括对步骤4)得到的式I所示化合物进行纯化的步骤,具体方法如下:将式I所示化合物进行硅胶柱层析,分段收集洗脱液,将洗脱液用高效液相色谱法检测,合并式I所示化合物的纯度大于90%的洗脱液,挥干溶剂,得到纯化后的式I所示化合物; 所述硅胶柱层析的洗脱条件分为:以石油醚和乙醚体积比为(5 : 1)-(20 : I)的混合溶剂为洗脱剂进行等度洗脱。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:所述方法还包括将所述纯化后的式I所示化合物进行重结晶的步骤;所述重结晶使用的溶剂为乙醚或石油醚和乙醚体积比为(50 : 50)-(0 : 100)的混合溶剂。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法,其特征在于:步骤4)中进行硅胶柱层析时,分段收集洗脱液,将洗脱液用薄层色谱法或高效液相色谱法检测,合并含式I所示化合物的洗脱液; 所述薄层色谱法检测的条件如下:用收集的洗脱液点样,采用硅胶GF254薄层板,以石油醚-甲酸乙酯-甲酸体积比为15 : 5 : I的混合液的上层溶液为展开剂,合并Rf值0. 60〜0. 70的洗脱液; 所述高效液相色谱法检测的色谱条件如下:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱;流动相为甲醇-水体积比为80 : 20的混合溶剂或乙腈-水体积比为70 : 30的混合溶剂;检测波长为214nm。
8.式I所示的化合物在下述I)或2)中的应用:1)在制备真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂中的应用;2)制备预防和/或治疗肿瘤的产品中的应用,所述产品为药品和/或保健品。
9. 一种预防和/或治疗肿瘤的产品,其有效成分为式I所示的化合物;所述产品为药品和/或保健品。
10.根据权利要求8所述的应用或根据权利要求9所述的产品,其特征在于:所述真核生物为哺乳动物;所述肿瘤细胞为癌细胞,所述癌细胞为肝癌细胞; 所述肿瘤为癌;所述癌为肝癌。
CN201210560010.1A 2011-12-31 2012-12-20 (2′s)-南五味子木质素j及其制备方法 Active CN103012359B (zh)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201110461090.0 2011-12-31
CN201110461090 2011-12-31
CN2011104610900 2011-12-31
CN201210560010.1A CN103012359B (zh) 2011-12-31 2012-12-20 (2′s)-南五味子木质素j及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210560010.1A CN103012359B (zh) 2011-12-31 2012-12-20 (2′s)-南五味子木质素j及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103012359A true CN103012359A (zh) 2013-04-03
CN103012359B CN103012359B (zh) 2015-09-09

Family

ID=47961516

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201210560010.1A Active CN103012359B (zh) 2011-12-31 2012-12-20 (2′s)-南五味子木质素j及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103012359B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105284546A (zh) * 2015-10-24 2016-02-03 高渐飞 一种野生水果冷饭团的人工栽培方法
CN111303185A (zh) * 2020-04-08 2020-06-19 黑龙江中医药大学 一种具有抑制肿瘤活性的化合物及其提取方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1634854A (zh) * 2004-12-08 2005-07-06 肖培根 一个新联苯环辛烯木脂素及其制备方法和用途

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1634854A (zh) * 2004-12-08 2005-07-06 肖培根 一个新联苯环辛烯木脂素及其制备方法和用途

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BAN NK ET AL.: "Dibenzocyclooctadiene Lignans and Lanostane Derivatives from the Roots of Kadsura coccinea and their Protective Effects on Primary Rat Hepatocyte Injury Induced by t-Butyl Hydroperoxide", 《PLANTA MED》 *
HERAN LI,ET AL.: "Kadsuralignans H-K from Kadsura coccinea and Their Nitric Oxide Production Inhibitory Effects", 《J. NAT. PROD.》 *
舒永志,等: "黑老虎的化学成分及药理作用研究进展", 《中草药》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105284546A (zh) * 2015-10-24 2016-02-03 高渐飞 一种野生水果冷饭团的人工栽培方法
CN111303185A (zh) * 2020-04-08 2020-06-19 黑龙江中医药大学 一种具有抑制肿瘤活性的化合物及其提取方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN103012359B (zh) 2015-09-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101559088B (zh) 穿心莲总内酯与新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯的生产工艺
CN102861112B (zh) 海滨锦葵木脂素提取物、其制备方法及其应用
CN102040520B (zh) 一种从杜仲叶中分离纯化绿原酸的方法
WO2017133465A1 (zh) 一种黄芩苷镁化合物及其制备方法与它的用途
CN1879672B (zh) 一种植物肿节风有效部位总多酚及其制备方法和应用
CN110563781A (zh) 一种合欢皮新木脂体单体化合物的制备方法
CN102924416B (zh) 从中药秦皮中分离纯化单体化合物的方法
CN103012359B (zh) (2′s)-南五味子木质素j及其制备方法
CN106243120B (zh) 苦豆子黄酮茋类提取物的制备及其在化妆品中的应用
CN103467425B (zh) 一种从小花棘豆中分离槲皮素的方法
Chatterjee et al. Studies on the chemical constituents of Nardostachys jatamansi DC (Valerianaceae)
CN102219813A (zh) 一种从连翘叶中提取连翘苷和连翘酯苷的方法
CN104086554A (zh) 一种新型的完全水溶的光敏剂单体及其制备方法及应用
EP2650301B1 (en) Method for preparing albiflorin and paeoniflorin
CN102584779B (zh) 一种联苯环辛烯类木脂素化合物的制备方法
CN104262154B (zh) 鼠曲草中多酚类化合物单体制备方法
CN103494806A (zh) 苯骈α-吡喃酮类化合物的应用及其制备方法
CN109320571B (zh) 提取木犀草素类化合物和菜蓟苦素的方法
CN103665065B (zh) 一种快速制备土大黄苷和丹叶大黄素的方法
CN105924351A (zh) 一种二羟丙茶碱的药物组合物及其医药用途
CN1275978C (zh) 澳洲茄胺盐酸盐的制备方法
CN104478894A (zh) 一种龙胆内酯化合物及其制备方法与应用
CN101974006A (zh) 一种从山荷叶中提取鬼臼毒素的方法
CN103483299A (zh) 一种穿心莲内酯的提取方法及应用
CN103006670A (zh) 一种总不饱和蟾蜍内酯及其制备方法和用途

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant