CN102895182B - 注射用头孢西丁钠的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及注射用头孢西丁钠的制备方法。该方法包括洗瓶工序、胶塞处理工序、铝盖处理工序、头孢西丁钠分装工序和轧盖制备注射用头孢西丁钠。本发明的制备方法通过工艺的合理设计，以及工艺中若干参数的控制，可以控制制备的注射用头孢西丁钠的pH值范围在6.7-7.0之间，澄清度、可见异物、无菌测定均符合要求，杂质含量、内毒素含量和不溶性微粒的数量显著低于现有标准制定的要求，进一步提高了产品的质量、增强了注射用头孢西丁钠的注射安全性。

Description

注射用头孢西丁钠的制备方法

技术领域

本发明属于制药领域，具体地，涉及一种注射用头孢西丁钠的制备方法。 

背景技术

注射用头孢西丁钠主要成分为头孢西丁钠，化学名称为：（6R、7 S）-3-[(1-氨甲酰氧)甲基]-7-甲氧基-8-氧代-7-[2-（2-噻吩基）乙酰氨基]-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸钠盐。头孢西丁钠在临床主上要用于敏感菌所致的下列感染：上下呼吸道感染、泌尿道感染包括无并发症的淋病、腹膜炎以及其它腹腔内、盆腔内感染、败血症（包括伤寒）、妇科感染、骨、关节软组织感染、心内膜炎等。由于本品对厌氧菌有效及对β-内酰胺酶稳定，故特别适用需氧及厌氧混合感染，以及对于由产β-内酰胺酶而对本品敏感细菌引起的感染。 

CN200910005009.0公开了一种注射用头孢西丁钠粉针制剂及其制备方法，具体步骤为：玻璃瓶经外包装拆除，清洗机清洗，洁净压缩空气吹干，最后经350℃干热灭菌5分钟，冷却，备用。丁基橡胶塞经外包装拆除，洗胶塞机清洗，于120℃干热灭菌120分钟，冷却，备用。铝塑盖经外包装拆除，于110℃烘箱中烘120分钟，冷却，备用。无菌原料头孢西丁钠经外包装拆除、表面消毒，传入10000级洁净区、局部100级洁净区，以管制抗生素玻璃瓶进行无菌分装，压塞。将分装并压塞万豪的样品进行轧盖。将轧盖完好的样品进行灯检、贴签与包装即得。注射用头孢西丁钠的用法为肌注或静滴，采用肌注或静滴方式给药，根据用药安全性的要求，对于药品本身的质量要求较高，如酸度、溶液的澄清度与颜色、胶塞相容性加速试验、有关物质、细菌内毒素、无菌、可见异物、不溶性微粒、含量等。而CN200910005009.0记载的方法是常规制备的注射用粉针制剂的方法，采用这种方法，对于产品的酸度、溶液的澄清度与颜色、胶塞相容性加速试验、有关物质、细菌内毒素、无菌、可见异物、不溶性微粒、含量等各种参数指标，不能同时起到较好的控制。而要起到对上述各种参数指标起到较好的控制，整个制备的工艺过程设计和各个工艺过程中的参数控制要求是难点，根据现有技术的记载的制备方法，无法控制上述参数指标在较好的范围内。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种注射用头孢西丁钠的制备方法，该方法能够较好的控制所制备的注射用头孢西丁钠的酸度、溶液的澄清度与颜色、胶塞相容性加速试验、有关物质、细菌内毒素、无菌、可见异物、不溶性微粒、含量等各种参数指标在较好的范围内。 

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：注射用头孢西丁钠的制备方法，包括下述步骤： 

1）洗瓶工序：将质量合格的注射剂瓶送入洗瓶轨道，首先使注射剂瓶进入超声波清洗区并使瓶口朝下，利用超声波初洗，初洗完成后采用水压为0.2Mpa的纯化水冲洗，然后采用水压为0.25Mpa的经0．22μm过滤器过滤的注射用水冲洗，最后采用0.3Mpa的经0．22μm过滤器过滤净化的压缩空气吹干，吹干后将注射剂瓶瓶口翻转朝上，出瓶；在百级层流保护下送入红外线灭菌干燥机进行干燥灭菌；

2）胶塞处理工序：将外包装拆除后胶塞经全自动胶塞清洗机进行清洗、灭菌、干燥、冷却后备用；

3）铝盖处理工序：将铝盖倒入洁净的有孔不锈钢筐内，放入电热干燥箱内，铝盖灭菌温度为普通铝盖140±2℃、铝塑组合盖120±2℃，保温1小时后关闭电源；

4）头孢西丁钠分装工序：在缓冲室拆开外包装，先用饮用水擦拭头孢西丁钠原粉桶/袋的表面，然后用消毒剂进行擦拭消毒；在传递窗采用紫外灯照射30分钟后进入一万级无菌区待用；分装前30分钟开启百级层流，在暂存室用75%酒精对原粉桶/袋的表面进行擦拭消毒，送入分装室；在百级层流下将原粉转入到粉桶中；控制分装室的温度为22±4℃，相对湿度在65%以下，工艺过道保持5Pa以上的相对负压；将工序1）中经干燥灭菌后的注射剂瓶送入分装轨道时，先向空瓶充入经0.22μm膜过滤器过滤的氮气，空瓶分装药品后，再向药品充入氮气，然后盖经工序2）处理的胶塞；根据计算的标准装量调试好分装机进行分装，然后送入轧盖室进行轧盖即得注射用头孢西丁钠，轧盖所用的铝盖为经工序2）处理的铝盖。

所述工序1）中超声清洗的频率为40kHz。 

所述工序2）中全自动胶塞清洗机中用到的水压、空气压力的具体工艺条件为：注射用水压力≥0.25 Mpa，压缩空气压力≥0.4Mpa，真空度≤-0.06Mpa；所述注射用水、压缩空气经0．22μm过滤器过滤；操作程序设定为：漂洗时间8～10分钟，灭菌F。值15，真空干燥时间0.5小时；热干燥时间0.5小时；冷却至60℃。 

洗瓶工序、胶塞处理工序、铝盖处理工序、头孢西丁钠分装工序操作时所在的洁净区进行甲醛熏蒸灭菌，甲醛用量10ml/m³房间体积，熏蒸灭菌后用甲醛相同量的氨水中和甲醛；熏蒸灭菌时无菌室温度应达到28℃~30℃，相对湿度为70%~80%。 

加水制成每1ml中含0.1g注射用头孢西丁钠的溶液，溶液的pH值为6.5-7.0。 

所述pH值为6.8-7.0。 

按上述方法制备的注射用头孢西丁钠的总杂质含量为0.5-1.3%，总杂质包括杂质A、杂质B、杂质C、杂质D，其结构式为： 

其中，杂质A含量为0.16-0.38%、杂质B含量为0.15-0.30%、杂质C含量为0.16-0.42%、杂质D含量为0.14-0.30%，杂质C的R=H，杂质D的R=OCH₃。

所述杂质采用高效液相色谱法测定，测定方法为： 

色谱条件与系统适应性试验：用苯基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为水，用甲酸调pH至2.7；流动相B为乙腈；按下表进行线性梯度洗脱：

流速为每分钟1.0ml；检测波长为235nm，取头孢西丁对照品适量，用磷酸盐缓冲液溶解并稀释制成每1ml中含头孢西丁0.25mg的溶液，于70℃放置1小时，冷却至室温，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，头孢西丁的保留时间约为35分钟，头孢西丁峰与其相对保留时间约为0.8处的杂质峰的分离度应大于5.0；

测定方法：取制备的注射用头孢西丁钠50mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液，量取供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，用上述磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录测定结果。

所述磷酸盐缓冲液的制备方法为：称取磷酸氢二钾34.836g，加水1000ml溶解，用磷酸调节pH值至6.8，取20ml，加水稀释至1000ml。 

按上述方法制备的注射用头孢西丁钠每1mg中含细菌内毒素的量为0.010-0.055 

相对于现有技术，本发明的有益效果是：本发明的制备方法通过工艺的合理设计，以及工艺中若干参数的控制，包括超声清洗频率、洗瓶工序中纯化水的水压、注射用水的水压、过滤器的规格、压缩空气的压力的参数控制，以及采用百级层流保护的工艺；胶塞处理工序中注射用水压力、压缩空气压力、真空度、漂洗时间、灭菌F。值、真空干燥时间、热干燥时间、冷却温度的参数控制；头孢西丁钠分装工序中分装前处理工艺、工艺过道保持5Pa以上的相对负压设计、分装时的氮气保护工艺和分装室的温度、相对湿度等参数选择；并且，在洗瓶工序、胶塞处理工序、铝盖处理工序、头孢西丁钠分装工序操作时所在的洁净区进行甲醛熏蒸灭菌，甲醛用量10ml/m³房间体积，熏蒸灭菌后用甲醛相同量的氨水中和甲醛；熏蒸灭菌时无菌室温度应达到28℃~30℃，相对湿度为70%~80%，这些总体的工艺设计和参数选择，可以控制制备的注射用头孢西丁钠的pH值范围在6.7-7.0之间，澄清度、可见异物、无菌测定均符合要求，杂质含量、内毒素含量和不溶性微粒的数量显著低于现有标准制定的要求，进一步提高了产品的质量、增强了注射用头孢西丁钠的注射安全性。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但本发明的实施方式不仅限于下述实施例。 

实施实例1 

本实施例注射用头孢西丁钠的制备方法具体步骤如下：

1）洗瓶工序

将质量合格的钠钙玻璃模制注射剂瓶送入洗瓶轨道，首先使注射剂瓶进入超声波清洗区并将其瓶口翻转朝下，利用超声波初洗（本实施例选用的频率为40kHz，实验发现，超声工作频率在人的听觉范围内就会产生噪音，当频率低于20kHz，不仅工作噪音大，而且可能超出其他条列所规定的安全噪音的限度。现有的很多清洗选用20-30kHZ的频率，但是用于注射剂瓶的清洗过程中，实验发现20-30kHZ的频率清洗效果较差，而且还可能造成注射剂瓶表面的损伤，实验发现，采用40kHz的频率不仅清洗效果好，而且不会造成注射剂瓶表面的损伤），初洗完成后采用水压为0.2Mpa的纯化水冲洗，然后采用水压为0.25Mpa的经0．22μm过滤器过滤的注射用水冲洗，最后采用0.3Mpa的经0．22μm过滤器过滤净化的压缩空气吹干，吹干后将注射剂瓶瓶口翻转朝上，出瓶；在百级层流保护下送入红外线灭菌干燥机进行干燥灭菌。

注射剂瓶在红外线灭菌干燥机中经过预热、干燥灭菌、冷却后送入凉瓶室。本实施例的红外线灭菌干燥机选用GMS1200隧道式红外线灭菌干燥机，温度设定要求：加热₁ 300~370℃、加热₂  350~380℃、加热₃  280~330℃；风压控制：预热区的风压差为5－15Pa、冷却区的风压差为10－20Pa，冷却区压差大于预热区压差2－10Pa。钠钙玻璃模制注射剂瓶在干燥灭菌段的温度350℃以上时间不得少于5分钟，经试验确定，最好为5-10min，这样可以取得最好的灭菌效果，也不会由于保持高温时间过长引起的注射剂瓶内部应力导致的注射剂瓶损坏等问题。 

2）胶塞处理工序 

将外包装拆除后胶塞经全自动胶塞清洗机进行清洗、灭菌、干燥、冷却后备用。全自动胶塞清洗机中用到的水压、空气压力的具体工艺条件为：注射用水压力≥0.25 Mpa，压缩空气压力≥0.4Mpa，真空度≤-0.06Mpa。注射用水、压缩空气应经0．22μm过滤器过滤。操作程序设定为：漂洗时间：8～10分钟，灭菌F。值15，真空干燥时间：0.5小时；热干燥时间：0.5小时。冷却至60℃。

3）铝盖处理工序 

将铝盖倒入洁净的有孔不锈钢筐内，放入电热干燥箱内，铝盖灭菌温度为普通铝盖140±2℃、铝塑组合盖120±2℃，保温1小时后关闭电源。

4）头孢西丁钠分装工序 

在缓冲室拆开外包装，先用饮用水擦拭头孢西丁钠原粉桶（袋）的表面，然后用消毒剂进行擦拭消毒；在传递窗用紫外灯进行照射30分钟以后方可进入一万级无菌区待用。

分装前30分钟开启百级层流，在暂存室用75%酒精对原粉桶（袋）的表面进行擦拭消毒，送入分装室；在百级层流下将原粉转入到粉桶中。控制分装室的温度为22±4℃，相对湿度在65%以下，工艺过道保持5Pa以上的相对负压。 

将工序1）中经干燥灭菌后的注射剂瓶送入分装轨道时，先向空瓶充入经0.22μm膜过滤器过滤的氮气，空瓶分装药品后，再向药品充入氮气，然后盖经工序2）处理的胶塞。 

根据计算的标准装量调试好分装机进行分装，然后送入轧盖室进行轧盖。轧盖所用的铝盖为经工序2）处理的铝盖。 

百级层流是采用空气洁净技术对微生物污染采取程度不同的控制，以达到控制空间环境中空气洁净度；并提供适宜的温、湿度，创造一洁净、细菌数低的工作环境，使分装时药品受到尽可能少的二次污染。百级层流的洁净度参数为：≥0.5μm和≥5μm的尘粒个数上限分别为3500和0，沉降菌0.5个/皿；界面风速0.25m/s（垂直单向流）或者0.35m/s（水平单向流），净化压缩空气经0．22μm过滤器过滤，空气压力0.2～0.4MPa。在百级保护区内不得裸手操作；在操作过程中不得用手直接接触瓶口；只能用灭菌后的不锈钢镊子进行盖、取胶塞。 

5）轧盖工序 

检查轧盖工序后得到的产品铝盖边是否将注射剂瓶包好；包边应平整、光滑，没有荷叶边和直边，包边在1mm以上。

6）灯检工序 

轧盖后产品进入灯检室，逐瓶进行灯检，将有异物、多药、少药、松盖、空瓶、破瓶、无塞等不合格半成品捡出。灯检合格的半成品由传送带送入包装室包装即得注射用头孢西丁钠。

当沉降菌检测不合格时，对上述各工序操作时所在的洁净区进行甲醛熏蒸灭菌，甲醛用量10ml/m³房间体积，熏蒸灭菌后用甲醛相同量的氨水中和甲醛；熏蒸灭菌时无菌室温度应达到28℃~30℃，相对湿度为70%~80%，确保甲醛蒸发完全。 

在上述工序中，需要进行压差的控制：洁净室（区）与室外大气的压差大于10帕，空气洁净级别不同的洁净室（区）之间的压差大于5帕，无菌分装与同级别相邻房间呈相对负压。空气洁净级别要求高的洁净室（区）对相邻的空气洁净级别低洁净室（区）要求呈相对正压。 

采用上述方法制备编号1-9的9批次的注射用头孢西丁钠，测定其主要参数包括酸度、溶液的澄清度与颜色、胶塞相容性加速试验、有关物质、细菌内毒素、无菌、可见异物、不溶性微粒、含量等，测定方法及测定结果如下（下述测定方法中所述的本品指本实施例的方法制备编号1-9的9批次的注射用头孢西丁钠）： 

酸度：取本品，加水制成每1ml中约含0.1g的溶液，按照中国药典2005年版二部附录Ⅵ H的方法测定pH值，结果如表1所示：

表1

人体血液的pH值为7.34 - 7.45，注射用头孢西丁钠通常有三种给药方式，放别为肌内注射、静脉注射、静脉滴注。研究发现，pH值的改变是诱发静脉炎的重要因素，pH值4.5左右，100%诱发严重的外周静脉血管炎；pH值5.9，50%发生轻到中度的静脉炎；pH值达到6.5，基本没有静脉炎发生。因此，为了减小注射用药在给药过程中给人体带来的影响，静脉注射液的pH值应尽可能与血液相等。注射用头孢西丁钠经常采用静脉注射给药，因此，其pH的控制成为最重要的控制指标之一。

对于一般的钠盐，其pH值都呈弱碱性，但是现有的注射用头孢西丁钠，其pH值一般在6.0以下，原因可能与生产过程中工艺设计和工艺参数指标控制不理想导致的头孢西丁钠分解有关，头孢西丁钠分解一是导致有关物质（杂质）的增加，另外就是影响其pH值。本发明的制备方法通过工艺的合理设计，以及工艺中若干参数的控制，包括超声清洗频率、洗瓶工序中纯化水的水压、注射用水的水压、过滤器的规格、压缩空气的压力的参数控制，以及采用百级层流保护的工艺；胶塞处理工序中注射用水压力、压缩空气压力、真空度、漂洗时间、灭菌F。值、真空干燥时间、热干燥时间、冷却温度的参数控制；头孢西丁钠分装工序中分装前处理工艺、工艺过道保持5Pa以上的相对负压设计、分装时的氮气保护工艺和分装室的温度、相对湿度等参数选择；并且，在洗瓶工序、胶塞处理工序、铝盖处理工序、头孢西丁钠分装工序操作时所在的洁净区进行甲醛熏蒸灭菌，甲醛用量10ml/m³房间体积，熏蒸灭菌后用甲醛相同量的氨水中和甲醛；熏蒸灭菌时无菌室温度应达到28℃~30℃，相对湿度为70%~80%，这些总体的工艺设计和参数选择，一是为了防止制备注射用头孢西丁钠时引入其他的杂质和细菌，二是为了防止头孢西丁钠分解和发生其他的化学反应。通过本发明的工艺设计和参数选择，其pH值范围在6.7以上，其pH值较为接近人体血液的pH值，可以避免静脉炎发生，进入血液后也不会对人体造成较大的不适。 

实验发现，酸度除了在给药过程中给人体带来的影响，还对药品本身的稳定性和安全性有很大的影响，以不同范围pH值的头孢西丁钠进行对比实验，除pH值之外，对比实验所用注射用头孢西丁钠的其他条件相同，按照中国药典2010年版二部附录ⅪⅩC药物制剂稳定性试验指导原则的相关要求，对比考察了头孢西丁钠粉末在25℃放置24个月、40℃放置6个月的稳定性和头孢西丁钠注射液的稳定性。 

表2 头孢西丁钠粉末 25℃稳定性实验 

表3 头孢西丁钠粉末 25℃稳定性实验

表4 头孢西丁钠粉末40℃稳定性实验

表5 头孢西丁钠粉末40℃稳定性实验

表2、表4中的含量是以加入头孢西丁钠粉末的量作为基数进行计算的，如加入量为1.0g，3个月后测得头孢西丁钠的量为0.953g，则3月后头孢西丁钠含量为95.3%；表3、表5中，可见异物按照可见异物检查法（中国药典2010年版二部附录Ⅸ　H）检查，Y表示符合规定，N表示不符合规定。表1至表4的结果表明： pH值在4.0～4.2时，可见异物从24个月开始就不符合规定；pH值在4.5～6.5时，18个月头孢西丁钠含量在96.3%～97.1%之间，24个月头孢西丁钠含量在94.3%～96.5%之间； pH值在6.5～7.0时，18个月头孢西丁钠含量在97.8%～99.1%之间，24个月头孢西丁钠含量在97.3%～98.8%之间；pH值在大于7.0时，头孢西丁钠含量18个月、24个月头孢西丁钠含量相对于pH值在6.5～7.0时减小，并且可见异物检测出现不合格。当比pH小余4.5时，或者pH值在大于7.0时，在18个月和24个月时头孢西丁钠含量差异比较大，并且含量不超过96.5%，其稳定性不是特别理想，比pH值在6.0～7.0时，特别是pH值在6.8～7.0时，在18个月和24个月时头孢西丁钠含量差异较小，并且含量可高达98.8，其稳定性相对于比旋度和pH值在此范围外的有显著提高。

溶液的澄清度与颜色：取本品，按加水制成每1ml中约含0.1g的溶液进行观察，测定结果如表6所示： 

表6

测定结果表明，所有产品的溶液均澄清无色，具有较好的澄清度，满足注射制剂关于澄清度的要求。

【胶塞相容性加速试验】溶液的澄清度：取本品，置于60℃恒温箱内，倒置放置10天，取出后加水制成每1ml中约含100mg的溶液行观察，测定结果如表7所示： 

表7

测定结果表明，本品在60℃恒温箱内放置10天后，该产品的溶液均澄清无色，进一步的实验，在60℃恒温箱内放置3个月后，该产品的溶液均澄清无色。产品的稳定性好，能够稳定的保持溶液的澄清度符合药品质量标准的规定，解决了一般的注射药物在贮存时间较长的情况下出现的注射液具有少量小白点、白块、溶液浑浊的问题出现，可以保证产品的可见异物检查符合药品质量标准的规定，便于临床用药和推广。

有关物质：照高效液相色谱法测定。 

色谱条件与系统适应性试验  用苯基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为水(用甲酸调pH至2.7)；流动相B为乙腈；按表8进行线性梯度洗脱： 

表8

流速为每分钟1.0ml；检测波长为235nm。取头孢西丁对照品适量，用磷酸盐缓冲液（称取磷酸氢二钾34.836g，加水1000ml溶解，用磷酸调节pH值至6.8，取20ml，加水稀释至1000ml）溶解并稀释制成每1ml中约含头孢西丁0.25mg的溶液，于70℃放置1小时，冷却至室温，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，头孢西丁的保留时间约为35分钟，头孢西丁峰与其相对保留时间约为0.8处的杂质峰的分离度应大于5.0。

测定法　取本品约50mg，精密称定，置10ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液，量取供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，用上述磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，测定结果如表9所示（其中数值为百分比数值，如编号1的杂质A含量为0.36%）： 

表9

杂质A的保留时间约为0.82min，杂质B的保留时间约为1.16min，杂质C的保留时间约为1.27min，杂质D的保留时间约为1.31min。各杂质的结构式如下述结构式所示，其中，C杂质的R=H，D杂质的R=OCH₃。

根据杂质测定结果显示，采用本实施例的制备方法，可以尽可能的减少工艺过程中和环境中带入杂质，并且可以尽可能的减少头孢西丁钠由于环境控制不断导致分解产生的杂质，使得制备的头孢西丁钠中单个杂质和总杂质的含量都符合要求。相对于现有药物标准单个杂质不超过0.5%、总杂质不超过2.0%，本实施例制备的头孢西丁钠，其中杂质A的含量不超过0.36%、杂质B的含量不超过0.28%、杂质C的含量不超过0.41、杂质D的含量不超过0.30%、总杂质含量不超过1.25%，相对于现有技术中杂质含量的控制有了显著的提高，进一步减少了注射制剂中杂质的含量。 

细菌内毒素：取本品，按照中国药典2005年版二部附录Ⅺ E的方法测定，测定结果如表10所示（测定结果为每1mg头孢西丁中含细菌内毒素的量，单位：EU） 

表10

内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，叫做脂多糖，脂多糖对宿主是有毒性的。内毒素脂多糖分子由菌体特异性多糖、非特异性核心多糖和脂质A三部分构成。脂质A是内毒素的主要毒性组分。不同革兰氏阴性细菌的脂质A结构基本相似。因此，凡是由革兰氏阴性菌引起的感染，虽菌种不一，其内毒素导致的毒性效应大致类同。这些毒性反应主要有：1、发热反应：人体对细菌内毒素极为敏感，极微量（1-5纳克/公斤体重）内毒素就能引起体温上升，发热反应持续约4小时后逐渐消退。自然感染时，因革兰氏阴性菌不断生长繁殖，同时伴有陆续死亡、释出内毒素，故发热反应将持续至体内病原菌完全消灭为止。内毒素引起发热反应的原因是内毒素作用于体内的巨噬细胞、中性粒细胞等，使之产生白细胞介素1、6和肿瘤坏死因子α等细胞因子，这些细胞因子作用于宿主下丘脑的体温调节中枢，促使体温升高发热。 2、白细胞反应：细菌内毒素进入宿主体内以后，血流中占白细胞总数60-70%的中性粒细胞数量迅速减少，这是因为细胞发生移动并粘附到组织毛细血管上了。不过1-2小时后，由内毒素诱生的中性细胞释放因子刺激骨髓释放其中的中性粒细胞进入血流，使其数量显著增加，有部分不成熟的中性粒细胞也被释放出来。革兰氏阴性菌的伤寒沙门菌是例外，其内毒素使白细胞总数始终是减少状态，目前还不清楚是什么原因。由于绝大多数被革兰氏阴性菌感染的患者血流中白细胞总数都会增加，所以现在医生在诊断前，为了初步区别是细菌性感染还是病毒性感染，常常要化验病人的血液，对白细胞进行总数测定和分类计数。被病毒感染的病人，其白细胞总数和中性粒细胞百分比基本在正常值范围内。 3、内毒素休克：当病灶或血流中革兰氏阴性病原菌大量死亡，释放出来的大量内毒素进入血液时，可发生内毒素血症。大量内毒素作用于机体的巨噬细胞、中性粒细胞、内皮细胞、血小板，以及补体系统和凝血系统等，便会产生白细胞介素1、6、8和肿瘤坏死因子α、组胺、5羟色胺、前列腺素、激肽等生物活性物质。这些物质作用于小血管造成功能紊乱而导致微循环障碍，临床表现为微循环衰竭、低血压、缺氧、酸中毒等，于是导致病人休克，这种病理反应叫做内毒素休克。 因此，对于注射制剂中内毒素的含量控制，是一个非常重要的指标，本实施例制备的头孢西丁钠，其中每1mg头孢西丁中含内毒素的量不超过0.051EU，远远低于药物规定的＜0.10 EU标准，相对于现有标准有了显著提高，进一步增强了注射用头孢西丁钠的注射安全性。

无菌：取本品，全部溶解于500ml的0.9%无菌氯化钠溶液中，用薄膜过滤法处理后，按照中国药典2010年版二部附录Ⅺ H的方法测定，测定结果如表11所示： 

表11

可见异物：照中国药典2010年版二部附录Ⅸ　H的可见异物检查法进行检查，如果如表12所示：

表12

不溶性微粒：取本品，按标示量加微粒检查用水制成每1ml中含50mg的溶液，按照中国药典2010年版二部附录Ⅸ C的方法测定，测定结果如表13所示：

表13

现有对于注射用头孢西丁钠的药品标准，限定≥10μm微粒不超过6000，限定≥25μm的微粒不超过600，本实施例制备的头孢西丁钠，≥10μm微粒不超过2900粒，≥25μm的微粒不超过200粒，相对于现有标准有了显著提高，进一步增强了注射用头孢西丁钠的注射安全性。

注射用头孢西丁钠作为一个现有注射制剂品种，目前公开的制备方法（如CN200910005009.0记载的方法）都是常规制备的注射用粉针制剂的方法，没有根据产品本身的性能进行针对性的设计和验证，由于每一个粉针制剂药品的理化性质、药性等都有所区别，如果采用常规制备的注射用粉针的方法，对于产品的酸度、溶液的澄清度与颜色、胶塞相容性加速试验、有关物质、细菌内毒素、无菌、可见异物、不溶性微粒、含量等各种参数指标，不能起到较好的控制，因此对于产品的质量不能够充分保证。要起到对上述各种参数指标起到较好的控制，整个制备的工艺过程设计和各个工艺过程中的参数必须要根据特定产品的理化性质和药性，进行充分的设计和验证，通过上述实验发现，本实施例的制备方法通过工艺的合理设计，以及工艺中若干参数的控制，包括超声清洗频率、洗瓶工序中纯化水的水压、注射用水的水压、过滤器的规格、压缩空气的压力的参数控制，以及采用百级层流保护的工艺；胶塞处理工序中注射用水压力、压缩空气压力、真空度、漂洗时间、灭菌F。值、真空干燥时间、热干燥时间、冷却温度的参数控制；头孢西丁钠分装工序中分装前处理工艺、工艺过道保持5Pa以上的相对负压设计、分装时的氮气保护工艺和分装室的温度、相对湿度等参数选择；并且，在洗瓶工序、胶塞处理工序、铝盖处理工序、头孢西丁钠分装工序操作时所在的洁净区进行甲醛熏蒸灭菌，甲醛用量10ml/m³房间体积，熏蒸灭菌后用甲醛相同量的氨水中和甲醛；熏蒸灭菌时无菌室温度应达到28℃~30℃，相对湿度为70%~80%，这些总体的工艺设计和参数选择，可以控制制备的注射用头孢西丁钠的pH值范围在6.7-7.0之间，澄清度、可见异物、无菌测定均符合要求，杂质含量、内毒素含量和不溶性微粒的数量显著低于现有国家标准制定的要求，进一步提高了产品的质量、增强了注射用头孢西丁钠的注射安全性。

如上所述，可较好的实施本发明。 

Claims (5)

1.注射用头孢西丁钠的制备方法，其特征在于，制备的注射用头孢西丁钠每1mg中含细菌内毒素的量为0.010-0.055；制备的注射用头孢西丁钠的总杂质含量为0.5-1.3%，总杂质包括杂质A、杂质B、杂质C、杂质D，其结构式为：

其中，杂质A含量为0.16-0.38%、杂质B含量为0.15-0.30%、杂质C含量为0.16-0.42%、杂质D含量为0.14-0.30%，杂质C的R=H，杂质D的R=OCH₃；制备的注射用头孢西丁钠加水制成每1ml中含0.1g注射用头孢西丁钠的溶液，溶液的pH值为6.5-7.0；注射用头孢西丁钠的制备方法包括下述步骤：

1）洗瓶工序：将质量合格的注射剂瓶送入洗瓶轨道，首先使注射剂瓶进入超声波清洗区并使瓶口朝下，利用超声波初洗，初洗完成后采用水压为0.2Mpa的纯化水冲洗，然后采用水压为0.25Mpa的经0．22μm过滤器过滤的注射用水冲洗，最后采用0.3Mpa的经0．22μm过滤器过滤净化的压缩空气吹干，吹干后将注射剂瓶瓶口翻转朝上，出瓶；在百级层流保护下送入红外线灭菌干燥机进行干燥灭菌；

2）胶塞处理工序：将外包装拆除后胶塞经全自动胶塞清洗机进行清洗、灭菌、干燥、冷却后备用，全自动胶塞清洗机中用到的水压、空气压力的具体工艺条件为：注射用水压力≥0.25 Mpa，压缩空气压力≥0.4Mpa，真空度≤-0.06Mpa；所述注射用水、压缩空气经0．22μm过滤器过滤；操作程序设定为：漂洗时间8～10分钟，灭菌F₀值15，真空干燥时间0.5小时；热干燥时间0.5小时；冷却至60℃；

3）铝盖处理工序：将铝盖倒入洁净的有孔不锈钢筐内，放入电热干燥箱内，铝盖灭菌温度为普通铝盖140±2℃、铝塑组合盖120±2℃，保温1小时后关闭电源；

4）头孢西丁钠分装工序：在缓冲室拆开外包装，先用饮用水擦拭头孢西丁钠原粉桶/袋的表面，然后用消毒剂进行擦拭消毒；在传递窗采用紫外灯照射30分钟后进入一万级无菌区待用；分装前30分钟开启百级层流，在暂存室用75%酒精对原粉桶/袋的表面进行擦拭消毒，送入分装室；在百级层流下将原粉转入到粉桶中；控制分装室的温度为22±4℃，相对湿度在65%以下，工艺过道保持5Pa以上的相对负压；将工序1）中经干燥灭菌后的注射剂瓶送入分装轨道时，先向空瓶充入经0.22μm膜过滤器过滤的氮气，空瓶分装药品后，再向药品充入氮气，然后盖经工序2）处理的胶塞；根据计算的标准装量调试好分装机进行分装，然后送入轧盖室进行轧盖即得注射用头孢西丁钠，轧盖所用的铝盖为经工序2）处理的铝盖；

洗瓶工序、胶塞处理工序、铝盖处理工序、头孢西丁钠分装工序操作时所在的洁净区进行甲醛熏蒸灭菌，甲醛用量10ml/m³房间体积，熏蒸灭菌后用甲醛相同量的氨水中和甲醛；熏蒸灭菌时无菌室温度应达到28℃~30℃，相对湿度为70%~80%。

2.根据权利要求1所述的注射用头孢西丁钠的制备方法，其特征在于，所述工序1）中超声清洗的频率为40kHz。

3.根据权利要求1所述的注射用头孢西丁钠的制备方法，其特征在于，所述pH值为6.8-7.0。

4.根据权利要求1所述的注射用头孢西丁钠的制备方法，其特征在于，所述杂质采用高效液相色谱法测定，测定方法为：

色谱条件与系统适应性试验：用苯基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为水，用甲酸调pH至2.7；流动相B为乙腈；按下表进行线性梯度洗脱：

流速为每分钟1.0ml；检测波长为235nm，取头孢西丁对照品适量，用磷酸盐缓冲液溶解并稀释制成每1ml中含头孢西丁0.25mg的溶液，于70℃放置1小时，冷却至室温，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，头孢西丁的保留时间约为35分钟，头孢西丁峰与其相对保留时间约为0.8处的杂质峰的分离度应大于5.0；

测定方法：取制备的注射用头孢西丁钠50mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液，量取供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，用上述磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录测定结果。

5.根据权利要求4所述的注射用头孢西丁钠的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的制备方法为：称取磷酸氢二钾34.836g，加水1000ml溶解，用磷酸调节pH值至6.8，取20ml，加水稀释至1000ml。