CN102875697B - 一种利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种从猪小肠粘膜中分离生化药物的工艺，特别涉及一种利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺。该利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，其特殊之处在于：其包括以下步骤（1）酶解；（2）吸附；（3）洗脱、沉淀脱盐、脱水：将过滤后所得的树脂经洗脱、沉脱盐淀、脱水干燥制得肝素钠。本发明的有益效果是：巧妙的化解了酶解和吸附过程中对盐度要求不同的矛盾，避免高温降解肝素钠，肝素钠活性损失小，质量稳定，使生产成本大大降低，利润可提高40％以上。

Description

一种利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺

（一）        技术领域

本发明涉及一种从猪小肠粘膜中分离生化药物的工艺，特别涉及一种利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺。

（二）        背景技术

肝素是一种广泛存在于哺乳动物组织中的黏多糖，主要存在于肥大细胞中，具有抗凝血作用，被广泛用于手术和脑血栓、心肌梗塞等的治疗。肝素的分子量大约3000—37500。肝素钠是肝素的钠盐。肝素钠作为天然抗凝血物质受到世界各国的重视．也是我国主要的出口药物之一．随着研究的深入，人们发现肝素钠不但有抗凝、抗血栓形成和调节血脂的作用，还具有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等功能。猪小肠是肝素钠的重要来源之一，但是传统生产工艺在酶解时一次性加盐，如果加盐不超过3%，不能提升溶液中钠离子含量，肝素钠生成结合率低；如果加盐超过3%，则细胞分解时发生盐析作用，肝素析出率低，且树脂在高盐浓度下吸附率低，肝素钠产率低，肝素钠产品质量不稳定。

（三）        发明内容

本发明为了弥补现有生产技术的不足，解决了酶解和吸附过程中对盐度要求不同的矛盾，提供了一种利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，本发明肝素解离完全，肝素与钠离子结合率高，吸附率高，并实现了吸附时分解液快速降温防止肝素酶快速裂解肝素钠，收率高，肝素钠活性损失小，质量稳定。

本发明是通过如下技术方案实现的： 

一种利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，其特殊之处在于：其包括以下步骤（1）酶解：将猪小肠中粘膜取出，与水一起置于酶解罐中，粘膜与水的重量比为1:7-9，搅拌均匀后加入蛋白酶调节所得料液的pH值为8-9，加热至温度为55-58℃，然后加入肠衣专用盐至料液的盐度为2.2%-2.5%，保温1-3h，再加入肠衣专用盐至料液的盐度为4.5%-5.0%，保温0.2-1h，继续加热使温度达到80-85℃，保温20-50min后，过80目膜过滤，收集过滤液；

（2）吸附：将上述所得过滤液加入吸附罐中，搅拌，然后加水至盐度为2.2%-2.5%，温度为55-58℃，再加入树脂，搅拌8-10h，过滤，放出废液，收集过滤树脂；

（3）洗脱、沉淀脱盐、脱水：将过滤后所得的树脂经洗脱、沉脱盐淀、脱水干燥制得肝素钠。                                                                                   

本发明的利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，步骤（1）中，添加碱性蛋白酶，该碱性蛋白酶与酶解中粘膜的重量比为1：500，用尼龙布过滤，收集过滤液，其中碱性蛋白酶属于一种丝氨酸脆外高碱性蛋白酶，它能水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸，具有较强的分解蛋白质的能力。

本发明的利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，步骤（2）中树脂的添加量按每根猪小肠加入20-30g树脂的比例添加。

本发明的利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，步骤（3）中，

洗脱：

（a）：反复冲洗过滤后的树脂；将冲洗干净的树脂倒入洗脱器中，加入质量分数为5%-7%的盐水，温度保持在40-60℃，开启搅拌机转速为20-40r/min，搅拌10-60min；

（b）：随后将废液倒掉，加入质量分数为15%-30%的盐水，温度保持在40-60℃，开启搅拌机转速20-40r/min，搅拌2-4h后，收集洗脱液；

（c）：重复步骤（b），将两次收集的洗脱液合并待用；

（d）：步骤（c）收集完洗脱液后，再接着加入质量分数为15%-30%的盐水，温度保持在40-60℃，开启搅拌机转速20-40r/min，搅拌10-60min后，收集洗脱液做高浓度盐水循环使用。

沉淀脱盐：

将洗脱液过滤移入沉淀罐中，边搅拌边加入质量分数为80%-85%的乙醇，乙醇与洗脱液的体积比为1.8-2.2:1，搅匀密封沉淀20-30h，收集沉淀物待用；

脱水：将收集的沉淀物滤干脱水；将脱水后的沉淀物移入烘箱在80-90℃下烘干6-8h即得肝素钠。

本发明的利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，所述的盐水是由肠衣专用盐加水配制而成。

本发明的有益效果是：巧妙的化解了酶解和吸附过程中对盐度要求不同的矛盾，低盐浓度分解完毕，再加盐提升钠离子含量，使肝素生成率高。此后，加水稀释盐分至低盐，提高了树脂吸附率，且快速冷却分解液，避免高温降解肝素钠，肝素钠活性损失小，质量稳定，利用旧工艺生产1亿个单位的肝素钠，需要1800～2000根猪小肠，而利用本发明的制备方法生产1亿个单位的肝素钠，只需要1400～1500根猪小肠，且肝素钠效价和活性都有大幅度提高，从而使生产成本大大降低，利润可提高40％以上。

（四）        具体实施方式  

实施例1：

本实施例中一种利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，采用如下步骤：

（1）酶解：

将520根猪小肠中的粘膜420kg从猪小肠中取出置于粘膜池中，通过粘膜泵，将该粘膜从粘膜池打入酶解罐中，将3360kg水加入酶解罐中，打开搅拌机进行搅拌，转速为50r/min，搅拌均匀，再加入840g碱性蛋白酶到酶解罐中，调节pH值为8.0；打开蒸汽阀门使温度达到55℃，加入100kg肠衣专用盐，用盐度计测其盐度达到2.5%，保温1.5h；恒温结束后，加入100kg肠衣专用盐，用盐度计测其盐度达到4.8%，保温0.5h，再打开蒸汽阀门继续加温，使温度达到80℃，停止加温，保温30min；保温后，即刻用80目尼龙布过滤，收集过滤液用于吸附。

（2）吸附：

将酶解过滤液打入吸附罐中，打开搅拌机，转速为50r/min，加入水，温度降到58℃，调节盐度至2.5%，保持溶液的pH值为8.0；按每根猪小肠加入25g树脂的比例需将10kg树脂加入吸附罐中，搅拌8h；自然冷却温度到45℃，放出废液，用80目尼龙丝袋收集过滤树脂。

（3）洗脱：

（a）：将放入尼龙丝袋中的树脂反复冲洗；将冲洗干净的树脂倒入洗脱器中，加入质量分数为5%的盐水，加入盐水的量刚好没过树脂，温度保持在50℃，开启搅拌机转速为30r/min，搅拌30min；

（b）：随后将废液倒掉，加入质量分数为22%的盐水，加入盐水的量刚好没过树脂，温度保持在50℃，开启搅拌机转速30r/min，搅拌3h后，收集洗脱液；

（c）：重复步骤（b），将两次收集的洗脱液合并待用；

（d）：步骤（c）收集完洗脱液后，再接着加入质量分数为22%的盐水，温度保持在50℃，开启搅拌机转速30r/min，搅拌30min后，收集洗脱液做高浓度盐水循环使用；

盐水是由肠衣专用盐加水配制而成。

（4）沉淀脱盐：

将洗脱液过滤移入沉淀罐中，边搅拌边加入质量分数为80%的预冷过的乙醇，加入乙醇的体积量为洗脱液的两倍，使乙醇浓度降到40％，搅匀密封沉淀24h；虹吸上层清液用于回收乙醇，收集沉淀物待用。

（5）脱水干燥：

将收集的沉淀物滤干脱水；将脱水后的沉淀物移入烘箱在80℃下用蒸汽干燥6h，烘干即得肝素钠。

肠衣专用盐为江苏井神盐化股份有限公司生产，该产品中：氯化钠含量≥99.10%，水份含量≤0.30%，水不溶物含量 ≤0.03%，铁（Fe）mg/kg≤5.00，松散剂 mg/kg≤5.00。树脂为德国拜耳树脂。

实施例2：

本实施例中一种利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，采用如下步骤：

（1）酶解：

将477根猪小肠中的310kg粘膜从猪小肠中取出置于粘膜池中，打开粘膜泵，将该粘膜从粘膜池打入酶解罐中，加入2790kg水至酶解罐中，打开搅拌机进行搅拌，转速为50r/min，搅拌均匀，再加入620g碱性蛋白酶到酶解罐中，调节pH值为8.5；打开蒸汽阀门使温度达到58℃，加入70kg肠衣专用盐，用盐度计测其盐度达到2.2%，保温1h；恒温结束后，加入肠衣专用盐93kg，用盐度计测其盐度达到5.0%，保温0.2h， 再打开蒸汽阀门继续加温，使温度达到80℃，停止加温，保温20min；保温后，即刻用80目尼龙布过滤，收集过滤液用于吸附。

（2）吸附：

将酶解过滤液打入吸附罐中，打开搅拌机，转速为50r/min，加入水，使吸附罐中的温度降到56℃，保持溶液的pH值为7.5，测分解液盐度2.2%；按每根猪小肠加入20g树脂的比例，将9.54kg树脂加入吸附罐中，搅拌10h；自然冷却温度到42℃，放出废液，用80目尼龙丝袋收集过滤树脂。

（3）洗脱：

（a）：将放入尼龙丝袋中的树脂反复冲洗；将冲洗干净的树脂倒入洗脱器中，加入质量分数为6%的盐水，加入盐水的量刚好没过树脂，温度保持在40℃，开启搅拌机转速为20r/min，搅拌60min；

（b）：随后将废液倒掉，加入质量分数为30%的盐水，加入盐水的量刚好没过树脂，温度保持在60℃，开启搅拌机转速20r/min，搅拌4h后，收集洗脱液；

（c）：重复（b）的步骤一次，将两次收集的洗脱液合并待用；

（d）：步骤（c）收集完洗脱液后，再接着加入质量分数为30%的盐水，温度保持在52℃，开启搅拌机转速30r/min，搅拌60min后，收集洗脱液做高浓度盐水循环使用；

盐水是由肠衣专用盐加水配制而成。

（4）沉淀脱盐：

将洗脱液过滤移入沉淀罐中，边搅拌边加入质量分数为80%的预冷过的乙醇，加入乙醇的体积量为洗脱液的1.8倍，使乙醇浓度降到41％，搅匀密封沉淀30h；虹吸上层清液用于回收乙醇，收集沉淀物待用；

（5）脱水干燥：

将收集的沉淀物滤干脱水；将脱水后的沉淀物移入烘箱在80℃下用蒸汽干燥8h，烘干即得肝素钠。

肠衣专用盐为江苏井神盐化股份有限公司生产，该产品中：氯化钠含量≥99.10%，水份含量≤0.30%，水不溶物含量 ≤0.03%，铁（Fe）mg/kg≤5.00，松散剂 mg/kg≤5.00。树脂为德国拜耳树脂。

实施例3：

本实施例中一种利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，采用如下步骤：

（1）酶解：

将867根猪小肠中的粘膜520kg从猪小肠中取出置于粘膜池中，打开粘膜泵，将该粘膜从粘膜池打入酶解罐中，将3640kg水加入酶解罐中，打开搅拌机进行搅拌，转速为50r/min，搅拌均匀，再加入1040g碱性蛋白酶到酶解罐中，调节pH值为9；打开蒸汽阀门使温度达到56℃，加入105kg肠衣专用盐，用盐度计测其盐度达到2.4%，保温1.5h；恒温结束后，加入肠衣专用盐91kg，测其盐度为4.5%，保温1h，再打开蒸汽阀门继续加温，使温度达到85℃，停止加温，保温50min；保温后，即刻用80目尼龙布过滤，收集过滤液用于吸附。

（2）吸附：

将酶解过滤液打入吸附罐中，打开搅拌机，转速为50r/min，加入水至吸附罐中，吸附罐中的温度降到55℃，保持溶液的pH值为8.0，调节盐度2.3%；按每根猪小肠加入30g树脂的比例，将26kg树脂加入吸附罐中，搅拌9h；自然冷却温度到45℃，放出废液，用80目尼龙丝袋收集过滤树脂。

（3）洗脱：

（a）：将放入尼龙丝袋中的树脂反复冲洗；将冲洗干净的树脂倒入洗脱器中，加入质量分数为7%的盐水，加入盐水的量刚好没过树脂，温度保持在60℃，开启搅拌机转速为40r/min，搅拌10min；

（b）：随后将废液倒掉，加入质量分数为15%的盐水，加入盐水的量刚好没过树脂，温度保持在40℃，开启搅拌机转速40r/min，搅拌2h后，收集洗脱液；

（c）：重复步骤（b），将两次收集的洗脱液合并待用；

（d）：步骤（c）收集完洗脱液后，再接着加入质量分数为15%的盐水，温度保持在40℃，开启搅拌机转速40r/min，搅拌10min后，收集洗脱液做高浓度盐水循环使用；

盐水是由肠衣专用盐加水配制而成。

（4）沉淀脱盐：

将洗脱液过滤移入沉淀罐中，边搅拌边加入质量分数为85%的预冷过的乙醇，加入乙醇的体积量为洗脱液的2.2倍，使乙醇浓度降到45％，调pH值至8.0，搅匀密封沉淀20h；虹吸上层清液用于回收乙醇，收集沉淀物待用；

（5）脱水干燥：

将收集的沉淀物滤干脱水；将脱水后的沉淀物移入烘箱在90℃下用蒸汽干燥6h，烘干即得肝素钠。

上述肠衣专用盐为江苏井神盐化股份有限公司生产，该肠衣专用盐中：氯化钠含量≥99.10%，水份含量≤0.30%，水不溶物含量 ≤0.03%，铁（Fe）mg/kg≤5.00，松散剂 mg/kg≤5.00。树脂为德国拜耳树脂。

Claims (3)

1.一种利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，其特征在于：其包括以下步骤：

（1）酶解：将猪小肠中粘膜取出，与水一起置于酶解罐中，粘膜与水的重量比为1:7-9，搅拌均匀后加入蛋白酶调节所得料液的pH值为8-9，加热至温度为55-58℃，然后加入肠衣专用盐至料液的盐度为2.2%-2.5%，保温1-3h，再加入肠衣专用盐至料液的盐度为4.5%-5.0%，保温0.2-1h，继续加热使温度达到80-85℃，保温20-50min后，过80目膜过滤，收集过滤液，添加碱性蛋白酶，该碱性蛋白酶与酶解中粘膜的重量比为1：500，用尼龙布过滤；

（2）吸附：将上述所得过滤液加入吸附罐中，搅拌，然后加水至盐度为2.2%-2.5%，温度为55-58℃，再加入树脂，搅拌8-10h，过滤，放出废液，收集过滤树脂，树脂的添加量按每根猪小肠加入20-30g树脂的比例添加；

（3）洗脱、沉淀脱盐、脱水：将过滤后所得的树脂经洗脱、沉脱盐淀、脱水干燥制得肝素钠。

2.根据权利要求1所述的利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，其特征在于：步骤（3）中，

洗脱：

（a）：反复冲洗过滤后的树脂；将冲洗干净的树脂倒入洗脱器中，加入质量分数为5%-7%的盐水，温度保持在40-60℃，开启搅拌机转速为20-40r/min，搅拌10-60min；

（b）：随后将废液倒掉，加入质量分数为15%-30%的盐水，温度保持在40-60℃，开启搅拌机转速20-40r/min，搅拌2-4h后，收集洗脱液；

（c）：重复步骤（b），将两次收集的洗脱液合并待用；

（d）：步骤（c）收集完洗脱液后，再接着加入质量分数为15%-30%的盐水，温度保持在40-60℃，开启搅拌机转速20-40r/min，搅拌10-60min后，收集洗脱液做高浓度盐水循环使用；

沉淀脱盐：

将洗脱液过滤移入沉淀罐中，边搅拌边加入质量分数为80%-85%的乙醇，乙醇与洗脱液的体积比为1.8-2.2:1，搅匀密封沉淀20-30h，收集沉淀物待用；

脱水：将收集的沉淀物滤干脱水；将脱水后的沉淀物移入烘箱在80-90℃下烘干6-8h即得肝素钠。

3.根据权利要求2所述的利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，其特征在于：所述的盐水是由肠衣专用盐加水配制而成。