CN102948415A - 一种牛精液冷冻稀释液及其配制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及牛冷冻精液生产技术领域，一种牛冻精稀释液，包括A液和B液，A液为每100ml稀释液中各原料的含量包括：柠檬酸三钠或柠檬酸钠2.5～3.4g,庆大霉素0.1～0.2g、环丙沙星0.03～0.1g、氨苄西林钠和链霉素各5～10万单位、果糖1～2g、卵黄10～15ml，余量为蒸馏水；其中B液为取自体积比84%～88%的A液作为基础液，再加入12～16ml的甘油或乙二醇构成。其配制方法主要包括步骤：称取各种原料及蒸馏水备用；基础液的配制；A液的配制；B液的配制。所述稀释液能有效降低牛精液冷冻后含菌数量，抗菌效果好，可大大提高牛冻精生产效率及冻精品质，其制备方法操作简单、经济实用。
Description
技术领域
本发明涉及牛冷冻精液生产技术领域，尤其是一种牛冻精稀释液及其配制方法，属于生物技术领域。
背景技术
牛精液冷冻保存与人工受精技术的结合在现代养牛生产中发挥着极其重要的作用，应用冷冻精液进行人工受精可以不受时间、地域、牛品种及个体的限制，并且大量减少公牛的饲养数量，降低生产成本，提高优良种公牛的利用率，为养牛业带来巨大的经济效益。同时，牛精液冷冻技术的发展和牛冷冻精液的使用在牛品种引进、杂交改良，以及提高繁殖性能、疾病控制及牛遗传多样性保护方面具有重要的意义。
精液冷冻稀释液是畜禽精液冷冻保存能否成功的前提条件，只有深入了解稀释液中各成分的用途与作用机理，才能使其发挥有效作用。稀释液的作用主要可以补充精子的营养，减少精液黏稠度，降低异物对精子的影响，同时缓和代谢产物的危害作用，另外还能够保护精子，增强其抵抗低温打击和搞氧化的能力，减少冷冻所造成的损伤。
精液冷冻稀释液通常选用葡萄糖、柠檬酸钠、卵黄、甘油、抗生素等作为主要成分，但是，随着对牛精液冷冻保存技术研究的不断深入，如何能根据品种进行精液特殊的理化性质，将众多成分组合起来，按其合理的比例配制有效的精液冷冻稀释液，仍是今后牛精液冷冻保存工作中的一个重要问题。虽然在牛精液冷冻方面已有一套成熟的技术，还需进一步探索，使新的精液冷冻稀释液能进一步提高解冻精子的质量，提高解冻精液的受精能力。
发明内容
针对目前牛精液冷冻后含菌数较多、冻后活力较低、抗菌效果不太理想的缺陷，本发明的目的在于提供一种能够有效降低牛精液冷冻后含菌数量，抗菌效果好，可大大提高牛冻精生产效率及冻精品质的牛精液冷冻稀释液，另一个发明目的在于提供操作简单、经济实用的该种牛精液冷冻稀释液的制备方法。
本发明公开了一种牛冻精稀释液，其特征在于所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸三钠或柠檬酸钠2.5～3.4g,庆大霉素0.1～0.2g、环丙沙星0.03～0.1g、氨苄西林钠和链霉素各5～10万单位、果糖1～2g、卵黄10～15ml，余量为蒸馏水；
其中B液为取自体积比84%～88%的 A液作为基础液，在其中加入12～16ml的甘油或乙二醇构成。
所述A液中每100ml稀释液中各原料的含量最佳值为：
柠檬酸三钠或柠檬酸钠2.9g、庆大霉素0.16g、环丙沙星0.04g、氨苄西林钠为8万单位、链霉素为5万单位、果糖1.1g、卵黄12ml，余量为蒸馏水。
其中B液为最好是取自体积比85%的 A液作为基础液，在其中加入15ml的甘油或乙二醇配制而成，即其中的主要原料含量最佳值包括：
柠檬酸三钠或柠檬酸钠2.465g、庆大霉素0.136g、环丙沙星0.34g、氨苄西林钠为6.8万单位、链霉素为4.25万单位、果糖0.935g、卵黄10.2ml、甘油或乙二醇为15ml，余量为蒸馏水。
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸三钠或柠檬酸钠2.5～3.4g,庆大霉素0.1～0.2g、环丙沙星0.03～0.1g、氨苄西林钠和链霉素各5～10万单位、果糖1～2g、卵黄10～15ml，甘油或乙二醇为12～16ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用2.5～3.4g的柠檬酸三钠或柠檬酸钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤；
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.1～0.2g、环丙沙星0.03～0.1g、氨苄西林钠和链霉素各5～10万单位、果糖1～2g、卵黄10～15ml配制而成；
（4）B液的配制：以上述备用的取自体积比84%～88%的A液作为基础液，加入甘油或乙二醇12～16ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
上述牛冻精稀释液在实际操作使用当中，使用的是二次稀释法，即鲜精接入后先置于一定温度的水浴锅内，经过记录、计算得出所需添加稀释A、B液的量后，首先添加等温的A液，然后直接置于常温（22-25℃）水浴中降温30-60min后，添加B液，最后连同水浴（22-25℃）放入4℃低温操作柜内降温平衡4小时，封装打印。
附图1为利用传统牛冻精稀释液与利用本发明所提供的牛冻精稀释液所做的实验对比数据，表中所示利用改进前传统的稀释液所做实验组为ⅰ，利用改进后本发明所提供的稀释液所做实验组ⅱ。国标中冻后活力≥0.35或35%，菌落数≤800个/剂。
通过改进前后两种稀释液的配方对比，新配方中将柠檬酸三钠或柠檬酸钠溶液，先溶解定容后过滤消毒，真正起到过滤残渣消毒的作用。经过上述实验证明，庆大霉素、环丙沙星、氨苄西林钠和链霉素四种抗生素的含量小可控制细菌菌落，对精液活力没有影响。由于卵黄不仅具有对精子在受到降温和冷刺激时能起到较好的保护作用，同时配合抗冻剂甘油对于精子在冷冻中有更好的保护作用。我们发现，本发明所提供的稀释液配制过程有利于精液冷冻保存，其优势在于方便、快捷、抗菌效果好、冻后活力高、菌落数均达标。
稀释液作为冷冻精液的保护机制，不仅为精液提供能量，也对精子有着保护的作用。它的成分有：糖类、卵黄、抗冻剂、缓冲剂、抗菌素及非电解质。其中糖类和抗冻剂尤为重要。
在冻精生产流程中，二次稀释时，糖类和抗冻剂是包含在稀释B液中的。糖类具有补充精子的能量消耗，对精子在低温情况下有保护的作用。抗冻剂的作用：当精液冷冻时，主要受到危害是冰晶从精子细胞原生质中抽去水，使精子细胞造成脱水状态，发生不可逆的变化死亡，而甘油可减少和降低这种冷冻对精细胞带来的危害。
然而，甘油浓度发生变化，会引起精液渗透压的变化，影响精液冷冻后活力和顶体完整率，添加较高的甘油对精子的主要损害时甘油使稀释液中渗透压明显升高，这种高渗透压对精子的顶体有损害作用，这就需要把甘油含量掌握在一个可控的范围内，当每100mlB液中甘油的含量达到12～16ml时，冷冻效果最佳。
与现有技术相比，本发明的优点：利用本发明所提供的牛冻精稀释液进行牛精液的冷冻保存，获得了良好的效果，解冻后精子的存活率有效提高，增加年产精液量，并且显著提高了精液品质，本发明所提供的稀释液配制过程有利于精液冷冻保存，其优势在于方便、快捷、抗菌效果好、冻后活力高、菌落数均达标。
附图说明
图1为利用传统牛冻精稀释液与利用本发明所提供的牛冻精稀释液所做的实验对比数据表格。
具体实施方式
实施例1：
一种牛冻精稀释液，所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸三钠2.9g、庆大霉素0.16g、环丙沙星0.04g、氨苄西林钠为8万单位、链霉素为5万单位、果糖1.1g、卵黄12ml，余量为蒸馏水。
其中B液为取自体积比85%的 A液作为基础液，在其中加入15ml的甘油配制而成，即其中的主要原料含量包括：
柠檬酸三钠或柠檬酸钠2.465g、庆大霉素0.136g、环丙沙星0.34g、氨苄西林钠为6.8万单位、链霉素为4.25万单位、果糖0.935g、卵黄10.2ml、甘油15ml，余量为蒸馏水。
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸三钠2.9g、庆大霉素0.16g、环丙沙星0.04g、氨苄西林钠为8万单位、链霉素为5万单位、果糖1.1g、卵黄12ml，甘油为15ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用2.9g的柠檬酸三钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤。
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.16g、环丙沙星0.04g、氨苄西林钠8万单位、链霉素为5万单位、果糖1.1g、卵黄12ml配制而成备用；
（4）B液的配制：以上述备用的取自体积比85%的A液作为基础液，加入甘油15ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液组成为所要得到的牛冻精稀释液。
上述牛冻精稀释液在实际操作使用当中，使用的是二次稀释法，即鲜精接入后先置于一定温度的水浴锅内，经过记录、计算得出所需添加稀释A、B液的量后，首先添加等温的A液，然后直接置于常温（22-25℃）水浴中降温30-60min后，再添加B液，最后连同水浴（22-25℃）放入4℃低温操作柜内降温平衡4小时，封装打印。
实施例2：与实施例1不同地方在于：
一种牛冻精稀释液，所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸钠2.9g、庆大霉素0.16g、环丙沙星0.04g、氨苄西林钠为8万单位、链霉素为5万单位、果糖1.1g、卵黄12ml，余量为蒸馏水。
其中B液为取自体积比85%的 A液作为基础液，在其中加入15ml的乙二醇配制而成，即其中的主要原料含量包括：
柠檬酸三钠或柠檬酸钠2.465g、庆大霉素0.136g、环丙沙星0.34g、氨苄西林钠为6.8万单位、链霉素为4.25万单位、果糖0.935g、卵黄10.2ml、乙二醇15ml，余量为蒸馏水。
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸钠2.9g、庆大霉素0.16g、环丙沙星0.04g、氨苄西林钠为8万单位、链霉素为5万单位、果糖1.1g、卵黄12ml，乙二醇为15ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用2.9g的柠檬酸钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤。
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.16g、环丙沙星0.04g、氨苄西林钠8万单位、链霉素为5万单位、果糖1.1g、卵黄12ml配制而成备用；
（4）B液的配制：以上述备用的取自体积比85%的A液作为基础液，加入乙二醇15ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
实施例3：与实施例1不同地方在于：
一种牛冻精稀释液，所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸三钠2.5g,庆大霉素0.1g、环丙沙星0.03g、氨苄西林钠和链霉素各5万单位、果糖1g、卵黄10ml，余量为蒸馏水。
其中B液为取自体积比84%的 A液作为基础液，在其中加入16ml的甘油配制而成。
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸三钠2.5g,庆大霉素0.1g、环丙沙星0.03g、氨苄西林钠和链霉素各5万单位、果糖1g、卵黄10ml，甘油为16ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用2.5g的柠檬酸三钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤。
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.1g、环丙沙星0.03g、氨苄西林钠和链霉素各5万单位、果糖1g、卵黄10ml配制而成备用；
（4）B液的配制：以上述备用的取体积比84%的A液为基础液，加入甘油16ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
实施例4：与实施例1不同地方在于：
一种牛冻精稀释液，所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸三钠2.6g,庆大霉素0.12g、环丙沙星0.04g、氨苄西林钠和链霉素各6万单位、果糖1.15g、卵黄11ml，余量为蒸馏水。
其中B液为取自上述体积比85%的A液中，加入15 ml甘油配制而成。
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸三钠2.6g,庆大霉素0.12g、环丙沙星0.04g、氨苄西林钠和链霉素各6万单位、果糖1.15g、卵黄11ml，甘油为15ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用2.6g的柠檬酸三钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤。
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.12g、环丙沙星0.04g、氨苄西林钠和链霉素各6万单位、果糖1.15g、卵黄11ml配制而成备用；
（4）B液的配制：以上述备用的的取体积比85%的A液为基础液，加入甘油15ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
实施例5：与实施例1不同地方在于：
一种牛冻精稀释液，所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸钠2.7g,庆大霉素0.14g、环丙沙星0.05g、氨苄西林钠和链霉素各7万单位、果糖1.4g、卵黄12ml，余量为蒸馏水。
其中B液为取自上述体积比86%的A液中，加入14 ml甘油配制而成。
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸钠2.7g,庆大霉素0.14g、环丙沙星0.05g、氨苄西林钠和链霉素各7万单位、果糖1.4g、卵黄12ml，甘油为14ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用2.7g的柠檬酸钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤。
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.14g、环丙沙星0.05g、氨苄西林钠和链霉素各7万单位、果糖1.4g、卵黄12ml配制而成备用；
（4）B液的配制：以上述备用的取自体积比86%的A液为基础液，加入甘油14ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
实施例6：与实施例1不同地方在于：
一种牛冻精稀释液，所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸钠2.5g,庆大霉素0.16g、环丙沙星0.06g、氨苄西林钠和链霉素各8万单位、果糖1.6g、卵黄13ml，余量为蒸馏水。
其中B液为取自上述体积比87%的A液中，加入13 ml甘油配制而成。
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸钠2.5g,庆大霉素0.16g、环丙沙星0.06g、氨苄西林钠和链霉素各8万单位、果糖1.6g、卵黄13ml，甘油为13ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用2.5g的柠檬酸钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤。
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.16g、环丙沙星0.06g、氨苄西林钠和链霉素各8万单位、果糖1.6g、卵黄13ml配制而成备用；
（4）B液的配制：以上述备用的取体积比87%的A液为基础液，加入甘油13ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
实施例7：与实施例1不同地方在于：
一种牛冻精稀释液，所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸三钠2.9g,庆大霉素0.18g、环丙沙星0.07g、氨苄西林钠和链霉素各9万单位、果糖1.7g、卵黄14ml，余量为蒸馏水。
其中B液为取自上述体积比88%的A液中，加入乙二醇12ml配制而成；
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸三钠2.9g,庆大霉素0.18g、环丙沙星0.07g、氨苄西林钠和链霉素各9万单位、果糖1.7g、卵黄14ml，乙二醇为12ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用2.9g的柠檬酸三钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤。
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.18g、环丙沙星0.07g、氨苄西林钠和链霉素各9万单位、果糖1.7g、卵黄14ml配制而成备用；
（4）B液的配制：以上述备用的取体积比88%的A液为基础液，加入乙二醇12ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
实施例8：与实施例1不同地方在于：
一种牛冻精稀释液，所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸三钠3.0g,庆大霉素0.19g、环丙沙星0.08g、氨苄西林钠5万单位、链霉素10万单位、果糖1.8g、卵黄15ml，余量为蒸馏水。
其中B液为取自上述体积比84%的A液中，加入乙二醇16ml配制而成；
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸三钠3.0g,庆大霉素0.19g、环丙沙星0.08g、氨苄西林钠6万单位、链霉素9万单位、果糖1.8g、卵黄15ml，乙二醇16ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用3.0g的柠檬酸三钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤。
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.19g、环丙沙星0.08g、氨苄西林钠5万单位、链霉素10万单位、果糖1.8g、卵黄15ml配制而成备用；
（4）B液的配制：以上述备用的取体积比84%的A液为基础液，加入乙二醇16ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
实施例9：与实施例1不同地方在于：
一种牛冻精稀释液，所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸钠3.1g,庆大霉素0.2g、环丙沙星0.09g、氨苄西林钠6万单位、链霉素5万单位、果糖1.9g、卵黄12ml，余量为蒸馏水。
其中B液为取自上述体积比85%的A液中，加入甘油为15ml配制而成；
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸钠3.1g,庆大霉素0.2g、环丙沙星0.09g、氨苄西林钠6万单位、链霉素5万单位、果糖1.9g、卵黄12ml，甘油为15ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用3.1g的柠檬酸钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤。
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.2g、环丙沙星0.09g、氨苄西林钠6万单位、链霉素5万单位、果糖1.9g、卵黄12ml配制而成备用；
（4）B液的配制：以上述备用的取体积比85%的A液为基础液，加入甘油15ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
实施例10：与实施例1不同地方在于：
一种牛冻精稀释液，所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸三钠3.2g,庆大霉素0.15g、环丙沙星0.03g、氨苄西林钠7万单位、链霉素8万单位、果糖2g、卵黄13ml，余量为蒸馏水。
其中B液为取自上述体积比85.5%的A液中，加入甘油为14.5ml配制而成；
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸三钠3.2g,庆大霉素0.15g、环丙沙星0.1g、氨苄西林钠8万单位、链霉素10万单位、果糖2g、卵黄14ml，甘油为14.5ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用3.2g的柠檬酸三钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤。
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.15g、环丙沙星0.03g、氨苄西林钠8万单位、链霉素10万单位、果糖2g、卵黄14ml配制而成备用；
（4）B液的配制：以上述备用的取体积比85.5%的A液为基础液，加入甘油14.5ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
实施例11：与实施例1不同地方在于：
一种牛冻精稀释液，所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸三钠3.3g,庆大霉素0.15g、环丙沙星0.1g、氨苄西林钠9万单位、链霉素7万单位、果糖1.5g、卵黄10ml，余量为蒸馏水。
其中B液为取自上述体积比86%的A液中，加入甘油为14ml配制而成。
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸三钠3.3g,庆大霉素0.15g、环丙沙星0.1g、氨苄西林钠9万单位、链霉素7万单位、果糖1.5g、卵黄10ml，甘油为14ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用3.3g的柠檬酸三钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤。
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.15g、环丙沙星0.1g、氨苄西林钠9万单位、链霉素7万单位、果糖1.5g、卵黄10ml配制而成备用；
（4）B液的配制：以上述备用的取体积比86%的A液为基础液，加入甘油14ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
实施例12：与实施例1不同地方在于：
一种牛冻精稀释液，所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸三钠3.4g,庆大霉素0.1g、环丙沙星0.03g、氨苄西林钠10万单位、链霉素5万单位、果糖1g、卵黄15ml，余量为蒸馏水。
其中B液为取自上述体积比86.5%的A液中，加入乙二醇为13.5ml配制而成。
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸三钠3.4g,庆大霉素0.1g、环丙沙星0.03g、氨苄西林钠10万单位、链霉素5万单位、果糖1g、卵黄15ml，乙二醇为13.5ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用3.4g的柠檬酸三钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤。
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.1g、环丙沙星0.03g、氨苄西林钠10万单位、链霉素5万单位、果糖1g、卵黄15ml配制而成备用；
（4）B液的配制：以上述备用的体积比86.5%的A液为基础液，加入乙二醇13.5ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
实施例13：与实施例1不同地方在于：
一种牛冻精稀释液，所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸钠3.4g,庆大霉素0.2g、环丙沙星0.06g、氨苄西林钠10万单位、链霉素7万单位、果糖1.5g、卵黄11ml，余量为蒸馏水。
其中B液为取自上述体积比87%的A液中，加入乙二醇为13ml配制而成。
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸钠3.4g,庆大霉素0.2g、环丙沙星0.06g、氨苄西林钠10万单位、链霉素7万单位、果糖1.5g、卵黄11ml，乙二醇为13ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用3.4g的柠檬酸钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤。
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.2g、环丙沙星0.06g、氨苄西林钠10万单位、链霉素7万单位、果糖1.5g、卵黄11ml配制而成备用；
（4）B液的配制：以上述备用的体积比87%的A液为基础液，加入乙二醇13ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
实施例14：与实施例1不同地方在于：
一种牛冻精稀释液，所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸钠2.7g,庆大霉素0.16g、环丙沙星0.03g、氨苄西林钠8万单位、链霉素9万单位、果糖1.2g、卵黄10ml，余量为蒸馏水。
其中B液为取自上述体积比87.5%的A液中，加入乙二醇为12.5ml配制而成。
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸钠2.7g,庆大霉素0.16g、环丙沙星0.03g、氨苄西林钠8万单位、链霉素9万单位、果糖1.2g、卵黄10ml，乙二醇为12.5ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用2.7g的柠檬酸钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤。
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.16g、环丙沙星0.03g、氨苄西林钠8万单位、链霉素9万单位、果糖1.2g、卵黄10ml配制而成备用；
（4）B液的配制：以上述备用的体积比87.5%的A液为基础液，加入乙二醇12.5ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
实施例15：与实施例1不同地方在于：
一种牛冻精稀释液，所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸钠2.9g,庆大霉素0.16g、环丙沙星0.08g、氨苄西林钠5万单位、链霉素10万单位、果糖1.2g、卵黄10ml，余量为蒸馏水。
其中B液为取自上述体积比88%的A液中，加入甘油为12ml配制而成。
所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸钠2.5g,庆大霉素0.16g、环丙沙星0.08g、氨苄西林钠5万单位、链霉素10万单位、果糖1.2g、卵黄10ml，甘油为12ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用2.5g的柠檬酸钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤。
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.16g、环丙沙星0.03g、氨苄西林钠5万单位、链霉素10万单位、果糖1.2g、卵黄10ml配制而成备用；
（4）B液的配制：以上述备用的体积比88%的A液为基础液，加入甘油12ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
Claims (3)
1.一种牛冻精稀释液，其特征在于所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：
柠檬酸三钠或柠檬酸钠2.5～3.4g,庆大霉素0.1～0.2g、环丙沙星0.03～0.1g、氨苄西林钠和链霉素各5～10万单位、果糖1～2g、卵黄10～15ml，余量为蒸馏水；
其中B液为取自体积比84%～88%的 A液作为基础液，在其中加入12～16ml的甘油或乙二醇构成。
2.如权利要求1所述的牛冻精稀释液，其特征在于所述A液中每100ml稀释液中各原料的含量为：
柠檬酸三钠或柠檬酸钠2.9g、庆大霉素0.16g、环丙沙星0.04g、氨苄西林钠为8万单位、链霉素为5万单位、果糖1.1g、卵黄12ml，余量为蒸馏水；
其中B液为取自体积比85%的 A液作为基础液，在其中加入15ml的甘油或乙二醇配制而成，即其中的主要原料含量包括：
柠檬酸三钠或柠檬酸钠2.465g、庆大霉素0.136g、环丙沙星0.34g、氨苄西林钠为6.8万单位、链霉素为4.25万单位、果糖0.935g、卵黄10.2ml、甘油或乙二醇为15ml，余量为蒸馏水。
3.如权利要求1所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取各种原料柠檬酸三钠或柠檬酸钠2.5～3.4g,庆大霉素0.1～0.2g、环丙沙星0.03～0.1g、氨苄西林钠和链霉素各5～10万单位、果糖1～2g、卵黄10～15ml，甘油或乙二醇为12～16ml及蒸馏水备用；
（2）每100ml蒸馏水用2.5～3.4g的柠檬酸三钠或柠檬酸钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤；
（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.1～0.2g、环丙沙星0.03～0.1g、氨苄西林钠和链霉素各5～10万单位、果糖1～2g、卵黄10～15ml配制而成；
（4）B液的配制：以上述备用的取自体积比84%～88%的A液作为基础液，加入甘油或乙二醇12～16ml配制而成；
上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
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