CN102960541A - 一种利用白酒糟和糖蛋白生产环保型生物饲料的方法 - Google Patents

Abstract

一种利用白酒糟和糖蛋白生产环保型生物饲料的方法，其是将各种发酵底物原料加入干料混合机内进行混合；混合完毕的发酵底物通过调质器进行蒸煮灭菌，再进入湿料混合机中进行降温，然后接种混合菌种发酵液进行充分混合；接种并混合好的发酵底物通过自动计量打包系统装填到新型硅胶呼吸膜饲料发酵袋中进行打包、封口，在发酵室内恒温条件下发酵72～120h，即得到所述环保型生物饲料的成品；所述发酵底物的组成为：稻糠8～10重量份、白酒糟40～50重量份、玉米糖蛋白10～30重量份、玉米喷浆纤维5～10重量份、玉米粉5～10重量份、麸皮5～10重量份以及糖蜜2～3重量份；混合完毕的发酵底物水分含量为45%；所述的混合菌种发酵液包括康宁木霉、酪酸梭状芽胞杆菌、酿酒酵母和粪肠球菌菌液。

Description

一种利用白酒糟和糖蛋白生产环保型生物饲料的方法

技术领域

本发明是关于一种利用白酒糟和糖蛋白生产环保型生物饲料的方法，属于微生物饲料添加剂领域。

背景技术

白酒糟是酿酒业的副产品，是白酒成熟醪经蒸馏而剩下的废糟液。我国是白酒生产大国，每年产糟量在数千万吨以上。白酒糟含有丰富的蛋白质、氨基酸和淀粉等营养成分，还含有多种微量元素、维生素和菌体代谢产物等。但由于其淀粉糊精及粗纤维含量高，动物难以直接消化利用，而使其营养价值大幅降低。

玉米糖蛋白是口服葡萄糖厂的附属产品，玉米制品，口感甜，动物适口性好，在饲料中添加代替部分玉米不仅饲喂效果好，还可以降低饲料成本。玉米糖蛋白主要含有丰富的粗脂肪、葡萄糖、多种维生素等，能量是玉米的1.7倍，是喂养畜禽的理想原料。玉米糖蛋白含有95%的玉米脂肪，20%的麸糖。除糖分外，其粗蛋白和氨基酸等营养成分相对较缺乏。同时，由于其脂肪和糖含量较高，因此在贮存过程中极易发生氧化变质。造成以上两类副产品作为饲料资源利用率低下的原因还包括：第一，白酒糟和玉米糖蛋白都是高水分饲料，含水量在50~60%之间，因此不能参与饲料工业的产品加工，失去了用料大户；第二，湿态的白酒糟和玉米糖蛋白是短命饲料，产出必须及时利用，久贮则霉坏变质，从而失去了饲料资源的稳定性；第三，湿态的白酒糟和玉米糖蛋白是裹足饲料，基本是就地消化，不能远销，因此失去了更大的市场；第四，湿态的白酒糟和玉米糖蛋白是发热饲料，易腐败变质，不宜久存；第五，湿态的白酒糟和玉米糖蛋白是冷贮饲料，周围气温高能加速品质劣变，同时造成环境污染；第六，湿态的白酒糟和玉米糖蛋白是添加饲料，因内含酒精、亚硫酸和过多的粗纤维，大大限制了利用比例。鉴于以上原因，白酒糟和玉米糖蛋白饲用显得苍白无力，无论哪种方法都不能得到快速、充分利用的效果，资源流失也就突出地表现出来。

发明内容

本发明的目的在于，为解决上述问题，提供一种利用白酒糟和糖蛋白生产环保型生物饲料的方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种利用白酒糟和糖蛋白生产环保型生物饲料的方法，其特征在于：

（1）将各种发酵底物原料加入干料混合机内进行混合；混合完毕的发酵底物通过调质器进行蒸煮灭菌，再进入湿料混合机中进行降温，然后接种由4种益生菌组成的混合菌种发酵液进行充分混合；

（2）接种并混合好的发酵底物通过自动计量打包系统装填到新型硅胶呼吸膜饲料发酵袋中进行打包、封口，在发酵室内恒温条件下发酵72～120h，即得到所述环保型生物饲料的成品；

所述的发酵底物的组成为：稻糠8～10重量份、白酒糟40～50重量份、玉米糖蛋白10～30重量份、玉米喷浆纤维5～10重量份、玉米粉5～10重量份、麸皮5～10重量份以及糖蜜2～3重量份；混合完毕的发酵底物水分含量为45%；

所述的混合菌种发酵液包括康宁木霉（Trichoderma konigii）、酪酸梭状芽胞杆菌（Clostridium butyricum）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和粪肠球菌（Enterococcus faecalis）菌液。

如上所述的方法，优选地，步骤（1）中所述的发酵底物在调质器中经0.3～0.4MPa的饱和蒸汽、在140～150℃条件下进行瞬时蒸煮灭菌1～2min。

如上所述的方法，优选地，步骤（1）中所述的发酵底物进入湿料混合机后，不断搅拌并通入冷空气，使发酵底物温度降至30～35℃。

如上所述的方法，优选地，步骤（2）中所述的混合菌种发酵液中，康宁木霉、酪酸梭状芽胞杆菌、酿酒酵母和粪肠球菌的接种量分别为发酵底物重量的2～5%、2～5%、5～10%和5～10%；发酵底物接种后充分混合2～5min。

如上所述的方法，优选地，所述的发酵底物接种并混合后，通过自动计量打包系统装填到硅胶呼吸膜饲料发酵袋中进行打包、封口，包装过程中不需将袋内空气排空，包装好的物料在发酵室内30～35℃条件下发酵72～120h即为成品。

如上所述的方法，优选地，所述的新型硅胶呼吸膜饲料发酵袋的袋体两端封口为圆形无角设计。

如上所述的方法，优选地，所述的湿料混合机、调质器和自动计量打包系统均为316L不锈钢材质。

如上所述的方法，优选地，所述的混合菌种发酵液中的各种菌液分别是按以下方法制成的：

（1）所述康宁木霉菌液的制备方法为：

制备康宁木霉一级种子培养基：葡糖糖20g，马铃薯浸取液1000mL，pH自然，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

其中，所述马铃薯浸取液的制备方法为：取去皮的马铃薯200g，切成小块，加水1000mL煮沸30min滤去马铃薯块，将滤液补足至1000mL；

制备康宁木霉二级固体种子培养基：麸皮80kg、豆粕粉16kg、硫酸铵2.5kg、KH₂PO₄1.5kg，无菌纯水100L，pH自然，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

康宁木霉一级种子培养：1000mL三角瓶中装康宁木霉一级种子培养基500mL，接入康宁木霉菌种斜面制成浓度为1.0～2.0×10⁸个/mL的孢子悬液25mL，25～28℃下以120～150r/min振荡培养24～48h；

康宁木霉二级种子培养：将上述经康宁木霉一级种子培养的菌液按照5～10%的重量比接种到康宁木霉二级固体种子培养基中，在25～28℃、相对湿度85～90%条件下发酵24～48h，发酵过程中每隔2～3h通风、翻料一次；

（2）所述酿酒酵母菌液的制备方法为：

制备酿酒酵母一级种子培养基：麦芽汁培养基130.1g，蒸馏水1000mL混合均匀，在温度115～121℃下灭菌15～30min；

制备酿酒酵母二级种子培养基和发酵培养基：蔗糖蜜120kg、葡萄糖10kg、麦芽浸粉10kg、酵母浸粉10kg、MgSO₄·7H₂O 1.5kg、KH₂PO₄ 2.0kg，无菌纯水1000L，pH自然，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

酿酒酵母一级种子培养：1000mL三角瓶中装酿酒酵母一级种子培养基500mL，将酿酒酵母菌种斜面按环/80～100mL的比例接种入酿酒酵母一级种子培养基中，28～30℃下以100～130r/min振荡培养24～48h；

酿酒酵母二级种子培养：将上述经酿酒酵母一级种子培养的菌液按照5～10%的重量比接种到酿酒酵母二级种子罐中，在28～30℃、通风量体积比为1:0.5～1的条件下、以100～120r/min机械搅拌，培养24～48h；

酿酒酵母液体发酵培养：将上述经酿酒酵母二级种子培养的菌液按照5～10%的重量比接种到酿酒酵母发酵罐中，在28～30℃、通风量体积比为1:0.5～1的条件下、以100～120r/min机械搅拌，培养24～48h；

（3）所述酪酸梭状芽胞杆菌菌液的制备方法为：

制备酪酸梭状芽胞杆菌一级种子培养基：胰蛋白胨20g、牛肉浸膏10g、酵母膏6g、葡萄糖4g、磷酸氢二钾2g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.4g、氯化钙0.2g、硫酸亚铁0.1g、半胱氨酸盐酸盐0.5g，蒸馏水1000mL，pH 7.2～7.4，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

制备酪酸梭状芽胞杆菌二级种子培养基和发酵培养基：葡萄糖10kg、胰蛋白胨10kg、酵母浸膏5kg、牛肉浸膏3kg、K₂HPO₄ 2kg、MgSO₄·7H₂O 0.5kg、MnSO₄·H₂O 0.2kg、NaHCO 1kg、CaCO₃ 1kg，蒸馏水1000L，pH6.8～7.0，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

酪酸梭状芽胞杆菌一级种子培养：1000mL三角瓶中装酪酸梭状芽胞杆菌一级种子培养基900mL，将酪酸梭状芽胞杆菌菌种斜面按环/50～100mL的比例接种入酪酸梭状芽胞杆菌一级种子培养基中，35～37℃静置培养24～48h；

酪酸梭状芽胞杆菌二级种子培养：将上述经酪酸梭状芽胞杆菌一级种子培养的菌液按照5～10%的重量比接种到酪酸梭状芽胞杆菌二级种子罐中，35～37℃静置培养24～48h；

酪酸梭状芽胞杆菌液体发酵培养：将上述经酪酸梭状芽胞杆菌二级种子培养的菌液按照5～10%的重量比接种到酪酸梭状芽胞杆菌发酵罐中，35～37℃静置培养24～48h；

（4）所述粪肠球菌菌液的制备方法为：

制备粪肠球菌一级种子培养基：大豆蛋白胨5g、胰蛋白胨5g、酵母浸粉10g、葡萄糖10g，无机盐溶液40mL，蒸馏水1000mL，培养基煮沸后加入半胱氨酸盐酸盐0.5g，pH 7.0，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

其中，所述无机盐溶液的制备方法为：无水CaCl₂ 0.2g、MgSO₄·7H₂O0.48g，K₂HPO₄ 1.0g，NaCl 2g，NaHCO₃ 10g，混合CaCl₂和MgSO₄在300mL蒸馏水中直至溶解，加500mL蒸馏水，边搅拌边缓慢加入其他盐类，继续搅拌直至全部溶解，加200mL蒸馏水混匀，保存到4℃下备用；

制备粪肠球菌二级种子培养基和发酵培养基：全脂奶粉10kg、牛肉浸粉10kg、酵母浸粉10kg、葡萄糖5kg、乙酸钠5kg、柠檬酸铵2kg、Tween80 1kg、K₂HPO₄ 2kg、MgSO₄·7H₂O 0.2kg、MnSO₄·H₂O 0.05kg，蒸馏水1000mL混合均匀，pH6.8，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

粪肠球菌一级种子培养：1000mL三角瓶中装粪肠球菌一级种子培养基900mL，将粪肠球菌菌种斜面按环/50～100mL的比例接种入粪肠球菌一级种子培养基中，35～37℃静置培养24～48h；接种前，将所述粪肠球菌一级种子培养基煮沸驱氧；

粪肠球菌二级种子培养：将上述经粪肠球菌一级种子培养的菌液按照5～10%的重量比接种到粪肠球菌二级种子罐中，35～37℃静置培养24～48h；

粪肠球菌液体发酵培养：将上述经粪肠球菌二级种子培养的菌液按照5～10%的重量比接种到粪肠球菌发酵罐中，35～37℃静置培养24～48h。

如上所述方法制备得到环保型生物饲料。

按照如上所述方法制备得到的环保型生物饲料，该产品中粗蛋白（DM）≥19.52%、粗脂肪（DM）≥6.75%、粗纤维（DM）＜7.80%、酿酒酵母（CFU/g）≥9.50×10⁸、酪酸梭状芽胞杆菌（CFU/g）≥4.50×10⁸、粪肠球菌（CFU/g）≥8.00×10⁸。

本发明的有益效果在于：

本发明是选用稻糠、白酒糟、玉米糖蛋白、玉米喷浆纤维、玉米粉和糖蜜为原料，经混合、灭菌后接种由康宁木霉（Trichoderma konigii）、酪酸梭状芽胞杆菌（Clostridium butyricum）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和粪肠球菌（Enterococcus faecalis）组成的混合菌液，通过硅胶呼吸膜固态发酵方法制得的微生物固态发酵饲料产品。本发明生产工艺简单、生产成本较低，产品具有较高的活菌数和粗蛋白以及较高的粗脂肪，具有微生态制剂与蛋白饲料的双重特性，产品能够获得较高的经济效益。同时采用硅胶呼吸膜饲料发酵袋进行发酵，使得微生物好氧发酵和厌氧发酵能在同一个环境下进行，接种的微生物组合巧妙，能有效抑制大肠杆菌和沙门氏菌，同时又能促进有益菌的快速生长。

更具体地说，本发明提供的利用白酒糟和糖蛋白生产环保型生物饲料的方法具有以下优点：

1、采用本发明方法，白酒糟和玉米糖蛋白经过特定的纤维素分解菌、饲料酵母及粪肠球菌进行固态发酵培养后，不仅能使其纤维素降低，蛋白质升高，而且由于产品具有较高的纤维素酶活和较高的活性酵母细胞数，因此在动物饲养中，可提高饲料的转化率，并具有抗病和促进生长的作用。

2、本发明方法采用硅胶呼吸膜饲料发酵袋进行发酵，使得微生物好氧发酵和厌氧发酵能在同一个环境下进行，接种的微生物组合巧妙，能有效抑制大肠杆菌和沙门氏菌，同时又能促进有益菌的快速生长。

3、本发明方法采用硅胶呼吸膜固态发酵方法，能使活菌在自然条件下能长期保持其高活性。原料接种后就密封包装，发酵在包装袋内进行。好氧菌在生长繁殖过程中首先将包装内氧气耗尽，发酵产生的气体从呼吸膜排出，确保了包装袋内的无氧和无杂菌污染的环境。同时后期粪肠球菌在厌氧条件下发酵产生了大量的有机酸，进一步保证了产品的长期运输和贮存的稳定性。

4、采用本发明方法，白酒糟和玉米糖蛋白经过微生物固态发酵后其中残留的如酒精、亚硫酸和过多的粗纤维等抗营养物质，都会得到有效的降解，从而有效的提高产品的饲用价值。

5、采用本发明方法生产的环保型生物饲料中，粗蛋白（DM）≥19.52%、粗脂肪（DM）≥6.75%、粗纤维（DM）＜7.80%、酿酒酵母（CFU/g）≥9.50×10⁸、酪酸梭状芽胞杆菌（CFU/g）≥4.50×10⁸、粪肠球菌（CFU/g）≥8.00×10⁸。

附图说明

图1为本发明方法的流程示意图。

具体实施方式

以下通过具体实施例详细说明本发明的技术及特点，但这些实施例并非用以限定本发明的保护范围。

本发明以下实施例中所用康宁木霉（Trichoderma konigii）、酪酸梭状芽胞杆菌（Clostridium butyricum）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和粪肠球菌（Enterococcus faecalis）菌种是分别购买于中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）和中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）的野生菌种。保藏号分别为：CGMCC 3.4290、CICC 20763、CGMCC 2.1190、CICC21869。

实施例1

参见图1，按照以下方法制备本实施例的环保型生物饲料：

1．准确称取稻糠80kg、白酒糟450kg、玉米糖蛋白300kg、玉米喷浆纤维50kg、玉米粉50kg、麸皮50kg、糖蜜20kg，混合均匀制成发酵底物，发酵底物水分含量为45%。

2．将发酵底物通过调质器经0.3MPa的饱和蒸汽，在140℃条件下进行瞬时蒸煮灭菌1min。

3．发酵底物灭菌结束后进入湿料混合机，不断搅拌并通入冷空气，使发酵底物温度降至32℃左右。

4．将康宁木霉、酪酸梭状芽胞杆菌、酿酒酵母和粪肠球菌分别按发酵底物重量的5%、5%、10%和10%进行接种；然后充分混合4min。

5．发酵底物接种混合好后，通过自动计量打包系统装填到硅胶呼吸膜饲料发酵袋中进行打包、封口，包装过程中不需将袋内空气排空，包装好的物料在发酵室内35℃条件下发酵96h即为成品。

6．将康宁木霉（Trichoderma konigii）、酪酸梭状芽胞杆菌（Clostridiumbutyricum）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和粪肠球菌（Enterococcusfaecalis）分别按以下方法进行增菌培养和液态发酵：

（1）康宁木霉（Trichoderma konigii）

A.制备一级种子培养基：葡糖糖20g，马铃薯浸取液1000mL，pH自然，在温度121℃下灭菌30min。

马铃薯浸取液的制备方法：取去皮的马铃薯200g，切成小块，加水1000mL煮沸30min滤去马铃薯块，将滤液补足至1000mL。

B.制备二级固体种子培养基：麸皮80kg、豆粕粉16kg、硫酸铵2.5kg、KH₂PO₄ 1.5kg，无菌纯水100L，pH自然，在温度121℃下灭菌30min。

C.培养条件：

一级种子培养：1000mL三角瓶中装一级种子培养基500mL，接入菌种斜面制成的孢子悬液（1.5×10⁸个/mL）25mL，28℃、130r/min、振荡培养24h。

二级种子培养：100L自动固态发酵罐装二级固体种子培养基50kg，将上述经一级种子培养的菌液按照10%的重量比接种到二级固体种子培养基中，28℃、相对湿度85～90%条件下发酵48h，发酵过程中每隔2h通风、翻料一次。

（2）酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）

A.制备一级种子培养基：麦芽汁培养基130.1g，蒸馏水1000mL混合均匀，在温度115℃下灭菌15min。

B.制备二级种子培养基和发酵培养基：蔗糖蜜120kg、葡萄糖10kg、麦芽浸粉10kg、酵母浸粉10kg、MgSO₄·7H₂O 1.5kg、KH₂PO₄ 2.0kg，无菌纯水1000L，pH自然，在温度121℃下灭菌30min。

C.培养条件：

一级种子培养：1000mL三角瓶中装一级种子培养基500mL，将菌种斜面按环/100mL的比例接种入一级种子培养基中，30℃、130r/min、振荡培养24h。

二级种子培养：20L自动种子发酵罐装二级种子培养基10L，将上述经一级种子培养的菌液按照10%的重量比接种到二级种子罐中，30℃、通风量体积比1:1、机械搅拌120r/min、培养24h。

液体发酵培养：200L自动种子发酵罐装发酵培养基100L，将上述经二级种子培养的菌液按照10%的重量比接种到发酵罐中，30℃、通风量体积比1:1、机械搅拌120r/min、培养24h。

（3）酪酸梭状芽胞杆菌（Clostridium butyricum）

A.制备一级种子培养基：胰蛋白胨20g、牛肉浸膏10g、酵母膏6g、葡萄糖4g、磷酸氢二钾2g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.4g、氯化钙0.2g、硫酸亚铁0.1g、半胱氨酸盐酸盐0.5g，蒸馏水1000mL，pH 7.2，在温度121℃下灭菌30min。

B.制备二级种子培养基和发酵培养基：葡萄糖10kg、胰蛋白胨10kg、酵母浸膏5kg、牛肉浸膏3kg、K₂HPO₄ 2kg、MgSO₄·7H₂O 0.5kg、MnSO₄·H₂O0.2kg、NaHCO 1kg、CaCO₃ 1kg，蒸馏水1000L，pH7.0，在温度121℃下灭菌30min。

C.培养条件：

一级种子培养：1000mL三角瓶中装一级种子培养基900mL，将菌种斜面按环/50mL的比例接种入一级种子培养基中，37℃静置培养24h。

二级种子培养：10L自动种子发酵罐装二级种子培养基5L，将上述经一级种子培养的菌液按照10%的重量比接种到二级种子罐中，37℃静置培养24h。

液体发酵培养：100L自动种子发酵罐装发酵培养基50L，将上述经一级种子培养的菌液按照10%的重量比接种到发酵罐中，37℃静置培养24h。

（4）粪肠球菌（Enterococcus faecalis）

A.制备一级种子培养基：大豆蛋白胨5g、胰蛋白胨5g、酵母浸粉10g、葡萄糖10g，无机盐溶液40mL，蒸馏水1000mL，半胱氨酸盐酸盐0.5g（培养基煮沸后加入），pH 7.0，在温度121℃下灭菌30min，在接种前先煮沸驱氧后再进行接种。

无机盐溶液：CaCl₂(无水)0.2g、MgSO₄·7H₂O 0.48g，K₂HPO₄ 1.0g，NaCl2g，NaHCO₃ 10g，混合CaCl₂和MgSO₄在300mL蒸馏水中直至溶解，加500mL蒸馏水，边搅拌边缓慢加入其他盐类，继续搅拌直至全部溶解，加200mL蒸馏水混匀，保存到4℃下备用。

B.制备二级种子培养基和发酵培养基：全脂奶粉10kg、牛肉浸粉10kg、酵母浸粉10kg、葡萄糖5kg、乙酸钠5kg、柠檬酸铵2kg、Tween80 1kg、K₂HPO₄2kg、MgSO₄·7H₂O 0.2kg、MnSO₄·H₂O 0.05kg，蒸馏水1000mL混合均匀，pH6.8，在温度121℃下灭菌30min。

C.培养条件：

一级种子培养：1000mL三角瓶中装一级种子培养基900mL，将菌种斜面按环/50mL的比例接种入一级种子培养基中，37℃静置培养24h；在接种前先将一级种子培养基煮沸驱氧，接种后初期利用三角瓶中剩余空间中的少量氧气进行种子培养，氧气消耗完毕之后形成厌氧培养。

二级种子培养：20L自动种子发酵罐装二级种子培养基10L，将上述经一级种子培养的菌液按照10%的重量比接种到二级种子罐中，37℃静置培养24h。

液体发酵培养：200L自动发酵罐装发酵培养基100L，将上述经一级种子培养的菌液按照10%的重量比接种到发酵罐中，37℃静置培养24h。

7.按照以上方法制备得到的环保型生物饲料，该产品中粗蛋白（DM）≥20.03%、粗脂肪（DM）≥12.65%、粗纤维（DM）＜6.55%、酿酒酵母（CFU/g）≥2.50×10⁹、酪酸梭状芽胞杆菌（CFU/g）≥5.00×10⁸、粪肠球菌（CFU/g）≥1.5×10⁹。

各项指标参见表1。

表1底物发酵前与发酵后营养指标比对表（DM）

实施例2

参见图1，按照以下方法制备本实施例的环保型生物饲料：

1．准确称取稻糠100kg、白酒糟500kg、玉米糖蛋白100kg、玉米喷浆纤维70kg、玉米粉100kg、麸皮100kg、糖蜜30kg，混合均匀制成发酵底物，发酵底物水分含量为45%。

2．将发酵底物通过调质器经0.3MPa的饱和蒸汽，在140℃条件下进行瞬时蒸煮灭菌1min。

3．发酵底物灭菌结束后进入湿料混合机，不断搅拌并通入冷空气，使发酵底物温度降至32℃左右。

4．将康宁木霉、酪酸梭状芽胞杆菌、酿酒酵母和粪肠球菌分别按发酵底物重量的5%、5%、5%和5%进行接种；然后充分混合4min。

5．发酵底物接种混合好后，通过自动计量打包系统装填到硅胶呼吸膜饲料发酵袋中进行打包、封口，包装过程中不需将袋内空气排空，包装好的物料在发酵室内35℃条件下发酵96h即为成品。

6．将康宁木霉（Trichoderma konigii）、酪酸梭状芽胞杆菌（Clostridiumbutyricum）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和粪肠球菌（Enterococcusfaecalis）分别按如实施例1所述的方法进行增菌培养和液态发酵。

7.按照以上方法制备得到的环保型生物饲料，该产品中粗蛋白（DM）≥19.52%、粗脂肪（DM）≥6.75%、粗纤维（DM）＜7.80%、酿酒酵母（CFU/g）≥9.50×10⁸、酪酸梭状芽胞杆菌（CFU/g）≥4.50×10⁸、粪肠球菌（CFU/g）≥8.00×10⁸。各项指标参见表2。

表2底物发酵前与发酵后营养指标比对表（DM）

Claims (9)

1.一种利用白酒糟和糖蛋白生产环保型生物饲料的方法，其特征在于：

（1）将各种发酵底物原料加入干料混合机内进行混合；混合完毕的发酵底物通过调质器进行蒸煮灭菌，再进入湿料混合机中进行降温，然后接种混合菌种发酵液进行充分混合；

（2）接种并混合好的发酵底物通过自动计量打包系统装填到硅胶呼吸膜饲料发酵袋中进行打包、封口，在发酵室内恒温条件下发酵72～120h，即得到所述环保型生物饲料的成品；

所述的发酵底物的组成为：稻糠8～10重量份、白酒糟40～50重量份、玉米糖蛋白10～30重量份、玉米喷浆纤维5～10重量份、玉米粉5～10重量份、麸皮5～10重量份以及糖蜜2～3重量份；混合完毕的发酵底物水分含量为45%；

所述的混合菌种发酵液包括康宁木霉、酪酸梭状芽胞杆菌、酿酒酵母和粪肠球菌菌液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的发酵底物在调质器中经0.3～0.4MPa的饱和蒸汽、在140～150℃条件下进行瞬时蒸煮灭菌1～2min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的发酵底物进入湿料混合机后，不断搅拌并通入冷空气，使发酵底物温度降至30～35℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的混合菌种发酵液中，康宁木霉、酪酸梭状芽胞杆菌、酿酒酵母和粪肠球菌的接种量分别为发酵底物重量的2～5%、2～5%、5～10%和5～10%；发酵底物接种后充分混合2～5min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的发酵底物接种并混合后，通过自动计量打包系统装填到硅胶呼吸膜饲料发酵袋中进行打包、封口，包装过程中不需将袋内空气排空，包装好的物料在发酵室内30～35℃条件下发酵72～120h即为成品。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的新型硅胶呼吸膜饲料发酵袋的袋体两端封口为圆形无角设计。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的湿料混合机、调质器和自动计量打包系统均为316L不锈钢材质。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的混合菌种发酵液中的各种菌液分别是按以下方法制成的：

（1）所述康宁木霉菌液的制备方法为：

制备康宁木霉一级种子培养基：葡糖糖20g，马铃薯浸取液1000mL，pH自然，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

其中，所述马铃薯浸取液的制备方法为：取去皮的马铃薯200g，切成小块，加水1000mL煮沸30min滤去马铃薯块，将滤液补足至1000mL；

制备康宁木霉二级固体种子培养基：麸皮80kg、豆粕粉16kg、硫酸铵2.5kg、KH₂PO₄1.5kg，无菌纯水100L，pH自然，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

康宁木霉一级种子培养：1000mL三角瓶中装康宁木霉一级种子培养基500mL，接入康宁木霉菌种斜面制成浓度为1.0～2.0×10⁸个/mL的孢子悬液25mL，25～28℃下以120～150r/min振荡培养24～48h；

康宁木霉二级种子培养：将上述经康宁木霉一级种子培养的菌液按照5～10%的重量比接种到康宁木霉二级固体种子培养基中，在25～28℃、相对湿度85～90%条件下发酵24～48h，发酵过程中每隔2～3h通风、翻料一次；

（2）所述酿酒酵母菌液的制备方法为：

制备酿酒酵母一级种子培养基：麦芽汁培养基130.1g，蒸馏水1000mL混合均匀，在温度115～121℃下灭菌15～30min；

制备酿酒酵母二级种子培养基和发酵培养基：蔗糖蜜120kg、葡萄糖10kg、麦芽浸粉10kg、酵母浸粉10kg、MgSO₄·7H₂O 1.5kg、KH₂PO₄ 2.0kg，无菌纯水1000L，pH自然，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

酿酒酵母一级种子培养：1000mL三角瓶中装酿酒酵母一级种子培养基500mL，将酿酒酵母菌种斜面按环/80～100mL的比例接种入酿酒酵母一级种子培养基中，28～30℃下以100～130r/min振荡培养24～48h；

酿酒酵母二级种子培养：将上述经酿酒酵母一级种子培养的菌液按照5～10%的重量比接种到酿酒酵母二级种子罐中，在28～30℃、通风量体积比为1:0.5～1的条件下、以100～120r/min机械搅拌，培养24～48h；

酿酒酵母液体发酵培养：将上述经酿酒酵母二级种子培养的菌液按照5～10%的重量比接种到酿酒酵母发酵罐中，在28～30℃、通风量体积比为1:0.5～1的条件下、以100～120r/min机械搅拌，培养24～48h；

（3）所述酪酸梭状芽胞杆菌菌液的制备方法为：

制备酪酸梭状芽胞杆菌一级种子培养基：胰蛋白胨20g、牛肉浸膏10g、酵母膏6g、葡萄糖4g、磷酸氢二钾2g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.4g、氯化钙0.2g、硫酸亚铁0.1g、半胱氨酸盐酸盐0.5g，蒸馏水1000mL，pH 7.2～7.4，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

制备酪酸梭状芽胞杆菌二级种子培养基和发酵培养基：葡萄糖10kg、胰蛋白胨10kg、酵母浸膏5kg、牛肉浸膏3kg、K₂HPO₄ 2kg、MgSO₄·7H₂O 0.5kg、MnSO₄·H₂O 0.2kg、NaHCO 1kg、CaCO₃ 1kg，蒸馏水1000L，pH6.8～7.0，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

酪酸梭状芽胞杆菌一级种子培养：1000mL三角瓶中装酪酸梭状芽胞杆菌一级种子培养基900mL，将酪酸梭状芽胞杆菌菌种斜面按环/50～100mL的比例接种入酪酸梭状芽胞杆菌一级种子培养基中，35～37℃静置培养24～48h；

酪酸梭状芽胞杆菌二级种子培养：将上述经酪酸梭状芽胞杆菌一级种子培养的菌液按照5～10%的重量比接种到酪酸梭状芽胞杆菌二级种子罐中，35～37℃静置培养24～48h；

酪酸梭状芽胞杆菌液体发酵培养：将上述经酪酸梭状芽胞杆菌二级种子培养的菌液按照5～10%的重量比接种到酪酸梭状芽胞杆菌发酵罐中，35～37℃静置培养24～48h；

（4）所述粪肠球菌菌液的制备方法为：

制备粪肠球菌一级种子培养基：大豆蛋白胨5g、胰蛋白胨5g、酵母浸粉10g、葡萄糖10g，无机盐溶液40mL，蒸馏水1000mL，培养基煮沸后加入半胱氨酸盐酸盐0.5g，pH 7.0，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

其中，所述无机盐溶液的制备方法为：无水CaCl₂ 0.2g、MgSO₄·7H₂O0.48g，K₂HPO₄ 1.0g，NaCl 2g，NaHCO₃ 10g，混合CaCl₂和MgSO₄在300mL蒸馏水中直至溶解，加500mL蒸馏水，边搅拌边缓慢加入其他盐类，继续搅拌直至全部溶解，加200mL蒸馏水混匀，保存到4℃下备用；

制备粪肠球菌二级种子培养基和发酵培养基：全脂奶粉10kg、牛肉浸粉10kg、酵母浸粉10kg、葡萄糖5kg、乙酸钠5kg、柠檬酸铵2kg、Tween80 1kg、K₂HPO₄ 2kg、MgSO₄·7H₂O 0.2kg、MnSO₄·H₂O 0.05kg，蒸馏水1000mL混合均匀，pH6.8，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

粪肠球菌一级种子培养：1000mL三角瓶中装粪肠球菌一级种子培养基900mL，将粪肠球菌菌种斜面按环/50～100mL的比例接种入粪肠球菌一级种子培养基中，35～37℃静置培养24～48h；接种前，将所述粪肠球菌一级种子培养基煮沸驱氧；

粪肠球菌二级种子培养：将上述经粪肠球菌一级种子培养的菌液按照5～10%的重量比接种到粪肠球菌二级种子罐中，35～37℃静置培养24～48h；

粪肠球菌液体发酵培养：将上述经粪肠球菌二级种子培养的菌液按照5～10%的重量比接种到粪肠球菌发酵罐中，35～37℃静置培养24～48h。

9.按照权利要求1～8中任一项所述方法制备得到环保型生物饲料。