CN102988294B

CN102988294B - 一种氟碳化合物脂质体的制备方法

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Publication number: CN102988294B
Application number: CN201210536103.0A
Authority: CN
Inventors: 刘璐; 朱君; 何丹农
Original assignee: Shanghai National Engineering Research Center for Nanotechnology Co Ltd
Current assignee: Shanghai National Engineering Research Center for Nanotechnology Co Ltd
Priority date: 2012-12-13
Filing date: 2012-12-13
Publication date: 2015-03-11
Anticipated expiration: 2032-12-13
Also published as: CN102988294A

Abstract

本发明涉及一种氟碳化合物脂质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：a.按重量份数计，将1～50份磷脂和0～50份胆固醇溶解于200份的有机溶剂中，超声混合均匀；b.在溶有磷脂的有机溶剂中加入氟碳化合物10～50份，继续超声混合均匀；c.将步骤b所得到的溶液慢慢滴加至100～500份的盐溶液中，搅拌溶液，搅拌速度为500～2500转/分钟，搅拌至有机溶剂挥发完全，时间为2小时，即得到氟碳化合物脂质体。本发明所制备的氟碳化合物脂质体稳定性好，粒径小，方法简便，便于大规模生产。制备的氟碳化合物脂质体可以在紧急供氧药物，急性供血，造影剂等方面有好的应用。

Description

一种氟碳化合物脂质体的制备方法

技术领域

本发明涉及一种脂质体的制备方法，特别是涉及一种氟碳化合物脂质体脂质体的制备方法。

背景技术

含氟化合物是包含氟原子的分子。含氟化合物或氟碳化合物是和全氟碳化合物（“PFC”）相对比的，全氟碳化合物是化学上惰性的合成分子，主要由碳原子和氟原子组成。液态的PFC和氟碳化合物通常是澄清、无色、无味的，密度高，表面张力低，在体内不易发生分解。PFC携带气体的能力强，这里所指的气体包括氧气，二氧化碳和氮气。PFC溶液氧气的原理不同于血红蛋白。血红蛋白通过铁和氧之间的化学作用力进行结合，结合较强；而PFC与气体都具有低的内聚能密度，两者的结合是通过较弱的范德华力进行的。因此，携带O₂的PFC能够将O₂迅速地释放到人体组织，并且能够将CO₂携带走。采用氟碳化合物对呼吸衰竭的患者进行液体通气治疗，氧合指数、肺的顺应性能得到改善，值得临床进一步研究。

由于氟碳化合物是疏水性的，不易与水混合，必须使用表面活性剂进行修饰来实现其在水溶液中的分散。采用磷脂类物质在水溶液中形成脂质体，脂质体内部包裹疏水性的氟碳化合物液滴，增加了氟碳化合物的稳定性。目前，脂质体包裹的全氟碳化合物得到了一定的研究，但仍不能提供一种快速简单的制备较小粒径脂质体的方法。制备脂质体的方法较多，包括薄膜分散法、注入法、逆向蒸发法、熔融法、冷冻干燥法等。氟碳化合物种类众多，其中包括多种低沸点、易挥发的氟碳化合物，因此选择低沸点的有机溶剂，采用注入法制备氟碳脂质体是一种非常有效的方法。通过对条件的控制，可以将脂质体制备成较小粒径（< 200 nm），可以大大增加氟碳化合物液滴的比表面积，使气体交换的面积大大增加，提高气体交换的效率。同时采用生物相容性好的磷脂化合物，增加了材料的生物相容性，降低了毒性，拓宽了其应用。

发明内容：

为了克服现有技术的缺点，本发明提供一种氟碳化合物脂质体的制备方法。一种氟碳化合物脂质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

a. 按重量份数计，将1～50份磷脂和0～50份胆固醇溶解于200份的有机溶剂中，超声混合均匀；

b. 在溶有磷脂的有机溶剂中加入氟碳化合物10～50份，继续超声混合均匀；

c. 将步骤 b所得到的溶液慢慢滴加至100～500份的盐溶液中，搅拌溶液，搅拌速度为500～2500转/分钟，搅拌至有机溶剂挥发完全，时间为2小时，即得到氟碳化合物脂质体。

所述的磷脂为大豆卵磷脂，蛋黄卵磷脂，氢化卵磷脂，氢化大豆磷脂，二棕榈酰磷脂酰胆碱中的一种或其组合。

所述的有机溶剂为沸点较低的易挥发的液体，具体为石油醚，氯仿，二氯甲烷，乙醚，正己烷，乙酸乙酯，乙醇中的一种。

所述的盐溶液为0.5～5%的氯化钠溶液，0.01～0.5%的磷酸盐缓冲溶液中的一种，其中磷酸盐缓冲溶液的pH为6～8。

所述的氟碳化合物为二（F-烷基）乙烯，环状氟碳化合物，F-金刚胺（FA），F-甲基金刚胺（FMA），F-1,3-二甲基金刚胺（FDMA），全氟代-2,2,4,4-四甲基戊烷，F-二或F-三甲基二环[3,3,1]壬烷，C7-12全氟化的胺类，溴化全氟碳化合物中的一种或其组合。

所述的二（F-烷基）乙烯为二（F-丁基）乙烯，二（F-己基）乙烯中的一种或其组合；所述环状氟碳化合物为氟苯，全氟萘烷中的一种或其组合；所述C7-12全氟化的胺类为F-三丙胺、F-4-甲基八氢喹嗪（FMOQ），F-n-甲基-十氢异喹啉（FMIQ）、F-n-甲基十氢喹啉（FHQ）、F-n-环己基吡咯烷（FCHP）中的一种或其组合；所述溴化全氟碳化合物为全氟溴辛烷（C₈F₁₇Br）1-溴十五氟庚烷（C₇F₁₅Br）、1-溴十三氟己烷（C₆F₁₃Br）中的一种或其组合。

本发明的优点在于：

本发明制备方法简单，制备周期短，操作性强，符合进一步生产和应用的需求。所制备的这种氟碳化合物脂质体稳定性好，粒径小，方法简便，便于大规模生产。本发明制备的氟碳化合物脂质体有着良好的物理化学稳定性，适合长期保存。采用乙醚为溶剂，可在室温下操作，更加适合于低沸点的易挥发氟碳化合物。

本发明制备的氟碳化合物脂质体可以在紧急供氧药物，急性供血，造影剂等方面有好的应用。

附图说明

图1为本发明实施例1所得的氟碳化合物脂质体的投射电镜照片；

图2 为本发明实施例1所得的氟碳化合物脂质体的动态光散射粒径分布图。

具体实施方式

一下通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步描述。以下的实施例是对本发明的进一步说明，而不限于本发明的范围。

实施例1：

按重量份计，配方如下：

磷酸盐缓冲溶液（0.01 M） 200份

大豆卵磷脂 20份

FC-77 20份

乙醚 200份

制备工艺：

按重量份数计，将20份大豆卵磷脂溶解于200份的乙醚中，超声混合均匀；

在磷脂的乙醚溶液中加入FC-77（全氟辛烷和全氟环辛醚的混合物）20份，继续超声混合均匀；

将步骤所得到的溶液慢慢滴加至200份的磷酸盐缓冲溶液中，搅拌溶液（搅拌速度为1000转/分钟），搅拌至乙醚挥发完全，时间约2.5小时。即可以得到FC-77脂质体。

制剂外观：乳白色溶液；稀释10倍可得到淡淡的白色带蓝色乳光的透明溶液。

粒度检测方法：动态光散射。包封率检测方法：离子色谱。

检测结果：平均粒径 89.45 nm，包封率 80 %。

实施例2：

按重量份计，配方如下：

磷酸盐缓冲溶液（0.01 M） 200份

蛋黄卵磷脂 19份

胆固醇 1份

全氟溴辛烷 10份

氯仿 200份

制备工艺：

按重量份数计，将19份蛋黄卵磷脂和1份胆固醇溶解于200份的氯仿中，超声混合均匀；

在磷脂的氯仿溶液中加入全氟溴辛烷25份，继续超声混合均匀；

将步骤所得到的溶液慢慢滴加至200份的磷酸盐缓冲溶液中，搅拌溶液（搅拌速度为2000转/分钟），搅拌至氯仿挥发完全，时间约1.5小时。即可以得到全氟溴辛烷脂质体。

制剂外观：乳白色溶液，稀释10倍可得到淡淡的白色带蓝色乳光的透明溶液

粒度检测方法：动态光散射。包封率检测方法：离子色谱。

检测结果：平均粒径 103.2 nm，包封率 84 %。

实施例3：

按重量份计，配方如下：

氯化钠溶液（0.9 %） 200份

氢化大豆磷脂 20份

胆固醇 10份

1-溴十三氟己烷 25份

乙醚 200份

制备工艺：

按重量份数计，将20份氢化大豆磷脂和10份胆固醇溶解于200份的乙醚中，超声混合均匀；

在磷脂的乙醚溶液中加入1-溴十三氟己烷25份，继续超声混合均匀；

将步骤所得到的溶液慢慢滴加至200份的氯化钠溶液（0.9 %）中，搅拌溶液（搅拌速度为1500转/分钟），搅拌至乙醚挥发完全，时间约2小时。即可以得到1-溴十三氟己烷脂质体。

制剂外观：乳白色溶液，稀稀释10倍可得到淡淡的白色带蓝色乳光的透明溶液

粒度检测方法：动态光散射。包封率检测方法：离子色谱。

检测结果：平均粒径 96.45 nm，包封率 81 %。

实施例4：

按重量份计，配方如下：

磷酸盐缓冲溶液（0.01 M） 250份

蛋黄卵磷脂 10份

二棕榈酰磷脂酰胆碱 4份

胆固醇 1份

1-氯十七氟辛烷 20份

氯仿 200份

制备工艺：

按重量份数计，将10份蛋黄卵磷脂，4份二棕榈酰磷脂酰胆碱，1份胆固醇溶解于200份的氯仿中，超声混合均匀；

在磷脂的氯仿溶液中加入1-氯十七氟辛烷20份，继续超声混合均匀；

将步骤所得到的溶液慢慢滴加至250份的磷酸盐缓冲溶液中，搅拌溶液（搅拌速度为500转/分钟），搅拌至氯仿挥发完全，时间约3小时。即可以得到1-溴十三氟己烷脂质体。

粒度检测方法：动态光散射。包封率检测方法：离子色谱。

检测结果：平均粒径 130.8 nm，包封率 82 %。

实施例5：

按重量份计，配方如下：

磷酸盐缓冲溶液（0.01 M） 400份

蛋黄卵磷脂 30份

二棕榈酰磷脂酰胆碱 5份

全氟萘烷 25份

乙醚 200份

制备工艺：

按重量份数计，将30份蛋黄卵磷脂和5份二棕榈酰磷脂酰胆碱溶解于200份的乙醚中，超声混合均匀；

在磷脂的乙醚溶液中加入全氟萘烷25份，继续超声混合均匀；

将步骤所得到的溶液慢慢滴加至400份的磷酸盐缓冲溶液中，搅拌溶液（搅拌速度为2000转/分钟），搅拌至乙醚挥发完全，时间约1.5小时。即可以得到全氟萘烷脂质体。

粒度检测方法：动态光散射。包封率检测方法：离子色谱。

检测结果：平均粒径 109.1 nm，包封率 78 %。

Claims

1.一种氟碳化合物脂质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2. 根据权利要求1所述的一种氟碳化合物脂质体的制备方法，其特征在于，所述的磷脂为大豆卵磷脂，蛋黄卵磷脂，氢化卵磷脂，氢化大豆磷脂，二棕榈酰磷脂酰胆碱中的一种或其组合。

3. 根据权利要求1所述的一种氟碳化合物脂质体的制备方法，其特征在于，所述的有机溶剂为石油醚，氯仿，二氯甲烷，乙醚，正己烷，乙酸乙酯，乙醇中的一种。

4. 根据权利要求1所述的一种氟碳化合物脂质体的制备方法，其特征在于，所述的盐溶液为0.5～5%的氯化钠溶液，0.01～0.5%的磷酸盐缓冲溶液中的一种，其中磷酸盐缓冲溶液的pH为6～8。

5. 根据权利要求1所述的一种氟碳化合物脂质体的制备方法，其特征在于，所述的氟碳化合物为二（F-烷基）乙烯，环状氟碳化合物，F-金刚胺（FA），F-甲基金刚胺（FMA），F-1,3-二甲基金刚胺（FDMA），全氟代-2,2,4,4-四甲基戊烷，F-二或F-三甲基二环[3,3,1]壬烷，C7-12全氟化的胺类，溴化全氟碳化合物中的一种或其组合。

6. 根据权利要求5所述的一种氟碳化合物脂质体的制备方法，其特征在于，所述的二（F-烷基）乙烯为二（F-丁基）乙烯，二（F-己基）乙烯中的一种或其组合；所述环状氟碳化合物为氟苯，全氟萘烷中的一种或其组合；所述C7-12全氟化的胺类为F-三丙胺、F-4-甲基八氢喹嗪（FMOQ），F-n-甲基-十氢异喹啉（FMIQ）、F-n-甲基十氢喹啉（FHQ）、F-n-环己基吡咯烷（FCHP）中的一种或其组合；所述溴化全氟碳化合物为全氟溴辛烷（C₈F₁₇Br）1-溴十五氟庚烷（C₇F₁₅Br）、1-溴十三氟己烷（C₆F₁₃Br）中的一种或其组合。