CN102973572A - 一种宫颈癌细胞抑制剂及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种宫颈癌细胞抑制剂及制备方法，其将Cd(NO3)24H2O、2-吡啶苯并咪唑（2-Pbim）、5-羟基间苯二甲酸（OH-H2Bdc）按照摩尔比为1~3:1~2:1的配比称量好；然后加水放入容器中，加入三乙胺，搅拌均匀；然后将搅拌后的原料液放入反应釜中，封盖，升温至140~145℃后进行保温反应115~120h；再采用梯度降温法将其降至室温，得到无色块状晶体配合物[Cd(OH-H2Bdc)(2-Pbim)]n，即得到宫颈癌细胞抑制剂。本发明的宫颈癌细胞抑制剂具有稳定性好，抑制能力强的特点，为抗宫颈癌药物的研发提供了指导。
Description
技术领域
本发明属于抗癌药物，尤其涉及一种宫颈癌细胞抑制剂及制备方法。
背景技术
宫颈癌是全球妇女中仅次于乳腺癌和结直肠癌的第3个常见的恶性肿瘤，是最常见的女性生殖道恶性肿瘤。宫颈癌是发生在宫颈阴道部或移行带的鳞状上皮细胞及颈管内膜的柱状上皮细胞交界处的恶性肿瘤。在发展中国家宫颈癌是女性生殖道发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，发病呈年轻化和上升化趋势。
目前子宫颈癌治疗方法主要有三种：手术治疗、放疗、化疗。手术治疗法中治疗宫颈癌最有效的方法是广泛性子宫切除加盆腔淋巴结清扫术，但其手术创面大，术区解剖变异大，易发生并发症，对患者的生活影响很大。放疗法，容易严重破坏患者的卵巢和阴道功能，不易被众多患者所接受。
现用于治疗的药物大多为化学药物，虽然可控制肿瘤的发展，缓解症状，但由于化疗药物毒副作用大，对身体伤害大，同时免疫能力低下产生一系列并发症，不良反应大，同时治疗费用昂贵，有相当多的患者不能耐受不良反应而放弃治疗。同时由于癌细胞暴露于亚致死浓度的化疗药物中往往会产生耐药性，并常常交叉耐受其他一些抗肿瘤药物，因此由于化疗药物的耐药性和肿瘤转移的产生常常使肿瘤治疗达不到预期效果。
研究出能选择性抑制癌细胞的生长扩散或杀死癌细胞，而对正常细胞毒性小，且在长期用药条件下仍能保留其疗效的抗肿瘤药物是目前研究的重点。
5-羟基间苯二甲酸，又称5-羟基间苯二酸，对称羟基间苯二甲酸，5-羟基-1,3-苯二甲酸；分子式：C8H5O6，分子量：182.13，熔点：296-299℃，性状：白色针状结晶，易溶于乙醇，微溶于水。用途：用作农药、医药中间体。其结构式为：
2-吡啶苯并咪唑，中文名称：2-(2-吡啶基)苯并咪唑，分子式为C12H9N3，分子量为195.22，熔点：220~225℃，用途：作为医药中间体，化学结构式：
发明内容
本发明的目的就是提供一种宫颈癌细胞抑制剂及制备方法。该抑制剂具有稳定性好，抑制能力强的特点，能为抗宫颈癌药物的研发提供理论指导。
本发明的技术方案：
一种宫颈癌细胞抑制剂，其结构式为：
其分子量为487~488，熔点为294~298℃，粘度为12.3~12.5mm-1，密度为1.77~1.78g cm-3。
宫颈癌细胞抑制剂为无色块状晶体，其晶体结构属于单斜晶系P21/c空间群，其晶胞参数为：a为
b为
c为
α为90°，β为97~98°，γ为90°。
本发明原料中的2-吡啶苯并咪唑的制备方法为先按邻苯二胺与2-吡啶甲酸摩尔比为1:1分别称取邻苯二胺与2-吡啶甲酸作为反应物，以多聚磷酸作为溶剂，混合均匀后，放入微波快速反应系统内，在功率为200~250w，温度为80~110℃下辐射3~5min；待反应物充分溶于多聚磷酸后，再将功率调到700w，在温度为100℃下反应6~10min，得到墨绿色溶液，冷却至室温后倾入冰水中，变成粉红色浑浊液，用NaOH中和至pH为9~10，产生粉红色沉淀，抽滤，用蒸馏水洗涤2~3次，得到粗产品。将粗产品用无水乙醇∶水体积比为1∶1进行重结晶，加入活性炭脱色，趁热过滤除去活性炭，将滤液冷却至室温后放到在5~10℃下冷藏3~5小时后抽滤，用蒸馏水洗涤2~3次，将滤液放在干燥箱中用80~100℃，烘20~30min，得到白色柱形的化合物即得到2-吡啶苯并咪唑。
2-吡啶苯并咪唑的合成原理：
一种宫颈癌细胞抑制剂的制备方法，它的制备方法包括如下步骤：
（1）将原料Cd(NO3)2·4H2O、2-吡啶苯并咪唑（2-Pbim）、5-羟基间苯二甲酸（OH-H2Bdc）按照摩尔比为1~3:1:1~2的配比称量好；
（2）将称量好的原料投入容器中，加入水，水与原料总体积的体积比为10~20:1；再加入三乙胺将溶液pH调至8.0~9.0；然后搅拌均匀形成原料液；搅拌时间为10~20min，搅拌速度为200~600r/min。
（3）将搅拌均匀的原料液转入反应釜中，封盖，升温至140~145℃后进行保温反应115~120h；
（4）反应完成之后，采用梯度降温法将其降至室温，得到无色块状晶体的配合物，即宫颈癌细胞抑制剂。
所述梯度降温法为：先降低10℃，保持20~30min,然后再降低10℃，保持20~30min；依此循环降至室温。
本发明的化学反应式：
反应过程中，Cd2+分别与四个来自5-羟基间苯二甲酸配体的羧基氧原子和两个来自2-吡啶苯并咪唑配体的氮原子配位。
本发明各组分在宫颈癌细胞抑制中的作用：
抑制剂的作用：它可能通过N或O的供体分子与RNA和DNA多聚酶以及腺嘌呤的N7残基进行轴式配位。
Cd2+的作用：可能与细胞膜的膜脂结合，然后顺着细胞膜扩散，与膜蛋白结合，并诱导膜双脂层发生相变、膜蛋白构象改变并聚集；还可能作用于细胞膜上的机械敏感性离子通道，进而激活许多酶系统，使癌细胞产生不可逆的损伤。
2-吡啶苯并咪唑的作用：提供一个疏水面以增加识别和跨膜转运，以抑制在DNA复制和细胞分裂中起重要作用的拓扑异构酶的活性。
5-羟基间苯二甲酸基的作用：它的桥联单齿的羧酸根上未配位的氧原子(O1)与羟基氧原子(O5)及螯合双齿中已配位的羧基氧(O4)与2-吡啶苯并咪唑中的未配位的咪唑氮原子(N3)形成的氢键[O5-H5…O1
N3-H3…O4
堆垛成有趣的二维网状超分子结构，使抑制剂的抑制能力增强。
本发明的宫颈癌细胞抑制剂在制备抗宫颈癌药物及抗宫颈癌药物分析中的应用，为抗宫颈癌药物的研发提供了技术指导。
本发明的有益效果：
a)本发明制备宫颈癌细胞抑制剂的方法简单易行。
b)本发明的宫颈癌细胞抑制剂具有稳定性好的特点，2-吡啶苯并咪唑基团能够提供一个疏水面以增加识别和跨膜转运，以抑制在DNA复制和细胞分裂中起重要作用的拓扑异构酶的活性。
c)本发明调整配体亲合性，电子传递及取代速率的能力。
d)本发明的宫颈癌细胞抑制剂能够有效抑制宫颈癌细胞的生长，为抗宫颈癌药物的研发提供技术指导。
附图说明
图1为本发明的宫颈癌细胞抑制剂的红外光谱图，其红外光谱为(KBr压片,cm-1)：3250,1615,1598，1548，1434，1391，1322，1275，1210，1148，1121，1051，979，892，798，733，692；配合物中的v(C-N)在1275cm-1处，它在3250cm-1附近宽吸收峰可指认为v(O-H)的伸缩振动。配合物中苯环的骨架伸缩振动位于1548cm-1。它在1210cm-1和1002cm-1处的吸收峰可分别指认为v(C-O-C)的对称和不对称伸缩振动。
图2为本发明的宫颈癌细胞抑制剂中的2-吡啶苯并咪唑的红外光谱图，其红外光谱为(KBr压片,cm-1)（图2）：3057,1594,1568,1467,1441,1401,1315,1280,1151,1123,994,971,928,851,797，741,701；配体2-吡啶苯并咪唑的ν(C-N)在1286cm-1和1238cm-1处，2-吡啶苯并咪唑的苯环的骨架伸缩振动位于1593cm-1处。
图3为本发明的宫颈癌细胞抑制剂的金属离子配位环境图，在图3中，Cd2+分别与四个来自5-羟基间苯二甲酸配体的羧基氧原子和两个来自2-吡啶苯并咪唑配体的氮原子配位。
图4为本发明的宫颈癌细胞抑制剂的一维梯形链，在图4中，5-羟基间苯二甲酸配体采用μ3-桥联配位模式：一个羧基采用桥联单齿配位模式桥联一个Cd(II)，另一个羧基则作为螯合-桥联双齿配体连接另一个Cd(II)形成一维梯形链结构，每个2-吡啶苯并咪唑配体螯合Cd(II)离子位于链的两侧并垂直于该链。
图5为本发明的宫颈癌细胞抑制剂的二维图，在图5中，邻近的链通过5-羟基间苯二甲酸配体、2-吡啶苯并咪唑之间的苯环与苯环之间形成π–π堆积作用(面心与面心之间的距离是3.556和及氢键作用堆垛成有趣的二维网状超分子结构。
图6为本发明宫颈癌细胞抑制剂、2-吡啶苯并咪唑和5-羟基间苯二甲酸配体对四种人肿瘤细胞MDA-MB-231（人乳腺癌细胞）、A549（肺癌细胞）、Hela(宫颈癌细胞)和MG-63(骨肉瘤细胞)的抑制率图。
图7为本发明宫颈癌细胞抑制剂、2-吡啶苯并咪唑和5-羟基间苯二甲酸配体对四种人肿瘤细胞MDA-MB-231（人乳腺癌细胞）、A549（肺癌细胞）、Hela(宫颈癌细胞)和MG-63(骨肉瘤细胞)的IC50图。
图8为本发明宫颈癌细胞抑制剂-DNA复合体系的紫外吸收光谱图（抑制剂的浓度为2.0×10-5mol/L，[DNA]/[抑制剂]=0to 10）。
图9为在0.1mol/L缓冲溶液(pH=7.35)下，抑制剂-DNA复合体系的荧光光谱图（λex=274nm，λem=415nm）。
图10为本发明宫颈癌细胞抑制剂-DNA复合体系的粘度图（t=30℃）。
具体实施方式
下面通过实施例结合附图对本发明作进一步说明。
实施例1
一、本发明的制备方法：
（1）2-吡啶苯并咪唑的制备：
在三颈烧瓶中加入1.08克（0.01mol）邻苯二胺、1.23克（0.01mol）2-吡啶甲酸和10mL多聚磷酸，混合均匀后，放入微波快速反应系统内，先将功率调到200w，温度设定为100℃，辐射4min，待反应物充分溶于多聚磷酸后，再将功率调到700w，在温度为100℃下反应6min，得到墨绿色溶液，冷却至室温后倾入100mL冰水中，变成粉红色浑浊液，用NaOH中和至pH=9，产生粉红色沉淀，抽滤，用蒸馏水洗涤2次，得到的粗产品。将粗产品用100mL无水乙醇∶水（1∶1）重结晶，加入适量活性炭脱色，趁热过滤除去活性炭，将滤液冷却至室温后放到冰箱中，5小时后抽滤，用蒸馏水洗涤2次，将滤渣放在干燥箱中用80℃，烘20min，得到白色柱形的化合物即得到2-吡啶苯并咪唑。将其进行红外光谱测定，得到红外光谱图（如图2所示）
（2）将Cd(NO3)2·4H2O（1mmol）、上述制备好的2-吡啶苯并咪唑（0.5mmol）、5-羟基间苯二甲酸（0.5mmol）和15mL水放在烧杯中，然后加入0.6ml的三乙胺将溶液pH调至8.5，搅拌均匀形成原料液，搅拌时间为10min，搅拌速度为300r/min。
（3）将搅拌后的原料液放入体积为23mL带聚四氟乙烯内胆的不锈钢反应釜中，封好后放入烘箱，加热到140℃并保持120小时。
（4）用梯度降温法先降低至130℃，保持30min,然后再降低至120℃，保持30min；依此循环降至室温，得到无色块状晶体，即得到宫颈癌细胞抑制剂。将其进行红外光谱测定，得到红外光谱图（如图1所示）
二、产品检验：
将得到的宫颈癌细胞抑制剂采用X-射线单晶衍射检测，得到图3~5，同时进行晶体参数测定得到表1。
表1配合物（抑制剂）的晶体数据
三、产品性能检测方法：
（1）用二甲基亚砜（DMSO）分别将无色块状晶体配合物宫颈癌细胞抑制剂、2-吡啶苯并咪唑和5-羟基间苯二甲酸配成2.0×10-3mol/L的储备液，缓冲溶液(pH=7.35)为0.1mol·L-1的三羟甲基氨基甲烷—盐酸（Tris-HCl），MTT试剂（3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐）的浓度为5mg/mL。
（2）MDA-MB-231（人乳腺癌细胞）、A549（肺癌细胞）、Hela（宫颈癌细胞）和MG-63（骨肉瘤细胞）细胞株均置于37℃、5%CO2充分湿化条件下的培养箱中，接种于含10%灭活新生牛血清的PPMI1640培养液中培养。
（3）将所有化合物配制成10μg/mL，助溶剂DMSO终浓度不超过1%，测试该浓度下各化合物对癌细胞的抑制率。
（4）取处于对数生长期的细胞，每孔180μL(约4500-5000个细胞)含细胞的培养基接种于96孔培养板，于37℃、5%CO2充分湿化条件下培养24h。
（5）待细胞贴壁后，按每孔20μL的量加入样品,每个样品设6个复孔，同时设定相应的空白对照。
（6）继续培养48h后，每孔加入10μL MTT试剂(浓度为5mg/mL)，继续孵育4h后，吸弃上清液，每孔再加入150μL DMSO，轻微震荡反应5-8min，使结晶颗粒充分溶解。
（7）空白对照组调零，用酶标仪以490nm波长测定去除本底光吸收值后的吸光度值
值)，计算细胞增殖抑制率。可根据公式计算化合物的抑制率：抑制率=（1-加药组OD值/对照组OD值）×100%。
（8）所有实验均重复3次后取平均值。得到本发明的抑制剂和其配体对四种人肿瘤细胞的抑制率如图6和表2所示。
由图6和表2可见，本发明的抑制剂对宫颈癌细胞具有较好的细胞毒活性，其抑制率为41.36%，且比其相应的2-吡啶苯并咪唑大。说明配体在形成配合物（抑制剂）以后，其对癌细胞的抑制作用增强。
表2抑制剂和其配体（10μM，48小时）对四种人癌细胞株的抑制率（%）
实施例2
一、本发明的制备方法：
（1）2-吡啶苯并咪唑的制备：
在三颈烧瓶中加入1.08克（0.01mol）邻苯二胺、1.23克（0.01mol）2-吡啶甲酸和10mL多聚磷酸，混合均匀后，放入微波快速反应系统内，先将功率调到250w，温度设定为110℃，辐射3min，待反应物充分溶于多聚磷酸后，再将功率调到700w，在温度为100℃下反应10min，得到墨绿色溶液，冷却至室温后倾入100mL冰水中，变成粉红色浑浊液，用NaOH中和至pH=10，产生粉红色沉淀，抽滤，用蒸馏水洗涤2次，得到的粗产品。将粗产品用100mL无水乙醇∶水（1∶1）重结晶，加入适量活性炭脱色，趁热过滤除去活性炭，将滤液冷却至室温后放到冰箱中，3小时后抽滤，用蒸馏水洗涤3次，将滤渣放在干燥箱中用100℃，烘20min，得到白色柱形的化合物即得到2-吡啶苯并咪唑。
（2）将Cd(NO3)2·4H2O（1.5mmol）、2-吡啶苯并咪唑（0.5mmol）、5-羟基间苯二甲酸（1.0mmol）和20mL水放在烧杯中，然后加入三乙胺将溶液pH调至8.0，搅拌均匀形成原料液，搅拌时间为20min，搅拌速度为200r/min。
（3）将搅拌后的原料液放入带聚四氟乙烯内胆的不锈钢反应釜中，封好后放入烘箱，加热到145℃并保持115小时。
（4）用梯度降温法先降低至135℃，保持30min,然后再降低至125℃，保持30min；依此循环降至室温，得到无色块状晶体，即得到宫颈癌细胞抑制剂。
二、产品检验
检验方法同实施例1。
三、产品性能检测方法：
（1）用二甲基亚砜（DMSO）分别将无色块状晶体配合物宫颈癌细胞抑制剂、2-吡啶苯并咪唑和5-羟基间苯二甲酸配成2.0×10-3mol/L的储备液，缓冲溶液(pH=7.35)为0.1mol·L-1的三羟甲基氨基甲烷—盐酸（Tris-HCl），MTT试剂（3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐）的浓度为5mg/mL。
（2）MDA-MB-231（人乳腺癌细胞）、A549（肺癌细胞）、Hela（宫颈癌细胞）和MG-63（骨肉瘤细胞）细胞株均置于37℃、5%CO2充分湿化条件下的培养箱中，接种于含10%灭活新生牛血清的PPMI1640培养液中培养。
（3）将所有化合物配制成10μg/mL，助溶剂DMSO终浓度不超过1%，测试该浓度下各化合物对癌细胞的抑制率。
（4）取处于对数生长期的细胞，每孔180μL(约4500-5000个细胞)含细胞的培养基接种于96孔培养板，于37℃、5%CO2充分湿化条件下培养24h。
（5）待细胞贴壁后，按每孔20μL的量加入样品,每个样品设6个复孔，同时设定相应的空白对照。
（6）继续培养48h后，每孔加入10μL MTT试剂(浓度为5mg/mL)，继续孵育4h后，吸弃上清液，每孔再加入150μL DMSO，轻微震荡反应5-8min，使结晶颗粒充分溶解。
（7）所有实验均重复3次后取平均值。对初筛抗肿瘤效果好的受试化合物，继续用5个浓度梯度做相应细胞株的IC50值，得到本发明的宫颈癌细胞抑制剂和其配体对四种人肿瘤细胞的IC50值如图7和表2所示。
由图7和表3可见，该抑制剂能够较好地抑制宫颈癌细胞的生长，其中对Hela（宫颈癌细胞）有较小的IC50值（20.53±11.26）。
表3抑制剂和其配体对四种人癌细胞株的IC50(μM).
实施例3
一、本发明的制备方法：
（1）2-吡啶苯并咪唑的制备：
在三颈烧瓶中加入1.08克（0.01mol）邻苯二胺、1.23克（0.01mol）2-吡啶甲酸和10mL多聚磷酸，混合均匀后，放入微波快速反应系统内，先将功率调到220w，温度设定为100℃，辐射4min，待反应物充分溶于多聚磷酸后，再将功率调到700w，在温度为100℃下反应8min，得到墨绿色溶液，冷却至室温后倾入100mL冰水中，变成粉红色浑浊液，用NaOH中和至pH=9.5，产生粉红色沉淀，抽滤，用蒸馏水洗涤3次，得到的粗产品。将粗产品用100mL无水乙醇∶水（1∶1）重结晶，加入适量活性炭脱色，趁热过滤除去活性炭，将滤液冷却至室温后放到冰箱中，4小时后抽滤，用蒸馏水洗涤3次，将滤渣放在干燥箱中用90℃，烘30min，得到白色柱形的化合物即得到2-吡啶苯并咪唑。
（1）将Cd(NO3)2·4H2O（1mmol）、2-吡啶苯并咪唑（0.5mmol）、5-羟基间苯二甲酸（1mmol）和15mL水放在烧杯中，然后加入三乙胺将溶液pH调至8.5，搅拌均匀形成原料液，搅拌时间为10min，搅拌速度为600r/min。
（2）将搅拌后的原料液放入体积为23mL带聚四氟乙烯内胆的不锈钢反应釜中，封好后放入烘箱，加热到140℃并保持120小时。
（3）用梯度降温法先降低至130℃，保持30min,然后再降低至120℃，保持30min；依此循环降至室温，得到无色块状晶体，即得到宫颈癌细胞抑制剂。
二、产品检验：
检验方法同实施例1
三、产品性能检测方法：
（1）用10%二甲基亚砜（DMSO）将无色块状晶体配合物宫颈癌细胞抑制剂配成2.0×10-3mol/L的溶液。
（2）用三羟甲基氨基甲烷—盐酸（Tris-HCl）缓冲溶液将DNA配成2.0×10-4mol/L的溶液。
（3）在比色皿中加入3mL，2.0×10-5mol/L的配合物溶液，逐次加入1μL，2.0×10-4mol/L的ct-DNA(即小牛胸腺DNA)溶液。
（4）每个混合液摇匀放置5min后，将其置于紫外-可见吸收光谱仪上扫描，结果如图8所示。
由图8可知，随着DNA浓度的增大，抑制剂-DNA复合体系的紫外吸收增加，在258nm处有3nm的红移，增色率为104.5%；而在312nm处，则没有红移和增色现象。
抑制剂与DNA的键合强度Kb可以通过下列方程式确定：
[DNA]/(εa-εf)＝[DNA]∕(εb-εf)﹢1/[Kb(εb-εf)]
此处，εa,εf和εb分别是DNA的已知浓度，未与抑制剂键合及已与抑制剂键合的相关系数，Kb是抑制剂与DNA的键合常数，[DNA]是DNA在0.1mol/L缓冲溶液(pH=7.35)中的浓度。将[DNA]/(εa-εf)比[DNA]作图，可以得到斜率1∕(εb-εf)和截距1/[Kb(εb-εf)]，斜率和截距之比就可以得到键合常数Kb，该抑制剂的键合常数为2.48×106。由此可见，该抑制剂较强地插入到DNA的碱基对之中，且还能通过沟槽键合与DNA作用。
由上述实施例可知，本发明的宫颈癌细胞抑制剂具有稳定性好，与癌细胞DNA作用较强的特点，是一种优质的宫颈癌细胞抑制剂。
实施例4
一、本发明的制备方法：
（1）将Cd(NO3)2·4H2O（1mmol）、2-吡啶苯并咪唑（0.5mmol）、5-羟基间苯二甲酸（0.5mmol）和15mL水放在烧杯中，然后加入三乙胺将溶液pH调至8.0~8.5，搅拌均匀形成原料液，搅拌时间为15min，搅拌速度为400r/min。
（2）将搅拌后的原料液放入体积为23mL带聚四氟乙烯内胆的不锈钢反应釜中，封好后放入烘箱，加热到145℃并保持115小时。
（3）用梯度降温法先降低至135℃，保持30min,然后再降低至125℃，保持30min；依此循环降至室温，得到无色块状晶体，即得到宫颈癌细胞抑制剂。
二、产品检验
检验方法同实施例1
三、产品性能检测方法：
（1）用10%二甲基亚砜（DMSO）将无色块状晶体配合物宫颈癌细胞抑制剂配成2.0×10-3mol/L的溶液。
（2）在比色皿中加入1mL，2.0×10-5mol/L的配合物溶液，1.0mL三羟甲基氨基甲烷—盐酸（Tris-HCl）缓冲溶液（pH=7.35）中，逐次加入1mL的ct-DNA(即小牛胸腺DNA)溶液，使DNA对配合物的浓度逐渐提高。
（3）将上述每个混合液用二次亚沸蒸馏水稀释至5mL后摇匀。摇匀放置5min后，将其置于荧光光谱仪上扫描（λex=309nm，λem=375nm），结果如图9所示。
由图9可见，随着DNA浓度的增加，抑制剂-DNA复合体系的荧光强度增加，当抑制剂/[DNA]=10时，荧光强度最强，分别是无DNA存在时的0.50倍。说明探针是以插入模式与DNA结合的。
实施例5
一、本发明的制备方法：
（1）将Cd(NO3)2·4H2O（1mmol）、2-吡啶苯并咪唑（0.5mmol）、5-羟基间苯二甲酸（0.5mmol）和15mL水放在烧杯中，然后加入三乙胺将溶液pH调至8.0~9.0，搅拌均匀形成原料液，搅拌时间为10min，搅拌速度为300r/min。
（2）将搅拌后的原料液放入体积为23mL带聚四氟乙烯内胆的不锈钢反应釜中，封好后放入烘箱，加热到140℃并保持120小时。
（3）用梯度降温法先降低至130℃，保持30min,然后再降低至120℃，保持30min；依此循环降至室温，得到无色块状晶体，即得到宫颈癌细胞抑制剂。
二、产品检验
检验方法同实施例1
三、产品性能检测方法：
（1）用10%二甲基亚砜（DMSO）将无色块状晶体配合物宫颈癌细胞抑制剂配成2.0×10-3mol/L的溶液。
（2）测定时溶液体系温度恒定在30℃。
（3）选择相对合适的转速（30RPM）和扭矩。
（4）用微量进样器将定量体积的待测物储液滴加至ct-DNA缓冲液中，按照[抑制剂]/[DNA]=0、0.02、0.04、0.06、0.09、0.12、0.16、0.20的累加比例逐渐滴加。
（5）每次滴加完反应10min待数值稳定记录数据。
（6）以不同化合物的(η/η0)1/3对[抑制剂]/[DNA]的比值作图，结果如图10所示。由图10可见，随着抑制剂浓度的增大，体系中DNA的粘度表现出明显的增加，当[抑制剂]/[DNA]达到0.20时，相对粘度比值(η/η0)1/3=1.0212，粘度明显增大，这进一步充分证明，抑制剂是通过其2-吡啶苯并咪唑平面与DNA碱基对间产生经典插入作用的，只有这种经典而有力的插入作用才能使DNA溶液粘度增大。
Claims (9)
1.一种宫颈癌细胞抑制剂，其特征在于：所述宫颈癌细胞抑制剂结构式为：
2.根据权利要求1所述的宫颈癌细胞抑制剂，其特征在于：所述宫颈癌细胞抑制剂分子量为487~488，熔点为294~298℃，粘度为12.3~12.5mm-1，密度为1.77~1.78g cm-3。
3.根据权利要求1所述的宫颈癌细胞抑制剂，其特征在于：所述宫颈癌细胞抑制剂为无色块状晶体。
4.根据权利要求3所述的宫颈癌细胞抑制剂，其特征在于：所述宫颈癌细胞抑制剂的晶体结构属于单斜晶系P21/c空间群，其晶胞参数为：a为
b为c为α为90°，β为97~98°，γ为90°。
5.一种制备权利要求1至4任一所述的宫颈癌细胞抑制剂的制备方法，其特征在于：它的制备方法包括如下步骤：
（1）将原料Cd(NO3)2·4H2O、2-吡啶苯并咪唑、5-羟基间苯二甲酸按照摩尔比为1~3:1:1~2的配比称量好；
（2）将称量好的原料投入容器中，加入水，水与原料总体积的体积比为10~20:1；再加入三乙胺将溶液pH调至8.0~9.0；然后搅拌均匀形成原料液；
（3）将搅拌均匀的原料液转入反应釜中，封盖，升温至140~145℃后进行保温反应115~120h；
（4）反应完成之后，采用梯度降温法将其降至室温，得到无色块状晶体的配合物，即宫颈癌细胞抑制剂。
6.根据权利要求5所述的宫颈癌细胞抑制剂的制备方法，其特征在于：所述梯度降温法为：先降低10℃，保持20~30min；然后再降低10℃，保持20~30min；依此循环降至室温。
7.根据权利要求5所述的宫颈癌细胞抑制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中的搅拌时间为10~20min，搅拌速度为200~600r/min。
8.根据权利要求5所述的宫颈癌细胞抑制剂的制备方法，其特征在于：所述原料中的2-吡啶苯并咪唑的制备方法为先按邻苯二胺与2-吡啶甲酸摩尔比为1:1分别称取邻苯二胺与2-吡啶甲酸作为反应物，以多聚磷酸作为溶剂，混合均匀后，放入微波快速反应系统内，在功率为200~250w，温度为80~110℃下辐射3~5min；待反应物充分溶于多聚磷酸后，再将功率调到700w，在温度为100℃下反应6~10min，得到墨绿色溶液，冷却至室温后倾入冰水中，变成粉红色浑浊液，用NaOH中和至pH为9~10，产生粉红色沉淀，抽滤，用蒸馏水洗涤2~3次，得到粗产品；将粗产品用无水乙醇∶水体积比为1∶1进行重结晶，加入活性炭脱色，趁热过滤除去活性炭，将滤液冷却至室温后放到在5~10℃下冷藏3~5小时后抽滤，用蒸馏水洗涤2~3次，将滤液放在干燥箱中用80~100℃，烘20~30min，得到白色柱形的化合物即得到2-吡啶苯并咪唑。
9.根据权利要求1所述的宫颈癌细胞抑制剂，其特征在于：它在制备抗宫颈癌药物中的应用。
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