CN102961522A - 一种防治酒精性肠病的中药复方制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明属中药领域,涉及防治酒精性肠病的中药复方制剂,本发明运用数学模型均匀设计法和Lieber-Decarli液体饲料复合LPS灌胃诱导的大鼠酒精性肠道损伤模型,对现有技术的中药材进行筛选,获得药理作用靶点明确的,能明显改善酒精性肠道损伤、减轻肠道渗漏和内毒素血症的由原料药白芍、泽泻、五味子的提取物组成的复方制剂。经动试验表明:本复方制剂具有显著的抗酒精性肠道损伤作用,可用于预防、治疗酒精性肠病,进一步防治酒精性肝损伤。本发明的复方制剂制成颗粒剂、片剂、胶囊剂、泡腾片等口服固体制剂剂型。
Description
技术领域
本发明属中药领域,涉及防治酒精性肠病的中药复方制剂,具体涉及一种由白芍、泽泻、五味子组成的中药复方制剂及其在保护酒精性肠道损伤、改善酒精性肠渗漏的用途。
背景技术
近年来随着生活水平提高,我国酒精的人均消耗量有大幅度增长,酒精相关的器官损伤疾病的发病率也有增加趋势;因此,积极防治酒精中毒性疾病有重要的社会和经济利益。
现代医学研究发现,慢性酒精中毒可造成肠道、肝脏、神经系统等多机体多器官损害;其中,肠道是酒精损伤的重要靶器官之一,由酒精引起的小肠通透性增加及其所致肠源性内毒素血症(Intestinal endotoxemia,IETM)已成为本领域研究的热点之一。研究显示,酒精可引起小肠通透性改变,引起小肠对内毒素和细菌等大分子的高通透性;酒精引起的肠道通透性改变的病理机制,可能与肠粘膜上皮细胞功能失调相关,上皮细胞靠腔面高度分化的连接复合物提供了上皮屏障功能所需的紧密连接,从而抵御过敏原、毒素以及病原体从肠腔向内部组织的移位,而紧密连接的破坏增加了肠道对致病因子的通透性。
酒精引起的肠道损伤不仅造成肠道本脏的疾病,而且内毒素肠渗漏还是酒精导致肝损伤的重要病理环节。已有大量研究阐明了酒精——内毒素——枯否细胞——TNF-α等细胞因子——肝脏炎症这一损伤途径和机制,揭示了长期酒精饮用致使小肠屏障功能破坏,对内毒素和细菌的通透性增加,血中内毒素升高的结果。还有研究发现,肝巨噬细胞(库普弗细胞)是内毒素解毒的主要细胞,也是内毒素攻击的靶细胞,内毒素除了干扰细胞能量代谢和细胞内信号传导而对肝细胞产生直接毒性作用外,更重要的是,内毒素能激活库普弗细胞释放促炎介质,介导肝损害。
专利“一种防治酒精性肠道损伤和肝损伤的中药复方”(专利号:ZL2005100289756)公开了中药复方健脾活血方(由丹参、白芍、白术、枳壳、葛根、泽泻、五味子、姜黄中药组成)对慢性酒精中毒的肝脏损伤和肠道损伤显示有作用。本申请发明人前期研究也明确了上述复方制剂抑制酒精引起的肝组织脂质过氧化损伤、保护肠道减轻肠通透性增加而减轻肠道内毒素渗漏、及对内毒素摄入后激活大鼠肝脏库普弗细胞分泌炎症因子TNF-α的信号通路有干预作用等。
发明内容
本发明的目的是在现有技术的基础上,提供一种药理作用靶点明确的防治酒精性肠病的中药复方制剂,该中药复方制剂具有显著的保护酒精性肠道损伤、改善酒精性肠渗漏的作用,进一步防治酒精性肝损伤。
本发明的进一步目的是提供所述的中药复方制剂的制备方法。
本发明运用数学模型均匀设计法和Lieber-Decarli液体饲料复合LPS灌胃诱导的大鼠酒精性肠道损伤模型,对现有技术的中药材进行筛选,获得药理作用靶点明确的,能明显改善酒精性肠道损伤、减轻肠道渗漏和内毒素血症的中药组合,并制备成复方制剂。
本发明的一种防治酒精性肠病的中药复方制剂,是由有效成分与药物载体制成,其特征在于所述有效成分是由下列质量/质量百分比的原料药的提取物组成:白芍50%~70%、泽泻10%~30%、五味子5%~15%。
本发明所涉及的原料药白芍、泽泻、五味子质量符合中国药典2005年版一部相应药材项下各有关规定。
所述白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lzctiilora pall.的干燥根;
所述泽泻为沼泽科植物泽泻Alisma orientalis(S am.)Juzep的干燥块茎;
所述五味子为木兰科藤本植物五味子Schisandra chinensis(T-urcz..)Baill.中华
五味子S.sphenanthera Rehd.Et Wils.的成熟干燥果实。
本发明的复方制剂通过下述方法制备:
五味子加乙醇提取2次,每次提取1~2小时;泽泻、白芍加水浸泡1小时,加水8~10倍,提取三次,水提取液浓缩至相对密度1.08~1.12(80℃)后,进行纯化处理,纯化方法可为乙醇沉淀法、离心法或壳聚糖澄清法;获得的泽泻、白芍水提取物、五味子醇提取物合并混匀,干燥,加入适当辅料,制成颗粒剂、片剂、胶囊剂、泡腾片等口服固体剂型。
本发明所述制剂剂型所用辅料包括糊精、乳糖、碳酸氢钠、枸橼酸、羟甲基淀粉钠、微粉硅胶、淀粉、可溶性淀粉和硬脂酸镁,均为药用规格辅料。
本发明中,制备剂型可采用如下方法:所获得的提取物合并后,加入糊精,喷雾干燥使成细粉,经干法制粒制成颗粒;或加入羟甲基淀粉钠、微粉硅胶、可溶性淀粉,乳糖、硬脂酸镁,混合均匀,以95%乙醇制颗粒剂;或80℃干燥后压片剂;或加入适量微粉硅胶,混匀后,装入胶囊;或部分细粉加入枸橼酸、淀粉制成颗粒,其余细粉加入碳酸氢钠、淀粉制成颗粒;或两种颗粒加入硬脂酸镁后,混合均匀,压片。
本发明经Lieber-Decarli液体饲料饮用6周复以内毒素脂多糖(LPS)灌胃诱导大鼠酒精性肠道损伤动物模型和均匀设计数学模型筛选,并再次经过该动物模型进行药效学验证,结果表明,本复方制剂可显著改善酒精所引起的小肠超微结构的病理变化,拮抗酒精引起的小肠通透性的增加,从而减轻内毒素肠渗漏。本复方制剂具有显著的抗酒精性肠道损伤作用,可用于预防、治疗酒精性肠病,进一步防治酒精性肝损伤。
本发明中所述的复方制剂与现有技术相比较,药理作用靶点明确在肠道,能显著改善酒精性肠渗漏作用,保护酒精性肠道损伤效果好。实验结果显示,Lieber-Decarli液体饲料饮用6周复以内毒素脂多糖(LPS)灌胃诱导大鼠酒精性肠道损伤模型经本发明复方制剂干预4周后,肠道通透性指标“血浆内毒素含量”较模型组显著下降(0.36±0.37Eu/ml vs1.40±1.06Eu/ml),且低于现有技术(ZL2005100289756的复方健脾活血方组)血浆内毒素含量(0.36±0.37Eu/ml vs 0.52±0.27Eu/ml)。
为了便于理解,下面通过附图和具体实施例对本发明的防治酒精性肠病的中药复方制剂进行详细的描述。需要特别指出的是,具体实施例和附图仅是为了说明,显然本领域的技术人员可以根据本文说明,对本发明进行各种修正或改变,这些修正和改变也将纳入本专利范围之内。
附图说明
图1为本发明中各组大鼠小肠HE染色(×100倍)图。
图2为本发明中各组大鼠小肠组织电镜超微结构(×11500倍)图。
具体实施方式
实施例1
采用Lieber-Decarli液体饲料复以内毒素脂多糖灌胃诱导大鼠酒精性肠道损伤模型和均匀设计方法回归分析,获得最佳的改善酒精性肠渗漏的中药组合。
(1)材料和方法
1)材料
①实验动物:
SD雄性大鼠,体重130-160g,95只,SPF级,购自中国科学院上海实验动物中心,SCXK(沪)2003-0002。
②实验药物
“筛选实验”药物:现有技术(以下称:健脾活血方)中8味药白术、丹参、枳壳、白芍、葛根、泽泻、五味子、姜黄分别提取,含挥发油药物(白术、枳壳、姜黄)先提取各味药挥发油,然后再将各药物水提,丹参、白芍、葛根、泽泻、五味子水提取,冷藏备用,临用前按照均匀设计表每组药物每味药的剂量,配制成相应的药液,并将相应量的挥发油成分混合入水提物中。
③实验试剂
脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS):购自美国sigma公司;内毒素检测试剂盒(Limulus amebocyte lysate)购自美国Associates of Cape Cod Incorporated公司。
2)方法
①模型制备方法
用Lieber-Decarli液体饲料饮用6周复以内毒素脂多糖(LPS)灌胃诱导大鼠酒精性肠道损伤模型(具体方法为本领域公知技术,可参见文献:彭景华,方志红,崔剑巍,冯琴,许丽莉,顾宏图,胡义扬等.健脾活血方对酒精复合LPS诱导的肝损伤大鼠库普弗细胞活化信号通路的干预.中西医结合学报,2007,5(3):302-306.
②均匀设计实验方案
根据均匀实验设计方案选用U17(1716)表,将上述方中8味中药作为考察因子,以X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8分别代表白术、丹参、枳壳、白芍、葛根、泽泻、五味子、姜黄,每个因子各取14个水平(水平为100g大鼠每日给药量),X1、X2、X4、X5、X6剂量范围为0.083g~0.25g,X3、X7、X8为0.033g~0.167g;同时根据U17(1716)使用表安排各因子和水平,进行组方设计,均匀设计实验方案,如表1所示,其中,一列为一种药,一行就是一种组方,按表中行数值取相应克数的药混合即得此组方,共16组。
③分组与用药
SD雄性大鼠,95只,分为正常组、无酒精液体饲料对照组、模型组及均匀设计各配方组,每组各5只。整个造模过程中,正常组食用普通饲料,无酒精液体饲料对照组服用无酒精液体饲料,模型组及均匀设计各组大鼠在造模的第1~2d饮用无酒精液体饲料;第3~4d饮用无酒精液体饲料和酒精液体饲料各半,第5d开始全量饮用酒精液体饲料。第3周起均匀设计组每日按10ml·kg-1体重灌胃各配方药物,正常组、无酒精液体饲料对照组及模型组灌服等量高压灭菌饮用水,连续4周。
表1 均匀设计实验方案(单位g)
④检测项目与方法
两批实验均在造模和用药周期完成后,用2%戊巴比妥钠3ml/kg腹腔注射麻醉,打开腹腔。经下腔静脉采血,离心后吸取血清,-70℃低温保存。在同一肝叶和位置切取小块组织,置入10%中性福尔马林缓冲液中固定,另定位取肝组织分装于离心管中低温保存。检测门脉血浆内毒素含量,ELLSA方法检测。
3)统计处理
所有数据均使用SPSS16.0软件包进行统计学分析。计量资料均写成平均数±标准差(±s)形式。组间比较采用单因素方差分析Q检验。均匀设计“筛选”实验采用多元逐步回归分析(以α=0.05为显著水准进行统计检验)。
(2)结果
1)各组大鼠一般情况、进食量及体重情况
在造模初期,食用酒精饲料组大鼠体重略有下降,在5天时体重降至最低,而后体重开始增加,并出现精神萎靡,活动减少,反应迟钝,皮毛无光泽甚至脱落等表现。正常及无酒精液体饲料组大鼠精神状态好,食欲佳,皮毛有光泽。各组大鼠进食量无明显差异,其所摄入的酒精量和热卡也大致相等,排除了饮食及酒精量的差异对实验结果的影响。实验过程中,食用酒精饲料组共有14只意外死亡。造模开始与结束时,各组大鼠体重均无明显差异。
2)模型情况
模型组与正常组与无酒精液体饲料对照组相比,模型组大鼠门静脉血浆内毒素含量(2.12±1.56)Eu/ml较无酒精组(0.23±0.17)Eu/ml显著升高(P<0.05),结果表明,酒精刺激后,其肠道通透性显著增加,该酒精性肝损伤模型存在明显的肠道通透性改变,为均匀设计法筛选中药健脾活血方的改善肠渗漏的主效应药物奠定模型基础。(如表2所示)
注:**P<0.01,*P<0.05,vs正常组;##P<0.01,#P<0.05,vs无酒精液体饲料对照组。
3)健脾活血方改善肠渗漏的主效应中药组合分析
均匀设计各组血浆内毒素含量如表3所示,
表3 均匀设计各组血浆内毒素含量
均匀设计各组门静脉血浆内毒素含量(如表2所示),经逐步回归分析获得回归方程:Y=29.303x6x7+1.747x4-0.208,根据回归方程,纳入考察因子是X4(白芍)、X6(泽泻)、X7(五味子),选定本发明的主效应中药组合为白芍、泽泻和五味子药物组合,该药物组合能显著保护肠道,改善酒精引起的肠道通透性增加而引起内毒素渗漏。根据其回归系数,最大限度降低血浆内毒素含量的剂量配伍为:白芍0.133g/100g鼠重、泽泻0.05g/100g鼠重、五味子0.017g/100g鼠重。
本实施例结果表明,本发明中,优选对Lieber-Decarli液体饲料饮用6周复以内毒素脂多糖(LPS)灌胃诱导大鼠酒精性肝损伤模型改善肠渗漏的主效应药物组合是由质量/质量百分比为:白芍66.5%,泽泻25%,五味子8.5%的原料药的提取物组成。
实施例2
用Lieber-Decarli液体饲料复以内毒素脂多糖灌胃诱导大鼠酒精性肠道损伤模型,验证上述“实施例1“所得的本发明的主效应药物组合药物对酒精性肠渗漏及肝损伤的疗效。
(1)材料和方法
1)材料
①实验动物
SD雄性大鼠,体重130-160g,50只,SPF级,购自中国科学院上海实验动物中心,SCXK(沪)2003-0002。
②实验药物
五味子醇提,泽泻、白芍水提,按“实施例1”中的质量/质量配比剂量制成复方药物。
③实验试剂
脂多糖及内毒素检测试剂同“实施例1”;二甲苯、丙酮、甲醛、异丙醇、无水氯化钙、无水乙醇,购自国药集团上海化学试剂有限公司。中性树胶,购自上海标本模型厂。
2)方法
①模型制备方法
同上述“实施例1”。
②分组与用药
SD雄性大鼠,50只,分为正常组、无酒精液体饲料对照组、模型组、本发明复方药物组和健脾活血方组,每组各10只。正常组食用普通饲料,无酒精液体饲料对照组服用无酒精液体饲料,模型组、本发明复方药物组及健脾活血方组大鼠在造模的第1~2d饮用无酒精液体饲料;第3~4d饮用无酒精液体饲料和酒精液体饲料各半,第5d开始全量饮用酒精液体饲料。第3周起给药组每日按10ml·kg-1体重灌胃给予相应药物,正常组、无酒精液体饲料对照组及模型组灌服等量高压灭菌饮用水,连续4周。药物组按10ml·kg-1体重分别灌服相应药物。正常组、无酒精液体饲料对照组及模型组灌服等量高压灭菌饮用水,连续4周。
③检测项目与方法
取材方法同上述“实施例1”。
取材后检测:(1)血浆内毒素含量,ELLSA方法检测;(2)肝组织和小肠组织HE染色;(3)小肠组织电镜超微结构观察。
3)统计处理
所有数据均使用SPSS16.0软件包进行统计学分析。计量资料均写成平均数±标准差(±s)形式。组间比较采用单因素方差分析Q检验。
(2)结果
1)各组大鼠一般情况、进食量及体重情况
在造模第5周健脾活血方组有1只大鼠意外死亡。造模过程中各组大鼠进食量无明显差异,其所摄入的酒精量和热卡大致相等,排除了饮食及酒精量的差异对实验结果的影响。造模开始与造模结束时,各组大鼠体重也无明显差异。
2)各组大鼠血浆内毒素含量变化
Lieber-DeCarli酒精液体饲料模型组大鼠门静脉血浆内毒素含量较无酒精液体饲料对照组明显升高(P<0.05),而健脾活血方组和本发明复方药物组较酒精组门静脉血浆内毒素含量均有显著下降,本发明复方药物组与健脾活血方相比呈下降趋势(如表4所示)。
注:#P<0.05,vs无酒精液体饲料对照组;*P<0.05,vs模型组。
3)各组大鼠小肠HE染色
结果如图1所示,光镜下,酒精饲料组大鼠小肠组织粘膜结构大致完整,正常组和无酒精饲料组大鼠小肠粘膜结构完整,健脾方组和“本发明复方药物组”小肠形态接近正常。
4)小肠组织电镜超微结构观察
结果如图2所示,电镜超微结构观察显示正常组小肠黏膜表面微绒毛排列整齐,可见与微绒毛相连的细胞终末网,上皮细胞可见呈柱状的吸收细胞和杯状细胞等。吸收细胞胞浆内可见较多的线粒体、内质网和高尔基体等细胞器,上皮细胞之间可见较多的各种细胞连接结构。无酒精饲料对照组小肠黏膜超微结构未见明显改变。Lieber-DeCarli酒精液体饲料模型组大鼠小肠黏膜表面微绒毛局灶性稀疏、减少、变短,排列不规则;与微绒毛相连的细胞终末网变性模糊。健脾活血方组和本发明复方药物组小肠黏膜表面微绒毛局灶性稀疏、减少等有所改善,偶见上皮细胞核固缩等现象,上皮细胞变性程度较为轻微,上皮细胞间各种连接结构较为清晰。
(3)结论
结果表明,本发明复方药物“白芍66.5%+泽泻25%+五味子8.5%”能明显改善Lieber-Decarli液体饲料饮用6周复以内毒素脂多糖灌胃诱导大鼠酒精性肠道损伤模型的小肠超微结构的病理变化,拮抗酒精引起的小肠通透性的增加,减轻内毒素肠渗漏。
实施例3
五味子加乙醇提取2次,每次提取1~2小时;泽泻、白芍加水浸泡1小时,加水8~10倍,提取三次,水提取液浓缩至相对密度1.08~1.12(80℃)后,进行纯化处理,纯化方法可为乙醇沉淀法、离心法或壳聚糖澄清法;上述泽泻、白芍水提取物、五味子醇提取物合并混匀,干燥,加入适当辅料,制成固体口服剂型;所述的提取物组分的质量/质量百分比范围为:白芍50%~70%、泽泻10%~30%、五味子5%~15%。
所述剂型制备方法可采用:提取物合并后,加入糊精,喷雾干燥使成细粉,经干法制粒制成颗粒;或加入羟甲基淀粉钠、微粉硅胶、可溶性淀粉,乳糖、硬脂酸镁,混合均匀,以95%乙醇制颗粒剂;80℃干燥后压片剂;加入适量微粉硅胶,混匀后,装入胶囊;或部分细粉加入枸橼酸、淀粉制成颗粒;其余细粉加入碳酸氢钠、淀粉制成颗粒;两种颗粒加入硬脂酸镁后,混合均匀,压片。
Claims (7)
1.一种防治酒精性肠病的中药复方制剂,是由有效成分与药物辅料制成,其特征在于所述有效成分是由下列质量/质量百分比的原料药的提取物组成:白芍50%~70%、泽泻10%~30%、五味子5%~15%。
2.按权利要求1所述的防治酒精性肠病的中药复方制剂,其特征在于,所述的原料药的提取物的质量/质量百分比为:白芍66.5%,泽泻25%,五味子8.5%。
3.权利要求1所述的防治酒精性肠病的中药复方制剂的制备方法,其特征在于,其包括步骤:
五味子加乙醇提取2次,每次提取1~2小时;泽泻、白芍加水浸泡1小时,加水8~10倍,提取三次,水提取液浓缩至相对密度1.08~1.12,80℃后,进行纯化处理;上述泽泻、白芍水提取物、五味子醇提取物合并混匀,干燥,加入药物辅料,制成固体口服剂型。
4.按权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述的纯化方法为乙醇沉淀法、离心法或壳聚糖澄清法。
5.按权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述药物辅料选自糊精、乳糖、碳酸氢钠、枸橼酸、羟甲基淀粉钠、微粉硅胶、淀粉、可溶性淀粉和/或硬脂酸镁。
6.按权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述的固体口服剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂或泡腾片。
7.权利要求1的中药复方制剂在制备防治酒精性肝损伤药物中的用途。
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