CN102920681A

CN102920681A - 一种以卵磷脂为载体的杨梅黄酮脂质微囊及其制备方法

Info

Publication number: CN102920681A
Application number: CN2012104244400A
Authority: CN
Inventors: 钱俊青; 郭辉; 竺少铭
Original assignee: Zhejiang University of Technology ZJUT
Current assignee: Zhejiang University of Technology ZJUT
Priority date: 2012-10-30
Filing date: 2012-10-30
Publication date: 2013-02-13

Abstract

本发明提供了一种以卵磷脂为载体的杨梅黄酮脂质微囊及其制备方法，由如下方法制备获得：按比例称取杨梅黄酮，油菜卵磷脂或大豆卵磷脂，以及硬脂酸单甘油酯，加入足量无水乙醇使其溶解，所得溶液在真空度0.080~0.085 MPa、50~70℃下蒸发回收乙醇至干，残余物质加入足量浓度为0.3~0.4g/L的吐温40水溶液，并在超声条件下使其充分溶解，溶解完全后静置5~10分钟，制得所述杨梅黄酮脂质微囊。本发明利用植物油料卵磷脂将杨梅黄酮制成脂质微囊，粒径可控制在100nm~300nm；制得的植物黄酮脂质微囊的稳定性较黄酮粉末有明显提高，特别是体内生物利用度提高更大，动物试验表明，脂质微囊的吸收率较原粉末提高2倍以上，使植物黄酮的生物活性发挥更突出。

Description

一种以卵磷脂为载体的杨梅黄酮脂质微囊及其制备方法

（一）技术领域

本发明涉及一种以卵磷脂为载体的杨梅黄酮脂质微囊及其制备方法。

（二）背景技术

多种植物黄酮均具有降血脂，调节血糖，增强心血管功能，抗氧化等生物活性，作为药物、保健食品的原料广泛应用。但植物黄酮稳定性较差，国内外科研人员为提高其稳定性，开展了环糊精包合制微囊的研究，经环糊精包合的植物黄酮抗氧化的稳定性明显提高。也有利用明胶、阿拉伯胶为载体材料制作植物黄酮微囊的工作介绍，而利用卵磷脂将植物黄酮制成脂质微囊尚没有开展。

（三）发明内容

植物黄酮的生物活性较突出，多种植物黄酮被制成药物和保健食品。为使植物黄酮有更高的体内生物利用度，并保持分子结构稳定，发挥更好的作用，本发明研制了以油菜卵磷脂等作为载体的植物黄酮脂质微囊，以杨梅黄酮为对象，脂质微囊在动物试验中体内生物利用度提高2倍以上，稳定性也有明显提高，25℃空气中放置三个月分子结构有变化的比例为3.5%，而作为对照的黄酮粉末分子结构变化的比例为30%。

本发明采用的技术方案是：

一种以卵磷脂为载体的杨梅黄酮脂质微囊，由如下方法制备获得：按照杨梅黄酮：卵磷脂：硬脂酸单甘油酯为15~20：40~50：8~12的质量比，称取杨梅黄酮，油菜卵磷脂或大豆卵磷脂，以及硬脂酸单甘油酯（食品级），加入足量无水乙醇使其溶解，所得溶液在真空度0.080~0.085 MPa、50~70℃下蒸发回收乙醇至干，残余物质加入足量浓度为0.3~0.4g/L的吐温40水溶液，并在超声条件（功率600~800W）下使其充分溶解（8~10分钟即可），溶解完全后静置5~10分钟，静置后，在水中形成杨梅黄酮脂质微囊，黄酮在微囊中的包封率为90%以上，通过激光粒径测定仪测定，所制得的杨梅黄酮脂质微囊粒径为120~230 nm。制得所述杨梅黄酮脂质微囊分散在水溶液中，可加入干燥保护剂并干燥获得其粉末。本发明中，所用杨梅黄酮纯度为98%（w/w），油菜卵磷脂或大豆卵磷脂纯度为55~70%（w/w）。

本发明还包括制备所述的杨梅黄酮脂质微囊的方法，所述方法包括：按照杨梅黄酮：卵磷脂：硬脂酸单甘油酯为15~20：40~50：8~12的质量比，称取杨梅黄酮，油菜卵磷脂或大豆卵磷脂，以及硬脂酸单甘油酯，加入足量无水乙醇使其溶解，所得溶液在真空度0.080~0.085 MPa、50~70℃下蒸发回收乙醇至干，残余物质加入足量浓度为0.3~0.4g/L吐温40水溶液，并在超声条件下使其充分溶解，溶解完全后静置5~10分钟，所得悬浮液经加入干燥保护剂并干燥，获得所述杨梅黄酮脂质微囊。

所述干燥方法为：往含有杨梅黄酮脂质微囊的悬浮液中加入适量甘露醇和聚乙烯醇使其充分溶解作为干燥保护剂，在真空度0.90~0.95 MPa、40~60℃下蒸发微囊液中的水至干，得到杨梅黄酮脂质微囊粉末。将得到微囊粉末复水，再检测微囊粒径为240~300 nm。

所述甘露醇与聚乙烯醇添加质量之比为0.5~1.5：1，甘露醇与聚乙烯醇总添加量为杨梅黄酮质量的20~40%。

脂质微囊不仅可使植物黄酮稳定性提高，而且提高植物黄酮在人体内的生物利用度也十分显著。

测定黄酮脂质微囊包封率的方法：

包封率（E%）=[微胶囊中杨梅黄酮的含量/(微胶囊中杨梅黄酮含量+介质中杨梅黄酮含量)]×100%；

本发明采用低速离心法测定杨梅黄酮微胶囊包封率。称取0.02g杨梅黄酮超声分散于一定的水溶液中，然后移取5ml至离心管，按照表格设计分别进行离心试验，考察其分离得率。

相对离心力（RCF ）就是实际离心力转化为重力加速度的倍数，一般用RCF表示离心速度。

RCF=F离心力／F重力= mω2r/mg= ω2r/g= （2*π*r/r*rpm） 2*r/g

（注：rpm为转/秒）

表1：杨梅黄酮分散于水中的离心试验

注：此离心机的半径（r）为9.5cm

由表1说明游离在水相中的杨梅黄酮在956g转速下的离心15min，离心率可以到达95.16%，可以达到分离效果。

将本发明空白微囊在956g转速下离心15min基本没有沉淀离心下来。将杨梅黄酮和空白微囊进行物理混合，在956g转速下离心15分钟验证其离心效果。其试验结果：杨梅黄酮离心率为100.78±0.92%。说明低速离心法对分离测定杨梅黄酮微囊与游离杨梅黄酮可行。

本发明的有益效果主要体现在：本发明利用油菜（或大豆）来源的植物油料卵磷脂，将杨梅黄酮制成脂质微囊，粒径可控制在100 nm~300 nm；制得的植物黄酮脂质微囊的稳定性较黄酮粉末有明显提高，特别是体内生物利用度提高更大，动物试验表明，脂质微囊的吸收率较原粉末提高2倍以上，使植物黄酮的生物活性发挥更突出。

（四）具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：

杨梅黄酮（浙江宁波中药制药有限公司生产，纯度98.0%）称取15 g，油菜卵磷脂（纯度60.0%，浙江衢州东港油脂厂生产）称取45 g，硬脂酸单甘油酯（食品级，广州义合化工有限公司生产）称取8 g，用无水乙醇10升将三种物质完全溶解，搅拌均匀，在真空度0.085 MPa下保温60℃，蒸发回收乙醇，至干。加入含0.3g/L吐温40（温州清明化工有限公司生产）的水50升，充分搅拌，以800 W功率的超声仪在水中超声8分钟，促使水中物质溶解和分散。静止5分钟，即形成杨梅黄酮脂质微囊。经测定，脂质微囊包封杨梅黄酮的量为原料的92.0%，微囊粒径为145±33.4 nm。在微囊液中加入2g甘露醇（上海青析化工科技有限公司生产）和3克聚乙烯醇（国药集团化学试剂有限公司生产），在水中充分溶解。

在真空度0.95 MPa下保温40℃蒸发脂质微囊液中的水，至干，得到杨梅黄酮脂质微囊粉末，将粉末在蒸馏水中复水分散，1克微囊粉末用水10 mL，复水的脂质微囊粒径经测定为261±21.6 nm。

将制得的杨梅黄酮脂质微囊粉末在25℃的环境中与空气接触放置3个月，原黄酮粉末作为对照样品。经分光光度法测定，其在200~400 nm间特征吸收峰吸收值均有下降，脂质微囊吸收值比3个月前下降3.5%，黄酮粉末吸收值比3个月前下降30.1%。说明杨梅黄酮脂质微囊中的黄酮分子结构稳定性较粉末原料有明显提高。

以大鼠在体肠循环的方法测定杨梅黄酮脂质微囊的体内吸收率，与杨梅黄酮原料粉末作对比，表示其生物利用度。方法为：

取禁食12h（自由饮水）的200g左右雄性大鼠，腹腔注射戊巴比妥钠溶液（40mg/kg），麻醉固定在手术台板上，红外灯照射保持37 ℃体温。沿腹中线剪开腹部约4cm，采用全肠段回流，对十二指肠上部至回肠下部剪切后分别插入直径约0.4cm的玻璃管并结扎；用37℃生理盐水冲洗肠道内容物，再换成37℃K氏营养液循环10分钟，将插管与恒流泵连接，形成回路，再换成37℃K氏营养液循环10分钟。接着将60ml供试样液（脂质微囊样液为复水后的分散液，浓度0.1g/mL；杨梅黄酮粉末的样液为其水分散液，浓度0.1g/mL）以5ml/min的流速循环10min，记为0时。后将流速调至2.5ml/min，分别在回流0、15、30、45、60、90、120min时间点上取样（1ml和0.5ml各一份），分别作为杨梅黄酮各时间点上的样品，同时向烧杯中补加1.5ml的37℃K氏营养液，共取样7次，停止循环。采用双波长分光光度法测定肠循环液所取样品中杨梅黄酮的浓度。

吸收半衰期计算：T_1/2=0.693/Ka（Ka为吸收速率常数）

结果显示，在2小时内，脂质微囊的吸收率为36.3%，粉末吸收率为10.2%，说明脂质微囊在动物体内的生物利用度明显优于粉末，2小时中生物利用度提高2倍多。

实施例2：

杨梅黄酮（浙江宁波中药制药有限公司生产，纯度98.0%）称取20 g，油菜卵磷脂（纯度70.0%，浙江衢州东港油脂厂生产）称取40 g，硬脂酸单甘油酯（食品级，广州义合化工有限公司生产）称取12 g，用无水乙醇15升将三种物质完全溶解，搅拌均匀，在真空度0.080 MPa下保温70℃，蒸发回收乙醇，至干。加入含0.4g/L吐温40（温州清明化工有限公司生产）的水60升，充分搅拌，以800 W功率的超声仪在水中超声10分钟，促使水中物质溶解和分散。静止10分钟，即形成杨梅黄酮脂质微囊。经测定，脂质微囊包封杨梅黄酮的量为原料的91.6%，微囊粒径为132±21.5 nm。在微囊液中加入3 g甘露醇（上海青析化工科技有限公司生产）和2克聚乙烯醇（国药集团化学试剂有限公司生产），在水中充分溶解。

在真空度0.95 MPa下保温60℃蒸发脂质微囊液中的水，至干，得到杨梅黄酮脂质微囊粉末，将粉末在蒸馏水中复水分散，1克微囊粉末用水10 mL，复水的脂质微囊粒径经测定为247±22.1 nm。

将制得的杨梅黄酮脂质微囊粉末在25℃的环境中与空气接触放置3个月，原黄酮粉末作为对照样品。经分光光度法测定，其在200~400 nm间特征吸收峰吸收值均有下降，脂质微囊吸收值比3个月前下降3.6%，黄酮粉末吸收值比3个月前下降30.3%。说明杨梅黄酮脂质微囊中的黄酮分子结构稳定性较粉末原料有明显提高。

采用大鼠在体肠循环的方法（具体方法参见实施例1）测定杨梅黄酮脂质微囊粉末体内吸收率，杨梅黄酮原料粉末作对比试验。结果显示，在2小时内，脂质微囊的吸收率为35.8%，粉末吸收率为10.5%，说明脂质微囊在动物体内的生物利用度明显优于粉末，2小时中生物利用度提高2倍多。

实施例3：

杨梅黄酮（浙江宁波中药制药有限公司生产，纯度98.0%）称取17 g，油菜卵磷脂（纯度55.0%，浙江衢州东港油脂厂生产）称取50 g，硬脂酸单甘油酯（食品级，广州义合化工有限公司生产）称取10 g，用无水乙醇13升将三种物质完全溶解，搅拌均匀，在真空度0.085 MPa下保温50℃，蒸发回收乙醇，至干。加入含0.3g/L吐温40（温州清明化工有限公司生产）的水55升，充分搅拌，以800 W功率的超声仪在水中超声9分钟，促使水中物质溶解和分散。静止8分钟，即形成杨梅黄酮脂质微囊。经测定，脂质微囊包封杨梅黄酮的量为原料的91.3%，微囊粒径为165±31.8 nm。在微囊液中加入3 g甘露醇（上海青析化工科技有限公司生产）和2克聚乙烯醇（国药集团化学试剂有限公司生产），在水中充分溶解。

在真空度0.95 MPa下保温50℃蒸发脂质微囊液中的水，至干，得到杨梅黄酮脂质微囊粉末，将粉末在蒸馏水中复水分散，1克微囊粉末用水10 mL，复水的脂质微囊粒径经测定为277±20.5 nm。

将杨梅黄酮脂质微囊粉末在25℃的环境中与空气接触放置3个月，原黄酮粉末作为对照样品。经分光光度法测定，其在200~400 nm间特征吸收峰吸收值均有下降，脂质微囊吸收值比3个月前下降3.6%，黄酮粉末吸收值比3个月前下降30.2%。说明杨梅黄酮脂质微囊中的黄酮分子结构稳定性较粉末原料有明显提高。

采用大鼠在体肠循环的方法（具体方法参见实施例1）测定杨梅黄酮脂质微囊体内吸收率，杨梅黄酮原料粉末作对比试验。结果显示，在2小时内，脂质微囊的吸收率为35.6%，粉末吸收率为10.7%，说明脂质微囊在动物体内的生物利用度明显优于粉末，2小时中生物利用度提高2倍多。

实施例4：

杨梅黄酮（浙江宁波中药制药有限公司生产，纯度98.0%）称取20 g，大豆卵磷脂（纯度70.0%，江苏曼氏生物科技有限公司生产）称取45 g，硬脂酸单甘油酯（食品级，广州义合化工有限公司生产）称取10g，用无水乙醇12升将三种物质完全溶解，搅拌均匀，在真空度0.085 MPa下保温65℃，蒸发回收乙醇，至干。加入含0.3g/L吐温40（温州清明化工有限公司生产）的水55升，充分搅拌，以800 W功率的超声仪在水中超声9分钟，促使水中物质溶解和分散。静止6分钟，即形成杨梅黄酮脂质微囊。经测定，脂质微囊包封杨梅黄酮的量为原料的92.2%，微囊粒径为142±33.7 nm。在微囊液中加入2 g甘露醇（上海青析化工科技有限公司生产）和3克聚乙烯醇（国药集团化学试剂有限公司生产），在水中充分溶解。

在真空度0.95 MPa下保温45℃蒸发脂质微囊液中的水，至干，得到杨梅黄酮脂质微囊粉末，将粉末在蒸馏水中复水分散，1克微囊粉末用水10 mL，复水的脂质微囊粒径经测定为252±22.3 nm。

将杨梅黄酮脂质微囊粉末在25℃的环境中与空气接触放置3个月，原黄酮粉末作为对照样品。经分光光度法测定，其在200-400 nm间特征吸收峰吸收值均有下降，脂质微囊吸收值比3个月前下降3.4%，黄酮粉末吸收值比3个月前下降30.3%。说明杨梅黄酮脂质微囊中的黄酮分子结构稳定性较粉末原料有明显提高。

采用大鼠在体肠循环的方法（具体方法参见实施例1）测定杨梅黄酮脂质微囊体内吸收率，杨梅黄酮原料粉末作对比试验。结果显示，在2小时内，脂质微囊的吸收率为36.1%，粉末吸收率为10.4%，说明脂质微囊在动物体内的生物利用度明显优于粉末，2小时中生物利用度提高2倍多。

Claims

1.一种以卵磷脂为载体的杨梅黄酮脂质微囊，由如下方法制备获得：按照杨梅黄酮：卵磷脂：硬脂酸单甘油酯为15~20：40~50：8~12的质量比，称取杨梅黄酮，油菜卵磷脂或大豆卵磷脂，以及硬脂酸单甘油酯，加入足量无水乙醇使其溶解，所得溶液在真空度0.080~0.085 MPa、50~70℃下蒸发回收乙醇至干，残余物质加入足量浓度为0.3~0.4g/L的吐温40水溶液，并在超声条件下使其充分溶解，溶解完全后静置5~10分钟，制得所述杨梅黄酮脂质微囊。

2.制备如权利要求1所述的杨梅黄酮脂质微囊的方法，所述方法包括：按照杨梅黄酮：卵磷脂：硬脂酸单甘油酯为15~20：40~50：8~12的质量比，称取杨梅黄酮，油菜卵磷脂或大豆卵磷脂，以及硬脂酸单甘油酯，加入足量无水乙醇使其溶解，所得溶液在真空度0.080~0.085 MPa、50~70℃下蒸发回收乙醇至干，残余物质加入足量浓度为0.3~0.4g/L吐温40水溶液，并在超声条件下使其充分溶解，溶解完全后静置5~10分钟，所得悬浮液经加入干燥保护剂并干燥，获得所述杨梅黄酮脂质微囊。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述干燥方法为：往含有杨梅黄酮脂质微囊的悬浮液中加入适量甘露醇和聚乙烯醇使其充分溶解作为干燥保护剂，在真空度0.90~0.95 MPa、40~60℃下蒸发微囊液中的水至干，得到杨梅黄酮脂质微囊粉末。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述甘露醇与聚乙烯醇添加质量之比为0.5~1.5：1，甘露醇与聚乙烯醇总添加量为杨梅黄酮质量的20~40%。