CN102854277B - 一种妇科洗液中苦参碱含量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种妇科洗液中苦参碱含量的测定方法，取苦参碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含0.2mg的苦参碱标准溶液，用微孔滤膜过滤，备用；取苦参提取物原料0.25g，超声溶解于流动相溶液，定容至100ml，摇匀，用微孔滤膜过滤，即得苦参提取物供试品溶液；取洗液样品1ml，溶解于流动相溶液，定容至100ml；摇匀，用微孔滤膜过滤，即得洗液供试品溶液；各取10μl的苦参提取物供试品溶液、洗液供试品和苦参碱标准液注入液相色谱仪，测定。本发明的有益效果：提供了一种妇科洗液中有效成分——苦参碱含量的高效液相色谱检验法。
Description
技术领域
本发明涉及一种苦参碱含量测定方法，特别涉及一种妇科洗液中的有效成分——苦参碱的测定方法。
背景技术
苦参碱为豆科植物苦参、苦豆子和山豆根含有的生物碱之一，临床主要用来治疗肝病、心脏病、癌症及病原性感染等。目前苦参碱含量的测定方法有薄层扫描法、毛细管电泳法、高效液相色谱法、气相色谱法、微流控芯片分析法等。高效液相色谱法多采用氨基柱、离子交换柱，洗脱方式也多为梯度洗脱，由于氨基住、离子交换柱造价高、寿命短、保养困难，其他方法操作过程繁琐、重复性差、分析时间长、供试品处理麻烦等，所以很难达到准确测定其中苦参碱的含量的目的，从而造成妇科洗液的可控性差。
以下是部分专利及文献的公开报道。
“清柏洁身洗液中苦参碱含量的测定方法”，专利申请号：200610060119.3，公开号：CN101046467A，包括以下步骤：制备对照品溶液：精密称取苦参碱对照品适量，加甲醇配制成0.01~0.1mg/ml的溶液；制备供试品溶液：精密量取供试品5~20ml，加浓俺试液0.25~1ml，用氯仿振摇提取3次以上，每次15~20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加约5ml氯仿溶解，装入1~5g、80~200目的碱性氧化铝柱，用2~10份氯仿：0~2份甲醇溶液10~50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液即得；吸取对照品及供试品溶液5~40ml，注入液相色谱仪测定，计算得出结果。
“苦参碱液相色谱测定方法”，申请号：200810205059.9，公开号：CN101458235A；包括以下步骤：取苦参碱样品10mg，用甲醇定溶于容量瓶中，超声溶解得供试品样品；取苦参碱对照品5mg，用甲醇定溶于容量瓶中，超声溶解得苦参碱标准液；各取10μl的供试品溶液和苦参碱标准液注入液相色谱仪进行测定；记录峰面积，按外标法以峰面积y对苦参碱含量x计算回归方程，获得所述的回归方程为：
y=1.32×106x-1.16×105
相关系数为0.9996，线性范围为0.32~1.92μg；根据以上步骤测定精密度、24小时稳定性、重现性以及回收率测定。
郭东艳等对复方苦参洗剂中苦参碱的含量测定，具体方法为：采用 ODS C18柱 ( 5μm , 4.6mm×200mm )，流动相为乙腈-0.1 %磷酸 ( 55: 94.5)，检测波长为 210nm，流速为 1.0ml·min-1，柱温：室温。
张成志的苦参片中苦参碱含量的反相高效液相色谱测定，具体方法为：采用高效液相色谱法，色谱柱为 ODS C18烷基硅烷化色谱柱，甲醇—0.05%三乙氨水溶液为流动相(60：40，流速1.0mL·min-1，检测波长：210nm，柱温:40℃。
肖淼生等用高效液相色谱法测定妇安消疹洗液中苦参碱的含量，具体方法为：色谱柱为 Phenomenex Luna C18( 150 mm×4.6mm，5 μm )不锈钢柱；流动相为乙腈-0.02mol·L-1磷酸二氢钾 ( 60:40)；流速为 1ml·min-1；检测波长为 210 nm。
发明内容
本发明的目的是针对上述技术中存在的不足之处，提供一种妇科洗液中苦参碱含量的测定方法，
取苦参碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含0.2mg的苦参碱标准溶液，用微孔滤膜过滤，备用；
取苦参提取物原料0.25g，超声溶解于流动相溶液，定容至100 ml，摇匀，用微孔滤膜过滤，即得苦参提取物供试品溶液；
取洗液样品1 ml，溶解于流动相溶液，定容至100 ml；摇匀，用微孔滤膜过滤，即得洗液供试品溶液；
各取10μl的苦参提取物供试品溶液、洗液供试品和苦参碱标准液注入液相色谱仪，测定。
本发明的有益效果：提供了一种妇科洗液中有效成分——苦参碱含量的高效液相色谱检验法。
附图说明
图1是本发明实施例的苦参碱标准品图谱。
图2是本发明实施例的苦参提取物供试品图谱。
图3是本发明实施例的洗液供试品图谱。
图4是本发明实施例的苦参碱标准品图谱。
图5是本发明实施例的苦参提取物供试品图谱。
图6是本发明实施例的洗液供试品图谱。
图7是本发明实施例的苦参碱标准品图谱。
图8是本发明实施例的苦参提取物供试品图谱。
图9是本发明实施例的洗液供试品图谱。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1。
一．实施仪器与试剂：
Aglient1200高效液相色谱仪，Lichrospher C18色谱柱（4.6*250mm，5um）。色谱纯甲醇、异丙醇，苦参碱标准品。
二．色谱条件：
分析柱： C18（4.6*250mm，5um）色谱柱，流动相：甲醇：异丙醇：水：氨水=52:3:45:0.02（体积比）；流速：1.0ml/min检测波长为220nm。柱温：室温；理论塔板数不低于9000，进样量：10μl。
三．检测步骤：
1.取苦参碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含0.2mg的苦参碱标准溶液，用微孔滤膜过滤，备用；
2.取苦参提取物原料0.25g，超声溶解于流动相溶液，定容至100 ml，摇匀，用微孔滤膜过滤，即得苦参提取物供试品溶液；
3.取洗液样品1 ml，溶解于流动相溶液，定容至100 ml。摇匀，用微孔滤膜过滤，即得洗液供试品溶液；
4.各取10μl的苦参提取物供试品溶液、洗液供试品和苦参碱标准液注入液相色谱仪，测定。
保留时间：11.5~11.9min之间（图1-3）。
四．计算：将测得两个供试品溶液按外标法以峰面积对苦参碱含量计算
m1=mp·s1/sp
m2=mp·s2·100/sp
式中：m1苦参提取物供试品溶液苦参碱浓度，mg/ml
mp苦参碱标准品浓度，mg/ml
s1苦参提取物供试品样品峰面积
sp苦参碱标准品峰面积，
m2洗液样品中苦参碱含量，mg/ml
s2洗液供试样品峰面积。
实施例2，苦参碱含量检测的其他方法。
1. Aglient1200高效液相色谱仪，氨基键合色谱柱。色谱纯乙腈、无水乙醇，磷酸，苦参碱标准品。
2.分析柱： 氨基键合色谱柱，流动相：乙腈:无水乙醇:3％磷酸溶液=80：10：10（体积比）；流速：1.0ml/min检测波长为220nm。柱温：室温；理论塔板数不低于2000，进样量：20μl。
3. 取苦参碱对照品适量，精密称定，加乙腈-无水乙醇（80：20）混合溶液制成每1ml含苦参碱50μg的苦参碱标准溶液，用微孔滤膜过滤，备用；
4.取苦参提取物原料约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液0.5-1ml，密塞放置10分钟，精密加入三氯甲烷50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，加在中性氧化铝柱（100～200目，5g，内径1cm）上，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇（7：3）混合溶液各20ml洗脱，合并收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇适量使溶解，转移至10ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤，即得苦参提取物供试品溶液；
5. 取洗液10ml，真空干燥或水浴蒸干，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液0.5-1ml，密塞放置10分钟，精密加入三氯甲烷50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，加在中性氧化铝柱（100～200目，5g，内径1cm）上，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇（7：3）混合溶液各20ml洗脱，合并收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇适量使溶解，转移至10ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤，即得洗液供试品溶液；
6.各取20μl的苦参提取物供试品溶液、洗液供试品和苦参碱标准液注入液相色谱仪，测定。
保留时间：苦参碱标准品保留时间7.8 min，供试品溶液图谱中未见符合分离度条件的苦参碱（图4-6）。
实施例3。
1. Aglient1200高效液相色谱仪，Lichrospher C18色谱柱（4.6*250mm，5um）。色谱纯甲醇、异丙醇，苦参碱标准品。
2.分析柱： 氨基键合色谱柱，流动相：甲醇：异丙醇：水：氨水=66:5:29:0.02（体积比）；流速：1.0ml/min检测波长为220nm。柱温：室温；理论塔板数不低于2000，进样量：10μl。
3. 取苦参碱对照品0.005g，置于容量瓶，用流动相定容至25ml得苦参碱标准溶液，用微孔滤膜过滤，备用；
4. 取苦参提取物原料称取样品约0.25g，超声溶解于流动相溶液，定容至25ml，摇匀，用微孔滤膜过滤，即得苦参提取物供试品溶液；
5.取洗液样品5ml，溶解于流动相溶液，定容至50ml，摇匀，用微孔滤膜过滤，即得洗液供试品溶液；
6.各取10μl的苦参提取物供试品溶液、洗液供试品和苦参碱标准液注入液相色谱仪，测定。
保留时间：苦参碱标准品保留时间7.05 min，供试品溶液图谱中未见符合分离度条件的苦参碱（图7-9）。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但他们并不是用来限定本发明，任何熟悉此技艺者，在不脱离本发明之精神和范围内，自当可作各种变化或润饰，同样属于本发明之保护范围。因此本发明的保护范围应当以本申请的权利要求所界定的为准。
Claims (3)
1.一种妇科洗液中苦参碱含量的测定方法，
取苦参碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含0.2mg的苦参碱标准溶液，用微孔滤膜过滤，备用；
取苦参提取物原料0.25g，超声溶解于流动相溶液，定容至100 ml，摇匀，用微孔滤膜过滤，即得苦参提取物供试品溶液；
取洗液样品1 ml，溶解于流动相溶液，定容至100 ml；摇匀，用微孔滤膜过滤，即得洗液供试品溶液；
各取10μl的苦参提取物供试品溶液、洗液供试品和苦参碱标准液注入液相色谱仪，测定；
实施仪器与试剂：
Aglient1200高效液相色谱仪，Lichrospher C18色谱柱 4.6*250mm，5μm；色谱纯甲醇、异丙醇，苦参碱标准品；
色谱条件：
分析柱： C18色谱柱 4.6*250mm，5μm，流动相体积比：甲醇：异丙醇：水：氨水=52:3:45:0.02；流速：1.0ml/min检测波长为220nm；柱温：室温；理论塔板数不低于9000，进样量：10μl。
2.根据权利要求1所述的妇科洗液中苦参碱含量的测定方法，其特征在于：
保留时间：苦参碱标准品保留时间11.5~11.9min之间。
3.根据权利要求1所述的妇科洗液中苦参碱含量的测定方法，其特征在于：
将测得两个供试品溶液按外标法以峰面积对苦参碱含量计算，
m1=mp·s1/sp
m2=mp·s2·100/sp
式中：m1苦参提取物供试品溶液苦参碱浓度，mg/ml；
mp苦参碱标准品浓度，mg/ml；
s1苦参提取物供试品样品峰面积；
sp苦参碱标准品峰面积；
m2洗液样品中苦参碱含量，mg/ml；
s2洗液供试样品峰面积。
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