CN103005220B

CN103005220B - 一种罗非鱼用核苷酸饲料添加剂

Info

Publication number: CN103005220B
Application number: CN201210589723.0A
Authority: CN
Inventors: 陈晓春; 黄小权; 蔡家栋; 张磊; 盛兵; 李淑亚; 汤亦文
Original assignee: NANJING BIO TOGETHER CO Ltd
Current assignee: NANJING BIO TOGETHER CO Ltd
Priority date: 2012-12-31
Filing date: 2012-12-31
Publication date: 2015-01-07
Anticipated expiration: 2032-12-31
Also published as: CN103005220A

Abstract

本发明公开了一种罗非鱼用核苷酸饲料添加剂，所述的核苷酸包括腺苷酸5’-AMP、胞苷酸5’-CMP、鸟苷酸5’-GMP和尿苷酸5’-UMP，各成份之间的重量比为：腺苷酸：胞苷酸：鸟苷酸：尿苷酸=0.9~1.5:0.7~1.2:1.1~2.0:0.8~1.5。本发明饲料添加剂能显著增加罗非鱼肠道的长度，提高罗非鱼的生长效率、对饲料的利用率和对环境的承受能力，同时核苷酸的添加大大增强了罗非鱼的非特异性免疫能力，这都对目前集约化罗非鱼的集约化养殖产业有深刻的意义。

Description

一种罗非鱼用核苷酸饲料添加剂

技术领域

本发明涉及一种鱼类饲料添加剂，具体涉及一种罗非鱼饲料添加剂，属于鱼类养殖领域。

背景技术

原产在非洲的罗非鱼它对外界环境条件要求不高，具有很强的适应能力和繁殖能力，养殖周期短，营养丰富，肉味鲜美并含有丰富的蛋白质及钙、磷、铁、维生素等。所以现在罗非鱼已成为国际市场上最活跃的水产品贸易对象，具有广阔的市场前景。

但是目前在罗非鱼的高密度养殖过程中，普遍存在饲料系数偏高，饲料转化率较低，化学合成药物滥用、因较高的饲料系数所造成的水环境恶化和随之而来的鱼体免疫力下降等问题。而且随着近年来全球能源和粮食资源价格的持续增加，使得饲料生产企业与养殖生产者的成本不断增加、收益下降，这就更在一定程度上制约了罗非鱼养殖业的发展壮大。

核苷酸对于动物的生理和营养具有多种生理功效。虽然大多数的生物体都能自身合成核苷酸，但由于核苷酸的合成在代谢上是一个耗费代价的过程，尤其是当机体处于快速生长发育、应激等条件下，内源核苷酸相对合成不足，不能满足代谢旺盛的器官和组织的需要，这时就需要外源核苷酸供给。饲料中添加核苷酸可促进动物肠道的生长，增加肠道吸收面积，改善肠道功能，促进消化，使动物能吸收更多的营养物质，并且饲料中添加核苷酸能刺激动物的特异性和非特异性反应，通过增强动物的免疫系统明显地提高动物的抗病能力和抗应激能力。核苷酸作为一种新型的饲料添加剂，目前在水产养殖中的研究还较少。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种可以显著增加罗非鱼肠道长度，改变代谢酶的活性，增强鱼体的非特异性免疫能力，提高饲料利用效率，从而最终提高罗非鱼生长效率的核苷酸饲料添加剂。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种罗非鱼用核苷酸饲料添加剂，所述的核苷酸包括腺苷酸5’-AMP、胞苷酸5’-CMP、鸟苷酸5’-GMP和尿苷酸5’-UMP，各成份之间的重量比为：腺苷酸：胞苷酸：鸟苷酸：尿苷酸=0.9~1.5:0.7~1.2:1.1~2.0:0.8~1.5。

其中，所述的核苷酸为核苷酸的酸或盐的形式，所述的核苷酸的盐的形式为核苷酸的钠盐、钙盐、钾盐、镁盐、锌盐或铁盐。

上述罗非鱼用核苷酸饲料添加剂的第一种制备方法，将配方量的腺苷酸5’-AMP、胞苷酸5’-CMP、鸟苷酸5’-GMP和尿苷酸5’-UMP纯品（各组分纯度优选在99%以上）混合均匀，制得。

上述罗非鱼用核苷酸饲料添加剂的第二种制备方法，以核糖核酸为原料，酶法水解得到混合核苷酸液体经直接喷雾干燥得到喷干的混合核苷酸，再根据配方量添加相应的腺苷酸5’-AMP、胞苷酸5’-CMP、鸟苷酸5’-GMP和尿苷酸5’-UMP纯品（各组分纯度优选在99%以上），使得各成份之间的重量比为：腺苷酸：胞苷酸：鸟苷酸：尿苷酸=0.8~1.3:0.3~0.8:1.1~1.5:0.7~1.4。

其中，所述的喷干的混合核苷酸包含如下重量百分比的组分：混合核苷酸42~60%、粗蛋白14~18%、粗脂肪2~6%、灰分15~25%、水分5~9%。一般核糖核酸通过酶解喷干得到的混合核苷酸很容易满足该指标。

其中，所述的核糖核酸来源于面包酵母、产朊假丝酵母、热带假丝酵母、球拟酵母或酿酒酵母中的一种。

上述罗非鱼用核苷酸饲料添加剂在罗非鱼饲料中的应用。本发明饲料添加剂能显著增加罗非鱼肠道的长度，提高罗非鱼的生长效率、对饲料的利用率和对环境的承受能力，同时核苷酸的添加大大增强了罗非鱼的非特异性免疫能力，这都对目前集约化罗非鱼的集约化养殖产业有深刻的意义。

其中，罗非鱼用核苷酸饲料添加剂的添加量占饲料重量的0.2%~1.6%，其中，罗非鱼用核苷酸饲料添加剂的添加量以总核苷酸量计。

其中，罗非鱼用核苷酸饲料添加剂的使用形态为固体制剂，优选为粉末形式、或颗粒形式、或微颗粒形式、或微粒形式。

有益效果：与现有技术相比，本发明的罗非鱼核苷酸饲料添加剂技术具有如下优势：

（1）本发明的核苷酸饲料添加剂来源于自然界中分布广泛的酵母细胞，生产工艺简单无污染，得到的核苷酸产品是一种绿色、环境友好型饲料添加剂。

（2）本发明的核苷酸饲料添加剂可明显增加鱼体的肠道长度，提高饲料的利用效率和罗非鱼的生长效率，降低养殖成本。

（3）本发明的核苷酸饲料添加剂可以显著提高鱼体对环境的适应能力，明显提高了鱼体的肥满度，并且提高了肌肉中干物质和蛋白质的含量，降低了鱼体肌肉中的灰分，使罗非鱼的营养价值得以大大提升。

（4）超氧化物歧化酶和溶菌酶活性是评价鱼类免疫力的常用指标。添加适量本发明的核苷酸饲料添加剂后，超氧化物歧化酶和溶菌酶活力明显增加，这表明罗非鱼的非特异性免疫能力得以大大改善。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权力要求书中所详细描述的本发明。

实施例1：

一种罗非鱼用核苷酸饲料添加剂：采用酿酒酵母为原料，将提取得到的核糖核酸进行酶解，然后将酶解液直接喷雾干燥，获得含有四种核苷酸AMP、CMP、GMP、UMP的混合核苷酸，所述的混合核苷酸包含如下重量百分比的组分：混合核苷酸50%、粗蛋白18%、粗脂肪4%、灰分20%、水分8%。检测四种核苷酸的含量，在此基础上添加适量单核苷酸纯品，使四种核苷酸之间的重量比为：腺苷酸：胞苷酸：鸟苷酸：尿苷酸=1.0:0.8:1.9:0.8，该添加剂中，核苷酸的总含量最终为61.3%。

实施例2：

一种罗非鱼用核苷酸饲料添加剂：采用面包酵母为原料，将提取得到的核糖核酸进行酶解，然后将酶解液直接喷雾干燥，获得含有四种核苷酸AMP、CMP、GMP、UMP的混合核苷酸，所述的混合核苷酸包含如下重量百分比的组分：混合核苷酸42%、粗蛋白18%、粗脂肪6%、灰分25%、水分9%。然后在其基础上添加适量单核苷酸纯品，使四种核苷酸之间的重量比为：腺苷酸：胞苷酸：鸟苷酸：尿苷酸=1.5:1.2:1.6:1.5，该添加剂中，核苷酸的总含量最终为52.7%。

实施例3：

一种罗非鱼用核苷酸饲料添加剂：采用热带假丝酵母为原料，将提取得到的核糖核酸进行酶解，然后将酶解液直接喷雾干燥，获得含有四种核苷酸AMP、CMP、GMP、UMP的混合核苷酸，所述的混合核苷酸包含如下重量百分比的组分：混合核苷酸60%、粗蛋白14%、粗脂肪2%、灰分19%、水分5%。，然后在其基础上添加适量单核苷酸纯品，使四种核苷酸之间的重量比为：腺苷酸：胞苷酸：鸟苷酸：尿苷酸=0.9:0.9:1.1 1.4，该添加剂中，核苷酸的总含量最终为69.3%。

实施例4：

一种罗非鱼用核苷酸饲料添加剂，直接添加纯度在99%以上的AMP钠盐、CMP钠盐、GMP钾盐和UMP，四种核苷酸之间的重量数之比为：腺苷酸钠盐：胞苷酸钠盐：鸟苷酸钾盐：尿苷酸=1.5:0.7:2.0:1.2。

实施例5

具体实验方案：

1、饲养条件和分组

循环水养鱼系统包括15个单个体积为60cm×60cm×65cm的塑料水族箱(有效水体200L)。水源为曝气自来水，使用沸石、活性炭净化水体，真空泵提水，单只箱体循环水量为1.5L/min，箱内放置散气石，以通风管连接罗茨鼓风机间断性充氧。养殖期间保存水体溶氧>6.0mg O/L，铵态氮<0.092mg N/L；自然水温，变化范围25.2~-28.5℃，10只8瓦节能日光灯提供照明，光照时间8:30-21:00，瞬时开断。

奥尼罗非鱼取自广东江门良种鱼苗养殖基地，2‰食盐水消毒，实验室循环水水族箱内暂养2周，暂养期间投喂基础饲料。试验饲料共5种，在基础饲料中加入不同用量的核苷酸添加剂，基础饲料及4种试验饲料配方如下所示：

对照组：基础饲料配方（见表1）；

试验组1：基础饲料配方中添加1.0%实施例1中的核苷酸饲料添加剂；

试验组2：基础饲料配方中添加1.0%实施例2中的核苷酸饲料添加剂；

试验组3：基础饲料配方中添加1.0%实施例3中的核苷酸饲料添加剂；

试验组4：基础饲料配方中添加1.0%实施例4中的核苷酸饲料添加剂。

表1基础饲料配方及化学组成

¹维生素预混物(g/100g预混物)：维生素A,550I.U.;维生素D₃,100I.U.;维生素E,5I.U.;维生素K,1;,胆碱，55;尼氨酸,10;核黄素，2;吡哆醇,2;硫胺素,2;泛酸钙,5;生物素,0.01;叶酸,0.5;维生素B₁₂,2;抗坏血酸,10;肌醇,10.

²矿物盐预混物(g/100g预混物)：氯化纳,1;硫酸镁,15;磷酸二氢纳,25;磷酸二氢钾，32;磷酸二氢钙,20;柠檬酸铁,2.5;乳酸钙,3.5;硫酸锌,0.353;硫酸锰,0.162;硫酸铜,0.031;氯化钴,0.001;碘酸钾,0.003;纤维素,0.45.

2、饲养管理及实验步骤

试验开始前，将鱼饥饿24h，然后随机取样称重，每箱放入试验鱼35尾，每种饲料含3个平行。同时取3组鱼样（每组7尾），取两侧脊背处肌肉，70℃烘干至恒重，用以分析初始躯体肌肉生化组成。每箱留下7尾鱼，注射浓度为3×10⁹cfu/mL的嗜水气单胞菌菌液，每尾注射1mL，观察2周内罗非鱼的死亡情况。

试验总时间工共持续8周，每天9:00和15:00各投过量饲料一次，1小时后回收残饵，70℃烘干。残饵量用饲料溶失率校正，测定溶失率时随机在3个无鱼的箱中各放入1份已称重的饲料，1小时后回收，70℃烘干至恒重并称重。

实验结束时，将鱼饥饿24h，称量每箱鱼的总重，再从每箱中随机取样7尾，测量体长(精确到0.01cm)、体重(精确到0.1g)，尾静脉取血，部分血液中加肝素钠抗凝，置于4℃冰箱暂时保存，稍后用作血细胞及血液部分生理生化指标分析；另一部分离心分离血清(转速2000-3000r/min,持续15-20min)，血清置于-70℃冰箱保存，用作后续生化指标分析。肠道去除肠系膜脂肪，称重并测量全长(分别精确到0.001g、0.01cm)，冰浴清洗，使用冰袋暂时冷藏保存，用作后续分析。

3、测定指标

测定鱼肌肉和饵料的干物质、粗蛋白、脂肪和灰分含量，测定干物质时在105℃下干燥样品至恒重，测定蛋白质时用凯氏定氮法测定含氮量，再乘以6.25，脂肪采用索氏乙醚抽提法测定，灰分采用马弗炉550℃灼烧样品测定。

测定超氧物歧化酶活性和血清中溶菌酶活性采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定，具体方法参见试剂盒。

采用酶联免疫吸附测定法，使用上海江莱生物科技有限公司剂盒测定测定血清补体3和补体4含量，具体方法参照试剂盒说明书。

4、试验结果和分析

4.1饲喂核苷酸对罗非鱼生长性能的影响

添加核苷酸对罗非鱼生产性能的影响，其结果见表2。对照组的罗非鱼只喂养日常饲料，试验组分别添加不同百分比的添加剂，肠长/体长指数有了明显的增加，促进了鱼体对饲料营养成份的吸收。鱼体增重率分别比对照组提高了17.67%、11.79%、25.30%和14.65%，饲料系数分别比对照组降低了10.96%、6.16%、9.59%和3.42%，蛋白质效率比与对照组相比也有了显著的提高。而且，日常基础饲料中添加核苷酸后还明显提高了罗非鱼的肥满度，提高了罗非鱼的对环境的适应能力，从而提高了罗非鱼的生长性状和经济价值。

表2饲喂核苷酸对罗非鱼生长和饲料利用的影响

4.2饲喂核苷酸对罗非鱼肌肉生化成份的影响

如表3所示，在日常饲料中添加本发明的核苷酸核苷酸添加剂后，罗非鱼的营养价值有了明显的提升。与对照组相比，四个试验组罗非鱼肌肉中干物质的含量都有所增高，灰分含量都有所降低，蛋白质的含量与对照组相比分别提高了2.95%、4.39%、3.64%和4.77%，脂肪含量分别降低了4.91%、7.49%、3.61%和2.07%。

表3核苷酸对奥尼罗非鱼肌肉生化成分的影响

4.3饲喂核苷酸对罗非鱼免疫能力的影响

超氧化物歧化酶和溶菌酶活性是评价鱼类免疫力的常用指标。超氧化物歧化酶活性与机体免疫水平密切相关,对于增强巨噬细胞的防御功能和整个机体的免疫机能有重要作用。溶菌酶是一种重要的体液免疫因子，产生于嗜中性粒细胞和巨噬细胞，被分泌到血液及粘液中发挥溶菌效应。

如表4所示，试验组超氧化物歧化酶和溶菌酶的活力显著高于对照组，这表明核苷酸的添加大大改善了罗非鱼的非特异性免疫功能。此外核苷酸的添加还激活了罗非鱼的补体系统,促进抗体的产生以及干扰素的诱生。攻毒实验更直观的反映了核苷酸在提高罗非鱼免疫力方面的作用效果，与对照组相比，核苷酸的添加大大提高了试验组罗非鱼对嗜水气单胞菌的抵抗力，降低了活菌攻毒后的死亡率。

表4核苷酸对奥尼罗非鱼非特异性免疫功能的影响

实施例6：

分别调整四种核苷酸的配方，与对照组对比进行优化实验，结果见表5。通过优化，我们得到的配方为：腺苷酸：胞苷酸：鸟苷酸：尿苷酸=0.9~1.5:0.7~1.2:1.1~2.0:0.8~1.5。其中最优配方为：1.2:0.9:1.6:1.2。

表5

注：配方比按以下排列=腺苷酸：胞苷酸：鸟苷酸：尿苷酸（重量比）。

Claims

1.一种罗非鱼用核苷酸饲料添加剂在罗非鱼饲料中的应用，其特征在于，所述的核苷酸包括腺苷酸5’-AMP、胞苷酸5’-CMP、鸟苷酸5’-GMP和尿苷酸5’-UMP，各成份之间的重量比为：腺苷酸：胞苷酸：鸟苷酸：尿苷酸＝1.2:0.9:1.6:1.2；

其中，所述的核苷酸为核苷酸的酸或盐的形式，所述的核苷酸的盐的形式为核苷酸的钠盐、钙盐、钾盐、镁盐、锌盐或铁盐；

所述的罗非鱼用核苷酸饲料添加剂按照如下方法制备得到，以核糖核酸为原料，酶法水解得到混合核苷酸液体经直接喷雾干燥得到喷干的混合核苷酸，再根据配方量添加相应的腺苷酸5’-AMP、胞苷酸5’-CMP、鸟苷酸5’-GMP和尿苷酸5’-UMP纯品，使得各成份之间的重量比为：腺苷酸：胞苷酸：鸟苷酸：尿苷酸＝1.2:0.9:1.6:1.2；

其中，所述的喷干的混合核苷酸包含如下重量百分比的组分：混合核苷酸42～60％、粗蛋白14～18％、粗脂肪2～6％、灰分15～25％、水分5～9％；

其中，所述的核糖核酸来源于面包酵母、产朊假丝酵母、热带假丝酵母、球拟酵母或酿酒酵母中的一种；

其中，罗非鱼用核苷酸饲料添加剂能显著增加罗非鱼肠道的长度，提高罗非鱼的生长效率、对饲料的利用率和对环境的承受能力，同时增强了罗非鱼的非特异性免疫能力；

其中，罗非鱼用核苷酸饲料添加剂的添加量占饲料重量的0.2％～1.6％，其中，罗非鱼用核苷酸饲料添加剂的添加量以总核苷酸量计；

其中，罗非鱼用核苷酸饲料添加剂的使用形态为固体制剂。