CN101642541A - 具有护肝作用的组合物、其制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有护肝作用的组合物、其制备方法及应用，该组合物有效成分原料重量为：枸杞子1－10份、姜黄5－10份、五味子3－8份、泽泻2－7份、白芍2－7份、辅料0.1－5份。制备步骤：(1)按所述重量份称取枸杞子，制得干浸膏粉A；(2)按所述重量份称取姜黄、五味子、泽泻、白芍混合，用60％乙醇提取2次，制得干浸膏粉B；(3)将干浸膏粉A和干浸膏粉B与过筛辅料混匀，制得混合粉C；(4)再将该混合粉C以90％乙醇为粘合剂，在制粒后与硬脂酸镁一同混匀；(5)制成成品胶囊。该组合物应用于制备预防、改善和治疗由应激负荷及酒精所致的急性肝损伤、粉刺杆菌－脂多糖诱发免疫性肝炎及非酒精性脂肪肝的药物、保健品或食品添加剂中。其工艺简单，效果显著。

Description

具有护肝作用的组合物、其制备方法及应用

技术领域

本发明涉及一种医药、保健领域，特别涉及一种具有保肝护肝作用的组合物、其制备方法及应用。

技术背景

随着科技的进步和生活节奏的加快，人们为了适应社会的日益强烈的竞争，需要承受来自不同方面的种种压力，使人们常常处于应激状态，由应激而引起的问题也随之而来。应激是机体受到任何因素的刺激，均出现与刺激种类无关的相同的全身防御反应与适应。现代医学研究证实情绪性心理应激负荷可以明显影响机体的神经、内分泌和免疫等功能，也可能导致急性器官功能衰竭等生理反应。中医理论认为，各种应激原所引起的气机变化，主要由肝脏来调整。尤其在调节情志因素引起的各种变化时，肝脏起着决定性的作用。这提示中医学的肝功能与西医学的神经-内分泌-免疫系统表示的机体内环境稳定状态密切相关。

肝脏是人体的解毒器官，酒精进入人体后也要由肝脏把它分解成水和二氧化碳等物质，过量喝酒，大量酒精超过肝脏的解毒能力，自然会加重肝脏的负担，导致肝脏受损，长此以往会引起酒精肝，进而导致肝硬化。酒精是目前世界范围内导致晚期肝脏疾病的主要原因之一，酒精性肝脏疾病已经成为肝脏移植的主要原因之一。酒精性肝脏疾病是除了病毒性肝脏疾病以外的发病率和致死率另外一个主要原因。现在除了戒酒和辅助治疗以外，暂时没有有效的治疗方法。肝炎(包括病毒性肝炎、血吸虫病、慢性酒精中毒肝炎、药物及化学毒物肝炎、营养不良、循环障碍、胆汁淤积、肠道感染及炎症、代谢性疾病等多种因素导致)是指肝脏有炎症性损害。热灭活P.acnes和LPS共同诱发的肝损伤是目前较为常用的自身免疫性肝损伤动物模型。当LPS静脉注射P.acnes负荷小鼠后，即可激活肝脏库普弗细胞(Kupffer cell)，活化巨噬细胞及相关细胞因子，继而诱发炎症反应。与其它肝损伤动物模型相比，P.acnes-LPS诱导的肝损伤更近似自身免疫性肝炎的病理过程，其病变与慢性肝炎非常接近。

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)在美国、澳大利亚、欧洲、亚太地区很多国家内引起慢性肝功能异常最为常见的原因，也是隐源性肝硬化的常见原因。非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)是NAFLD的一种病理类型，是进展性疾病，可以发展为肝硬化、肝功能衰竭和肝癌等终末期肝病，其病理生理机制尚不完全清楚。疾病的发病机制只有通过与疾病相似的合适动物模型才可以得到阐明，关于NASH的最新实验数据大部分来源于2种动物模型，1种是通过基因敲除方法获得的动物模型如ob/ob小鼠；另一种就是由蛋氨酸胆碱缺乏饮食(methionine-choline deficient，MCD)引起的脂肪性肝炎模型。MCD饮食最初由Shinozuka et al(Cancer Res，1978，38，1092-1098)提出，是用于探讨饮食因素对肝脏肿瘤形成的影响，后来发现在短期内可以引起脂肪性肝炎。但因为MCD饮食价格昂贵配方复杂，我们通过改良的MCD饮食建立了NASH动物模型。

基于上述分析，本发明意在提供一种具有护肝作用的组合物、其制备方法及应用，即作为主要成分应用于保肝、护肝的医药品和保健品中，以有效改善人体拘束应激负荷下的肝脏功能、急性酒精性负荷下的肝脏功能、P.acnes-LPS负荷下的肝脏功能以及非酒精性脂肪性肝负荷下的肝脏功能等指标。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种具有护肝作用的组合物、其制备方法及应用。

本发明通过如下技术方案实现：一种具有护肝作用的组合物，其特征是：该组合物有效成分的原料重量为：枸杞子1-10份、姜黄5-10份、五味子3-8份、泽泻2-7份、白芍2-7份、辅料0.1-5份。

一种根据权利要求1所述的具有护肝作用的组合物的制备方法，实施步骤如下：

(1)按所述重量份称取枸杞子，用水提取3次，每次8倍量，提取时间2小时，过滤得滤液，然后经过真空浓缩步骤后，提炼出稠浸膏；以下操作均在30万洁净区内进行，经真空干燥过程制成干浸膏后进行粉碎，并过筛80目得干浸膏粉A；

(2)按所述重量份称取姜黄、五味子、泽泻、白芍混合，用60％乙醇提取2次，每次8倍量，提取时间2小时，过滤得滤液，然后经过真空浓缩步骤后，提炼出稠浸膏；以下操作均在在30万洁净区内进行，经真空干燥过程制成干浸膏后进行粉碎，并过筛80目得干浸膏粉B；

(3)采用三维混合机将干浸膏粉A和干浸膏粉B与辅料淀粉混合均匀，制得混合粉C；

(4)再将该混合粉C以90％乙醇为粘合剂，沸腾干燥制粒，并在制粒后与硬脂酸镁一同放入三维混合机中混匀，生产成为总颗粒；

(5)经装填工序制成胶囊，最后按常规进行抛光、包装及检验，制成成品胶囊。

所述具有护肝作用的组合物在制备改善和治疗由应激负荷引起的肝损伤的药物，或保健食品，或食品添加剂中的应用。

所述具有护肝作用的组合物在制备改善和治疗酒精所致的急性肝损伤的药物，或保健食品，或食品添加剂中的应用。

所述具有护肝作用的组合物在制备改善和治疗粉刺杆菌-脂多糖诱发免疫性肝炎的药物，或保健食品，或食品添加剂中的应用。

所述具有护肝作用的组合物在制备改善和治疗非酒精性脂肪肝的药物，或保健食品，或食品添加剂中的应用。

组方原理：

化学性肝损伤，顾名思义，是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。这些化学物质包括酒精、环境中的化学毒物及某些药物，酒精肝损伤是目前最常见的。根据毒性的强弱，这些亲肝毒物可分为剧毒、高毒和低毒三类。这些毒物在人群中普遍易感，潜伏期短，且病变的过程与感染的剂量直接相关，均可引起肝脏不同程度的肝细胞坏死、肝硬化和肝纤维化。有毒物质进入人体肝脏内后，其代谢过程中所造成的肝细胞损伤，临床常常出现头痛、头晕、胃脘胀满，消化不良，呕吐泄泻，肌肉痉挛等一系列症状。

化学性肝损伤在实验中表明，肝组织MDA显著升高，GSH明显降低，组织化学染色显示脂滴显著增加，血清甘油三酯(TG)明显升高等，而血清转氨酶和肝组织结构改变却不明显。目前认为乙醇大量进入机体后在乙醇脱氢酶催化下可被脱氢氧化为乙醛和乙酸盐，使三羧酸循环障碍和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢，导致脂肪在肝细胞中沉积，同时血清中TG也明显升高。乙醇还使得NADH/NAD比率增大，导致氧化应激和脂质过氧化过程，还能消耗肝细胞的抗氧化剂GSH和维生素E。

中医认为急性肝损伤，其发病规律是：正虚不能抗御外邪→湿热毒邪入侵→由气入血→肝阻脾胃，脏腑功能失调→血脉受病，肝络瘀阻。其病机要点为：毒邪是致病的基本因素，正虚是发病和邪气滞留的关键，血瘀是病证的主要特点。临床常见证型是：热毒炽盛和湿热熏蒸；气滞血瘀和肝郁气滞；脾胃不足和肝肾亏虚等。但实际病情中，单一证型少见，而多型并见者多见，治疗也应多药联用，或清热解毒为主，或补益正气为主，或活血化瘀为主而兼用他法。故解毒、益气、活血可谓是治疗急性肝损害的常用基本法。为此，我们以中医理论为指导，以辨证施治为原则，开发了本发明组合物胶囊。选用枸杞子、姜黄、五味子、泽泻、白芍等为主要原料；用现代提取工艺提取枸杞子多糖、姜黄素、五味子醇甲、芍药苷等功效性成分，不仅对保护肝脏有良好效果，对肝脏损伤引起血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶和一氧化氮升高有明显的降低作用，使肝脏细胞坏死程度明显好转；方中枸杞子有滋补肝肾、益精明目、坚筋骨、去虚劳的作用；姜黄具有行气破瘀，通经止痛的作用；五味子有收敛固涩，益气生津，补肾宁心的作用；泽泻有利水消肿，渗湿，泄热的功效；白芍有养血敛阴，柔肝止痛，平抑肝阳的作用；诸药配伍使用，能显著增强对化学性肝损伤的辅助性保护和预防肝损伤的功效。基于对化学性肝损伤中西药不良反应及中医药优势的认识，人们越来越重视中医整体的观念的思想模式，选用具有辅助治疗化学性肝损伤的中药进行组方。

各组分药理：

枸杞子：

枸杞子是茄科植物宁夏枸杞子的成熟果实；性味甘、平，归肝肾经。为传统中医常用的补益药，具有“滋补肝肾、益精明目”的功效。《本草纲目》中记载枸杞子“坚筋骨，去虚劳”，是传统的药食两源物质，备受人们的青睐。枸杞子中主要含有甜菜碱、多糖、粗脂肪、烟酸、胡萝卜素、抗坏血酸、亚油酸、微量元素等成分。现代药理实验证明枸杞子对免疫有促进作用，同时具有免疫调节作用；可提高血睾酮水平，起强壮作用；对造血功能有促进作用；对正常健康人也有显著升白细胞作用；还有抗衰老、抗突变、抗肿瘤、降血脂、保肝及抗脂肪肝、降血糖、降血压的作用。

枸杞子粗多糖是从枸杞子中提取的水溶性多糖，具有增强细胞免疫及抗衰老作用。它含有丰富的氨基酸和微量元素，可使正常小鼠的免疫器官重量增加，亦能增强小鼠网状内皮系统的吞噬功能，具有增强免疫功能的作用。

实验证明肝损伤经枸杞子多糖治疗后，以中央静脉为中心的坏死区缩小，含有脂滴的肝细胞明显减少，脂滴由多变少，由大变小，说明枸杞子多糖具减轻肝细胞坏死，防止脂肪变性及促进肝细胞恢复的作用。CCl₄肝损伤组的肝细胞内嗜碱质和RNA均呈疏松的细颗粒状，中央坏死区含量更少，粗面内质网排列紊乱、扩张、脱颗粒。治疗组肝细胞增大，嗜碱质RNA量有明显增加，有的还呈小块状，核仁也明显增加，粗面内质网大部分恢复平行排列，G-6-Pase为内质网标记酶，其活性增加。说明枸杞子多糖可能通过阻止内质网的破坏，有助于肝细胞蛋白质的合成及解毒。SDH位于线粒体外膜上为其标记酶，损伤组其活性降低，超微结构呈线粒体肿胀、破碎。治疗组SDH活性增强，线粒体恢复正常形态，表明枸杞子多糖可促进线粒体恢复和再生。结果提高了细胞氧化的呼吸代谢，有助于细胞功能的恢复及减少肝细胞的进一步坏死。综上所述，枸杞子多糖对CCl₄损伤的肝组织有保护作用，其机理可能是枸杞子多糖阻止脂类过氧化以保护肝细胞的膜相结构不受破坏，阻止了内质网的损伤，促进蛋白质合成及解毒作用，继而线粒体损伤和脂肪变性相应减轻，减少了细胞损伤，并有促肝细胞再生、恢复肝功能的作用。

五味子：

五味子为木兰科植物五味子的成熟果实；性酸、甘，温，具有“收敛固涩，益气生津，补肾宁心”之功效，中医视为滋补强壮剂。《本草备要》中记载“性温，五味俱全，酸成为多，故专收敛肺气而滋肾水，益气生津，补虚明目，强阴涩精，除烦渴”。

从20世纪70年代起我国即以五味子治疗慢性肝炎，取得良好疗效。现代化学研究中，五味子主含挥发油、有机酸、鞣质、维生素等；药理实验证明其具有降低谷丙转氨酶的作用，降血压，利胆，对肝细胞有保护作用。用于久嗽虚喘，梦遗滑精，遗尿尿频，久泻不止，自汗盗汗，津伤口渴，内热消渴，心悸失眠。对慢性、病毒性肝炎、早期肝硬化具有显著疗效；还能预防由酒精引起的胃粘膜损伤。

五味子能降低转氨酶，临床用于治疗慢性肝炎。五味子对CCl₄经肝微粒体代谢转化后生成的一氧化碳及其在代谢过程中对NADPH的消耗亦能有抑制作用。可使受损的肝功能恢复加快，促使肝细胞的生长；加速肝内有毒物质的排泄，有利于保护肝脏。

泽泻：

泽泻为泽泻科植物泽泻的干燥块茎，为利水渗湿之要药；性甘，寒，具有“利水消肿，渗湿，泄热”的功效。《本草纲目》中记载：“泽泻渗湿热、行痰饮、止呕吐、疝痛等”。主要含有三萜类、挥发油、树脂、蛋白质、淀粉及多种生物碱成分，药理实验证明泽泻有利尿作用，能增加尿量，增加尿素与氯化物的排泄，对肾炎患者利尿作用更为明显。有降压、降血糖作用，还有抗脂肪肝作用。对金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、结核杆菌有抑制作用。并且有利尿，降血脂、降血糖，抗脂肪肝的作用，这些药理活性与泽泻的利水渗湿功效基本吻合。泽泻炮制入药已有数千年的历史，目前根据临床应用需要，泽泻的炮制有麸泽泻、酒泽泻、盐泽泻等方法，历年版《中国药典》收载均为生泽泻和盐泽泻。《得配本草》还提到其炮制的作用“健脾生用，或酒炒用，滋阴利水盐水炒。”

泽泻作为传统的利水药，在临床上治疗肝湿症较多，近来重剂量泽泻治疗肝炎或由此引起的肝腹水、肝硬化也取得较好的疗效。

泽泻生品及不同炮制品对CCl₄急性肝损伤模型的保护作用。模型组与空白对照组比较，血清ALT、AST均明显增高。20g/kg生泽泻及不同炮制品的水提物对CCl₄诱导的急性肝损伤小鼠血清ALT升高有明显降低作用，其中盐泽泻水提物还能降低肝损伤小鼠血清AST活性。

结果表明，生泽泻及各炮制品均能明显对抗小鼠急性肝损伤，与文献研究一致，但盐泽泻水提物保肝作用从降ALT、AST酶来看要优于生泽泻及麸泽泻，说明泽泻在经过盐制后能增强保肝降酶的作用，提示泽泻中极性偏小的(泽泻醇类)保肝成分在盐制后增强了其水溶性，水煎煮即可将有效成分提取出，这有利于入汤药时的临床应用。结果提示临床泽泻片用于保肝处方时，选用盐泽泻较适合，其盐制加强保肝作用的成分变化机理有待进一步研究。血清ALT测定是反映肝损伤的灵敏指标，ALT为氨基酸代谢中的重要酶，存在于肝细胞内。正常情况下ALT不逸出细胞外，当肝细胞损伤时，细胞膜结构破坏，通透性改变。

白芍：

白芍为毛茛科植物芍药的根，性苦、酸，微寒；具有“养血敛阴，柔肝止痛，平抑肝阳”之功效，还具有“平肝作用”。《本草备要》云：“白芍补血，泻肝，益脾，敛肝阴，治血虚之腹痛。”化学研究表明，白芍主要含有芍药苷、芍药内酯、挥发油、淀粉、三萜类成分。药理实验证明，白芍水煎剂给小鼠喂饲腹腔巨噬百分率和吞噬指数均较对照组有明显提高，能促进小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。

白芍对化学性肝损伤，有明显保护作用，能降低ALT，使肝细胞变性坏死程度减轻。白芍水提液体外试验，对CCl₄或D-半乳糖胺引起的原代培养大鼠肝细胞损伤有显著的保护作用，使肝细胞培养液中ALT降低。

白芍总苷(TGP)是从白芍根中提取的有效部位，其中芍药苷约占90％，具有明显的抗炎免疫调节及抗自由基、提高抗氧化物酶的活性。研究证实TGP可显著降低化学性肝损伤时脂质过氧化物的生成，同时可提高抗氧化酶的活性。

姜黄：

为姜科植物姜黄的根茎，性辛、苦、温；具有“行气破瘀，通经止痛”之功效。《新修本草》中记载“主心腹结积，下气，破血，除风热，功力烈于郁金。”现代研究表明，姜黄中含有挥发油，主要成分为姜黄酮、姜黄素、莪术酮、莪术醇、樟脑、微量元素等。药理实验证明姜黄素能抑制血小板聚集，降低血浆和全血黏度，对细菌有抑制作用，能保护胃粘膜与肝细胞。

姜黄素是从姜黄中提取的一种植物类多酚，除了作为色素添加剂外，还是姜黄发挥药理作用最重要的活性成分之一。研究证明，姜黄素不仅有抗氧化、抗炎、清除氧自由基的药理作用，还具有较强的抗肝损伤和护肝的功效，对CCl₄、D-氨基半乳糖及卡介苗加脂多糖诱导的肝损伤小鼠具有保护作用，可显著降低因肝损伤所致的血清谷丙转氨酶(ALT)，谷草转氨酶(AST)及一氧化氮(NO)含量的升高，降低肝组织内丙二醛(MDA)含量。

其主要作用机理表现为以下三个方面：

(1)清除肝脏自由基：主要表现为抑制细胞色素P₄₅₀的活性、抑制黄嘌呤氧化反应、抑制Fe²⁺诱导的氧化损伤、抑制NO的生成、抑制CCl₄等肝毒性物质的氧化损伤。

(2)抑制肝脏炎症反应：实验室研究已经证实，姜黄素能够抑制多种参与炎症反应的细胞因子，诸如环氧合酶-2(COX-2)、前列腺素、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子(TNF)、白介素-12(IL-12)等。

(3)抑制HSC活化：主要表现为抑制胶原合成和激活过氧化物酶体增殖体活化受体γ活性。

基于姜黄素抗氧化、抗炎的两大药理特性，不难推断出姜黄素有阻断、延缓肝损伤病理进程的作用。姜黄素在清除肝脏自由基、抑制肝脏炎症、抑制肝星状细胞活化等方面的作用，都能够提示出姜黄素是一种理想的抗肝损伤的制剂，而且毒性极低、来源广泛、价格低廉，具有良好的应用开发前景。

本发明选用枸杞子、五味子、姜黄、泽泻、白芍配伍组方，其中以枸杞子为主，滋补肝肾、益精明目，坚筋骨，去虚劳的功效，保肝及抗脂肪肝、降血糖、降血压的作用。姜黄、五味子为辅。五味子，性温，五味俱全，酸成为多，故专收敛肺气而滋肾水，益气生津，补虚明目，强阴涩精，除烦渴，具有“收敛固涩，益气生津，补肾宁心”之功效，降血压，利胆，对肝细胞有保护作用。姜黄，行气破瘀，通经止痛”之功效。主心腹结积，下气，破血，除风热，功力烈于郁金。再配以泽泻、白芍。泽泻，性甘，寒，具有“利水消肿，渗湿，泄热”的功效，利水渗湿之要药。《本草纲目》中记载：“泽泻渗湿热、行痰饮、止呕吐、疝痛等”。在临床上治疗肝湿症较多，白芍，补血，泻肝，益脾，敛肝阴，治血虚之腹痛。养血敛阴，柔肝止痛，平抑肝阳之功效。本品配方将中医理论与现代营养学相结合，针对化学性肝损伤的成因，由内及外，辩证施治，注重滋阴补肾，疏肝理气，强调活血化淤，综合治疗，从根本上调节人体阴阳气血平衡，有较好的辅助治疗化学性肝损伤的保健功能。

本发明的有益效果是：

本发明组合物可以有效调节因应激导致的各种肝、血液生化指标的变异。此外，本发明以拘束应激诱发小鼠肝功能低下作为动物试验模型，评价该组合物的抗应激作用及保肝护肝作用效果。结果显示，该组合物对拘束应激诱发小鼠肝功能活性表现出统计学上有意义的改善作用。

本发明组合物可以有效调节因饮酒导致的各种肝、血液生化指标的变异。此外，本发明以酒精所致小鼠急性肝功能低下作为动物试验模型，评价该组合物的解酒作用及保肝护肝作用效果。结果显示，该组合物对酒精所致小鼠急性肝功能低下表现出统计学上有意义的改善作用。

本发明组合物可以有效调节因P.acnes-LPS导致的各种肝、血液生化指标的变异。此外，本发明以P.acnes-LPS诱发小鼠免疫性肝功能低下作为动物试验模型，评价抗免疫性肝损伤的保肝护肝作用效果。结果显示，该组合物对P.acnes-LPS诱发小鼠肝功能低下表现出统计学上有意义的改善作用。

本发明组合物可以有效调节因非酒精性脂肪肝导致的各种肝、血液生化指标的变异。此外，本发明以非酒精性脂肪肝作为动物试验模型，评价对脂肪肝的保肝护肝作用效果。结果显示，该组合物对非酒精性脂肪肝肝功能低下表现出统计学上有意义的改善作用。

总之，该组合物通常制备成胶囊剂的形式，其主要用于改善各种肝损伤状态。其制备简单，效果显著，应用广泛。

附图说明

图1是本发明制备方法流程图；

图2是本发明胶囊P.acnes-LPS所致小鼠肝组织iNOS的图像；

图3是本发明组合物对非酒精性脂肪肝大鼠肝病理学的影响图像。

具体实施方式

以下结合附图和较佳实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详述如下：

实施例1：(每份按100g计)

一种具有护肝作用的组合物，其有效成分的原料重量组成为：枸杞子100g、姜黄500g、五味子300g、泽泻200g、白芍200g、辅料采用淀粉30g。

参见图1，一种具有护肝作用的组合物的制备方法，实施步骤如下：

(1)提取、过滤、浓缩、干燥

(1.1)药材的提取、过滤

枸杞子置回流提取罐中，加水提取，煎煮3次，每次加水8倍量煎煮2h，滤过，合并提取液，备用。五味子、白芍、泽泻、姜黄饮片，置回流提取罐中，加60％乙醇提取，煎煮2次，每次加水8倍量煎煮2h，滤过，合并提取液，备用。

(1.2)真空浓缩

取水提滤液置真空浓缩罐中，并浓缩至相对密度为1.20-1.25(50℃热测)，得稠浸膏A。

取醇提滤液置真空浓缩罐中，回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃热测)，得稠浸膏B。

真空浓缩工艺参数：真空度为0.08Mpa，温度：80℃。

(1.3)干燥

取上述稠浸膏A，用真空干燥箱加热至60℃干燥，得干浸膏A，干浸膏A用万能磨粉机粉碎成80目粉，得干浸膏粉A。

取上述稠浸膏B，用真空干燥箱加热至60℃干燥，得干浸膏B，干浸膏B用万能磨粉粉碎成80目粉，得干浸膏粉B。

真空干燥工艺参数：真空度为0.08Mpa，温度：60℃

(2)细粉原料的混合工艺

1.将干浸膏粉A、干浸膏粉B和淀粉置三维混合机中充分混匀，混合30分钟得混合粉C。

(3)制粒

将混合粉C，以90％乙醇溶液为湿润剂，用沸腾干燥制粒机制粒。

本品干颗粒经手指轻捻能碎且有粗糙感为宜。

制粒参数：进风温度100℃，雾化压力2-4Kg，转数为10。

(4)总混工艺

取合格颗粒，加入助流剂硬脂酸镁，置三维混合机中，混合20分钟。

(5)胶囊填充、抛光

采用自动胶囊填充机降上述合格颗粒按操作过程灌装入0号胶囊中，调整装量至每粒重0.5g，于自动磨光机内抛光。

(6)分装、包装、成品检验、入库

采用药用高密度聚乙烯瓶分装，符合《国家药品包装容器(材料)标准》YBB00122002的质量要求。每瓶装90粒，包装后，检验合格，入库。

(7)生产环境卫生洁净级要求：

生产环境及管理应符合GMP要求，生产过程中干燥、粉碎、过筛、混合、胶囊填充、抛光、装瓶均在符合GB17405-1998要求(为三十万级)的生产洁净区条件下操作，其它的在一般生产区内进行。

所述具有护肝作用的组合物在制备改善和治疗由应激负荷引起的肝损伤的药物，或保健食品，或食品添加剂中的应用。

所述具有护肝作用的组合物在制备改善和治疗酒精所致的急性肝损伤的药物，或保健食品，或食品添加剂中的应用。

所述具有护肝作用的组合物在制备改善和治疗粉刺杆菌-脂多糖诱发免疫性肝炎的药物，或保健食品，或食品添加剂中的应用。

所述具有护肝作用的组合物在制备改善和治疗非酒精性脂肪肝的药物，或保健食品，或食品添加剂中的应用。

实施例2：(每份按100g计)

一种具有护肝作用的组合物，该组合物有效成分的原料重量为：枸杞子500g、姜黄420g、五味子500g、泽泻330g、白芍380g、辅料200g。

一种具有护肝作用的组合物的制备方法，实施步骤如下：

(1)按所述重量份称取枸杞子，用水提取3次，每次8倍量，提取时间2小时，过滤得滤液，然后经过真空浓缩步骤后，提炼出稠浸膏；以下操作均在30万洁净区内进行，经真空干燥过程制成干浸膏后进行粉碎，并过筛80目得干浸膏粉A；

(2)按所述重量份称取姜黄、五味子、泽泻、白芍混合，用60％乙醇提取2次，每次8倍量，提取时间2小时，过滤得滤液，然后经过真空浓缩步骤后，提炼出稠浸膏；以下操作均在在30万洁净区内进行，经真空干燥过程制成干浸膏后进行粉碎，并过筛80目得干浸膏粉B；

(3)采用三维混合机将干浸膏粉A和干浸膏粉B与辅料淀粉混合均匀，制得混合粉C；

(4)再将该混合粉C以90％乙醇为粘合剂，沸腾干燥制粒，并在制粒后与硬脂酸镁一同放入三维混合机中混匀，生产成为总颗粒，

(5)经装填工序制成胶囊，最后按常规进行抛光、包装及检验，制成成品胶囊。

应用及其它同于实施例1。

实施例3：(每份按100g计)

一种具有护肝作用的组合物，该组合物有效成分的原料重量为：枸杞子900g、姜黄860g、五味子750g、泽泻700g、白芍700g、辅料480g。

一种具有护肝作用的组合物的制备方法，实施步骤如下：

(1)按所述重量份称取枸杞子，用水提取3次，每次8倍量，提取时间2小时，过滤得滤液，然后经过真空浓缩步骤后，提炼出稠浸膏；以下操作均在30万洁净区内进行，经真空干燥过程制成干浸膏后进行粉碎，并过筛80目得干浸膏粉A；

(2)按所述重量份称取姜黄、五味子、泽泻、白芍混合，用60％乙醇提取2次，每次8倍量，提取时间2小时，过滤得滤液，然后经过真空浓缩步骤后，提炼出稠浸膏；以下操作均在在30万洁净区内进行，经真空干燥过程制成干浸膏后进行粉碎，并过筛80目得干浸膏粉B；

(3)采用三维混合机将干浸膏粉A和干浸膏粉B与辅料淀粉混合均匀，制得混合粉C；

(4)再将该混合粉C以90％乙醇为粘合剂，沸腾干燥制粒，并在制粒后与硬脂酸镁一同放入三维混合机中混匀，生产成为总颗粒，

(5)经装填工序制成胶囊，最后按常规进行抛光、包装及检验，制成成品胶囊。

应用及其它同于实施例1。

应用实例1：

改善拘束应激引起小鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，拘束应激模型组，维生素C阳性药对照组(250mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。给药剂量为0.1ml每10g体重，每天1次，正常对照组和拘束模型组均灌胃同容量水溶液，给药第4天模型组和给药组小鼠灌胃30min后进行拘束应激实验。小鼠拘束装置参考文献为通风良好的50mL尖底聚丙烯塑料离心管，给予一次性拘束18h(15:00-9:00)，拘束期间小鼠禁食禁水，正常对照组小鼠为非拘束自由饮食饮水小鼠。所有小鼠乙醚麻醉，抽取血液，离心处理，用赖氏法测定血浆ALT水平。

实验结果：见表1，结果表明维生素C组和本发明组合物高、低计量组均可以改善拘束应激引起的ALT升高，使得ALT值下降到正常水平。(表1为本发明组合物对拘束负荷小鼠血浆ALT活性和肝组织MDA含量的影响)。

应用实例2：

对拘束应激引起小鼠肝匀浆丙二醛(MDA)升高的恢复作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，拘束应激模型组，维生素C阳性药对照组(250mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。给药剂量为0.1ml每10g体重，每天1次，正常对照组和拘束模型组均灌胃同容量水溶液，给药第4天模型组和给药组小鼠灌胃30min后进行拘束应激实验。小鼠拘束装置参考文献为通风良好的50mL尖底聚丙烯塑料离心管，给予一次性拘束18h(15:00-9:00)，拘束期间小鼠禁食禁水，正常对照组小鼠为非拘束自由饮食饮水小鼠。所有小鼠乙醚麻醉，取肝匀浆，离心处理，TBARS法测定肝匀浆MDA含量。

实验结果：见表1，结果表明维生素C组和本发明组合物高、低计量组均可以改善拘束应激引起的MDA升高，使得MDA值下降到正常水平。

表1本发明组合物对拘束负荷小鼠血浆ALT活性和肝组织MDA含量的影响(mean±S.D)

注：与拘束应激组相比较¹⁾P＜0.01，²⁾P＜0.05

应用实例3：

本发明组合物促进拘束应激引起小鼠肝组织一氧化氮(NO)含量升高的恢复作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，拘束应激模型组，维生素C阳性药对照组(250mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。给药剂量为0.1ml每10g体重，每天1次，正常对照组和拘束模型组均灌胃同容量水溶液，给药第4天模型组和给药组小鼠灌胃30min后进行拘束应激实验。小鼠拘束装置参考文献为通风良好的50mL尖底聚丙烯塑料离心管，给予一次性拘束18h(15:00-9:00)，拘束期间小鼠禁食禁水，正常对照组小鼠为非拘束自由饮食饮水小鼠。所有小鼠乙醚麻醉，取肝匀浆，离心处理，用Griess化学法测定肝匀浆NO含量。

实验结果：见表2，结果表明维生素C组和本发明组合物可以改善拘束应激引起的NO升高，使得NO值下降到正常水平(表2为本发明组合物对拘束应激小鼠肝匀浆NO含量和ORAC的影响)。

应用实例4：

本发明组合物改善拘束应激引起小鼠肝匀浆抗氧化能力指数(ORAC)紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，拘束应激模型组，维生素C阳性药对照组(250mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。给药剂量为0.1ml每10g体重，每天1次，正常对照组和拘束模型组均灌胃同容量水溶液，给药第4天模型组和给药组小鼠灌胃30min后进行拘束应激实验。小鼠拘束装置参考文献为通风良好的50mL尖底聚丙烯塑料离心管，给予一次性拘束18h(15:00-9:00)，拘束期间小鼠禁食禁水，正常对照组小鼠为非拘束自由饮食饮水小鼠。所有小鼠乙醚麻醉，取肝匀浆，离心处理，测定肝匀浆ORAC水平。

实验结果：见表2，结果表明维生素C组和本发明组合物可以改善拘束应激引起的ORAC降低，使得ORAC值升高到正常水平。

表2本发明组合物对拘束负荷小鼠肝组织NO含量和ORAC指数的影响(mean±S.D )

注：与拘束应激组相比较¹⁾P＜0.01，²⁾P＜0.05

应用实例5：

本发明组合物改善拘束应激引起小鼠肝组织谷胱甘肽(GSH)紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，拘束应激模型组，维生素C阳性药对照组(250mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。给药剂量为0.1ml每10g体重，每天1次，正常对照组和拘束模型组均灌胃同容量水溶液，给药第4天模型组和给药组小鼠灌胃30min后进行拘束应激实验。小鼠拘束装置参考文献为通风良好的50mL尖底聚丙烯塑料离心管，给予一次性拘束18h(15:00-9:00)，拘束期间小鼠禁食禁水，正常对照组小鼠为非拘束自由饮食饮水小鼠。所有小鼠乙醚麻醉，取肝匀浆，去蛋白离心处理，用HPLC法测定肝组织的GSH含量。

实验结果：见表3，结果表明维生素C组和本发明组合物可以改善拘束应激引起的GSH降低，使得GSH值升高到正常水平。表3为本发明组合物对拘束负荷小鼠肝组织GSH含量和GPX、GST活性的影响。

应用实例6：

本发明组合物改善拘束应激引起小鼠肝组织谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，拘束应激模型组，维生素C阳性药对照组(250mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。给药剂量为0.1ml每10g体重，每天1次，正常对照组和拘束模型组均灌胃同容量水溶液，给药第4天模型组和给药组小鼠灌胃30min后进行拘束应激实验。小鼠拘束装置参考文献为通风良好的50mL尖底聚丙烯塑料离心管，给予一次性拘束18h(15:00-9:00)，拘束期间小鼠禁食禁水，正常对照组小鼠为非拘束自由饮食饮水小鼠。所有小鼠乙醚麻醉，取肝匀浆，离心处理，用比色法测定肝组织的GSH-PX活性。

实验结果：见表3，结果表明维生素C组和本发明组合物可以改善拘束应激引起的GSH-PX降低，使得GSH-PX值升高到正常水平。表3为本发明组合物对拘束负荷小鼠肝组织GSH含量和GPX、GST活性的影响。

应用实例7：

本发明组合物改善拘束应激引起小鼠肝组织总超氧化物歧化酶(SOD)活性紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，拘束应激模型组，维生素C阳性药对照组(250mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。给药剂量为0.1ml每10g体重，每天1次，正常对照组和拘束模型组均灌胃同容量水溶液，给药第4天模型组和给药组小鼠灌胃30min后进行拘束应激实验。小鼠拘束装置参考文献为通风良好的50mL尖底聚丙烯塑料离心管，给予一次性拘束18h(15:00-9:00)，拘束期间小鼠禁食禁水，正常对照组小鼠为非拘束自由饮食饮水小鼠。所有小鼠乙醚麻醉，取肝匀浆，离心处理，比色法测定肝组织的SOD活性。

实验结果：见表3，结果表明维生素C组和本发明组合物可以改善拘束应激引起的SOD降低，使得SOD值升高到正常水平。

表3本发明组合物对拘束负荷小鼠肝组织GSH含量和GPX、GST活性的影响(mean±S.D)

注：与拘束应激组相比较¹⁾P＜0.01，²⁾P＜0.05

应用实例8：

本发明组合物改善酒精所致急性肝损伤小鼠血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性紊乱作用

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，酒精模型组，联苯双酯阳性药对照组(150mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。给药剂量为0.1ml每10g体重，每天1次，正常对照组和酒精模型组均灌胃同容量水溶液，给药第7天模型组和给药组小鼠灌胃30min后，灌胃酒精8g·kg^-1，空白对照组灌胃等量的蒸馏水，6h后将小鼠乙醚麻醉，抽取血液，离心处理，用赖氏法测定血浆ALT水平。

实验结果：见表4，结果表明本发明组合物可以改善酒精所致急性肝损伤引起的ALT升高，使得ALT值下降到正常水平。表4为本发明组合物对酒精所致急性肝损伤小鼠血浆ALT活性和肝组织MDA含量的影响。

应用实例9：

本发明组合物改善酒精所致急性肝损伤小鼠肝组织丙二醛(MDA)活性紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，酒精模型组，联苯双酯阳性药对照组(150mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。给药剂量为0.1ml每10g体重，每天1次，正常对照组和酒精模型组均灌胃同容量水溶液，给药第7天模型组和给药组小鼠灌胃30min后，灌胃酒精8g·kg^-1，空白对照组灌胃等量的蒸馏水，6h后将小鼠乙醚麻醉，抽取血液，离心处理，用TBARS法测定肝匀浆MDA含量。

实验结果：见表4，结果表明本发明组合物可以改善酒精所致急性肝损伤引起的MDA升高，使得MDA值下降到正常水平。

表4为本发明组合物对酒精所致急性肝损伤小鼠血浆ALT活性和肝组织MDA含量的影响(mean±S.D)

注：与酒精组相比较¹⁾P＜0.01，²⁾P＜0.05

应用实例10：

本发明组合物改善酒精所致急性肝损伤小鼠肝组织抗氧化能力指数(ORAC)紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，酒精模型组，联苯双酯阳性药对照组(150mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。给药剂量为0.1ml每10g体重，每天1次，正常对照组和酒精模型组均灌胃同容量水溶液，给药第7天模型组和给药组小鼠灌胃30min后，灌胃酒精8g·kg^-1，空白对照组灌胃等量的蒸馏水，6h后将小鼠乙醚麻醉，抽取血液，离心处理，测定肝匀浆ORAC水平。

实验结果：见表5，结果表明本发明组合物可以改善酒精所致急性肝损伤引起的ORAC降低，使得ORAC值恢复到正常水平。表5为本发明组合物对酒精所致小鼠肝组织GSH含量和ORAC指数的影响。

应用实例11：

本发明组合物改善酒精所致急性肝损伤小鼠肝组织谷胱甘肽(GSH)紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，酒精模型组，联苯双酯阳性药对照组(150mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。给药剂量为0.1ml每10g体重，每天1次，正常对照组和酒精模型组均灌胃同容量水溶液，给药第7天模型组和给药组小鼠灌胃30min后，灌胃酒精8g·kg^-1，空白对照组灌胃等量的蒸馏水，6h后将小鼠乙醚麻醉，取肝匀浆，离心处理，测定肝匀浆GSH水平。

实验结果：见表5，结果表明本发明组合物可以改善酒精所致急性肝损伤引起的GSH降低，使得GSH值恢复到正常水平。

表5本发明组合物对酒精所致小鼠肝组织GSH含量和ORAC指数的影响(mean±S.D)

注：与酒精组相比较¹⁾P＜0.01，²⁾P＜0.05

应用实例12：

本发明组合物改善酒精所致急性肝损伤小鼠肝组织谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，酒精模型组，联苯双酯阳性药对照组(150mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。给药剂量为0.1ml每10g体重，每天1次，正常对照组和酒精模型组均灌胃同容量水溶液，给药第7天模型组和给药组小鼠灌胃30min后，灌胃酒精8g·kg^-1，空白对照组灌胃等量的蒸馏水，6h后将小鼠乙醚麻醉，取肝匀浆，离心处理，测定肝匀浆GSH-PX水平。

实验结果：见表6，结果表明本发明组合物可以改善酒精所致急性肝损伤引起的GSH-PX降低，使得GSH-PX值恢复到正常水平。表6为本发明组合物对拘束负荷小鼠肝组织GPX和SOD活性的影响。

应用实例13：

本发明组合物改善酒精所致急性肝损伤小鼠肝组织总超氧化物歧化酶(SOD)活性紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，酒精模型组，联苯双酯阳性药对照组(150mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。给药剂量为0.1ml每10g体重，每天1次，正常对照组和酒精模型组均灌胃同容量水溶液，给药第7天模型组和给药组小鼠灌胃30min后，灌胃酒精8g·kg^-1，空白对照组灌胃等量的蒸馏水，6h后将小鼠乙醚麻醉，取肝匀浆，离心处理，测定肝匀浆SOD活性。

实验结果：见表6，结果表明本发明组合物可以改善酒精所致急性肝损伤引起的SOD降低，使得SOD值恢复到正常水平。

表6本发明组合物对酒精负荷小鼠肝组织GPX和SOD活性的影响(mean±S.D)

注：与酒精组相比较¹⁾P＜0.01，²⁾P＜0.05

应用实例14：

本发明组合物对P.acnes-LPS免疫性肝炎小鼠血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性的影响。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，P.acnes-LPS模型组，环孢菌素A阳性药对照组(25mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。对照组和P.acnes-LPS模型组均灌胃同体积蒸馏水，每天1次，第7天模型组和本发明组合物以及环孢菌素A给药组小鼠均25mg·kg^-1P.acnes负荷5d后尾静脉注射5μg·kg^{- 1}LPS-PBS溶液，对照组注射等量的PBS溶液，5h后将小鼠乙醚麻醉，抽取血液，离心处理，用赖氏法测定血浆ALT水平。

实验结果：见表7，结果表明本发明组合物可以改善P.acnes-LPS所致免疫性肝炎引起的ALT升高，使得ALT值下降到正常水平。表7为本发明组合物对P.acnes-LPS所致免疫性肝炎小鼠血清ALT活性和肝匀浆MDA含量的影响。

应用实例15：

本发明组合物改善P.acnes-LPS免疫性肝炎小鼠肝组织丙二醛(MDA)紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h小时/天(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，P.acnes-LPS模型组，阳性药对照组(环孢菌素A 25mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。对照组和P.acnes-LPS模型组均灌胃同体积蒸馏水，每天1次，第7天模型组和本发明组合物以及环孢菌素A给药组小鼠均25mg·kg^-1P.acnes负荷5d后尾静脉注射5μg·kg^{- 1}LPS-PBS溶液，对照组注射等量的PBS溶液，5h后将小鼠乙醚麻醉，取肝匀浆，离心处理，用TBARS法测定肝匀浆MDA含量。

实验结果：见表7，结果表明本发明组合物可以改善P.acnes-LPS所致免疫性肝炎引起的MDA升高，使得MDA值下降到正常水平。

表7本发明组合物对P.acnes-LPS所致免疫性肝炎小鼠血清ALT活性和肝匀浆MDA含量的影响(mean±S.D)

注：与P.acnes-LPS组相比较¹⁾P＜0.01，²⁾P＜0.05

应用实例16：

本发明组合物改善P.acnes-LPS免疫性肝炎小鼠肝组织一氧化氮(NO)紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，P.acnes-LPS模型组，阳性药对照组(环孢菌素A 25mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。对照组和P.acnes-LPS模型组均灌胃同体积蒸馏水，每天1次，第7天模型组和本发明组合物以及环孢菌素A给药组小鼠均25mg·kg^-1P.acnes负荷5d后尾静脉注射5μg·kg^{- 1}LPS-PBS溶液，对照组注射等量的PBS溶液，5h后将小鼠乙醚麻醉，取肝匀浆，离心处理，用Griess化学法测定肝匀浆NO含量。

实验结果：见表8，结果表明本发明组合物可以改善P.acnes-LPS所致免疫性肝炎引起的NO升高，使得NO值下降到正常水平。表8为本发明组合物对P.acnes-LPS所致免疫性肝炎小鼠肝组织NO含量和iNOS mRNA表达的影响。

应用实例17：

本发明组合物调节P.acnes-LPS免疫性肝炎小鼠肝组织一氧化氮合酶(iNOS mRNA)紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的7周龄雄性昆明小鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。小鼠随机分为空白对照组，P.acnes-LPS模型组，阳性药对照组(环孢菌素A 25mg·kg^-1)，本发明组合物低剂量组(300mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(600mg·kg^-1)等给药组，每组10只小鼠，共分5组。对照组和P.acnes-LPS模型组均灌胃同体积蒸馏水，每天1次，第7天模型组和本发明组合物以及环孢菌素A给药组小鼠均25mg·kg^-1P.acnes负荷5d后尾静脉注射5μg·kg^{- 1}LPS-PBS溶液，对照组注射等量的PBS溶液，5h后将小鼠乙醚麻醉，取肝匀浆，离心处理，用RT-PCR法测定肝匀浆iNOS mRNA。

实验结果：见表8和图2，图中A为样品，B为内参；结果表明本发明组合物可以改善P.acnes-LPS所致免疫性肝炎引起的iNOS mRNA升高，使得iNOS mRNA值下降到正常水平。图2为本发明组合物对酒精所致小鼠肝组织iNOSmRNA表达的影响。

表8本发明组合物对P.acnes-LPS所致免疫性肝炎肝组织NO含量和iNOS mRNA表达的影响(mean±S.D)

注：与P.acnes-LPS组相比较¹⁾P＜0.01，²⁾P＜0.05

应用实例18：

本发明组合物改善非酒精性脂肪肝大鼠血清甘油三酯(TG)紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的180-220g雄性SD大鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。大鼠随机分为空白对照组非酒精性脂肪肝模型组，本发明组合物低剂量组(200mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(400mg·kg^-1)等给药组，每组5只小鼠，共分4组。给药剂量为0.1ml·10g^-1，每天1次连续给6周，正常对照组和非酒精性脂肪肝模型组均灌胃蒸馏水。正常组给予普通饮食，模型组、低剂量组和高剂量组给改良蛋氨酸胆碱缺乏饮食，水和食物均为随意摄取。最后一次给药后禁食12h，将大鼠乙醚麻醉，抽取血液，离心处理，测定血浆TG含量。

实验结果：见表9，结果表明本发明组合物可以改善非酒精性脂肪肝引起的血清TG降低，使得TG值升高到正常水平。表9为本发明组合物对非酒精性脂肪肝损伤大鼠血清TG和TC以及肝组织TC的影响。

应用实例19：

本发明组合物改善非酒精性脂肪肝大鼠血清总胆固醇(TC)紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的180-220g雄性SD大鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。大鼠随机分为空白对照组非酒精性脂肪肝模型组，本发明组合物低剂量组(200mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(400mg·kg^-1)等给药组，每组5只小鼠，共分4组。给药剂量为0.1ml·10g^-1，每天1次连续给6周，正常对照组和非酒精性脂肪肝模型组均灌胃蒸馏水。正常组给予普通饮食，模型组、低剂量组和高剂量组给改良蛋氨酸胆碱缺乏饮食，水和食物均为随意摄取。最后一次给药后禁食12h，将大鼠乙醚麻醉，抽取血液，离心处理，测定血浆TC含量。

实验结果：见表9，结果表明本发明组合物可以改善非酒精性脂肪肝引起的血清TC降低，使得TC值升高到正常水平。表9为本发明组合物对非酒精性脂肪肝损伤大鼠血清TG和TC以及肝组织TC的影响。

应用实例20：

本发明组合物改善非酒精性脂肪肝大鼠肝匀浆总胆固醇(TC)紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的180-220g雄性SD大鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。大鼠随机分为空白对照组非酒精性脂肪肝模型组，本发明组合物低剂量组(200mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(400mg·kg^-1)等给药组，每组5只小鼠，共分4组。给药剂量为0.1ml·10g^-1，每天1次连续给6周，正常对照组和非酒精性脂肪肝模型组均灌胃蒸馏水。正常组给予普通饮食，模型组、低剂量组和高剂量组给改良蛋氨酸胆碱缺乏饮食，水和食物均为随意摄取。最后一次给药后禁食12h，将大鼠乙醚麻醉，取肝匀浆，离心处理，测定肝匀浆TC含量。

实验结果：见表9，结果表明本发明组合物可以改善非酒精性脂肪肝引起的肝匀浆TC升高，使得TC值恢复到正常水平。

表9本发明组合物对非酒精性脂肪肝损伤大鼠血清TG和TC以及肝组织TC的影响

注：与模型组相比较¹⁾P＜0.01，²⁾P＜0.05

应用实例21：

本发明组合物改善非酒精性脂肪肝大鼠肝病理学检查紊乱作用。

实验方法：实验使用广东省医学实验动物中心购入的180-220g雄性SD大鼠，饲养温度23±2℃，照明时间12h/d(7:00-19:00)，饲养一周后用于实验。大鼠随机分为空白对照组非酒精性脂肪肝模型组，本发明组合物低剂量组(200mg·kg^-1)，本发明组合物高剂量组(400mg·kg^-1)等给药组，每组5只小鼠，共分4组。给药剂量为0.1ml·10g^-1，每天1次连续给6周，正常对照组和非酒精性脂肪肝模型组均灌胃蒸馏水。正常组给予普通饮食，模型组、低剂量组和高剂量组给改良蛋氨酸胆碱缺乏饮食，水和食物均为随意摄取。最后一次给药后禁食12h，将大鼠乙醚麻醉，取肝灌流，泡福尔马林，用HE切片光镜下评估肝脏脂肪变性和炎症活动情况。

实验结果：参见图3，本发明胶囊对非酒精性脂肪肝大鼠肝病理学的影响：A：空白组；B：模型组；C：低剂量组；D：高剂量组；结果表明本发明组合物可以改善非酒精性脂肪肝引起肝脏的脂肪变，使得肝脏的脂肪变缓解。

上述参照实施例对具有护肝作用的组合物、其制备方法及应用进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可根据所限定范围例举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1、一种具有护肝作用的组合物，其特征是：该组合物有效成分的原料重量为：枸杞子1-10份、姜黄5-10份、五味子3-8份、泽泻2-7份、白芍2-7份、辅料0.1-5份。

2、一种根据权利要求1所述的具有护肝作用的组合物的制备方法，实施步骤如下：

(1)按所述重量份称取枸杞子，用水提取3次，每次8倍量，提取时间2小时，过滤得滤液，然后经过真空浓缩步骤后，提炼出稠浸膏；以下操作均在30万洁净区内进行，经真空干燥过程制成干浸膏后进行粉碎，并过筛80目得干浸膏粉A；

(2)按所述重量份称取姜黄、五味子、泽泻、白芍混合，用60％乙醇提取2次，每次8倍量，提取时间2小时，过滤得滤液，然后经过真空浓缩步骤后，提炼出稠浸膏；以下操作均在在30万洁净区内进行，经真空干燥过程制成干浸膏后进行粉碎，并过筛80目得干浸膏粉B；

(3)采用三维混合机将干浸膏粉A和干浸膏粉B与辅料淀粉混合均匀，制得混合粉C；

(4)再将该混合粉C以90％乙醇为粘合剂，沸腾干燥制粒，并在制粒后与硬脂酸镁一同放入三维混合机中混匀，生产成为总颗粒；

(5)经装填工序制成胶囊，最后按常规进行抛光、包装及检验，制成成品胶囊。

3、根据权利要求1所述具有护肝作用的组合物在制备预防、改善和治疗由应激负荷引起的肝损伤的药物，或保健食品，或食品添加剂中的应用。

4、根据权利要求1所述具有护肝作用的组合物在制备预防、改善和治疗酒精所致的急性肝损伤的药物，或保健食品，或食品添加剂中的应用。

5、根据权利要求1所述具有护肝作用的组合物在制备预防、改善和治疗粉刺杆菌-脂多糖诱发免疫性肝炎的药物，或保健食品，或食品添加剂中的应用。

6、根据权利要求1所述具有护肝作用的组合物在制备预防、改善和治疗非酒精性脂肪肝的药物，或保健食品，或食品添加剂中的应用。

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