CN102860440A

CN102860440A - 猪用复合益生菌制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN102860440A
Application number: CN201210391466XA
Authority: CN
Inventors: 徐春厚; 刘颖; 谢为天; 赵生才; 邝雪梅
Original assignee: Guangdong Ocean University
Current assignee: Guangdong Ocean University
Priority date: 2012-10-16
Filing date: 2012-10-16
Publication date: 2013-01-09

Abstract

本发明涉及一种猪用复合益生菌制剂及其制备方法，其组分和重量份如下：鼠李糖乳杆菌制剂20-30、粪肠球菌制剂15-25、乳酸芽孢杆菌制剂8-18、蜡状芽孢杆菌制剂7-17、枯草芽孢杆菌制剂10-20、啤酒酵母制剂10-20；各组分制备所用菌株分别为鼠李糖乳杆菌LT22、粪肠球菌CH13、芽孢杆菌SC27、蜡状芽孢杆菌SL1、枯草芽孢杆菌和啤酒酵母；各组分经活化培养、扩大培养、冷冻干燥和麸皮吸附等工艺制得，按比例混合均匀即得猪用复合益生菌制剂，分为液体剂型和固体剂型。该制剂含有高活性的多株益生菌，菌体细胞抵抗力强、代谢产物丰富，对猪有营养、免疫和益生作用，尤其对妊娠母猪和断奶仔猪使用效果好。

Description

猪用复合益生菌制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种微生物饲料添加剂，具体涉及一种猪用复合益生菌制剂及其制备方法，属于微生态制剂及饲料添加剂技术领域。

背景技术

自20世纪以来，抗生素和抗菌药已广泛应用于畜牧生产中，但长期使用造成的药物残留、耐药性、动物抗病力降低及动物产品质量下降已成为一个严重且亟待解决的问题。世界各国纷纷采取官方强制措施，对饲用抗生素的种类、使用方法、剂量等方面严加限制，甚至有不少国家已明令禁止在动物养殖及饲料中添加使用抗生素。

益生菌制剂是近年来国内外迅速崛起的一类微生物制剂，它作为一种新型饲料添加剂，无毒副作用且具有调节肠道菌群平衡、促进动物生长，提高饲料转化率和增强动物机体免疫功能等优点，已被广泛应用于畜禽养殖业和饲料业，成为了饲用抗生素的理想替代品。

CN101199558A公布了一种禽用复合益生菌制剂及其制备方法，由嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、纤维二糖乳杆菌等菌种制得；CN101507466A公开了一种生物益生素及其制备方法，其菌株液是以占50~60%重量比的乳杆菌液为主要成分组成的四联菌，但是乳杆菌抵抗力较弱，保存期较短，本发明是由鼠李糖乳杆菌LT22、粪肠球菌CH13、产乳酸的芽孢杆菌SC27、蜡状芽孢杆菌SL1、枯草芽孢杆菌和啤酒酵母等6种益生菌经过特殊的生产工艺制备而成，含有高活性的益生菌及乳酸、抑菌活性物质、酶类、维生素等代谢产物；可提高猪的饲料转化率、促进生长、改善料肉比；能调节猪肠道菌群平衡，抑制病原微生物生长，提高猪的抗病能力；能降低排泄物中有害物质的含量，使猪舍中的臭味明显减少。

猪用复合益生菌制剂可以替代抗生素在猪饲料中添加，使用效果更好，且无任何毒副作用、不在体内残留、不引起耐药性，是绿色环保型饲料添加剂。该制剂的开发与应用，对养殖业及饲料业的发展有积极促进作用，对增加农民收入、公共卫生、人类健康和环境保护均有重要作用和意义。

发明内容

本发明针对养猪场和饲料厂大量使用抗生素的弊端及现有产品的不足，提供一种猪用复合益生菌制剂及其制备方法。

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：

猪用复合益生菌制剂，按重量份由以下益生菌制剂组分和数量组成：

鼠李糖乳杆菌制剂，20-30份；粪肠球菌制剂，15-25份；乳酸芽孢杆菌制剂，8-18份；蜡状芽孢杆菌制剂，7-17份；枯草芽孢杆菌制剂，10-20份；啤酒酵母制剂，10-20份。

猪用复合益生菌制剂的制备方法，步骤如下：

（1）取鼠李糖乳杆菌LT22，经35℃ ~ 37℃ 活化培养24h ~ 36h，然后经33℃ ~ 37℃静置扩大培养48h ~ 60h，期间每隔12h摇动一次培养基，获得菌体浓度在1 x 10¹²CFU/mL以上的液体鼠李糖乳杆菌制剂；

将液体鼠李糖乳杆菌制剂与冻干保护剂混合，二者重量比为1:1，低温冷冻干燥，得鼠李糖乳杆菌菌粉；

将鼠李糖乳杆菌菌粉与麸皮混合，二者重量比为1:10，得固体鼠李糖乳杆菌制剂，菌数在1 x 10¹⁰CFU/g以上；

（2）取粪肠球菌CH13，经35℃ ~ 37℃ 活化培养24h ~ 36h，然后经33℃ ~ 37℃静置扩大培养48h ~ 60h，期间每隔12h摇动一次培养基，获得菌体浓度在1 x 10¹¹CFU/mL以上的液体粪肠球菌制剂；

将液体粪肠球菌制剂与冻干保护剂混合，二者重量比为1:1，低温冷冻干燥，得粪肠球菌菌粉；

将粪肠球菌菌粉与麸皮混合，二者重量比为1:10，得固体粪肠球菌制剂，菌数在1 x 10⁹CFU/g以上；

（3）取芽孢杆菌SC27，经35℃ ~ 38℃ 活化培养18h ~ 24h，然后经33℃ ~ 37℃、140r/min ~ 160r/min摇床扩大培养48h ~ 60h，获得菌体浓度在1 x 10¹⁰CFU/mL以上的液体乳酸芽孢杆菌制剂；

将液体乳酸芽孢杆菌制剂用麸皮吸附，二者重量比为1:2.5，50℃ ~ 60℃风干，粉碎后即为固体乳酸芽孢杆菌制剂，菌数在1 x 10⁹CFU/g以上；

（4）取蜡状芽孢杆菌SL1，经35℃ ~ 38℃ 活化培养18h ~ 24h，然后经33℃ ~ 37℃、140r/min ~ 160r/min摇床扩大培养40h ~ 48h，获得菌体浓度在1 x 10⁹CFU/mL以上的液体蜡状芽孢杆菌制剂；

将液体蜡状芽孢杆菌制剂用麸皮吸附，二者重量比为1:2.5，50℃ ~ 60℃风干，粉碎后即为固体蜡状芽孢杆菌制剂，菌数在1 x 10⁸CFU/g以上；

（5）取枯草芽孢杆菌，经35℃ ~ 38℃ 活化培养18h ~ 24h，然后经33℃ ~ 37℃、140r/min ~ 160r/min摇床扩大培养40h ~ 48h，获得菌体浓度在1 x 10⁹CFU/mL以上的液体枯草芽孢杆菌制剂；

将液体枯草芽孢杆菌制剂用麸皮吸附，二者重量比为1:2.5，50℃ ~ 60℃风干，粉碎后即为固体枯草芽孢杆菌制剂，菌数在1 x 10⁸CFU/g以上；

（6）取啤酒酵母，经28℃ ~ 30℃ 活化培养24h ~ 36h，然后经27℃ ~ 32℃、140r/min ~ 160r/min摇床扩大培养48h ~ 60h，获得菌体浓度在1 x 10¹⁰CFU/mL以上的液体啤酒酵母制剂；

将液体啤酒酵母制剂用麸皮吸附，二者重量比为1:2.5，40℃ ~ 50℃风干，粉碎后即为固体啤酒酵母制剂，菌数在2 x 10⁸CFU/g以上；

（7）按按重量份，将上述液体鼠李糖乳杆菌制剂20-30份、液体粪肠球菌制剂15-25份、液体乳酸芽孢杆菌制剂8-18份、液体蜡状芽孢杆菌制剂7-17份、液体枯草芽孢杆菌制剂10-20份和液体啤酒酵母制剂10-20份混合均匀，即得猪用复合益生菌制剂液体剂型；

按重量份，将上述固体鼠李糖乳杆菌制剂20-30份、固体粪肠球菌制剂15-25份、固体乳酸芽孢杆菌制剂8-18份、固体蜡状芽孢杆菌制剂7-17份、固体枯草芽孢杆菌制剂10-20份和固体啤酒酵母制剂10-20份混合均匀，即得猪用复合益生菌制剂固体剂型。

所述步骤（1）、（2）中的活化培养用MRS培养基，培养基组分如下，均为重量百分比：

1%蛋白胨，1%牛肉膏， 0.5%酵母膏，2%葡萄糖，0.2% K₂HPO₄， 0.5%乙酸钠，0.2%柠檬酸二铵，0.058% MgSO₄·7H₂O，0.025% MnSO₄·H₂O，0.1%吐温80，余量水，pH6.2~6.4。

所述步骤（1）、（2）中的扩大培养，接种量为5%，培养基组分如下，均为重量百分比：

1%大豆蛋白胨，0.5%酵母膏，2%葡萄糖，0.1% NaCl，0.03% K₂HPO₄，0.02% MgSO₄·7H₂0，余量水，pH值自然。

所述步骤（1）、（2）中的冻干保护剂，其成分如下，均为重量百分比：

15%脱脂奶粉，3%蔗糖，2%海藻糖，余量水；脱脂奶粉为市售，蛋白含量为32% ~ 34%。

所述步骤（3）、（4）、（5）中的活化培养用营养肉汤培养基，培养基组分如下，均为重量百分比：1%蛋白胨，0.5%牛肉膏，0.5% NaCl，0.1% K₂HPO₄，余量水，pH7.2 ~ pH7.6。

所述步骤（3）、（4）、（5）中的扩大培养，接种量为8%，培养基组分如下，均为重量百分比：1%大豆蛋白胨，0.5%酵母膏，2%葡萄糖，0.1% NaCl，0.1% K₂HPO₄，余量水，pH值自然。

所述步骤（6）中的活化培养用YPD培养基，培养基组分如下，均为重量百分比：2%蛋白胨，1%酵母膏，2%葡萄糖，余量水。

所述步骤（6）中的扩大培养，接种量为5%，培养基组分如下，均为重量百分比：1%大豆蛋白胨，1%酵母膏，2%葡萄糖，0.03% K₂HPO₄，0.02% MgSO₄·7H₂0，余量水，pH值自然。

上述鼠李糖乳杆菌LT22（Lactobacillus rhamnosus LT22）、粪肠球菌CH13（Enterococcus faecalis CH13）、芽孢杆菌SC27（Bacillus sp. SC27）、蜡状芽孢杆菌SL1（Bacillus cereus SL1），均为分离鉴定的自有菌株；枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）为普通市售菌株。

上述培养基中的大豆蛋白胨为市售医药级，酵母膏和葡萄糖为市售食用级。

上述培养基均采用121℃、20min的条件进行灭菌处理；冻干保护剂采用100℃、20min的条件进行消毒处理；大规模生产时，扩大培养基可采用流通蒸汽消毒法进行处理，扩大培养可以将活化的菌种接种到液体发酵罐中进行培养。

上述吸附剂为麸皮，市售，经80目筛粉碎后使用。

本发明的方法制备的猪用复合益生菌制剂固体剂型，常温保存一年，细菌总数不低于1 x 10⁹CFU/g。

本发明的猪用复合益生菌制剂的有效成分及有益效果在于：

（1）本发明的猪用复合益生菌制剂含有鼠李糖乳杆菌LT22、粪肠球菌CH13、芽孢杆菌SC27、蜡状芽孢杆菌SL1、枯草芽孢杆菌和啤酒酵母等6种高活性的益生菌株，而且含有乳酸、抑菌活性物质、蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、维生素等胞外代谢产物；

（2）鼠李糖乳杆菌LT22和粪肠球菌CH13具有高产乳酸、抑菌活性物质和生长速度快的优良性能，经过冻干保护剂和低温冷冻干燥法处理，菌株处于一种休眠状态，可耐高温，便于制粒和长时间保藏；

（3）3株芽孢杆菌易形成芽孢，能产生蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶；芽孢杆菌SC27和蜡状芽孢杆菌SL1亦可产生乳酸和抑菌活性物质；啤酒酵母的菌体蛋白、维生素含量高，对机体有营养作用；

（4）以每头猪每日2~4mL的剂量添加到饲料或饮用水中，用于饲喂妊娠母猪和哺乳母猪，以0.5%~1%量比的剂量添加到饲料或饮用水中，用于饲喂断奶仔猪和小猪，对猪有营养、免疫和益生作用，可使妊娠母猪分娩的死产、畸形、木乃伊和体弱仔猪的总数量比对照组减少55%，且出生仔猪平均重比对照组增加10%；使断奶仔猪平均日增重提高8%。

具体实施方式

下面通过实例对本发明做进一步详细说明，这些实例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。

实施例1

猪用复合益生菌制剂液体剂型的制备，步骤如下：

（1）鼠李糖乳杆菌制剂的制备：取鼠李糖乳杆菌LT22，经36±1℃活化培养36h，然后经35±1℃静置扩大培养60h，期间每隔12h摇动一次培养基，获得菌体浓度为2.6 x 10¹²CFU/mL的液体鼠李糖乳杆菌制剂；

（2）粪肠球菌制剂的制备：取粪肠球菌CH13，经36±1℃活化培养36h，然后经35±1℃静置扩大培养48h，期间每隔12h摇动一次培养基，获得菌体浓度为3.5 x 10¹¹CFU/mL的液体粪肠球菌制剂；

（3）乳酸芽孢杆菌制剂的制备：取芽孢杆菌SC27，经36±1℃活化培养24h，然后经36±1℃、150r/min摇床扩大培养60h，获得菌体浓度为4.4 x10¹⁰CFU/mL的液体乳酸芽孢杆菌制剂；

（4）蜡状芽孢杆菌制剂的制备：取蜡状芽孢杆菌SL1，经36±1℃活化培养24h，然后经36±1℃、150r/min摇床扩大培养48h，获得菌体浓度为6.3 x 10⁹CFU/mL的液体蜡状芽孢杆菌制剂；

（5）枯草芽孢杆菌制剂的制备：取枯草芽孢杆菌，经36±1℃ 活化培养24h，然后经36±1℃、150r/min摇床扩大培养48h，获得菌体浓度为3.0 x 10⁹CFU/mL的液体枯草芽孢杆菌制剂；

（6）啤酒酵母制剂的制备：取啤酒酵母，经29±1℃ 活化培养36h，然后经29±1℃、160r/min摇床扩大培养60h，获得菌体浓度为6.9 x 10¹⁰CFU/mL的液体啤酒酵母制剂；

（7）猪用复合益生菌制剂的制备：按重量份，将上述液体鼠李糖乳杆菌制剂25份、液体粪肠球菌制剂20份、液体乳酸芽孢杆菌制剂13份、液体蜡状芽孢杆菌制剂12份、液体枯草芽孢杆菌制剂15份和液体啤酒酵母制剂15份混合均匀，得20L猪用复合益生菌制剂液体剂型，细菌总数为7.3 x 10¹¹CFU/mL。

实施例2

猪用复合益生菌制剂固体剂型的制备，步骤如下：

液体鼠李糖乳杆菌制剂、液体粪肠球菌制剂、液体乳酸芽孢杆菌制剂、液体蜡状芽孢杆菌制剂、液体枯草芽孢杆菌制剂和液体啤酒酵母制剂的制备方法与实施例1相同；

（1）鼠李糖乳杆菌制剂的制备：将液体鼠李糖乳杆菌制剂与冻干保护剂混合，二者重量比为1:1，低温冷冻干燥，得鼠李糖乳杆菌菌粉；将鼠李糖乳杆菌菌粉与麸皮混合，二者重量比为1:10，得固体鼠李糖乳杆菌制剂，菌数为3.2 x 10¹⁰CFU/g；

（2）粪肠球菌制剂的制备：将液体粪肠球菌制剂与冻干保护剂混合，二者重量比为1:1，低温冷冻干燥，得粪肠球菌菌粉；将粪肠球菌菌粉与麸皮混合，二者重量比为1:10，得固体粪肠球菌制剂，菌数为3.9 x 10⁹CFU/g；

（3）乳酸芽孢杆菌制剂的制备：将液体乳酸芽孢杆菌制剂用麸皮吸附，二者重量比为1:2.5，60℃风干，粉碎后即为固体乳酸芽孢杆菌制剂，菌数为5.5 x 10⁹CFU/g；

（4）蜡状芽孢杆菌制剂的制备：将液体蜡状芽孢杆菌制剂用麸皮吸附，二者重量比为1:2.5，60℃风干，粉碎后即为固体蜡状芽孢杆菌制剂，菌数为6.0 x 10⁸CFU/g；

（5）枯草芽孢杆菌制剂的制备：将液体枯草芽孢杆菌制剂用麸皮吸附，二者重量比为1:2.5，60℃风干，粉碎后即为固体枯草芽孢杆菌制剂，菌数为6.5 x 10⁸CFU/g；

（6）啤酒酵母制剂的制备：将液体啤酒酵母制剂用麸皮吸附，二者重量比为1:2.5，45℃风干，粉碎后即为固体啤酒酵母制剂，菌数为5.8 x 10⁸CFU/g；

（7）猪用复合益生菌制剂的制备：按重量份，将上述固体鼠李糖乳杆菌制剂25份、固体粪肠球菌制剂20份、固体乳酸芽孢杆菌制剂13份、固体蜡状芽孢杆菌制剂12份、固体枯草芽孢杆菌制剂15份和固体啤酒酵母制剂15份混合均匀，得50kg猪用复合益生菌制剂固体剂型，细菌总数为9.8 x 10⁹CFU/g。

实施例3

猪用复合益生菌制剂对妊娠母猪生产性能的影响：

选用18头妊娠时间基本相同的二元杂交母猪，分为三组，每组2个重复，每个重复3头母猪；对照组母猪饲喂基础日粮；试验一组和试验二组母猪在分娩前一个月开始饲喂添加猪用复合益生菌制剂液体剂型的基础日粮，剂量为2mL/头和4mL/头；

试验一组、试验二组与对照组比较，总产仔数基本相同，但死产、畸形、木乃伊仔猪和弱仔猪的总数量比对照组减少了36.36%和54.55%，出生仔猪平均重比对照组增加了5.38%和10%，结果见表1；

表1 猪用复合益生菌制剂对妊娠母猪生产性能的影响

组别	试验期/d	试验母猪/头	总产仔数/头	死产	畸形	木乃伊	弱仔	总重量/kg	平均重/kg
										对照组	30	6	71	3	0	1	7	92.6	1.30
试验一组	30	6	68	3	1	0	3	93.0	1.37
										试验二组	30	6	70	1	1	0	3	100.3	1.43

实施例4

猪用复合益生菌制剂对断奶仔猪生产性能的影响：

选用45头28±2d三元杂交断奶仔猪，随机分为3组，每组15头仔猪，公母各半，采用网上平养；对照组仔猪饲喂基础日粮；试验一组和试验二组仔猪喂添加有猪用复合益生菌制剂固体剂型的基础日粮，添加量为0.5%和1%；试验期28d；

试验一组、试验二组的断奶仔猪与对照组比较，平均日增重提高了5.03%和8.06%；料重比降低了4.07%和5.81%；腹泻率降低了74.91%和100%；结果见表2；

表2 猪用复合益生菌制剂对断奶仔猪生产性能的影响

Figure 201210391466X100002DEST_PATH_IMAGE001

Claims

1.猪用复合益生菌制剂，其特征在于：由下列组分组成，均为重量份：

2.一种用于制备权利要求1所述的猪用复合益生菌制剂的方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）鼠李糖乳杆菌制剂的制备

取鼠李糖乳杆菌LT22，经35℃ ~ 37℃ 活化培养24h ~ 36h，然后经33℃ ~ 37℃静置扩大培养48h ~ 60h，期间每隔12h摇动一次培养基，获得菌体浓度在1 x 10¹²CFU/mL以上的液体鼠李糖乳杆菌制剂；

（2）粪肠球菌制剂的制备

取粪肠球菌CH13，经35℃ ~ 37℃ 活化培养24h ~ 36h，然后经33℃ ~ 37℃静置扩大培养48h ~ 60h，期间每隔12h摇动一次培养基，获得菌体浓度在1 x 10¹¹CFU/mL以上的液体粪肠球菌制剂；

（3）乳酸芽孢杆菌制剂的制备

取芽孢杆菌SC27，经35℃ ~ 38℃ 活化培养18h ~ 24h，然后经33℃ ~ 37℃、140r/min ~ 160 r/min摇床扩大培养48h ~ 60h，获得菌体浓度在1 x 10¹⁰CFU/mL以上的液体乳酸芽孢杆菌制剂；

（4）蜡状芽孢杆菌制剂的制备

取蜡状芽孢杆菌SL1，经35℃ ~ 38℃ 活化培养18h ~ 24h，然后经33℃ ~ 37℃、140r/min ~ 160 r/min摇床扩大培养40h ~ 48h，获得菌体浓度在1 x 10⁹CFU/mL以上的液体蜡状芽孢杆菌制剂；

（5）枯草芽孢杆菌制剂的制备

取枯草芽孢杆菌，经35℃ ~ 38℃ 活化培养18h ~ 24h，然后经33℃ ~ 37℃、140r/min ~ 160 r/min摇床扩大培养40h ~ 48h，获得菌体浓度在1 x 10⁹CFU/mL以上的液体枯草芽孢杆菌制剂；

（6）啤酒酵母制剂的制备

取啤酒酵母，经28℃ ~ 30℃ 活化培养24h ~ 36h，然后经27℃ ~ 32℃、140r/min ~ 160r/min摇床扩大培养48h ~ 60h，获得菌体浓度在1 x 10¹⁰CFU/mL以上的液体啤酒酵母制剂；

（7）猪用复合益生菌制剂的制备

按重量份，将上述液体鼠李糖乳杆菌制剂20-30份、液体粪肠球菌制剂15-25份、液体乳酸芽孢杆菌制剂8-18份、液体蜡状芽孢杆菌制剂7-17份、液体枯草芽孢杆菌制剂10-20份和液体啤酒酵母制剂10-20份混合均匀，即得猪用复合益生菌制剂液体剂型；

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）、（2）中的扩大培养，培养基组分如下，各组分含量均为重量百分比：

1%大豆蛋白胨，0.5%酵母膏，2%葡萄糖，0.1% NaCl，0.03% K₂HPO₄，0.02% MgSO₄·7H₂0，余量水，pH值自然；

所述步骤（1）、（2）中的冻干保护剂，其组分如下，均为重量百分比：

15%脱脂奶粉，3%蔗糖，2%海藻糖，余量水。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）、（4）、（5）中的扩大培养，培养基组分如下，均为重量百分比：

1%大豆蛋白胨，0.5%酵母膏，2%葡萄糖，0.1% NaCl，0.1% K₂HPO₄，余量水，pH值自然。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（6）中的扩大培养，培养基组分如下，均为重量百分比：

1%大豆蛋白胨，1%酵母膏，2%葡萄糖，0.03% K₂HPO₄，0.02% MgSO₄·7H₂0，余量水，pH值自然。