CN105861391A - 一种常温复合微生物发酵剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种常温复合微生物发酵剂,该微生物发酵剂由以下数量百分比的微生物菌种按比例制备而成：土地类芽孢杆菌NK3‑4 9％‑13％、保加利亚乳杆菌8％‑12％、肠杆菌YC105C 9％‑15％、水稻内生细菌11％‑19％、乳酸链球菌10％‑21％、黑曲霉菌8％‑15％、谷氨酸棒杆菌21％‑29％，上述各微生物菌种的数量百分比总和为100％。本发明制备简单，所得的发酵剂，可使原料的营养成分迅速转化，缩短了发酵周期。

Description

一种常温复合微生物发酵剂
技术领域
本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及一种常温复合微生物发酵剂。
背景技术
我国的秸秆资源十分丰富，年产量可达到5.79亿吨。其中，玉米、小麦、和稻草秸秆三大作物秸秆产量达到了4.39亿吨，占整个秸秆产量的75.88％。采用科学的方法对秸秆进行加工调剂，广泛用于畜牧业，具有良好的生态效益社会效益和经济效益。而今年来雾霾严重，多和烧秸秆有关系。
近年来在我国推广的氨化饲料，不仅成本高、能耗高，并且存在与农业争肥、污染环境，有些方法对于牲畜还有毒副作用。而饲料清楚技术的研究与应用已有上百年的历史，目前关键的技术在于微生物优良菌株的选育、复合菌种的有效复配和发酵工艺的优化。
微生物发酵广泛用于乳业、酒发酵及各类食品发酵中。但这种微生物发酵剂需要温度条件及其他控制条件。由于条件的控制，选用微生物发酵剂比较繁琐，成本比较高，发酵周期比较长。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种常温复合微生物发酵剂，制备简单，所得的发酵剂，可使原料的营养成分迅速转化，缩短了发酵周期。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种常温复合微生物发酵剂，由以下数量百分比的微生物菌种按比例制备而成：
土地类芽孢杆菌NK3-4 9％-13％、保加利亚乳杆菌8％-12％、肠杆菌YC105C9％-15％、水稻内生细菌11％-19％、乳酸链球菌10％-21％、黑曲霉菌8％-15％、谷氨酸棒杆菌21％-29％，上述各微生物菌种的数量百分比总和为100％。
优选地，由以下数量百分比的微生物菌种按比例制备而成：土地类芽孢杆菌NK3-4 11％、保加利亚乳杆菌10％、肠杆菌YC105C 12％、水稻内生细菌15％、乳酸链球菌15.5％、黑曲霉菌11.5％、谷氨酸棒杆菌25％。
上述的一种常温复合微生物发酵剂的制备方法，包括如下步骤：
S1、将土地类芽孢杆菌NK3-4、保加利亚乳杆菌、肠杆菌YC105C、水稻内生细菌、乳酸链球菌、黑曲霉菌和谷氨酸棒杆菌分别进行菌种活化、斜面培养；
其中，土地类芽孢杆菌NK3-4的培养基为葡萄糖5克、硫酸镁0.5克、氨基酸螯合钙0.1克、磷酸氢二钠1.5克、葛仙米冻干粉0.5克、玻璃粉1.2克、琼脂粉20克，pH＝7.0-7.5，温度28-30度；
保加利亚乳杆菌的培养基为酪蛋白胨9.0克、螺旋藻渣9.0克、酵母粉4.0克、葡萄糖5.0克、乙酸钠5.0克、柠檬酸二铵2.0克，吐温-801.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁0.2克，氨基酸螯合锰0.05克，碳酸钙20.0克，琼脂15.0克，蒸馏水1000ml，PH＝6.8-7.0，温度33-37℃；
肠杆菌YC105C的培养基为葡萄糖10.0克、蛋白胨8.0克、磷酸二氢钾1.0克、七水硫酸镁0.3克、酵母粉4.0克、醋糟1.0克、甘油0.3克、二水钼酸钠0.5克、五水硫酸铜0.5克、六水氯化钴0.5克；
水稻内生细菌的培养基采用含有3-5g/L碱木质素并补充1-3％葡萄糖与0.5-1.5％蛋白胨作为起始碳、氮源的液体培养基；
乳酸链球菌的培养基为牛肉膏6.0克、麦芽精4.0克、蛋白胨1.0克、葛仙米发酵粉5.0克、蔗糖8.0克、水1000ml、琼脂15.0克，pH＝6.3-6.7、温度24-26℃；
黑曲霉菌的培养基为牛肉膏9.0克、螺旋藻渣9.0克、葛仙米冻干粉4.0克、蔗糖5.0克、柠檬酸铵2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁0.2克、氨基酸螯合锰0.05克、碳酸钙20.0克、琼脂15.0克，蒸馏水1000ml，PH＝6.3-6.8，温度23-25℃；
谷氨酸棒杆菌的培养基为硝酸钠3.0克、磷酸氢二钾1.0克、氨基酸螯合铁0.1克、葡萄糖20.0克、七水硫酸镁0.5克、松针营养液1000ml、琼脂20.0克，pH＝6.5-7.0、温度28℃；
S2、将步骤S1所得的多种微生物菌种按数量百分比配比：
土地类芽孢杆菌NK3-4 9％-13％、保加利亚乳杆菌8％-12％、肠杆菌YC105C9％-15％、水稻内生细菌11％-19％、乳酸链球菌10％-21％、黑曲霉菌8％-15％、谷氨酸棒杆菌21％-29％，混合放入三角瓶中，置于摇床内，在27-29℃的条件下培养2-3天，控制pH在6.3-7.0，使菌数含量达7-9亿/ml，得常温复合微生物发酵剂。
优选地，所述松针营养液的制备方法为：
取生长六年以上的干油松松针用闪式提取器处理，所得提取液先用武火加热，沸腾后用文火加热1-1.5h，中空纤维超滤膜过滤，取滤液，加水补足至初始液体量，加入19-25％蚕蛹粉后混合即得。
优选地，所述葛仙米冻干粉通过以下步骤制备所得：
取干燥的葛仙米置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.8～1.4MPa，爆破处理8～25min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.4～1.8MPa，蒸汽爆破处理0.5～2.5min后，室温浓缩至相对密度1.10～1.20，冷冻干燥，得葛仙米冻干粉。
本发明具有以下有益效果：
制备简单，所得的发酵剂，可使原料的营养成分迅速转化，缩短了发酵周期。
具体实施方式
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
以下实施例中，所使用的松针营养液通过以下步骤制备：取生长六年以上的干油松松针用闪式提取器处理，所得提取液先用武火加热，沸腾后用文火加热1-1.5h，中空纤维超滤膜过滤，取滤液，加水补足至初始液体量，加入19-25％蚕蛹粉后混合即得。
所使用的葛仙米冻干粉通过以下步骤制备所得：
取干燥的葛仙米置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.8～1.4MPa，爆破处理8～25min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.4～1.8MPa，蒸汽爆破处理0.5～2.5min后，室温浓缩至相对密度1.10～1.20，冷冻干燥，得葛仙米冻干粉。
实施例1
S1、将土地类芽孢杆菌NK3-4、保加利亚乳杆菌、肠杆菌YC105C、水稻内生细菌、乳酸链球菌、黑曲霉菌和谷氨酸棒杆菌分别进行菌种活化、斜面培养；
其中，土地类芽孢杆菌NK3-4的培养基为葡萄糖5克、硫酸镁0.5克、氨基酸螯合钙0.1克、磷酸氢二钠1.5克、葛仙米冻干粉0.5克、玻璃粉1.2克、琼脂粉20克，pH＝7.0-7.5，温度28-30度；
保加利亚乳杆菌的培养基为酪蛋白胨9.0克、螺旋藻渣9.0克、酵母粉4.0克、葡萄糖5.0克、乙酸钠5.0克、柠檬酸二铵2.0克，吐温-801.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁0.2克，氨基酸螯合锰0.05克，碳酸钙20.0克，琼脂15.0克，蒸馏水1000ml，PH＝6.8-7.0，温度33-37℃；
肠杆菌YC105C的培养基为葡萄糖10.0克、蛋白胨8.0克、磷酸二氢钾1.0克、七水硫酸镁0.3克、酵母粉4.0克、醋糟1.0克、甘油0.3克、二水钼酸钠0.5克、五水硫酸铜0.5克、六水氯化钴0.5克；
水稻内生细菌的培养基采用含有3-5g/L碱木质素并补充1-3％葡萄糖与0.5-1.5％蛋白胨作为起始碳、氮源的液体培养基；
乳酸链球菌的培养基为牛肉膏6.0克、麦芽精4.0克、蛋白胨1.0克、葛仙米发酵粉5.0克、蔗糖8.0克、水1000ml、琼脂15.0克，pH＝6.3-6.7、温度24-26℃；
黑曲霉菌的培养基为牛肉膏9.0克、螺旋藻渣9.0克、葛仙米冻干粉4.0克、蔗糖5.0克、柠檬酸铵2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁0.2克、氨基酸螯合锰0.05克、碳酸钙20.0克、琼脂15.0克，蒸馏水1000ml，PH＝6.3-6.8，温度23-25℃；
谷氨酸棒杆菌的培养基为硝酸钠3.0克、磷酸氢二钾1.0克、氨基酸螯合铁0.1克、葡萄糖20.0克、七水硫酸镁0.5克、松针营养液1000ml、琼脂20.0克，pH＝6.5-7.0、温度28℃；
S2、将步骤S1所得的多种微生物菌种按数量百分比配比：
土地类芽孢杆菌NK3-4 9％、保加利亚乳杆菌8％、肠杆菌YC105C 9％、水稻内生细菌11％、乳酸链球菌10％、黑曲霉菌8％、谷氨酸棒杆菌21％，混合放入三角瓶中，置于摇床内，在27-29℃的条件下培养2-3天，控制pH在6.3-7.0，使菌数含量达7-9亿/ml，得常温复合微生物发酵剂。
实施例2
S1、将土地类芽孢杆菌NK3-4、保加利亚乳杆菌、肠杆菌YC105C、水稻内生细菌、乳酸链球菌、黑曲霉菌和谷氨酸棒杆菌分别进行菌种活化、斜面培养；
其中，土地类芽孢杆菌NK3-4的培养基为葡萄糖5克、硫酸镁0.5克、氨基酸螯合钙0.1克、磷酸氢二钠1.5克、葛仙米冻干粉0.5克、玻璃粉1.2克、琼脂粉20克，pH＝7.0-7.5，温度28-30度；
保加利亚乳杆菌的培养基为酪蛋白胨9.0克、螺旋藻渣9.0克、酵母粉4.0克、葡萄糖5.0克、乙酸钠5.0克、柠檬酸二铵2.0克，吐温-801.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁0.2克，氨基酸螯合锰0.05克，碳酸钙20.0克，琼脂15.0克，蒸馏水1000ml，PH＝6.8-7.0，温度33-37℃；
肠杆菌YC105C的培养基为葡萄糖10.0克、蛋白胨8.0克、磷酸二氢钾1.0克、七水硫酸镁0.3克、酵母粉4.0克、醋糟1.0克、甘油0.3克、二水钼酸钠0.5克、五水硫酸铜0.5克、六水氯化钴0.5克；
水稻内生细菌的培养基采用含有3-5g/L碱木质素并补充1-3％葡萄糖与0.5-1.5％蛋白胨作为起始碳、氮源的液体培养基；
乳酸链球菌的培养基为牛肉膏6.0克、麦芽精4.0克、蛋白胨1.0克、葛仙米发酵粉5.0克、蔗糖8.0克、水1000ml、琼脂15.0克，pH＝6.3-6.7、温度24-26℃；
黑曲霉菌的培养基为牛肉膏9.0克、螺旋藻渣9.0克、葛仙米冻干粉4.0克、蔗糖5.0克、柠檬酸铵2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁0.2克、氨基酸螯合锰0.05克、碳酸钙20.0克、琼脂15.0克，蒸馏水1000ml，PH＝6.3-6.8，温度23-25℃；
谷氨酸棒杆菌的培养基为硝酸钠3.0克、磷酸氢二钾1.0克、氨基酸螯合铁0.1克、葡萄糖20.0克、七水硫酸镁0.5克、松针营养液1000ml、琼脂20.0克，pH＝6.5-7.0、温度28℃；
S2、将步骤S1所得的多种微生物菌种按数量百分比配比：
土地类芽孢杆菌NK3-4 11％、保加利亚乳杆菌10％、肠杆菌YC105C 12％、水稻内生细菌15％、乳酸链球菌15.5％、黑曲霉菌11.5％、谷氨酸棒杆菌25％，混合放入三角瓶中，置于摇床内，在27-29℃的条件下培养2-3天，控制pH在6.3-7.0，使菌数含量达7-9亿/ml，得常温复合微生物发酵剂。
实施例3
S1、将土地类芽孢杆菌NK3-4、保加利亚乳杆菌、肠杆菌YC105C、水稻内生细菌、乳酸链球菌、黑曲霉菌和谷氨酸棒杆菌分别进行菌种活化、斜面培养；
其中，土地类芽孢杆菌NK3-4的培养基为葡萄糖5克、硫酸镁0.5克、氨基酸螯合钙0.1克、磷酸氢二钠1.5克、葛仙米冻干粉0.5克、玻璃粉1.2克、琼脂粉20克，pH＝7.0-7.5，温度28-30度；
保加利亚乳杆菌的培养基为酪蛋白胨9.0克、螺旋藻渣9.0克、酵母粉4.0克、葡萄糖5.0克、乙酸钠5.0克、柠檬酸二铵2.0克，吐温-801.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁0.2克，氨基酸螯合锰0.05克，碳酸钙20.0克，琼脂15.0克，蒸馏水1000ml，PH＝6.8-7.0，温度33-37℃；
肠杆菌YC105C的培养基为葡萄糖10.0克、蛋白胨8.0克、磷酸二氢钾1.0克、七水硫酸镁0.3克、酵母粉4.0克、醋糟1.0克、甘油0.3克、二水钼酸钠0.5克、五水硫酸铜0.5克、六水氯化钴0.5克；
水稻内生细菌的培养基采用含有3-5g/L碱木质素并补充1-3％葡萄糖与0.5-1.5％蛋白胨作为起始碳、氮源的液体培养基；
乳酸链球菌的培养基为牛肉膏6.0克、麦芽精4.0克、蛋白胨1.0克、葛仙米发酵粉5.0克、蔗糖8.0克、水1000ml、琼脂15.0克，pH＝6.3-6.7、温度24-26℃；
黑曲霉菌的培养基为牛肉膏9.0克、螺旋藻渣9.0克、葛仙米冻干粉4.0克、蔗糖5.0克、柠檬酸铵2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁0.2克、氨基酸螯合锰0.05克、碳酸钙20.0克、琼脂15.0克，蒸馏水1000ml，PH＝6.3-6.8，温度23-25℃；
谷氨酸棒杆菌的培养基为硝酸钠3.0克、磷酸氢二钾1.0克、氨基酸螯合铁0.1克、葡萄糖20.0克、七水硫酸镁0.5克、松针营养液1000ml、琼脂20.0克，pH＝6.5-7.0、温度28℃；
S2、将步骤S1所得的多种微生物菌种按数量百分比配比：
土地类芽孢杆菌NK3-4 13％、保加利亚乳杆菌12％、肠杆菌YC105C 15％、水稻内生细菌19％、乳酸链球菌21％、黑曲霉菌15％、谷氨酸棒杆菌29％，混合放入三角瓶中，置于摇床内，在27-29℃的条件下培养2-3天，控制pH在6.3-7.0，使菌数含量达7-9亿/ml，得常温复合微生物发酵剂。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种常温复合微生物发酵剂，其特征在于，由以下数量百分比的微生物菌种按比例制备而成：
土地类芽孢杆菌NK3-4 9％-13％、保加利亚乳杆菌8％-12％、肠杆菌YC105C9％-15％、水稻内生细菌11％-19％、乳酸链球菌10％-21％、黑曲霉菌8％-15％、谷氨酸棒杆菌21％-29％，上述各微生物菌种的数量百分比总和为100％。
2.如权利要求1所述的一种常温复合微生物发酵剂，其特征在于，由以下数量百分比的微生物菌种按比例制备而成：土地类芽孢杆菌NK3-4 11％、保加利亚乳杆菌10％、肠杆菌YC105C 12％、水稻内生细菌15％、乳酸链球菌15.5％、黑曲霉菌11.5％、谷氨酸棒杆菌25％。
3.如权利要求1-2任一项所述的一种常温复合微生物发酵剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将土地类芽孢杆菌NK3-4、保加利亚乳杆菌、肠杆菌YC105C、水稻内生细菌、乳酸链球菌、黑曲霉菌和谷氨酸棒杆菌分别进行菌种活化、斜面培养；
其中，土地类芽孢杆菌NK3-4的培养基为葡萄糖5克、硫酸镁0.5克、氨基酸螯合钙0.1克、磷酸氢二钠1.5克、葛仙米冻干粉0.5克、玻璃粉1.2克、琼脂粉20克，pH＝7.0-7.5，温度28-30度；
保加利亚乳杆菌的培养基为酪蛋白胨9.0克、螺旋藻渣9.0克、酵母粉4.0克、葡萄糖5.0克、乙酸钠5.0克、柠檬酸二铵2.0克，吐温-80 1.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁0.2克，氨基酸螯合锰0.05克，碳酸钙20.0克，琼脂15.0克，蒸馏水1000ml，PH＝6.8-7.0，温度33-37℃；
肠杆菌YC105C的培养基为葡萄糖10.0克、蛋白胨8.0克、磷酸二氢钾1.0克、七水硫酸镁0.3克、酵母粉4.0克、醋糟1.0克、甘油0.3克、二水钼酸钠0.5克、五水硫酸铜0.5克、六水氯化钴0.5克；
水稻内生细菌的培养基采用含有3-5g/L碱木质素并补充1-3％葡萄糖与0.5-1.5％蛋白胨作为起始碳、氮源的液体培养基；
乳酸链球菌的培养基为牛肉膏6.0克、麦芽精4.0克、蛋白胨1.0克、葛仙米发酵粉5.0克、蔗糖8.0克、水1000ml、琼脂15.0克，pH＝6.3-6.7、温度24-26℃；
黑曲霉菌的培养基为牛肉膏9.0克、螺旋藻渣9.0克、葛仙米冻干粉4.0克、蔗糖5.0克、柠檬酸铵2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁0.2克、氨基酸螯合锰0.05克、碳酸钙20.0克、琼脂15.0克，蒸馏水1000ml，PH＝6.3-6.8，温度23-25℃；
谷氨酸棒杆菌的培养基为硝酸钠3.0克、磷酸氢二钾1.0克、氨基酸螯合铁0.1克、葡萄糖20.0克、七水硫酸镁0.5克、松针营养液1000ml、琼脂20.0克，pH＝6.5-7.0、温度28℃；
S2、将步骤S1所得的多种微生物菌种按数量百分比配比：
土地类芽孢杆菌NK3-4 9％-13％、保加利亚乳杆菌8％-12％、肠杆菌YC105C9％-15％、水稻内生细菌11％-19％、乳酸链球菌10％-21％、黑曲霉菌8％-15％、谷氨酸棒杆菌21％-29％，混合放入三角瓶中，置于摇床内，在27-29℃的条件下培养2-3天，控制pH在6.3-7.0，使菌数含量达7-9亿/ml，得常温复合微生物发酵剂。
4.如权利要求3所述的一种常温复合微生物发酵剂的制备方法，其特征在于，所述松针营养液的制备方法为：
取生长六年以上的干油松松针用闪式提取器处理，所得提取液先用武火加热，沸腾后用文火加热1-1.5h，中空纤维超滤膜过滤，取滤液，加水补足至初始液体量，加入19-25％蚕蛹粉后混合即得。
5.如权利要求3所述的一种常温复合微生物发酵剂的制备方法，其特征在于，所述葛仙米冻干粉通过以下步骤制备所得：
取干燥的葛仙米置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.8～1.4MPa，爆破处理8～25min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.4～1.8MPa，蒸汽爆破处理0.5～2.5min后，室温浓缩至相对密度1.10～1.20，冷冻干燥，得葛仙米冻干粉。
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