CN102970864A - 纳米颗粒药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明披露了一种用于口服递送的由壳聚糖、耐酶PGA-氨羧络合剂、以及一种生物活性剂组成的生物活性纳米颗粒药物组合物。这种用于口服给药的基于壳聚糖的纳米颗粒具有正表面电荷、增强的渗透性、以及在GIT中耐酶性的特征。

Description

纳米颗粒药物组合物
技术领域
本发明涉及纳米颗粒的一般用途，这种用于口服给药的纳米颗粒具有壳聚糖和带负电荷的基质以及至少一种生物活性剂的一种组合物、以及它们的增强的渗透性和耐酶性。
背景技术
对于病人或一种受试动物来说口服进入被认为是最方便的给药方式。尽管如此，肠上皮是亲水性药物(如肽和蛋白质)吸收的主要屏障。这是因为亲水性药物不能够容易地跨细胞扩散通过脂质双分子层细胞膜。由位于相邻上皮细胞的腔表面的紧密连接的存在严格限制了亲水性分子经由细胞旁路的转运。这些紧密连接形成一种屏障，限制了亲水性分子的细胞旁扩散。
溶质在细胞之间通过将细胞一起结合在一个层(例如胃肠道的上皮细胞)中的紧密连接的移动，被称为细胞旁转运。紧密连接形成一种细胞间屏障，这种屏障将一个细胞层的顶端与基底外侧的流体腔分隔开。细胞旁转运是被动的，并且对于一种溶质来说它通过从顶端到基底外侧的腔的一种紧密连接的移动取决于该紧密连接的渗透性。
聚合纳米材料已经被作为药物递送载体进行了广泛的研究。由合成的可生物降解聚合物(例如聚-ε-己内酯和聚丙交酯)制成的纳米颗粒由于它们的生物相容性而备受关注。但是，这些纳米颗粒由于它们的疏水性对于亲水性药物不是理想的载体。
在口服给药途径之后，蛋白质药物经在胃中的胃介质的低pH而易于降解。在口服给药之后的蛋白质药物的吸收由于它们的高分子量、亲水性、以及对酶钝化的敏感性是具有挑战性的。为了克服在胃肠道(GIT)内的酶屏障，口服肽类药物已经与蛋白酶抑制剂联合给药。虽然在短期内许多酶抑制剂与最小细胞毒性相关联，但是长期给药已经显示其干扰营养蛋白质的消化并且引起受激蛋白酶的分泌或胰腺肥大。在最好的情况下，在GIT中一种肽类药物分子与一种酶抑制剂之间的距离大约为几个微米。在联合给药时，当该肽类药物分子碰到在GIT中的蛋白酶时，蛋白酶抑制剂可能不在用作保护作用的非常接近之处，导致该酶抑制剂的降低的耐酶功效。
壳聚糖(CS)，一种阳离子多糖，是无毒的并且是软组织相容的。另外，已知壳聚糖具有一种特殊的性质-粘附在粘膜表面(即粘膜粘附特性)、瞬时打开上皮细胞之间的连接、并且在接近于生理学范围的pH值下具有良好的可溶性，以释放有效负载。将肽或蛋白质药物(有效负载)载入一种在生理学pH范围的药物递送载体可以保留它们的生物活性。
Thanou等人，报道了作为肠吸收增强剂的壳聚糖和其衍生物。当在酸性pH下被质子化时，壳聚糖能够提高肽类药物穿过粘膜上皮的细胞旁渗透性。发现在动物中壳聚糖或N-三甲基壳聚糖与肽类药物的联合给药与没有壳聚糖组分增强吸收的给药相比实质性地提高了这种肽的生物利用度。
γ-PGA，一种阴离子肽，是通过杆菌属的成员产生的作为荚膜物质或作为粘液的一种天然化合物。γ-PGA是独特的，它是由通过酰胺键连接在一起的天然存在的L-谷氨酸组成的。据报道这种天然存在的γ-PGA是一种水溶性的、生物可降解的、并且无毒的聚合物。一种聚氨基羧酸(氨羧络合剂)，例如二亚乙基三胺五乙酸，已经显示出耐酶特性。临床上有益的是将有待使用的作为一种带负电荷的基质的PGA-氨羧络合剂结合物与作为一种带正电荷的基质的壳聚糖结合在纳米颗粒制剂中，以用于口服给药时增强吸收性能并且降低酶的作用。
发明内容
技术问题
为了被吸收，在口服给药之后的一种肽类药物将必然沿着胃肠道(GIT)运送、通过粘膜/糖萼层以穿过肠上皮进入门静脉并且最终排入全身血液循环中。大多数肽类药物对于被存在于胃肠液中和粘膜/糖萼层中的消化酶的降解是敏感的。一般而言，在胃肠道中在吸收的过程中极少有肽类药物能够抵抗酶的攻击(onslaught)。可以经由一种封装这两种物质的胶囊来完成一种耐酶化合物(例如，一种蛋白酶抑制剂)与一种生物活性药物(例如，一种肽类药物)向一种受试动物的联合给药。但是，由于接近限制(在GIT中的酶的存在下耐酶化合物和生物活性药物可以相距几微米或几毫米)；酶抑制作用将被严重损害。
问题解决方案
因此，本发明的一个目的是提供一种具有朝向感兴趣的药物非常接近的耐酶化合物的口服给药系统，以保护该药物在GIT中免受酶攻击。
本发明的一些方面提供了一种纳米颗粒药物组合物，这些纳米颗粒包括由带正电荷的壳聚糖为主导的外壳部分以及核心部分，该核心部分包括一种带正电荷的壳聚糖、一种PGA-氨羧络合剂结合物的带负电荷的基质、至少一种载入纳米颗粒之内的生物活性剂、以及可任选的一种零电荷化合物。
在一个实施方案中，该非常接近定义为在小于1微米的纳米范围之内。在另一个实施方案中，该PGA氨羧络合剂结合物的带负电荷的基质是该纳米颗粒系统中的耐酶化合物。
本发明的一方面提供了一种新颖、独特的纳米颗粒系统，该系统用于通过使用一种简单且温和的离子凝胶作用的方法将蛋白质/肽类药物或生物活性剂递送至一种受试动物，该方法在于将一种聚-γ-谷氨酸(γ-PGA)溶液(或其他带负电荷的组分，例如PGA-氨羧络合剂结合物)添加到壳聚糖溶液中。在一个实施方案中，采用的壳聚糖是N-三甲基壳聚糖(TMC)、低分子量壳聚糖、EDTA壳聚糖、壳聚糖衍生物、和/或它们的组合。在一个实施方案中，本发明的CS的分子量大约为80kDa或更小，适合于在维持蛋白质和肽类药物的生物活性的一个pH时的充分可溶性。规定一种低分子量壳聚糖颗粒是肾惰性的。制备的纳米颗粒的粒径和ζ电位值是由构成它们的组合物所控制。经TEM(透射电子显微镜检查)以及AFM(原子力显微镜检查)检查获得的结果表明，这种制备的纳米颗粒的形态是大致球形或类似球体的形状。
可以经由口服给药和肠胃外给药(例如鼻内吸收)、皮下注射或注射到血管中来给予纳米颗粒。在一个实施方案中，壳聚糖作为外壳基质在这种纳米颗粒表面上占主导地位，并且这种纳米颗粒表面的实质性部分具有正电荷特征。在核心部分中，带负电荷的γ-PGA或其他适合的带负电荷的组分(例如PGA-氨羧络合试剂结合物)与带正电荷的壳聚糖以静电方式相互作用。在一个实施方案中，在核心部分中基本上所有的带负电荷的核心基质与带正电荷的基质的一部分结合或以静电方式相互作用从而维持基本上零电荷(中性)的核心。
在一个进一步的实施方案中，这种纳米颗粒具有在大约50与400纳米之间的平均粒径，优选地在大约100与300纳米之间，并且最优选地在大约100与200纳米之间。由于该耐酶PGA-氨羧络合剂以及该生物活性剂两者均被封装在一种纳米颗粒中，它们的距离总是在纳米范围内。
在一个实施方案中，这种包含生物活性剂的纳米颗粒进一步地包括至少一种渗透促进剂，其中该渗透促进剂既不涉及纳米颗粒的基本配方，也不涉及纳米颗粒结构的静电网络形成。该渗透促进剂可以选自下组，该组由以下各项组成：螯合剂、胆汁盐、阴离子表面活性剂、中链脂肪酸、磷酸酯、等等。在另一个实施方案中，这种纳米颗粒和一种渗透促进剂被联合载入一种胶囊中或被分别封装在两组胶囊中以用于联合给药。
在一个实施方案中，用于治疗阿尔茨海默病的方法包括将具有用于治疗阿尔茨海默病的至少一种生物活性剂的纳米颗粒以大约每天10mg至40mg的有效量施用给病人持续一个月至一年或更长的时期。在另一个实施方案中，该外壳基质的至少一部分是交联的，优选地处于小于50％的交联度，或最优选地在大约1％与20％之间。
本发明的一方面提供了一种纳米颗粒药物组合物，其中该纳米颗粒可以是冻干的以形成固体的干燥的纳米颗粒。这种干燥的纳米颗粒可以载入一种胶囊、一种片剂、一种丸剂、一种咀嚼块、或任何方便的药物递送载体中以用于在一种受试动物中口服给药，其中胶囊可以用一种肠溶包衣进一步地处理。这种冻干的纳米颗粒可以被再水合到一种溶液中或通过接触体液从而恢复成带有正表面电荷并具有与那些冻干前的纳米颗粒相同的物理和生化特性的湿的纳米颗粒。在一个实施方案中，在一个冻干过程中纳米颗粒可以与海藻糖或与1，2，3，4，5，6-己六醇(hexan-1，2，3，4，5，6-hexol)相混合。在一个实施方案中，将胶囊内表面处理成亲脂的或疏水的。在另一个实施方案中，该胶囊的外表面是肠溶包衣的或用一种肠溶包衣聚合物处理的。
本发明的某些方面提供了一种用于在一种受试动物中口服给药的耐酶纳米颗粒药物组合物，这些纳米颗粒包括由带正电荷的壳聚糖为主导的外壳部分和核心部分，该核心部分含有带负电荷的PGA-氨羧络合剂结合物基质，其中在该核心部分中该带负电荷的基质至少部分地与一部分所述带正电荷的壳聚糖中和，并且至少一种生物活性剂被载入这些纳米颗粒之内。在一个实施方案中，该PGA-氨羧络合剂具有耐酶性。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物的纳米颗粒表面具有一种正表面电荷特征，其中这些纳米颗粒具有一种从大约+5mV至大约+75mV、优选地从大约+15mV至大约+50mV的表面电荷。在一个进一步的实施方案中，这些纳米颗粒是处于一种冻干粉的形式。在一个实施方案中，本发明的药物组合物的纳米颗粒进一步包括铁、锌、钙、硫酸镁以及TPP。
本发明的一些方面提供了一种降低在受试动物中由肿瘤坏死因子引起的炎症应答的方法，该方法包括口服给予由一种TNF抑制剂、壳聚糖、以及一种PGA-氨羧络合剂结合物的核心基质组成的纳米颗粒。在一个实施方案中，该TNF抑制剂是一种单克隆抗体。在另一个实施方案中，该TNF抑制剂是英利昔单抗或阿达木单抗。在一个实施方案中，该TNF抑制剂是一种循环受体融合蛋白。在另一个实施方案中，该TNF抑制剂是依那西普。
本发明的一些方面提供了将具有增强的耐酶性的生物活性纳米颗粒连同在生物活性纳米颗粒内部的生物活性剂给予受试者，其中这些纳米颗粒包括由带正电荷的壳聚糖占主导的外壳部分和核心部分，该核心部分含有至少一种耐酶剂和带负电荷的基质，其中该带负电荷的基质至少部分地与一部分带正电荷的壳聚糖中和。在一个实施方案中，该耐酶剂是氨羧络合剂，例如二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)或乙二胺四乙酸(EDTA)，在纳米颗粒的制造中该氨羧络合剂可以与壳聚糖基质或PGA基质结合。
本发明的一些方面提供了一种纳米颗粒药物组合物，这些纳米颗粒包括由带正电荷的壳聚糖为主导的外壳部分和核心部分，该核心部分包含一种带负电荷的基质，其中该基质是PGA-氨羧络合剂结合物，其中在核心部分中该带负电荷的基质至少部分地与一部分该带正电荷的壳聚糖中和，并且至少一种生物活性剂被载入这些纳米颗粒之内。在一个实施方案中，纳米颗粒的该药物组合物进一步包括一种药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂、或其他惰性添加剂。
在一个实施方案中，这些纳米颗粒被封装入一种胶囊中，其中该胶囊进一步包括至少一种增溶剂、发泡剂、乳化剂、药典上的赋形剂或至少一种渗透促进剂。在另一个实施方案中，这些纳米颗粒是冻干的，由此这些纳米颗粒是处于一种粉末形式。
发明的有益效果
本发明的纳米颗粒为将一种耐酶化合物(例如，PGA-氨羧络合剂结合物)和一种生物活性药物(例如，一种肽类药物)联合给予一种受试动物提供了有益的手段，其中该PGA-氨羧络合剂结合物与该生物活性剂通常在纳米距离之内以在充满酶的GIT中提供它的耐酶保护作用。
附图说明
当参考附图阅读时，根据实施方案的说明，本发明的另外的目的和特征将变得更清楚并且其披露本身将得以最好地理解。
图1显示了(a)制备的CS-γ-PGA纳米颗粒的TEM显微照片(0.10％γ-PGA：0.20％CS)以及(b)制备的CS-γ-PGA纳米颗粒的AFM显微照片(0.01％γ-PGA：0.01％CS)。
图2显示了制备的CS-γ-PGA纳米颗粒对Caco-2细胞单层的TEER值的影响。
图3显示了具有正表面电荷的用FITC标记的壳聚糖的一种fCS-γ-PGA纳米颗粒。
图4显示了在糖尿病大鼠中血浆胰岛素含量对口服给药的载胰岛素纳米颗粒的时间，其中这些冻干的纳米颗粒在递送时被载入一种肠溶包衣胶囊中。
图5显示了基于用(γ-PGA)-DTPA结合物的关于酶抑制研究的实验数据。
具体实施方式
以下所述的本发明的优选实施方案具体地涉及由壳聚糖/PGA-氨羧络合剂/胰岛素组成的纳米颗粒的制备、以及它们通过打开上皮细胞之间的紧密连接来增强肠的或血脑的细胞旁渗透的渗透性。虽然该说明书提出了不同的实施方案的具体细节，应当理解的是该说明书仅仅是说明性的并且不应当以任何方式被解释为对本发明进行限制。此外，本发明的不同应用、以及可以由那些本领域的技术人员想到的另外的修改，也被包括在下文所述的一般概念中。
在此“生物活性剂”表示包括在给药之后以一种积极或消极方式在物理、生理、心理、生物化学、生物学、或其他躯体功能上可以影响接受者(一种受试动物)的任何试剂。该“生物活性剂”可以包括，但不限于，药物、蛋白质、肽、siRNA、酶、补充营养素、维生素、其他活性剂。在一个实施方案中，该生物活性剂选自下组，该组由以下各项组成：蛋白质、肽、核苷、核苷酸、抗病毒剂、抗肿瘤剂、抗生素、富氧剂(oxygen-enriching agent)、含氧剂(oxygen-containing agent)、抗癫痫药、以及抗炎药。该抗癫痫药可以包括纽诺汀(Neurontin)(加巴喷丁(gabapentin)，一种γ-氨酪酸类似物)、利必通(Lamictal)(拉莫三嗪(lamotrigine)，显示其作用于电压敏感性钠通道，稳定神经膜并且抑制兴奋神经递质的释放)、Febatol(非尔氨酯(felbamate)，显示其对GABA受体结合位点具有弱的抑制作用)、妥泰(Topamax)(托吡酯(topiramate)，具有衍生自D-果糖的一种新颖的化学结构，其阻断电压敏感性钠通道，增强一种抑制性神经递质-GABA的活性，并且阻断一种兴奋神经递质-谷氨酸盐的作用)、和/或Cerebyx(磷苯妥英(fosphenytoin)，在肠胃外给药之后可被迅速转化的一种苯妥英前体)。
进一步地，该生物活性剂可以选自下组，该组由以下各项组成：降钙素、环胞素、胰岛素、催产素、酪氨酸、脑啡肽、促甲状腺激素释放激素(tyrotropinreleasing hormone)、促卵泡激素、促黄体激素、加压素以及加压素类似物、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、白细胞介素-11、干扰素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子、肿瘤坏死因子抑制剂、以及黑素细胞刺激激素。白细胞介素11(IL-11)是一种促血小板生成的生长因子，该生长因子可以直接刺激造血干细胞以及巨核细胞祖细胞的增殖，并且诱导巨核细胞成熟导致血小板的产生增多(奥普瑞白介素
Figure BDA00002281784500081
)。在一个优选实施方案中，该生物活性剂是一种阿尔茨海默拮抗剂或疫苗。用于治疗阿尔茨海默病的生物活性剂可以包括盐酸美金刚(Merz制药的
Figure BDA00002281784500082
)、盐酸多奈哌齐(卫材有限公司(Eisai Co.Ltd.)的安理申
Figure BDA00002281784500083
酒石酸利伐斯的明(诺华的艾斯能
Figure BDA00002281784500084
盐酸加兰他敏(Johnson &Johnson的)、或他克林(帕克-戴维斯(Parke Davis)的他克林
Figure BDA00002281784500086
在一个实施方案中，该生物活性剂可以选自下组，该组由以下各项以一种药学上的有效量组成：硫酸软骨素、透明质酸、生长因子以及蛋白质。
在一个进一步的实施方案中，该至少一种生物活性剂是胰岛素或胰岛素类似物。在再另一个实施方案中，该至少一种生物活性剂选自下组，该组由以下各项组成：一种胰岛素增敏剂、一种胰岛素促分泌剂、一种类似物、GLP-2、GLP-2类似物、一种二肽基肽酶4抑制剂(DPP-4抑制剂)、艾塞那肽、利拉鲁肽、阿必鲁肽(albiglutide)、他司鲁泰(taspoglutide)、α-葡糖苷酶抑制剂、淀粉不溶素类似物、钠-葡萄糖协同转运蛋白2型(SGLT2)抑制剂、苯氟雷司、以及托瑞司他。在一个进一步的实施方案中，该含胰岛素的纳米颗粒包括一种痕量的锌或钙，或用一种肠溶包衣处理。在一个实施方案中，该生物活性剂是非胰岛素的艾塞那肽，一种非胰岛素的普兰林肽、胰岛素、胰岛素类似物、或它们的组合。
本发明的该生物活性剂也可以选自下组，该组由以下各项组成：催产素、加压素、促肾上腺皮质激素、催乳素、促黄体素释放素或促黄体生成激素释放激素、生长激素、生长激素释放因子、生长抑素、胰高血糖素、干扰素、胃泌素、四肽胃泌素、五肽胃泌素、尿抑胃素(urogastroine)、胰泌素、降钙素、脑啡肽类、内啡肽类、血管紧张素类、肾素、缓激肽、杆菌肽、多粘菌素、粘菌素、短杆菌肽、以及合成类似物、改性物以及它们的药理学上的活性片段、单克隆抗体类以及可溶性疫苗。生长激素(GH)是一种在人和其他动物中刺激生长和细胞繁殖的肽类激素。它是有191个氨基酸的单链多肽激素，是由在垂体前叶侧翼内的体促素细胞合成、贮存、以及分泌。促生长素(somatotrophin)是指在动物体内产生的生长激素，术语生长激素(somatropin)是指通过重组DNA技术产生的生长激素，并且对于人类缩写为“rhGH”。
在一个进一步的实施方案中，该生物活性剂选自下组，该组由以下各项组成：蛋白质、肽、核苷、核苷酸、抗病毒剂、抗肿瘤药剂、抗生素、抗癫痫药、以及抗炎药。在一个进一步的实施方案中，该生物活性剂可以选自下组，该组由以下各项组成：降钙素、环胞素、胰岛素、催产素、酪氨酸、脑啡肽、促甲状腺激素释放激素(TRH)、促卵泡激素(FSH)、促黄体激素(LH)、加压素以及加压素类似物、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、白细胞介素-II(IL2)、白细胞介素-11(IL-11)、干扰素、集落刺激因子(CSF)、肿瘤坏死因子(TNF)以及黑素细胞刺激激素。
在一个进一步的实施方案中，该生物活性剂是一种阿尔茨海默拮抗剂。在一个实施方案中，该抗癫痫药可以包括纽诺汀(Neurontin)(加巴喷丁(gabapentin))、利必通(Lamictal)(拉莫三嗪(lamotrigine))、Febatol(非尔氨酯(felbamate))、妥泰(Topamax)(托吡酯(topiramate))、Cerebyx(磷苯妥英(fosphenytoin))、狄兰汀(Dilantin)(苯妥英(phenytoin))、德巴金(Depakene)(丙戊酸)、得理多(Tegretol)(卡马西平(carbamazepine))、卡马西平环氧化物、Vimpat(拉科酰胺(lacosamide))以及苯巴比妥(phenobarbitol)。磷苯妥英(帕克-戴维斯(Parke-Davis)的磷苯妥英制剂(Cerebyx)；辉瑞制药有限公司(Pfizer Holding France)的Prodilantin)是一种水溶性的苯妥英药物前体，仅在医院中使用通过肠胃外递送用于对癫痫发作的治疗。磷苯妥英具有系统(IUPAC)名称为(2，5-二氧-4，4-联苯-咪唑烷-1-基)甲氧基膦酸。它的化学式为C16H15N2O6P，具有362.274g/mol的分子质量。
实例1：
材料和CS-γ-PGA纳米颗粒的制备
具有相对低分子量(大约80kDa或更低)的壳聚糖可以容易地溶解于pH 6.0的水溶液中，然而在解聚作用之前该壳聚糖需要溶于一种其pH值大约为4.0的醋酸溶液中。作为一个实例，紧接着将一种0.10％的γ-PGA水溶液添加入该低分子量CS溶液中(粘度1.29±0.02cp)，形成具有平均粒径为218.1±4.1nm、具有多分散性指数为0.3(n＝5)的纳米颗粒。
通过在室温下使用一种移液管(0.5-5ml，
Figure BDA00002281784500101
BrandTech科学公司，德国)将γ-PGA水溶液(pH 7.4，2ml)以不同的浓度(按w/v计0.01％、0.05％、0.10％、0.15％、或0.20％)在磁力搅拌下添加入到一种低分子量CS水溶液(pH 6.0，10ml)中而获得纳米颗粒。通过38,000rpm超速离心1小时收集纳米颗粒。弃去上清液并且在去离子水中再悬浮纳米颗粒以用于进一步的研究。如此通过在此所述的简单且温和的离子-凝胶作用的方法获得的这些纳米颗粒显示出典型的特征：具有在大约50至400nm之间的粒径的类似球体的构型、正表面电荷以及窄的多分散性指数。如在此所披露的，该纳米颗粒制剂中的γ-PGA可以用PGA-氨羧络合剂代替。
在不同的γ-PGA和CS浓度下制备的CS-γ-PGA纳米颗粒的粒径和ζ电位值被确定，并且结果显示在表1a和1b中。发现制备的纳米颗粒的粒径和ζ电位值主要是通过在添加溶液中γ-PGA的局部浓度对于在下沉溶液(sinksolution)中的CS的周围浓度的相对量来确定的。在一个固定的CS浓度，γ-PGA浓度的增加允许γ-PGA分子与更多CS分子相互作用，并且因此形成一种更大尺寸的纳米颗粒(表1a，p＜0.05)。当CS分子的量超过局部γ-PGA分子的量时，一些多余的CS分子缠结在CS-γ-PGA纳米颗粒的表面上。
因此，形成的纳米颗粒可以表现出一种以中性聚合电介质-络合物为核心、该核心被一种带正电荷的CS外壳(表1b)包围的结构，该结构确保了胶体的稳定性。相反，当局部γ-PGA分子的量足以超过环境中的CS分子的量时，形成的纳米颗粒具有暴露在表面的γ-PGA并且因此具有ζ电位的负电荷。因此，制备的CS-γ-PGA纳米颗粒的粒径和ζ电位值可以由构成它们的组合物所控制。由TEM和AFM检查得到的结果显示，所制备的纳米颗粒在形状上是具有一种平滑表面的球形(图1a和1b)。在任何2.5与6.6之间的pH时，这些纳米颗粒在形状上是具有一种平滑表面的球形。在一个实施方案中，在大约2.5的pH时，当暴露在胃中的酸性介质时，本发明的纳米颗粒的稳定性可以使这种纳米颗粒能够保持完整。
在一个进一步的研究中，只要在室温下将一种水性γ-PGA在磁力搅拌下加入到一种水性TMC(N-三甲基壳聚糖)(具有6∶1的TMC/γ-PGA重量比)，纳米颗粒(NPs)立即自组装。壳聚糖和N-三甲基壳聚糖的化学式如下所示：
Figure BDA00002281784500111
        壳聚糖                           TMC
带正电荷的TMC的量远远超过带负电荷的γ-PGA的量；一些多余的TMC分子缠结在纳米颗粒的表面上，因此表现出一种正表面电荷(表2)。TMC季铵化程度几乎不影响纳米颗粒的平均粒径和ζ电位。
表1a
γ-PGA和CS的浓度对制备的CS-γ-PGA纳米颗粒的粒径的影响
Figure BDA00002281784500121
a)CS的浓度(按w/v计)
b)γ-PGA的浓度(按w/v计)
▲观察到的聚集体的沉淀
表1b
γ-PGA和CS的浓度对制备的CS-γ-PGA纳米颗粒的ζ电位值的影响
Figure BDA00002281784500122
Figure BDA00002281784500131
a)CS的浓度(按w/v计)
b)γ-PGA的浓度(按w/v计)
▲观察到得聚集体的沉淀
表2
由具有不同季铵化程度的TMC聚合物和γ-PGA自组装的纳米颗粒(NPs)的平均粒径、ζ电位值以及多分散性指数(n＝5批)TMC：N-三甲基壳聚糖；
CS：壳聚糖；γ-PGA：聚(γ-谷氨酸)。
Figure BDA00002281784500132
实例2
Caco-2细胞培养物和TEER测量
将Caco-2细胞以3x105细胞/孔的接种密度接种在Costar Transwell 6孔/板(Corning Costar公司，纽约)中的经组织培养处理的聚碳酸酯滤器上(直径24.5mm，生长面积4.7cm2)。添加了有20％FBS、1％NEAA、以及40μg/ml抗生素-庆大霉素的MEM(pH 7.4)被用来作为培养基，并且被添加至供体和受体两者的小室中。该培养基在最初6天每48小时更换一次并且此后每24小时更换一次。将这些培养物保持在37℃含95％空气和5％CO2的气氛中，并且在接种后18-21天用于细胞旁转运实验(TEER值在600-800Ωcm2的范围)。
细胞间的紧密连接是大分子细胞旁转运的主要屏障之一。跨上皮离子转运被考虑为细胞之间连接紧密的一种良好指示，并且因此在该研究中可以通过测量Caco-2细胞单层的TEER来评估。据报道TEER的测量可以被用来预测亲水性分子的细胞旁转运(Eur.J.Pharm.Biopharm.2004；58：225-235)。当这些紧密连接打开时，由于水和离子通道经过细胞旁路，TEER值降低。Caco-2细胞单层已经被广泛用作一种体外模型来评估肠内大分子的细胞旁渗透性。
图2显示了制备的CS-γ-PGA纳米颗粒对Caco-2细胞单层的TEER值的影响。如图所示，这种具有一种正表面电荷(CS在表面上占主导地位，0.01％γ-PGA：0.05％CS，0.10％γ-PGA：0.2％CS，以及0.20％γ-PGA：0.20％CS)的制备的纳米颗粒能够显著降低Caco-2细胞单层的TEER值(p＜0.05)。在将这些纳米颗粒孵育2小时之后，Caco-2细胞单层的TEER值与对照组(在转移培养基中不没有添加纳米颗粒)相比降低至它们初始值的50％。这指示出CS在其表面上占主导地位的这些纳米颗粒可以有效地打开或松开Caco-2细胞之间的紧密连接，导致TEER值降低。据报道，CS的带正电荷的氨基与在细胞表面和紧密连接上的带负电荷的位点的相互作用诱导F-肌动蛋白和紧密连结蛋白ZO-1的再分布，这种再分布伴随着细胞旁渗透性的增加。表明在壳聚糖与该紧密连接蛋白ZO-1之间的相互作用会导致它移动到细胞骨架。
在去除孵育的纳米颗粒之后，注意到TEER值的逐渐增加。这种现象指示Caco-2细胞单层的细胞间紧密连接开始逐渐恢复；然而，TEER值没有恢复至它们的初始值(图2)。据报道，由于CS强的粘附特征，完全去除CS-衍生的聚合物而不损伤培养的细胞是困难的(Pharm.Res.1997；14：1197-1202)。这可能是为什么TEER值未恢复至它们的初始值的原因。相反，与带有负表面电荷的纳米颗粒(γ-PGA在表面占主导地位，0.10％γ-PGA：0.01％CS以及0.2％γ-PGA：0.01％CS，图2)孵育的Caco-2细胞单层的TEER值与对照组相比显示出没有显著性差异(p＞0.05)。这指示出γ-PGA对细胞间的紧密连接的打开没有任何影响。
表明在细胞表面上紧密连接(TJ)处，在带正电荷的CS与ZO-1蛋白质的带负电荷的位点之间的相互作用诱导了细胞F-肌动蛋白的再分布以及ZO-1移动到细胞骨架，导致在渗透性方面的增加。在粘附并渗透入十二指肠的粘液层之后，口服给药的纳米颗粒由于肠液中不同的消化酶的存在而可以降解。另外，当纳米颗粒正在渗透入粘膜层并接近肠上皮细胞时，pH环境可能变成中性。由于在暴露的pH环境中的变化，这进一步导致了纳米颗粒的崩解(collapse)。从降解/崩解的纳米颗粒解离的CS进而能够在上皮细胞之间相互作用并且调整ZO-1蛋白的功能。ZO-1蛋白被认为是封闭蛋白(occludin)和F-肌动蛋白细胞骨架之间的连接分子，而且在紧密连接处细胞间接触的重排中起着重要的作用。
以壳聚糖对γ-PGA比值为0.75mg/ml到0.167mg/ml制备具有两种胰岛素浓度的纳米颗粒。它们的粒径以及ζ电位显示在下表3中。
表3
Figure BDA00002281784500151
(*)对照参照不含胰岛素
通过使用离子-凝胶作用的方法获得CS-γ-PGA纳米颗粒的API载入效率(LE 40％-55％)和API载入含量(LC 5.0％-14.0％)，该方法在于加入与γ-PGA溶液混合的模型API(在这种情况下为胰岛素)，之后通过磁力搅拌将纳米颗粒分离。本发明的一些方面涉及带负电荷的糖胺聚糖(GAG)作为这种纳米颗粒的核心基质。GAG可以与低分子量的壳聚糖相络合以形成药物载体纳米颗粒。GAG也可以与如在此披露的蛋白质药物结合以增强纳米颗粒中的核心基质的键合效率。具体而言，本发明的纳米颗粒的带负电荷的核心基质(例如GAG、肝素、PGA、海藻酸盐、等等)可以与硫酸软骨素、透明质酸、PDGF-BB、BSA、EGF、MK、VEGF、KGF、bFGF、aFGF、MK、PTN、等相结合。
在另一个实施方案中，该胶囊可以含有增溶剂、发泡剂、乳化剂、或其他药典上的赋形剂、例如“公认安全”(Generally Recognized as Safe(GRAS))的物质。GRAS是由美国的美国食品与药物管理局(FDA)指明，是指经专家认为是安全的添加至食物中的化学品或物质，并且因此豁免了通常联邦食品、药品、和化妆品法案(FFDCA)中的食品添加剂容许要求。发泡剂是当接触液体时散发二氧化碳气体的试剂，其目的是使胶囊爆裂或促进胶囊成分与胶囊外部周围材料的紧密接触。例如，碳酸氢钠与一种酸反应生成以一种盐和碳酸，碳酸易于分解成二氧化碳和水。发泡剂可以包括碳酸氢钠/柠檬酸混合物，艾迪速(Ac-Di-Sol)，等等。化学品Ac-Di-Sol的IUPAC名称为2，3，4，5，6-五羟基己醛乙酸钠，并且它的化学式为C18H16NaO8。乳化剂是一种通过增加其动力学稳定性而稳定一种乳液的物质。一类乳化剂被称为表面活性物质、或表面活性剂。洗涤剂是另一类表面活性剂乳化剂，并且将与油和水两者以物理方式相互作用，因此稳定了在悬浮液中油或水滴之间的界面。最普及的乳液是非离子的，因为它们具有低毒性。在此也可以使用阳离子乳液，因为它们具有抗微生物特性。
因此，为了方便和有效地口服给药，可以将本发明的纳米颗粒以药学上有效的量用一种或多种赋形剂压成片剂、包装进胶囊(例如软胶囊)中、或悬浮在一种液体溶液中等等。这些纳米颗粒可以悬浮于一种去离子溶液种或一种类似的溶液中以用于肠胃外给药(例如鼻内喷雾、皮下注射或静脉注射)。这些纳米颗粒可以通过常规技术形成用于摄入的封装的块或可咀嚼的块。例如，这些纳米颗粒可以通过使用已知的包裹步骤和材料胶囊化为一种“硬填充胶囊”或一种“软-弹性胶囊”。该包裹材料在胃液中应当是高度可溶的，这样这些颗粒将会在咽下胶囊之后在胃中迅速分散。不论是胶囊还是片剂，每单位剂量将优选地含有适合大小和数量的纳米颗粒，其提供这些纳米颗粒的药学上有效的量。胶囊的适用形状和大小可以包括从0.75mm至80mm或更大尺寸的圆形、椭圆、长方形、管状或栓剂形状。胶囊的体积可以是从0.05cm2至多于5cm2。在一个实施方案中，将胶囊内部处理成疏水或亲脂的。
在另一个实施方案中，本发明的纳米颗粒增加了生物活性剂穿过血脑屏障和/或胃肠屏障的吸收。在再另一个实施方案中，当口服给予生物活性剂和纳米颗粒时，具有壳聚糖在外层占主导地位的纳米颗粒(显示正表面电荷)在增强一种给予的生物活性剂的药物(生物活性剂)的渗透中作为增强剂起作用。
实例3
上皮渗透和增强剂
壳聚糖及其衍生物可以发挥上皮吸收促进剂的功能。当在酸性pH下质子化时，壳聚糖能够增加肽类药物穿过粘膜上皮的渗透性。本发明的一些方面提供了本发明的纳米颗粒以及至少一种渗透促进剂(以非纳米颗粒形式或纳米颗粒形式)的联合给药。在一个实施方案中，这些纳米颗粒可以经至少一种渗透促进剂以及至少一种生物活性剂、以及可选择添加的其他组分的联合胶囊化而配制。在一个实施方案中，这些纳米颗粒进一步包括一种渗透促进剂。该渗透促进剂可以选自下组，该组由以下各项组成：螯合剂(例如，Ca2+螯合剂)、胆汁盐、阴离子表面活性剂、中链脂肪酸、磷酸酯、以及壳聚糖或壳聚糖衍生物。
在一些实施方案中，本发明的纳米颗粒，或与至少一种渗透促进剂被载入一种软凝胶、丸剂、片剂、咀嚼块、或胶囊中，或被载入软凝胶、丸剂、片剂、咀嚼块、或胶囊的肠溶包衣对应物中。增强剂和这种纳米颗粒大约同时可以到达紧密连接处以瞬时促进紧密连接的打开。在另一个实施方案中，该至少一种渗透促进剂是被联合包封在本发明的这些纳米颗粒之内。因此，一些破碎的纳米颗粒或片段可以释放增强剂以辅助这种纳米颗粒打开上皮细胞层的紧密连接。在一个替代实施方案中，该至少一种增强子被包封入具有表面正电荷的第二种纳米颗粒(具体地是一种壳聚糖型的纳米颗粒)中，其中该第二种纳米颗粒的配制没有任何生物活性剂或具有不同于在第一种纳米颗粒中的生物活性剂的一种生物活性剂。当本发明的第一种含有药物的纳米颗粒与以上鉴定的第二种纳米颗粒口服联合给药时，第二种纳米颗粒内的增强剂释放至胃肠道中以辅助第一种这些含有药物的纳米颗粒打开并经过紧密连接或促进增强的药物吸收和输送。
通过修饰壳聚糖结构或改变它的电荷特征，例如用EDTA、甲基、N-三甲基、烷基(例如，乙基、丙基、丁基、异丁基，等)、聚乙二醇(PEG)、或肝素(包含低分子量肝素、普通分子量肝素、以及遗传修饰的肝素)接枝壳聚糖，CS-γ-PGA纳米颗粒的表面电荷密度(ζ电位)可以变得更加耐受pH或更亲水。在一个实施方案中，用聚丙烯酸接枝壳聚糖。在一个实施方案中，采用的壳聚糖是N-三甲基壳聚糖(TMC)、低分子量壳聚糖、EDTA壳聚糖、壳聚糖衍生物、和/或它们的组合。EDTA-壳聚糖的一个示例性的化学结构如下所示：
Figure BDA00002281784500181
作为举例说明，氯化三甲基壳聚糖可以用在CS/PGA-氨羧络合剂纳米颗粒的配制中以保持纳米颗粒在pH低于2.5、优选地在pH低至1.0时的球形生物稳定性。本发明的一些方面提供了一种载药的含壳聚糖的生物材料，该生物材料与京尼平或其他交联剂相交联，作为一种生物相容性药物载体用于增强在pH低于2.5、优选地在pH低至1.0时的生物稳定性。
已知CS(胺基基团)和γ-PGA(羧基基团)的pKa值分别为6.5和2.9。在DI(去离子)水(pH 6.0)中制备NP(纳米颗粒)。在pH 6.0时，CS(TMC25)和γ-PGA被离子化。离子化的CS(TMC25)和γ-PGA可以形成聚合电介质络合物，导致形成一种具有球形形状的基体结构。在pH 1.2-2.0时，大多数在γ-PGA上的羧基基团是处于-COOH的形式。因此，在CS(TMC25)与γ-PGA之间几乎没有静电作用；因此NP崩解(表4)。类似地，在pH值高于6.6时，在CS(TMC25)上的自由胺基基团被去质子化；因此导致NP的崩解。这可能限制药物递送的功效以及在小肠中的吸收。
当TMC(TMC40和TMC55)上的季铵化程度增加时，NP在pH 6.6-7.4的范围内的稳定性显著提高。然而，在pH 7.4时，TMC55/γ-PGA NP的溶胀是极微的(由于高度季铵化的TMC55)，这可能限制载药的释放。相反，TMC40/γ-PGA NP随着渐增的pH值显著溶胀。TMC40/γ-PGA NP(崩解的NP或片段)在pH 7.4时仍然保留ζ电位值为17.3mV的正表面电荷。
因此，在一个更宽的pH范围内TMC40/γ-PGA/药物纳米颗粒(NP)具有与CS/γ-PGA/药物NP相比更优良的稳定性。在一个实施方案中，在体液pH大约为7.4的周围，本发明的生物活性剂纳米颗粒可以表现为带壳聚糖外壳的片段或含有壳聚糖的片段的构型。这种带壳聚糖外壳的片段或含有壳聚糖的片段(来自本发明的生物活性纳米颗粒)的表面至少一部分显示出正ζ电位特征。
这种具有主导表面的TMC40的TMC40/γ-PGA/药物片段可以粘附并且渗透进血脑屏障的上皮膜的粘液中，进而瞬时触发肠上皮细胞之间紧密连接的打开。表4显示了在不同的pH环境下由具有不同季铵化程度的TMC聚合物和γ-PGA自组装的纳米颗粒(NPs)的平均粒径、ζ电位值、以及多分散性指数(n＝5批)。如在表4中所示，TMC40/γ-PGA NP在pH 7.4时仍然保留其ζ电位值为17.3mV的正表面电荷。
冻干的纳米颗粒
在冻干过程之前，在颗粒上形成一种保护层的几种常规的包衣化合物被用来以物理方式进行包被或与纳米颗粒混合。这种包衣化合物可以包括海藻糖、甘露醇、甘油、等等。海藻糖也称为mycose，是一种α连接的(二糖)糖，其在自然界中广为发现但不是很丰富。它可以由真菌、植物以及无脊椎动物合成。它与脱水休眠(anhydrobiosis)相关联，脱水休眠是植物和动物经受长时期干燥的能力。然后再水合允许恢复正常的细胞活性而没有较多的、通常致死的损伤，这可以正常地遵循一种脱水/再水合循环。海藻糖具有成为抗氧化剂的额外优点。海藻糖具有的化学式为C12H22O11·H2O。它作为CSA号99-20-7和PubChem(有机小分子生物活性数据库)号7427而列出。
纳米颗粒(浓度在2.5％)各自与四种类型的液体的溶液以1∶1体积比混合大约30分钟直到完全分散。然后将该混合的颗粒-液体在一种冷冻干燥条件下冻干，例如，在大约-80℃以及＜25mmHg压力下持续大约6小时。在一种选择的冷冻干燥条件中的参数可以轻微不同于上述的数字。在该实验中的四种类型的液体包括：(A)DI(去离子)水；(B)海藻糖；(C)甘露醇；以及(D)甘油，而溶液中的液体(A)至液体(C)的浓度分别设为2.5％、5％以及10％。在冻干过程之后，将该混合的颗粒-液体与DI(去离子)水以1∶5的体积比再水合以评定每种类型液体中的纳米颗粒的完整性。通过比较粒径、多分散性指数、以及ζ电位数据，来自冻干颗粒-海藻糖流程的纳米颗粒(浓度水平在2.5％、5％、10％)显示出比得上冷冻干燥前的纳米颗粒的特性。在相同的数据分析下，来自冻干颗粒-甘露醇流程的纳米颗粒(浓度水平在2.5％、5％)显示出在某种程度上比得上冷冻干燥前的纳米颗粒的特性。
实例4
在动物评估中的冻干纳米颗粒
一种大鼠模型中针对胰岛素的口服递送测试了一种载有冻干NP的肠溶包衣胶囊。基本概念是该肠溶包衣胶囊在胃的强酸性环境中保持完整，但在小肠的中性(或轻度碱性)环境中迅速溶解。其结果是，这样一种胶囊可以阻止NP在胃中崩解，并因此增加递送至小肠近段的完整NP的量。糖尿病大鼠先禁食12小时并且在实验期间保持禁食，但允许随意饮水。将三种制剂给予这些糖尿病大鼠。(a)用游离形式的胰岛素(30IU/kg)以及海藻糖填充的口服
Figure BDA00002281784500201
L100-55-包衣胶囊；(b)用冻干NP(30.0IU/kg)填充的口服
Figure BDA00002281784500202
L100-55-包衣胶囊；以及(c)游离形式的胰岛素溶液(5.0IU/kg，每个研究组n＝5)的皮下(SC)注射剂。在给药前以及在剂量给药之后的不同时间间隔从大鼠尾静脉收集血样。相应的血浆胰岛素浓度-时间曲线如图4所示。如图所示，用游离形式的胰岛素溶液皮下处理的大鼠在给药后1小时导致一个最大血浆浓度，然而用载胰岛素的NP填充的
Figure BDA00002281784500203
L100-55-包衣胶囊的口服给药在处理5小时之后显示最大血浆浓度。相反，发现用游离形式的胰岛素填充的
Figure BDA00002281784500204
L100-55-包衣胶囊在的口服治疗的大鼠中，未检测到血浆胰岛素(牛胰岛素)。
表4
通过具有不同季铵化程度的TMC聚合物自组装的纳米颗粒(NP)的参数
Figure BDA00002281784500211
N/A：观察到聚集体的沉淀
在一个实施方案中，载在本发明的纳米颗粒上的该生物活性剂是肿瘤坏死因子(TNF)抑制剂，而TNF促进一种炎症应答，进而引起许多与自身免疫失调相关联的临床问题，如类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、克罗恩病、银屑病、以及难治性哮喘。有时通过使用一种TNF抑制剂来治疗这些失调。这种抑制可以用一种单克隆抗体(例如英利昔单抗(类克(Remicade))、或阿达木单抗(Humira)、或用一种循环受体融合蛋白(例如依那西普(恩利(Enbrel))而实现。另一个实例是己酮可可碱。
实例5
载有DTPA的纳米颗粒
本发明的一些方面涉及一种包含壳聚糖、PGA-氨羧络合剂结合物以及一种生物活性剂的纳米颗粒药物组合物。在一个实施方案中，PGA-氨羧络合剂结合物可以广泛地包括一种具有PGA衍生物(如γ-PGA、α-PGA、PGA衍生物或PGA的盐)的结合物，而该氨羧络合剂可以是DTPA(二亚乙基三胺五乙酸)、EDTA(乙二胺四乙酸)、IDA(亚氨基二乙酸)、NTA(次氮基三乙酸)、EGTA(乙二醇四乙酸)、BAPTA(1，2-双(o-胺基苯氧基)乙烷-N，N，N′，N′-四乙酸)、DOTA(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-N，N′，N，N′-四乙酸)、以及NOTA(2，2′，2″-(1，4，7-三氮杂环壬烷-1，4，7-三基)三乙酸)、等等。一种聚氨基羧酸(氨羧络合剂)是一种包含通过碳原子连接至一个或多个羧基基团的一个或多个氮原子的化合物。
二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)是一种聚氨基羧酸，由用五个羧甲基基团修饰的二亚乙基三胺主链组成。该分子可以被看作是一种EDTA的扩展型式。DTPA以它的共轭碱被使用(经常是未定义地)，该共轭碱对金属阳离子具有高亲和力。在实例中，镧系和锕系离子一旦络合，DTPA作为五阴离子(pentaanionic)的形式存在，即，所有五个羧酸基团均被去质子化。DTPA具有的分子式为C14H23N3O10，分子质量为393.358g/摩尔，并且其化学式为：
Figure BDA00002281784500231
DTPA化学式
当前，DTPA被美国食品与药物管理局(FDA)批准用作三种放射性物质的螯合：钚、镅、以及锔。DTPA是一种八齿配体，二乙基三胺五乙酸酯的母体酸。在一些情况下，所有五个乙酸酯臂未附接至金属离子。在本发明的一个方面，DTPA已经通过己二胺((γ-PGA)-DTPA)结合至γ-PGA，如下图所示：
Figure BDA00002281784500232
(γ-PGA)-DTPA
在本发明的一个方面，(γ-PGA)-DTPA是PGA-氨羧络合剂结合物中的一个种类，这种结合物被使用于当前的纳米颗粒药物组合物中。在(γ-PGA)-DTPA结合物中的DTPA的总取代程度通常是在大约1％-70％的范围之内，优选地在大约5％-40％的范围之内，并且最优选地在大约10％-30％的范围之内。DTPA不会在体内积累或引起长期健康影响。
使用在此所述的简单且温和的离子-凝胶作用的工艺制成的包括壳聚糖、PGA-氨羧络合剂结合物以及至少一种的生物活性剂的纳米颗粒，通过在Caco-2细胞培养模型中的TEER的测量已经证明了这种纳米颗粒所希望的细胞旁转运效果。
实例6
用(γ-PGA)-DTPA结合物进行酶抑制研究
刷状缘膜界定的酶被用来模拟接触在供体室底部的膜，其中在供体室内的载胰岛素介质(rebs-Ringer缓冲液)被用作0时间的起始材料。用刷状缘膜界定的酶在这个酶抑制研究中使用了三种成分来评定胰岛素对时间的酶降解作用。它们是(a)胰岛素1mg/ml作为对照；(b)DTPA 5mg/ml；以及(c)(γ-PGA)-DTPA 5mg/ml。如在图5中所示，DTPA和(γ-PGA)-DTPA两者在经过高达2小时的实验持续时间均基本上保护或维持胰岛素活性或有活力的含量(viable content)。本发明的一些方面提供了一种纳米颗粒药物组合物，这些纳米颗粒包括由带正电荷的壳聚糖为主导的外壳部分和核心部分，该核心部分包括氨羧络合剂和一种带负电荷的基质，其中该基质是PGA，其中在该核心部分中该带负电荷的基质至少部分地与一部分该带正电荷的壳聚糖中和，并且至少一种生物活性剂被载入这些纳米颗粒之内。在一个实施方案中，该PGA与氨羧络合剂相结合以在纳米颗粒之内形成PGA-氨羧络合剂结合物。
本发明的一些方面提供了一种通过将生物活性剂封装在纳米颗粒中以增强在口服给药中生物活性剂的耐酶性的方法，其中这些纳米颗粒具有一种在本披露和权利要求书中所述的药物配方和/或组合物。在一个实施方案中，进一步将这些纳米颗粒用药学上可接受的载体、稀释剂、或赋形剂载入片剂、丸剂、胶囊、咀嚼块、等等中。
本发明的一些方面涉及一种纳米颗粒药物组合物，这些纳米颗粒包括由带正电荷的壳聚糖为主导的外壳部分和核心部分，该核心部分包括一种PGA-氨羧络合剂结合物的带负电荷的基质，其中在该核心部分中该带负电荷的基质至少部分地与一部分该带正电荷的壳聚糖中和，并且至少一种生物活性剂被载入这些纳米颗粒之内。在一个实施方案中，这些纳米颗粒进一步包括锌、硫酸镁、或三聚磷酸钠(TPP)。在另一个实施方案中，将这些纳米颗粒用肠溶包衣处理。
虽然已经参考本发明的某些实施方案的具体细节对本发明进行了描述，但是除了如所附权利要求所包括的范围或者达到所附权利要求所包括的范围之外，不旨在将这样的细节看作是对本发明范围的限制。根据以上披露，许多修改和变化都是可能的。
工业实用性
一种载有至少一种生物活性剂的纳米颗粒的药物制剂是一种方便且无争议的(hassle-free)口服递送方式，只要该生物活性剂在GIT中的酶攻击下有活性即可。本发明披露了一种新颖的纳米颗粒制剂，该制剂在纳米颗粒之内载有与该生物活性剂非常接近的耐酶性PGA-氨羧络合剂，从而提高该生物活性剂在受试动物中的生物利用度和功效。
引用文件清单
专利文献
·美国专利号6,383,478B1(2002年5月7日)
·美国专利号6,649,192B2(2003年11月18日)
·美国专利申请2006/0051423A1(2006年3月9日)
非专利文献
·LIN YH等人，“用于口服胰岛素递送的具有壳聚糖外壳的纳米颗粒的制备和特征”(″Preparation and characterization of nanoparticles shelled withchitosan for oral insulin delivery″).生物大分子(Biomacromolecules)，2007；8：146-152
·LIN YH等人，“用于经由细胞旁途径口服胰岛素递送的新型纳米颗粒”(Novel nanoparticles for oral insulin delivery via the paracellular pathway).纳米技术(Nanotechnology)，2007；18：1-11
·van der LUBBEN IM等人，“在粘膜药物和疫苗递送中的壳聚糖及其衍生物”(″Chitosan and its derivatives in mucosal drug and vaccine delivery″)。欧洲药理学杂志(Euro J Pharma Sci)，2001；14：201-207
·HOSNY EA等人，“来自含水杨酸钠的肠溶包衣胶囊的胰岛素的口服递送”(″Oral delivery of insulin from enteric-coated capsules containing sodiumsalicylate″).国际药剂学杂志(Int J Pharmaceutics)，2002；237：71-76
·THANOU M等人，“作为肠吸收促进剂的壳聚糖及其衍生物”(″Chitosan and its derivatives as intestinal absorption enhancers″).药物递送综述前沿(Adv.Drug Deliv.Rev.)，2001；50：S91-S 101
·SMITH J等人，“壳聚糖对上皮细胞紧密连接的作用”(″Effect ofchitosan on epithelial cell tight junctions″).药物研究(PharmaceuticalResearch)，2004；21：43-49
·MI FL等人，“使用经聚(r-谷氨酸)和一种三甲基功能化的壳聚糖衍生物自组装的纳米颗粒的肽类药物的口服递送”(″Oral delivery of peptide drugsusing nanoparticles self-assembled by poly(r-glutamic acid)and a chitosandefivative functionalized by trimethylation″).生物结合化学(BioconjugateChem)，2008；19：1248-1255
权利要求书(按照条约第19条的修改)
1.一种纳米颗粒药物组合物，所述纳米颗粒包括由带正电荷的壳聚糖为主导的外壳部分和核心部分，该核心部分包含一种PGA-氨羧络合剂结合物的带负电荷的基质，其中在该核心部分中所述带负电荷的基质至少部分地与一部分所述带正电荷的壳聚糖中和，至少一种生物活性剂被载入所述纳米颗粒中，并且可任选地包括一种零电荷化合物。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒具有在大约50纳米与400纳米之间的平均粒径。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述壳聚糖是N-三甲基壳聚糖、EDTA-壳聚糖、低分子量壳聚糖、壳聚糖衍生物、或它们的组合。
4.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒是通过一种简单且温和的离子-凝胶工艺形成的。
5.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒可以被配制为一种片剂、丸剂或咀嚼块构型。
6.如权利要求5所述的药物组合物，其中所述片剂或丸剂用一种肠溶包衣进行处理。
7.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒被封装入胶囊中。
8.如权利要求7所述的药物组合物，其中所述胶囊进一步包括一种药学上可接受的载体、稀释剂、或赋形剂。
9.如权利要求7所述的药物组合物，其中所述胶囊进一步包括至少一种增溶剂、发泡剂、或乳化剂。
10.如权利要求7所述的药物组合物，其中将所述胶囊用一种肠溶包衣进行处理。
11.如权利要求7所述的药物组合物，其中所述胶囊进一步包括至少一种渗透促进剂。
12.如权利要求11所述的药物组合物，其中所述渗透促进剂选自下组，该组由以下各项组成：螯合剂、胆汁盐、阴离子表面活性剂、中链脂肪酸、磷酸酯、壳聚糖、以及壳聚糖衍生物。
13.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述氨羧络合试剂选自下组，该组由以下各项组成：DTPA(二亚乙基三胺五乙酸)、EDTA(乙二胺四乙酸)、IDA(亚氨基二乙酸)、NTA(次氮基三乙酸)、EGTA(乙二醇四乙酸)、BAPTA(1，2-双(o-胺基苯氧基)乙烷-N，N，N′，N′-四乙酸)、DOTA(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-N，N′，N，N′-四乙酸)、以及NOTA(2，2′，2″-(1，4，7-三氮杂环壬烷-1，4，7-三基)三乙酸)。
14.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述至少一种生物活性剂选自下组，该组由以下各项组成：蛋白质、肽、胰岛素、胰岛素类似物、GLP-1、GLP-1类似物、一种胰岛素增敏剂、一种胰岛素促分泌剂、GLP-2、GLP-2类似物、一种二肽基肽酶4抑制剂(DPP-4抑制剂)、艾塞那肽、利拉鲁肽、阿必鲁肽(albiglutide)、他司鲁肽(taspoglutide)、α-葡糖苷酶抑制剂、淀粉不溶素类似物、钠-葡萄糖协同转运蛋白2型(SGLT2)抑制剂、苯氟雷司、以及托瑞司他。
15.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒是冻干的，由此所述纳米颗粒是处于一种粉末的形式。
16.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒与海藻糖混合然后冻干，由此所述纳米颗粒处于一种粉末的形式。
17.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒进一步包括锌、硫酸镁、或三聚磷酸钠(TPP)。
18.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒用一种肠溶包衣进行处理。
19.如权利要求1所述的药物组合物，其中在PGA-氨羧络合剂结合物中的所述PGA是γ-PGA、α-PGA、PGA的衍生物、或PGA的盐。
20.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒进一步包括至少一种渗透促进剂。

Claims (20)

1.一种纳米颗粒药物组合物，所述纳米颗粒包括由带正电荷的壳聚糖为主导的外壳部分和核心部分，该核心部分包含一种PGA-氨羧络合剂结合物的带负电荷的基质，其中在该核心部分中所述带负电荷的基质至少部分地与一部分所述带正电荷的壳聚糖中和，并且至少一种生物活性剂被载入所述纳米颗粒中。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒具有在大约50纳米与400纳米之间的平均粒径。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述壳聚糖是N-三甲基壳聚糖、EDTA-壳聚糖、低分子量壳聚糖、壳聚糖衍生物、或它们的组合。
4.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒是通过一种简单且温和的离子-凝胶工艺形成的。
5.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒可以被配制为一种片剂、丸剂或咀嚼块构型。
6.如权利要求5所述的药物组合物，其中所述片剂或丸剂用一种肠溶包衣进行处理。
7.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒被封装入胶囊中。
8.如权利要求7所述的药物组合物，其中所述胶囊进一步包括一种药学上可接受的载体、稀释剂、或赋形剂。
9.如权利要求7所述的药物组合物，其中所述胶囊进一步包括至少一种增溶剂、发泡剂、或乳化剂。
10.如权利要求7所述的药物组合物，其中将所述胶囊用一种肠溶包衣进行处理。
11.如权利要求7所述的药物组合物，其中所述胶囊进一步包括至少一种渗透促进剂。
12.如权利要求11所述的药物组合物，其中所述渗透促进剂选自下组，该组由以下各项组成：螯合剂、胆汁盐、阴离子表面活性剂、中链脂肪酸、磷酸酯、壳聚糖、以及壳聚糖衍生物。
13.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述氨羧络合试剂选自下组，该组由以下各项组成：DTPA(二亚乙基三胺五乙酸)、EDTA(乙二胺四乙酸)、IDA(亚氨基二乙酸)、NTA(次氮基三乙酸)、EGTA(乙二醇四乙酸)、BAPTA(1，2-双(o-胺基苯氧基)乙烷-N，N，N′，N′-四乙酸)、DOTA(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-N，N′，N，N′-四乙酸)、以及NOTA(2，2′，2″-(1，4，7-三氮杂环壬烷-1，4，7-三基)三乙酸)。
14.如权利要求11所述的药物组合物，其中所述至少一种生物活性剂选自下组，该组由以下各项组成：蛋白质、肽、胰岛素、胰岛素类似物、GLP-1、GLP-1类似物、一种胰岛素增敏剂、一种胰岛素促分泌剂、GLP-2、GLP-2类似物、一种二肽基肽酶4抑制剂(DPP-4抑制剂)、艾塞那肽、利拉鲁肽、阿必鲁肽(albiglutide)、他司鲁肽(taspoglutide)、α-葡糖苷酶抑制剂、淀粉不溶素类似物、钠-葡萄糖协同转运蛋白2型(SGLT2)抑制剂、苯氟雷司、以及托瑞司他。
15.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒是冻干的，由此所述纳米颗粒是处于一种粉末的形式。
16.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒与海藻糖混合然后冻干，由此所述纳米颗粒处于一种粉末的形式。
17.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒进一步包括锌、硫酸镁、或三聚磷酸钠(TPP)。
18.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒用一种肠溶包衣进行处理。
19.如权利要求1所述的药物组合物，其中在PGA-氨羧络合剂结合物中的所述PGA是γ-PGA、α-PGA、PGA的衍生物、或PGA的盐。
20.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述纳米颗粒进一步包括至少一种渗透促进剂。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104740647A (zh) * 2015-04-08 2015-07-01 东莞市麦亘生物科技有限公司 一种艾塞那肽口服制剂及其制备方法
CN107750162A (zh) * 2015-05-06 2018-03-02 因苏卡普斯有限公司 适于将治疗性肽口服递送至下肠的凝胶微粒
CN109675020A (zh) * 2019-01-11 2019-04-26 浙江大学 一种口服glp-1多肽类纳米制剂及其制备方法和应用

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2867701C (en) * 2012-03-22 2020-10-27 Nanotherapeutics, Inc. Compositions and methods for oral delivery of encapsulated diethylenetriaminepentaacetate particles
EP2978428A4 (en) * 2013-03-28 2016-12-28 Bbs Nanotechnology Ltd STABLE NANO COMPOSITION WITH EPIRUBICIN, PROCESS FOR THE PRODUCTION THEREOF, THE USE THEREOF AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS THEREWITH
US11548940B2 (en) 2014-05-15 2023-01-10 Rani Therapeutics, Llc Anti-interleukin antibody preparations for delivery into a lumen of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device
EP3006045B3 (en) 2014-10-07 2021-03-17 Cyprumed GmbH Pharmaceutical formulations for the oral delivery of peptide or protein drugs
CA2983337A1 (en) 2015-05-01 2016-11-10 Incube Labs, Llc Pharmaceutical compositions and methods for fabrication of solid masses comprising polypeptides and/or proteins
CA2997343A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Cyprumed Gmbh Pharmaceutical formulations for the oral delivery of peptide drugs
JP6850546B2 (ja) * 2016-04-07 2021-03-31 アリメント工業株式会社 極小ソフトカプセルの製造方法
WO2018065634A1 (en) 2016-10-07 2018-04-12 Cyprumed Gmbh Pharmaceutical compositions for the nasal delivery of peptide or protein drugs
KR102083481B1 (ko) * 2018-03-22 2020-03-02 강원대학교산학협력단 아연-키토산 나노 입자를 포함한 급성 림프구성 백혈병 치료용 약학조성물
JP7442823B2 (ja) 2018-04-06 2024-03-05 シプルメット・ゲーエムベーハー 治療用ペプチド及び治療用タンパク質の経粘膜送達のための薬学的組成物
KR102140185B1 (ko) * 2018-09-21 2020-08-03 (주)세포활성연구소 천연물 유래 발효추출물 발모제를 포함하는 하이드로젤 나노입자, 이의 제조방법
CN110327221A (zh) * 2019-04-16 2019-10-15 中国人民解放军第四军医大学 一种牙本质胶原纤维脱矿材料及其制备方法与应用
CN116419750A (zh) 2020-09-07 2023-07-11 西普鲁梅有限公司 改进的glp-1受体激动剂的药物制剂
WO2023166179A1 (en) 2022-03-03 2023-09-07 Cyprumed Gmbh Improved oral pharmaceutical formulations of therapeutic peptides and proteins
KR20240103309A (ko) * 2022-12-27 2024-07-04 삼육대학교산학협력단 폴리에틸렌글라이콜 기반의 비이온성 계면활성제와 함께 안정화된 소수성약물을 담지한 초음파 감응 마이크로 버블 약물전달체 및 이의 제조방법

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7541046B1 (en) * 2005-01-04 2009-06-02 Gp Medical, Inc. Nanoparticles for protein drug delivery
WO2009137711A1 (en) * 2008-05-07 2009-11-12 Medivas, Llc Biodegradable metal-chelating polymers and vaccines

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7604795B1 (en) * 2005-01-04 2009-10-20 Gp Medical, Inc. Nanoparticles for protein drug delivery
US20090297615A1 (en) * 2008-05-27 2009-12-03 The Chinese University Of Hong Kong Nanoparticles, methods of making same and cell labeling using same

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7541046B1 (en) * 2005-01-04 2009-06-02 Gp Medical, Inc. Nanoparticles for protein drug delivery
US20090202628A1 (en) * 2005-01-04 2009-08-13 Hsing-Wen Sung Nanoparticles for protein drug delivery
WO2009137711A1 (en) * 2008-05-07 2009-11-12 Medivas, Llc Biodegradable metal-chelating polymers and vaccines

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104740647A (zh) * 2015-04-08 2015-07-01 东莞市麦亘生物科技有限公司 一种艾塞那肽口服制剂及其制备方法
CN107750162A (zh) * 2015-05-06 2018-03-02 因苏卡普斯有限公司 适于将治疗性肽口服递送至下肠的凝胶微粒
CN109675020A (zh) * 2019-01-11 2019-04-26 浙江大学 一种口服glp-1多肽类纳米制剂及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP2560484A4 (en) 2014-05-28
CA2796853A1 (en) 2011-10-27
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AU2011243226A1 (en) 2012-10-11
JP2013525351A (ja) 2013-06-20
WO2011133198A1 (en) 2011-10-27
RU2012144776A (ru) 2014-05-27

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