CN102911901A - 一种短小芽孢杆菌菌株及其应用 - Google Patents

一种短小芽孢杆菌菌株及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN102911901A
CN102911901A CN201210413435XA CN201210413435A CN102911901A CN 102911901 A CN102911901 A CN 102911901A CN 201210413435X A CN201210413435X A CN 201210413435XA CN 201210413435 A CN201210413435 A CN 201210413435A CN 102911901 A CN102911901 A CN 102911901A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacillus pumilus
strain
bacillus
pumilus
application
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201210413435XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN102911901B (zh
Inventor
彭虹旎
梁莉
马俊孝
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yingchuang Ulan Biotechnology Shandong Co ltd
Original Assignee
Qingdao Vland Biotech Group Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Qingdao Vland Biotech Group Co Ltd filed Critical Qingdao Vland Biotech Group Co Ltd
Priority to CN201210413435.XA priority Critical patent/CN102911901B/zh
Publication of CN102911901A publication Critical patent/CN102911901A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102911901B publication Critical patent/CN102911901B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Fodder In General (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一株短小芽孢杆菌菌株及其应用,上述菌株的保藏编号为CCTCC NO: M 2012428,可应用于饲料添加剂领域。本发明从肉鸡养殖场土壤中筛选到一株短小芽孢杆菌BP14,该菌株耐高温、产蛋白酶,对动物源大肠杆菌、沙门氏菌生长具有显著的抑制作用,能有效促进养殖动物的生产性能,可作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中,应用前景广阔。

Description

一种短小芽孢杆菌菌株及其应用
技术领域
本发明属于微生物筛选、应用技术领域,具体涉及一种短小芽孢杆菌菌株及其应用。 
背景技术
随着环保意识的增强,对于抗生素滥用引起的耐药性病原菌增加,以及畜禽产品药残超标等严重问题备受关注,人们对抗生素饲料添加剂带来的负面效应意识也在不断提高。欧盟已全面禁止饲料中使用抗生素促生长饲料添加剂。为了应对这些问题,采用益生菌微生态制剂的生物防治措施成为当前畜禽养殖热点而受到重视。 
益生菌在其生长代谢过程中,会分泌产生多种物质,比如抗菌肽、细菌素,一方面可以拮抗大肠杆菌等病原菌生长,另一方面利于自身定植,促进动物生长,改善免疫等。微生态制剂作为一种新型的抗生素替代品的添加剂,具有无毒副作用、无耐药性、无残留、效果显著等优点,受到了畜禽养殖的欢迎。作为饲用抗生素替代添加剂,微生态制剂研究和开发前景广阔。因此,筛选出具有良好效果的益生菌就具有重要的意义。但目前饲用添加剂的益生菌以枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌最为常见,而短小芽孢杆菌在动物饲料、预混料、饲料添加剂方面的报道和研发较少。 
发明内容
本发明的目的是提供一株新型短小芽孢杆菌及其在畜禽养殖中的应用,所述短小芽孢杆菌筛选自肉鸡养殖场的土壤,对动物源大肠杆菌、沙门氏菌生长有显著抑制作用,可作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中,促进养殖动物的生产性能。 
本发明一方面提供了一株短小芽孢杆菌,该菌株命名为短小芽孢杆菌BP14(Bacillus pumilus BP14),已于2012年10月25日保藏于“中国典型培养物保藏中心”,其保藏编号为CCTCC NO:M 2012428。 
本发明的短小芽孢杆菌BP14可应用于饲料添加剂领域。 
本发明的另一个方面提供一种包含上述短小芽孢杆菌BP14的微生物制剂。 
上述的微生物制剂为短小芽孢杆菌BP14的菌粉,按质量百分比为0.1%-1%的比例添加至畜禽饲料中。 
本发明从肉鸡养殖场土壤中筛选到一株短小芽孢杆菌BP14,该菌株耐高温、产蛋白酶,对动物源大肠杆菌、沙门氏菌生长具有显著的抑制作用,能有效促 进养殖动物的生产性能,可作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中,应用前景广阔。 
具体实施方式
实施例1短小芽孢杆菌BP14分离筛选及鉴定: 
1、芽孢杆菌初筛 
采集肉鸡养殖场土样6份,分别称取25g土样,加入225mL无菌水,制备成悬液,经80℃水浴处理10min后,涂布于营养琼脂平板上,培养获得50株芽孢杆菌。 
2、抑菌型芽孢杆菌筛选 
1)指示菌:大肠杆菌(ATCC25922)、沙门氏菌(ATCC14028),接种于营养肉汤中,37℃,200rpm,培养15h; 
2)制备芽孢杆菌液:初筛分离的芽孢杆菌,接种于营养肉汤中,37℃,200rpm,培养24h; 
3)体外抑菌实验—微量肉汤法:将培养24h的芽孢杆菌液离心、收集上清,取无菌96孔培养板,按1:1比例加入芽孢杆菌上清液及病原菌液,使得其中病原菌浓为1×108cfu/mL,37℃,200rpm,作用6h,(对照组为不添加芽孢杆菌上清的病原菌液),取出读取各处理的OD600,计算抑菌率,公式如下: 
Figure BDA00002309058500021
A为对照组OD600,A0为0h数据;A2为6h数据; 
B为芽孢杆菌上清处理组OD600,B0为0h数据;B2为6h数据; 
4)经体外抑菌实验,筛选得到1株对大肠杆菌(ATCC25922)、沙门氏菌(ATCC14028)生长抑制显著的芽孢杆菌,并进一步鉴定分析。 
3、芽孢杆菌鉴定 
1)生化反应采用API50细菌鉴定系统,上述芽孢杆菌的生物学特性如下: 
a、菌落形态特征: 
在营养琼脂培养基上培养18-24小时,呈现为灰黄色、不透明、表面湿润、有皱褶、直径约2-4mm菌落; 
b、细胞形态特征: 
经革兰氏染色呈阳性、短杆状,芽孢为椭圆状,位于中部或偏端; 
c、生理生化特征: 
V-P试验(+),淀粉水解(+),酪素水解(+),明胶水解(+),硝酸盐还原(-),吲哚试验(-),生长温度范围15~45℃,pH范围5~9,高于7%NaCl不生长; 
生化鉴定结果显示该芽孢杆菌为短小芽孢杆菌。 
2)利用试剂盒提取上述芽孢杆菌基因组DNA,利用PCR技术扩增16S rRNA序列,测序后获得长度为1457bp的片段。通过BLAST比对分析,其与公布的多株短小芽孢杆菌的16S rRNA序列相似度为99%,与其他芽孢杆菌16S rRNA序列菌相似度低于99%。进一步扩增该菌的gyrB基因(用于编码DNA促旋酶)序列,经BLAST比对分析,其与公布的短小芽孢杆菌gyrB基因序列相似度为98%,与其他芽孢杆菌gyrB基因序列相似度低于90%,结合16S rRNA比对结果,鉴定证实该芽孢杆菌为短小芽孢杆菌,与生化鉴定结果一致。 
将该菌命名为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)BP14,并于2012年9月 日,保藏于“中国典型培养物保藏中心”,保藏编号为CCTCC NO:M 2012428。; 
实施例2:短小芽孢杆菌BP14抑制动物源病原菌实验 
1、指示病原菌: 
来自病鸡、猪肠道的大肠杆菌、沙门氏菌(青岛农业大学预防兽医学实验室惠赠),接种于营养肉汤中,37℃,200rpm,培养15h; 
2、制备短小芽孢杆菌BP14:挑取单菌落,接种于营养肉汤中,37℃,200rpm,培养24h; 
3、体外抑菌实验—微量肉汤法: 
将培养24h的短小芽孢杆菌BP14菌液离心、收集上清,经测定,上清中蛋白酶的酶活为75U/mL。 
取无菌96孔培养板,按1:1比例加入短小芽孢杆菌BP14上清液及病原菌液,使得其中病原菌浓为1×108cfu/mL,37℃,200rpm,作用6h,(对照组为不添加芽孢杆菌上清的病原菌液),取出读取各处理的OD600,计算抑菌率,公式如下: 
A为对照组OD600,A0为0h数据;A2为6h数据; 
B为芽孢杆菌BP14上清处理组OD600,B0为0h数据;B2为6h数据; 
短小芽孢杆菌BP14对6株动物源的大肠杆菌、沙门氏菌生长抑制情况如下表所示: 
病原菌菌株 抑菌活性
大肠杆菌E1(血清型O1) +++
大肠杆菌E3(血清型O9) +++
大肠杆菌E4(血清型O101) +++
[0044] 
大肠杆菌E5(血清型O78) ++
鸡沙门氏菌SC1 +++
猪沙门氏菌SP1 ++
+++表示抑菌率大于75%;++表示抑菌率为50-75%之间; 
由上表中体外抑菌实验结果可知,本发明的短小芽孢杆菌BP14能显著抑制分离自动物源的4株大肠杆菌和2株沙门氏菌的生长,其中对大肠杆菌E1、E3、E4及鸡沙门氏菌的抑菌率达到75%以上,说明短小芽孢杆菌BP14对动物源大肠杆菌、沙门氏菌有显著的抑制作用。 
实施例3:短小芽孢杆菌BP14对肉鸡肠道微生物变化的影响 
采购1日龄罗氏308白羽肉公鸡,分为对照组和实验组,每个处理组16个重复,每个重复8羽鸡,对照组为饲喂普通商品日粮,实验组为饲喂添加短小芽孢杆菌BP14菌粉的普通商品日粮,分别于饲喂第7天、14天、21天、28天,收集新鲜的鸡粪样品,测定其中微生物菌群变化情况,实验结果如表2所示: 
表2短小芽孢杆菌BP14饲喂肉鸡试验过程中微生物菌群变化 
Figure BDA00002309058500041
由表2试验结果可知,在饲喂实验中,1)益生菌双歧杆菌和乳酸杆菌的菌量变化测定过程,实验组菌量高于对照组,2)肠道病原菌大肠杆菌和沙门氏菌的菌量变化测定过程,实验组菌量低于对照组,这说明饲喂过程中,实验组添加短小芽孢杆菌BP14后对肉鸡肠道的益生菌增殖有促进作用,而对肠道病原菌起到抑制作用,明显优于对照组。添加短小芽孢杆菌BP14饲喂肉鸡,调节肠道 菌群效果显著提高。 
实施例4:短小芽孢杆菌BP14对肉鸡生产性能的影响 
采购1日龄罗氏308白羽肉公鸡,分为对照组和实验组,每个处理组16个重复,每个重复8羽鸡,生产试验期为35天,其中对照组为饲喂普通商品日粮,实验组为饲喂添加短小芽孢杆菌BP14菌粉的普通商品日粮,测量试验过程中采食量、料重比、体重的变化情况,实验结果如表3所示: 
表3肉鸡生产性能统计结果 
Figure BDA00002309058500051
由表3的肉鸡0-35天试验结果可知,全期来看,实验组肉鸡料肉比比对照组降低0.07,与对照差异显著(P<0.05)。测试指标中,实验组日增重、料肉比、育肥指数均优于对照组。这表明饲喂中添加短小芽孢杆菌BP14后,很好的改善了肉鸡的生产性能,不仅降低了肉鸡的生产成本,还提高了肉鸡的生产效率,增加了饲养者的经济效益。 

Claims (5)

1.一种短小芽孢杆菌菌株,其保藏编号为CCTCC NO: M 2012428。
2.权利要求1所述的菌株在饲料添加剂领域中的应用。
3.一种微生物制剂,所述的微生物制剂包含有权利要求1所述的短小芽孢杆菌。
4.如权利要求3所述的微生物制剂,为权利要求1所述的短小芽孢杆菌的菌粉。
5.权利要求4所述的短小芽孢杆菌的菌粉的应用,是将短小芽孢杆菌的菌粉按质量百分比为0.1%-1%的比例添加至畜禽饲料中。
CN201210413435.XA 2012-10-25 2012-10-25 一种短小芽孢杆菌菌株及其应用 Active CN102911901B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210413435.XA CN102911901B (zh) 2012-10-25 2012-10-25 一种短小芽孢杆菌菌株及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210413435.XA CN102911901B (zh) 2012-10-25 2012-10-25 一种短小芽孢杆菌菌株及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102911901A true CN102911901A (zh) 2013-02-06
CN102911901B CN102911901B (zh) 2014-02-19

Family

ID=47610482

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201210413435.XA Active CN102911901B (zh) 2012-10-25 2012-10-25 一种短小芽孢杆菌菌株及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102911901B (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103937698A (zh) * 2014-01-23 2014-07-23 上海海洋大学 具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌突变菌株
CN104087529A (zh) * 2014-06-29 2014-10-08 新疆农业科学院微生物应用研究所 短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)JY2及其应用
CN104263683A (zh) * 2014-09-15 2015-01-07 中国农业科学院饲料研究所 具有益生作用的短小芽孢杆菌315及其应用
CN106577772A (zh) * 2016-12-02 2017-04-26 青岛蔚蓝生物集团有限公司 一种新型生物种衣剂及其应用
CN114736834A (zh) * 2022-05-19 2022-07-12 宁夏安利森生物科技有限公司 一种短小芽孢杆菌ts1及其应用
CN114982413A (zh) * 2022-06-16 2022-09-02 南京农业大学 一种生物炭基芽孢杆菌菌剂的固态发酵制备及其应用

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI569731B (zh) * 2015-12-30 2017-02-11 聯發生物科技股份有限公司 飼料添加菌劑及其製備方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102229902A (zh) * 2011-05-27 2011-11-02 北京大北农科技集团股份有限公司 短小芽孢杆菌及其饲料添加剂、预混料和饲料防霉剂
CN102409015A (zh) * 2011-12-06 2012-04-11 北京大北农科技集团股份有限公司 一种复合微生态制剂及其在饲料添加剂中的应用和预混料

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102229902A (zh) * 2011-05-27 2011-11-02 北京大北农科技集团股份有限公司 短小芽孢杆菌及其饲料添加剂、预混料和饲料防霉剂
CN102409015A (zh) * 2011-12-06 2012-04-11 北京大北农科技集团股份有限公司 一种复合微生态制剂及其在饲料添加剂中的应用和预混料

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《中山大学学报论丛》 19970228 雷秋波 等 "利用生物工程菌作为鸡饲料添加剂的研究" , 第1期 *
雷秋波 等: ""利用生物工程菌作为鸡饲料添加剂的研究"", 《中山大学学报论丛》, no. 1, 28 February 1997 (1997-02-28) *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103937698A (zh) * 2014-01-23 2014-07-23 上海海洋大学 具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌突变菌株
CN104087529A (zh) * 2014-06-29 2014-10-08 新疆农业科学院微生物应用研究所 短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)JY2及其应用
CN104087529B (zh) * 2014-06-29 2016-08-31 新疆农业科学院微生物应用研究所 短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)JY2及其应用
CN104263683A (zh) * 2014-09-15 2015-01-07 中国农业科学院饲料研究所 具有益生作用的短小芽孢杆菌315及其应用
CN106577772A (zh) * 2016-12-02 2017-04-26 青岛蔚蓝生物集团有限公司 一种新型生物种衣剂及其应用
CN106577772B (zh) * 2016-12-02 2020-04-14 青岛蔚蓝生物集团有限公司 一种生物种衣剂及其应用
CN114736834A (zh) * 2022-05-19 2022-07-12 宁夏安利森生物科技有限公司 一种短小芽孢杆菌ts1及其应用
CN114736834B (zh) * 2022-05-19 2023-06-06 宁夏安利森生物科技有限公司 一种短小芽孢杆菌ts1及其应用
CN114982413A (zh) * 2022-06-16 2022-09-02 南京农业大学 一种生物炭基芽孢杆菌菌剂的固态发酵制备及其应用
CN114982413B (zh) * 2022-06-16 2023-12-08 南京农业大学 一种生物炭基芽孢杆菌菌剂的固态发酵制备及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN102911901B (zh) 2014-02-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102911901B (zh) 一种短小芽孢杆菌菌株及其应用
CN103555640B (zh) 一种枯草芽孢杆菌及其在畜禽养殖中的应用
CN102399733B (zh) 约氏乳杆菌及其菌剂、应用和预混料
CN106190933B (zh) 广谱抗致病菌的枯草芽孢杆菌及其应用
CN105062933A (zh) 一种罗伊氏乳杆菌及其应用
CN104651268A (zh) 一种植物乳杆菌及其应用
CN104293696A (zh) 一株粪肠球菌hew-a131及其应用
CN105175518B (zh) 凝结芽孢杆菌fm603产生的细菌素及其制备方法
CN109679882A (zh) 一株屎肠球菌dt1-1及其应用
CN109055268A (zh) 一种复合微生态制剂及其在蜜蜂养殖过程中的应用
CN102373162A (zh) 唾液乳酸杆菌(Lactobacillus salivarius)M6及含有该唾液乳酸杆菌M6的抑菌组合物
CN107177522A (zh) 一株高活性饲用植物乳杆菌及其培养方法和应用
CN102229902A (zh) 短小芽孢杆菌及其饲料添加剂、预混料和饲料防霉剂
CN102517227A (zh) 粪肠球菌及其应用与其饲料添加剂和发酵剂
CN103266074B (zh) 一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用
CN114276946B (zh) 植物乳杆菌、菌剂以及饲料及其应用
CN101072864A (zh) 可将生物活性化合物递送到反刍动物肠道的细菌的培养方法
Mahoney et al. Fermented duckweed as a potential feed additive with poultry beneficial bacilli probiotics
CN103555634B (zh) 一种嗜酸乳杆菌及其应用
CN105062914A (zh) 一株调节畜禽肠道菌群平衡的丁酸梭菌的筛选及应用
CN104263683B (zh) 具有益生作用的短小芽孢杆菌315及其应用
KR20020093996A (ko) 사료 첨가물 및 그 제조방법
CN103146602B (zh) 乳酸菌液态混菌发酵方法、所得菌剂及其用途
CN103255082B (zh) 一株用于育肥猪养殖的优良凝结芽孢杆菌及其应用
CN105104712B (zh) 一种微生物饲料添加剂及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: SHANDONG VLAND BIOTECH CO., LTD.

Free format text: FORMER OWNER: QINGDAO WEILAN BIOLOGY GROUP CO., LTD.

Effective date: 20130422

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 266061 QINGDAO, SHANDONG PROVINCE TO: 251719 BINZHOU, SHANDONG PROVINCE

TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20130422

Address after: 251719, Huimin County, Shandong Province, Binzhou Economic Development Zone (Stone Town, sand nest, forest farm)

Applicant after: SHANDONG VLAND BIOTECH CO.,LTD.

Address before: Miao road Laoshan District 266061 Shandong city of Qingdao province Shandong No. 29 high building 12A07

Applicant before: QINGDAO VLAND BIOTECH GROUP Co.,Ltd.

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: QINGDAO WEILAN TIANCHENG BIOLOGY TECHNOLOGY CO., L

Effective date: 20150115

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20150115

Address after: 251719, Huimin County, Shandong Province, Binzhou Economic Development Zone (Stone Town, sand nest, forest farm)

Patentee after: SHANDONG VLAND BIOTECH CO.,LTD.

Patentee after: QINGDAO WEILAN TIANCHENG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd.

Address before: 251719, Huimin County, Shandong Province, Binzhou Economic Development Zone (Stone Town, sand nest, forest farm)

Patentee before: SHANDONG VLAND BIOTECH CO.,LTD.

TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20231128

Address after: 251702 Road West, 1 kilometer north of the intersection of Hefang Daji Road and Sunwu Road in Huimin County, Binzhou City, Shandong Province

Patentee after: Yingchuang Ulan Biotechnology (Shandong) Co.,Ltd.

Address before: 251719 Economic Development Zone, Huimin County, Binzhou City, Shandong Province (Shawo forest farm, Shimiao town)

Patentee before: SHANDONG VLAND BIOTECH CO.,LTD.

Patentee before: QINGDAO WEILAN TIANCHENG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd.

TR01 Transfer of patent right