CN102949340A - 一种赛拉菌素纳米乳药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种赛拉菌素纳米乳药物的制备方法和组方，本制剂由油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、超纯水、赛拉菌素组成的O/W型(水包油型)纳米乳体系。该纳米乳体系具有较高的载药量(高达11％以上，可根据临床实际需求用注射用水或生理盐水按任意比率稀释)，放置稳定，极大地提高该药的生物利用度，有效地克服了传统透皮给药用药量大，极大地提高了赛拉菌素的杀虫驱虫作用，同时由于极大限度的降低赛拉菌素的临床用量，其1％制剂辅料(油酸乙酯、OP、正丁醇等)含量同比降至4.1％，其1‰制剂辅料含量同比降至4.1‰，外观性状与真溶液无二。与透皮制剂相比，赛拉菌素的临床用量从6mg/kg降至0.2mg/kg，而疗效却一样，因此在原料药相对短缺的今天，本发明的研发成功，不仅降低用药量，减少畜主的用药成本，而且大大降低了该药对环境和公共卫生的危害；此外，通过对小鼠的急性毒性实验和临床药效试验表明，该纳米乳无明显毒副作用，是一种安全、可靠、高效的的纳米级抗寄生虫药物。

Description

一种赛拉菌素纳米乳药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于兽药领域，涉及一种高效驱除畜禽体内线虫和体外虱、蚤、螨等多种节肢昆虫的抗寄生虫药物制剂，具体是指一种赛拉菌素纳米乳药物及其制备方法。

背景技术

大环内酯类抗寄生虫药是兼具抗体内寄生虫和抗体外寄生虫双重作用的抗寄生虫药，主要包括两类，即阿维菌素类和米尔贝霉素类，阿维菌素类包括阿维菌素(Avermectin)、伊维菌素(Ivermectin)、多拉菌素(Doramectin)、爱普诺霉素(Eprinomectin)、塞拉菌素(Selamctin)，米尔贝霉素类主要有米尔贝霉素(Milbemycins)、莫昔克丁(Moxidectin)、米尔贝肟(MilbemycinOxime)。其中伊维菌素、多拉菌素、爱普诺霉素、塞拉菌素和莫昔克丁是临床常用的药物。大环内酯类化合物具有一个复杂的大环内酯环，均是通过土壤中的链霉菌发酵产生的，但是每一种药物也有其独特的结构。伊维菌素是阿维菌素的第二代衍生物，主要含有IVMB1(B1a+B1b)，伊维菌素B1是阿维菌素B1的-C22＝C23-加氢产物。多拉菌素是阿维菌素的第三代衍生物，是阿维菌素B1的C-25位的短碳链被环己烷取代后的产物。爱普诺霉素是阿维菌素B1的C″-4位上的OH被-NHCOCH3取代后的产物。塞拉菌素是多拉菌素的衍生物，其与多拉菌素最大的不同之处就是C-5位存在肟基(见图1)。大环内酯类抗寄生虫药物均易溶于甲醇、乙醇、乙腈、异丙醇、乙酸乙酯等有机溶剂，几乎不溶于水。该类药物对绝大多数哺乳动物是安全的，但科利犬对该类药物中的大部分药物都很敏感，主要是由缺陷基因导致的，但塞拉菌素对科利犬是安全的。

赛拉菌素为白色或淡黄色结晶粉末，其化学名为25一环已烷基一25一去(1一甲丙基)一5一脱氧一22，23一二氢一5一(肟基)一阿维菌素B1单糖，其分子结构中具有较强的亲脂基团，脂溶性较高，水溶性较差。赛拉菌素的作用机理与其他阿维菌素类药物相同，即通过干扰虫体谷氨酸控制的氯离子通道使虫体发生快速、致死性和非痉挛性的神经肌肉麻痹，赛拉菌素对吸虫和绦虫无效，只对体内线虫和体外节肢动物类体表寄生虫有杀灭作用。赛拉菌素作为一种优良宠物用的抗寄生虫药物，其剂型的研究也取得了一定的进展。目前，赛拉菌素制剂共有3种剂型：透皮剂、口服剂和注射剂。国内市场上较为成熟的产品为美国辉瑞公司生产的供外用的赛拉菌素透皮剂，中文商品名为“大宠爱”，该制剂具有操作简单、使用方便的特点，但用药量大，临床最低用药剂量要在6mg/kgBW以上，但根据该制剂在犬体内的药代动力学研究，其血浆最高血药浓度均在纳克级别(约15ng/ml)，换言之本制剂在纳克级别就对寄生虫有驱杀作用，而给药量6mg/kg BW是其有效浓度数十万倍，是注射用药剂量0.2mg/kg BW数十倍(30倍以上)，而如此高的用药量造成危害不仅对环境有污染，畜主的用药成本提高，并且造成敏感寄生虫对该药抗性的增加，缩短药物的使用有效周期。

发明内容

针对赛拉菌素透皮剂、口服剂等现有剂型的缺陷和技术的不足，本发明的目的在于提供一种赛拉菌素纳米乳药物组合物。将药物增溶到纳米乳体系中制成兽医临床用于抗体内线虫和体外节肢昆虫含赛拉菌素纳米乳剂。本发明将赛拉菌素制成纳米乳，极大地增强了赛拉菌素的效力，同时也解决了赛拉菌素水溶性差的缺点。

由于纳米乳基质属于纳米级乳液，可以使药物增溶到纳米乳体系中，提高其稳定性，可最大化地提高其药物的利用率，故本发明将赛拉菌素增溶于纳米乳基质，制成纳米级药物，旨在通过该发明为兽医临床上提供新型的广谱抗寄生虫药物新制剂，起到对动物寄生虫病的治疗和预防作用。

本发明的另一目的是提供赛拉菌素纳米乳药物组合物的制备方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：一种赛拉菌素纳米乳药物组合物，由下列重量百分比的原料组成：

油酸乙酯        1.6％～8％；

Tween-80        13.2～30％；

正丁醇          10％～18％；

超纯水          50.4％～74％；

赛拉菌素        0.5％～11％。

上述各原料优选配方的重量百分比为：

油酸乙酯1.6～6.5％、Tween-8013.2～27％、正丁醇10％～13.2％、赛拉菌素0.5％～5％、超纯水50.4％～60％；

上述各原料最佳配方的重量百分比为：

油酸乙酯5.1％、Tween-8027％、正丁醇13.2％、赛拉菌素5％、超纯水49.7％。

一种制备赛拉菌素纳米乳药物的方法，包括以下步骤：

a)称取各药物组分油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、超纯水、赛拉菌素备用；

b)在室温条件下，将a)称取的油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、赛拉菌素置于恒温磁力搅拌器上以200～400rpm搅拌混匀，搅拌至药物溶于体系中；

c)向混合物中缓慢滴加超纯水，边滴加边搅拌；开始时体系黏度较小，随着水量的增加，体系逐渐变得黏稠，当体系出现液晶相或W/O(油包水型)纳米乳，继续滴加超纯水并不断的搅拌，当水量达到一定量时，体系呈透亮变稀，即是O/W型纳米乳；再将超纯水加到足够量，纳米乳呈现澄清透亮、无色的液体。

赛拉菌素纳米乳的判别：

用油溶性染料苏丹红和水溶性染料亚甲蓝在微乳中的红色和蓝色的扩散速度快慢可以来判断微乳的类型，若红色扩散快于蓝色则为W/O型微乳，反之为0/W型微乳。通过试验观察，蓝色在体系中的扩散速度明显快于红色，因此本发明制备的赛拉菌素纳米乳为O/W型(见图2)

赛拉菌素纳米乳药物制剂经透射电镜检测，按配方制成的纳米乳外观呈现澄清透亮，淡黄色的液体；纳米乳滴粒径分布在50～70nm之间，平均粒径60nm(见图3、图4)。

本发明热力学稳定性好，贮存稳定性好，久置不分层，甚至在离心加速试验中12000rpm离心30min不分层。另外，本发明防腐性能较好，不需要另加防腐剂，所以比市售同类产品具有更好的防腐和防霉变能力，保质期时间长。

赛拉菌素纳米乳含量测定

将制备好的赛拉菌素纳米乳用HPLC法进行含量测定，采用安捷仑1100系列高效液相色谱仪(Agilent 1100 series)；色谱柱：ODS柱(4.6×100mm，5um)；检测器：G1314A紫外可变波长检测器；泵：G1311A四元泵；柱温箱：G1316A；流动相：乙腈∶水(65∶35，用稀醋酸调PH＝3.8)；柱温为室温；检测波长：210nm；进样量：20ul

标准曲线的建立精密称取赛拉菌素标准品10mg，置100ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，配成100μg/ml的赛拉菌素对照品储备液，精密吸取赛拉菌素对照品储备液10ml，8ml，6ml，4ml，2ml，1ml，分别置于10ml容量品中，用流动相稀释至刻度，摇匀，配置成浓度分别为100μg/ml，80μg/ml，60μg/ml，40μg/ml，20μg/ml，10μg/ml系列的赛拉菌素标准液，分别量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，计算峰面积，以峰面积A对赛拉菌素浓度C进行线性回归，得标准曲线的回归方程：A＝3496lC-36.725(r＝0.9999)，表明赛拉菌素在10～100μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。

含量测定：精密量取已知含量的赛拉菌素纳米乳0.1ml，置100ml容量瓶中，以乙腈-水(65∶35)稀释至刻度，超声混合均匀，静置10min，过滤，取续滤液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，进样20μl，记录色谱图，计算峰面积，由标准曲线计算药物含量，结果见表1。

表1赛拉菌素纳米乳含量测定结果(n＝3)

Table 1 Contents of Artesunate nanoemulsion (n＝3)

从表1可以看出赛拉菌素纳米乳中赛拉菌素含量在99.52％～100.36％之间，其相对偏差(RSD)均值为1，低于药物制剂标准要求3％～5％的范围，因此本检测方法可用于赛拉菌素纳米乳含量测定。

赛拉菌素纳米乳急性毒性试验

将制备好的纳米乳以15g/kgBW灌胃或腹腔注射一次性给药，结果受试小鼠均无死亡，按照药物急性毒性分级标准，该配方赛拉菌素纳米乳属于实际无毒。

综上所述，本发明具有如下的有益效果是：

本制剂-赛拉菌素纳米乳由油酸乙酯、OP、正丁醇、超纯水、赛拉菌素组成的O/W型(水包油型)纳米乳体系。该纳米乳体系具有较高的载药量(高达11％以上)，依据临床需求可用注射用水或生理盐水按任意比率稀释成不同浓度的赛拉菌素纳米乳液，其次放置稳定，极大地提高赛拉菌素的生物利用度，有效地克服了传统透皮给药用药量大，提高了赛拉菌素的杀虫驱虫作用，同时极大限度的降低赛拉菌素的临床用量，其1％制剂辅料含量同比降至4.1％，其1‰制剂辅料含量同比降至4.1‰，而目前所有报道成功的纳米制剂辅料含量均高达10％-20％，辅料含量越低药品的毒副作用越小这是众所周知的事实；并且其外观性状与真溶液无二，但却具有纳米乳特有的缓释和靶向作用，能更好延长药物的有效期，对一次用药彻底驱虫具有重要意义，而药物的流动性、药物的刺激性、给动物注射时的疼痛反应等比现在用化学溶剂制成的注射剂要好许多，并且由于药物流动性好，抽吸和注射时操作容易，投放市场更容易被兽医和畜主接受。与透皮制剂相比，本制剂赛拉菌素的临床用量从6mg/kg降至0.2mg/kg，而疗效却一样，因此在原料药相对短缺的今天，本发明的研发成功，不仅降低用药量减轻畜主的用药成本，而且大大降低了该药对环境和公共卫生的危害，防止药物大量滥用致使寄生虫产生抗药性具有重要意义；此外，通过对小鼠的急性毒性实验和临床药效试验表明，该纳米乳无明显毒副作用，是一种安全、可靠、高效的的纳米级抗寄生虫药物。并且目前国内外尚无赛拉菌素纳米乳相关制剂的报道和专利，本专利的申报和获批，对发明的研发对于抢占市场制高点，保护发展我国兽药产业，加强国际竞争力亦具有重要价值和意义。

附图说明

图1为目前国内兽药市场常用的阿维菌素类驱虫药物结构图；其中：a..阿维菌素类共有的结构；b.伊维菌素；c..多拉菌素；d塞拉菌素。

图2为1％赛拉菌素纳米乳类型鉴定图。

图3为1％赛拉菌素纳米乳药物制剂透射电镜图。

图4为1％赛拉菌素纳米乳药物制剂激光粒度仪检测的粒径分布图

具体实施方式

下面，通过实施例对本发明进一步予以说明：

实施例1

1)称取油酸乙酯6g、Tween-8022g、正丁醇11.5g、赛拉菌素3g、超纯水57.5g备用；

2)在室温条件下，将上所述重量的油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、赛拉菌素置于恒温磁力搅拌器上200～400rpm搅拌混匀，搅拌至药物溶于体系中。

3)向混合物中缓慢滴加超纯水，边滴加边搅拌；开始时体系黏度较小，随着水量增加至16ml时，体系逐渐变得黏稠，此时体系可能出现液晶相或W/O(油包水型)纳米乳，继续滴加并不断的搅拌，当水量达到32ml时，体系会突然变透亮变稀，此时产生的即是O/W型纳米乳，将超纯水加到57.5ml，体系流动性良好，制备成澄清透明的O/W型纳米乳。

实施例2

1)称取各药物组分油酸乙酯1.6g、Tween-80 13.2g、正丁醇9.7g、赛拉菌素2g、超纯水73.5g备用。

2)在室温条件下，将上所述重量的油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、超纯水、赛拉菌素置于恒温磁力搅拌器上200～400rpm搅拌混匀，搅拌至药物溶于上述体系中。

3)向混合物中缓慢滴加超纯水，边滴加边搅拌；开始时体系黏度较小，随着水量增加，体系逐渐变得黏稠，此时体系可能出现液晶相或W/O(油包水型)纳米乳，继续滴加并不断的搅拌，当水量达到50ml时，体系会突然变透亮变稀，此时产生的即是O/W型纳米乳，将超纯水加到73.5ml，体系流动性良好，制备成澄清透明的O/W型纳米乳。

实施例3

1)称取各药物组分油酸乙酯5.1g、Tween-8027g、正丁醇13.2g，超纯水43.7g、赛拉菌素11g备用。

2)在室温条件下，将上所述重量的油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、超纯水、赛拉菌素置于恒温磁力搅拌器上200～400rpm搅拌混匀，搅拌至药物溶于上述体系中。

3)向混合物中缓慢滴加超纯水，边滴加边搅拌；开始时体系黏度较小，随着水量增加至，体系逐渐变得黏稠，此时体系可能出现液晶相或W/O(油包水型)纳米乳，继续滴加并不断的搅拌，当水量达到32ml时，体系会突然变透亮变稀，此时产生的即是O/W型纳米乳，将超纯水加到49.7ml，体系流动性良好，制备成澄清透明的O/W型纳米乳。

上述三个实施例中，以实施例3的配方比例最佳，载药量最高，赛拉菌素载药量高达11％以上，按临床猪、牛、羊等动物常规用药量1％计算，该制剂需再加纯水1000ml，赛拉菌素含量才能降到1％，按0.2mg/kgBW的用量，1ml该制剂可满足50kg体重动物抗寄生虫的需求，而此时油酸乙酯、Tween-80、正丁醇等辅料的含量同比降至4.1％，注射时药物流动性很好，刺激性、动物的疼痛反应也越小。

按药物稳定性试验要求的影响因素试验、加速试验、及长期试验观察三个实施例中制备的纳米乳，其颜色、透明度、药物含量等无明显变化，0℃～60℃放置2年均很稳定。

Claims (4)

1.一种赛拉菌素纳米乳药物组合物，其特征是由下列重量百分比的原料组成：

油酸乙酯            1.6％～8％；

Tween-80            13.2～30％；

正丁醇              10％～18％；

超纯水              50.4％～74％；

赛拉菌素            0.5％～11％。

2.根据权利要求1所述的赛拉菌素纳米乳药物，其特征是：各原料优选的重量百分比为：

油酸乙酯1.6～6.5％、Tween-80 13.2～27％、正丁醇10％～13.2％、超纯水50.4％～60％、赛拉菌素0.5％～5％。

3.根据权利要求1所述的赛拉菌素纳米乳药物，其特征是：各原料最佳的重量百分比为：

油酸乙酯6％、Tween-8024％、正丁醇11.5％、超纯水53.5％、赛拉菌素5％。

4.一种制备权利要求1所述的赛拉菌素纳米乳药物的方法，包括以下步骤：

a)称取各药物组分油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、超纯水、赛拉菌素备用；

b)在室温条件下，将a)称取的油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、赛拉菌素置于恒温磁力搅拌器上以200～400rpm搅拌混匀，搅拌至药物溶于混合物体系中；

c)向混合物中缓慢滴加超纯水，边滴加边搅拌；滴加速率为35滴/min，开始时体系黏度较小，随着水量的增加，体系逐渐变得黏稠，当体系出现液晶相或W/O油包水型纳米乳，继续滴加超纯水并不断的搅拌，当水量达到一定量时，体系呈透亮变稀，即是O/W型纳米乳；再将超纯水加到足够量，纳米乳呈现澄清透亮、淡黄色的液体。

Images