CN102850351A

CN102850351A - 牧马豆中提取金雀花碱的方法

Info

Publication number: CN102850351A
Application number: CN2012103158041A
Authority: CN
Inventors: 纪鹏
Original assignee: SHAANXI RIOTTO VEGETABLE CHEMICAL CO Ltd
Current assignee: SHAANXI RIOTTO VEGETABLE CHEMICAL CO Ltd
Priority date: 2012-08-30
Filing date: 2012-08-30
Publication date: 2013-01-02

Abstract

本发明涉及从牧马豆中分离、提取金雀花碱的方法；目的是解决提取成本高的技术问题；提取方法的步骤包括：脱脂：牧马豆原料粉碎，再用有机溶剂进行脱脂，得脱脂物料；提取：用有机溶剂对脱脂物料进行热回流提取，提取液过滤、浓缩，浓缩液冷却到室温；层析：浓缩液用层析硅胶吸附有效物质；洗脱：将吸附了有效物质的层析硅胶洗除杂质然后用溶剂从层析硅胶中脱洗出含有效物质的脱洗液；层析硅胶吸附分离，分离彻底，生产规模也不受限制，层析硅胶也可重复再生利用；初结晶、重结晶干燥得成品；本发明脱脂用平板式浸出器所用有机溶剂消耗少，提取、重结晶所用溶剂常见且消耗也较少，还可回收重复利用，使生产成本降低。

Description

牧马豆中提取金雀花碱的方法

技术领域

本发明涉及从牧马豆中分离、提取金雀花碱的方法。

背景技术

金雀花碱，分子式：C₁₁H₁₄N₂O，分子量：190.24，CAS：485-35-8。常态下是一种斜方棱柱黄白色粉末，通常由豆科槐属植物苦豆子的种子中提取得到。临床用0.15%的金雀花碱水溶液供肌肉或静脉注射，抢救因手术和各种创伤引起的反射性呼吸暂停、休克和新生儿窒息等。金雀花碱还具有抗心率失常、抗微生物感染、抗溃疡、升高白细胞等多方面的药理作用，特别是该类化合物较强的抗癌活性。因此在医药领域具有重要价值。

目前，金雀花碱的获得方法主要是化学合成法和植物中提取两大途径。

采用合成法生产金雀花碱，合成步骤繁琐，对环境污染严重。植物提取成本较低，由于金雀花碱存在好多种植物当中，因牧马豆中金雀花碱的含量较高，故现在大多都是从牧马豆中提取分离金雀花碱的方法。

2010年09月15日公开的分类号：C07D471/18，申请号：201010182690.9中所公开的一种金雀花碱的提取方法，包含主要步骤：超临界CO₂萃取：将牧马豆种子粉碎到40～60目，投入萃取釜中，调试萃取釜，分离釜、加温装置和制冷装置正常工作，打开压缩泵加压为21～22Mpa，泵入液体CO₂提取金雀花碱，从分离釜中解析萃取物，得金雀花碱粗品；其主要缺点为：

1、生产设备都是高压设备，设备投资过高；

2、在生产过程中需要使用大量的液态二氧化碳，故生产成本过高；

3、在生产过程中，需要使用大量的有机溶剂，还需要会用到酸和碱处理，工艺流程长，工序复杂，劳动强度大，生产周期长，生产成本过高。

4、由于大量生产条件是高压条件，生产安全性差。

2011年10月19日公开的分类号：C07D471/18，申请号：201110151509.2中所公一种金雀花碱的制备方法，步骤如下：a.牧马豆种子粉碎，加0.5～1％盐酸或硫酸水溶液冷浸，提取液调节pH至中性过滤，加入超滤膜超滤，再加入纳滤膜过滤，透过液用反渗透膜浓缩，得浓缩液；b.上述浓缩液调pH值9～10，用二氯甲烷萃取，萃取液浓缩后再采用高速逆流色谱分离，根据紫外检测器图谱收集目标成分，低温干燥即得其主要缺点为：

1、需要复杂、精密的过滤设备，设备投资过高；

2、其采用了先进的膜分离技术，由于膜容易堵塞，使用受命短，且膜分离之后要进行膜清洗，所以该方法生产成本较高，操作也很复杂；

3、膜生产虽然先进，但处理量小，不利于大规格生产；市场普遍推广困难。

可见，现有技术中从牧马豆中提取金雀花碱的工艺方法都存在着设备成本和生产成本高的问题。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种牧马豆中提取分离金雀花碱的方法，该方法提取金雀花碱的成本显著降低。

为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一种牧马豆中提取金雀花碱的方法，步骤包括：

a、脱脂：牧马豆原料粉碎，再用有机溶剂进行脱脂，得脱脂物料；

b、提取：用有机溶剂对脱脂物料进行热回流提取，提取液过滤、浓缩，浓缩液冷却到室温；

c、层析：浓缩液用100～200目的层析硅胶吸附有效物质；层析硅胶为市售产品，细孔、中孔、大孔层析硅胶均可，只要保证细度即可实现本发明的目的。

d、洗脱：将吸附了有效物质的层析硅胶洗除杂质然后用溶剂从层析硅胶中脱洗出含有效物质的脱洗液；

e、初结晶：将步骤d所得洗脱液浓缩到无溶剂，放置得粗品；

f、重结晶：将粗品加溶剂溶解，过滤，放置，再结晶，过滤，干燥得成品。

优选的：

所述的步骤b中，每次用5～6倍量体积的有机溶剂对脱脂物料进行2～3次热回流提取，得提取液，将提取液过滤，浓缩至比重为1.05，得浓缩液，放置至室温；

所述的步骤c中，浓缩液上层析硅胶吸附柱，流速不限，TLC检测配合吸附，检测到流出液有斑点,套用下根柱子吸附；流出液有斑点无斑点时，证明吸附完全，无需继续吸附，直接排掉。

所述的步骤d中，层析硅胶吸附柱饱和后，用1倍量石油醚甲醇混合物（石油醚与甲醇重量比99:1）洗杂质，2倍量石油醚甲醇混合物（石油醚与甲醇重量比98:2）洗脱有效成分，得洗脱液；

进一步优选的：

所述步骤a中牧马豆粉碎到30～50目，有机溶剂为环己烷或正己烷，用平转式浸出器脱脂。

所述步骤b中进行热回流的有机溶剂为70%～85%的甲醇或乙醇。

所述步骤c中，层析柱容积处理能力为自身体积的1.25倍。也就是层析柱容积和所处理的浓缩液体积比为0.8：1，这样既充分利层析硅胶，又保证吸附效果。

所述的步骤e中，浓缩到比重为1.15～1.2。

所述步骤f中所使用的有面溶剂为乙醇，需要2～3倍量，在50～70℃的条件下溶解，过滤，浓缩至有结晶析出，放置48小时以上，过滤结晶，烘干得产品。

所述步骤f中真空低温干燥得成品。

本发明具有以有益的技术效果：

1、成本低。脱脂用平板式浸出器所用有机溶剂消耗少，提取、重结晶所用溶剂常见且消耗也较少，还可回收重复利用，使生产成本降低。

2、用普通的层析硅胶吸附分离有效物质，分离彻底，有效成分流失少，生产工艺简单，周期短，产品收率高，而且层析硅胶也可重复再生利用，可进一步节省降低生产成本；生产规模也不受限制。

3、产品收率高，品质好，杂质少，有效成分含量高，纯度可达98%以上。

4、在步骤a中会得牧马豆油和牧马豆渣。牧马豆油中可分离植物甾醇，还可用来生产香皂等。牧马豆渣经提取分离得金雀花碱后，所剩牧马豆渣，晒干可用作饲料或饲料添加剂。

5、生产工艺合理，生产效率高，更利于规模化生产，对环境污染小。

附图说明

图1金雀花碱HPLC分析图谱。

具体实施方式

下面进一步详细介绍本发明的优选技术方案：

牧马豆中提取分离金雀花碱的方法，其实现步骤包括：

a、脱脂：牧马豆原料用粉碎机粉碎到30～50目，平转式浸出器中用环己烷或正己烷作溶剂进行脱脂，得脱脂物料。

b、提取：每次用5～6倍量体积的70%～85%的甲醇或乙醇对脱脂物料进行2～3次热回流提取，提取时间分别为：第一次为2h、第二次为2h、第三次1.5h，得提取液，将提取液过滤，合并滤液真空减压浓缩至比重为1.05；得浓缩液，放置至室温。

c、层析：浓缩液上层析硅胶细度为100～200目的吸附柱，流速以最大量流；TLC跟踪检测，当流出液有斑点,套用下根柱子吸附，流出液有斑点无斑点时直接排掉，也就是说当流出液经TLC检测没有明显的斑点时，证明吸附完全了，流出液可以直接排放掉。

d、洗脱：层析硅胶吸附柱饱和后，1倍量石油醚甲醇混合物（重量比99:1）洗杂质，2倍量石油醚甲醇混合物（重量比98:2）洗脱有效成分，得洗脱液。

e、初结晶：将步骤（4）所得洗脱液浓缩到无溶剂，此时比重约在1.15至1.2之间；放置，自然结晶，加少量的水过滤得粗品；浓缩可以采用真空加热或者自然条件加热等方式。

f、重结晶：将粗品加2～3倍量的乙醇在50～70℃度溶解，过滤去掉不溶物，真空减压浓缩至有结晶析出，浓缩液放置48小时以上，自然结晶，过滤，真空低温干燥得成品。

下面进一步提供本发明的优选实施例。

实施例一

取牧马豆1000克，粉碎至40目，用环己烷作溶剂，经平转式浸出器脱脂。脱脂物料每次加入6倍量体积80%甲醇热回流提取三次。提取时间分别为：第一次为2h、第二次为2h、第三次1.5h。过滤提取物液，合并三次滤液，真空减压浓缩至比重为1.05。放凉至室温，将凉后的滤液上层析硅胶细度为120目的层析柱，TLC跟踪检测使有效物质吸附基本完全。用1倍量的石油醚甲醇混合物（重量比99:1）洗杂质，用2倍量的石油醚甲醇混合物（重量比98:2）洗脱有效成分。洗脱液真空加热浓缩至无溶剂，比重约在1.18。放置结晶，加等体积去离子水后离心过滤得到结晶粗品。然后用2倍量的乙醇60℃溶解，用100目滤网过滤溶解液，滤液真空减压浓缩，浓缩至无醇后观察，若有结晶析出，停止浓缩，放出浓缩液，放置48小时，待结晶完全后，真空抽滤，得产品。低温干燥，得产品28.55克，含量为98.2%。

实施例一的金雀花碱采用HPLC高效液相检测，采用外标法计算含量。检测条件：色谱柱：C18柱；流动相：0.2%磷酸水:无水乙醇(80:8:10)；检测波长：220nm；进样量：20μL；流速1．0mL/min；柱温：30℃。检测结果图谱见图1所示，对应的分析表如表1所示的：

表1 金雀花碱HPLC分析结果表

实施例二

取牧马豆1000克，粉碎至50目，用正己烷作溶剂，经平转式浸出器脱脂。脱脂物料每次加入5倍量体积85%乙醇热回流提取二次。提取时间分别为：第一次为2h、第二次为2h。过滤提取物液，合并滤液，真空减压浓缩至比重为1.05。放凉至室温，将凉后的滤液上层析硅胶细度为100目的层析柱，TLC跟踪检测。吸附完全后用1倍量的石油醚甲醇混合物（重量比99:1）洗杂质，用2倍量的石油醚甲醇混合物（重量比98:2）洗脱有效成分。洗脱液真空加热浓缩至无溶剂，比重约在1.16。放置结晶，加等体积去离子水后离心过滤得到结晶粗品。然后用3倍量的乙醇70℃溶解，用120目滤网过滤溶解液，滤液真空减压浓缩，浓缩至无醇后观察，若有结晶析出，停止浓缩，放出浓缩液，放置48小时，待结晶完全后，真空抽滤，得产品。低温干燥，得产品29.01克，含量为98.0%。

实施例三

取牧马豆1000克，粉碎至35目，用正己烷作溶剂，经平转式浸出器脱脂。脱脂物料每次加入6倍量体积75%乙醇热回流提取三次。提取时间分别为：第一次为2h、第二次为2h、第三次1.5h。过滤提取物液，合并三次滤液，真空减压浓缩至比重为1.05。放凉至室温，将凉后的滤液上层析硅胶细度为200目的层析柱，TLC跟踪检测。吸附完全后用1倍量的石油醚甲醇混合物（重量比99:1）洗杂质，用2倍量的石油醚甲醇混合物（重量比98:2）洗脱有效成分。洗脱液真空加热浓缩至无溶剂，比重约在1.16。放置结晶，加等体积去离子水后离心过滤得到结晶粗品。然后用2倍量的乙醇55℃溶解，用100目滤网过滤溶解液，滤液真空减压浓缩，浓缩至无醇后观察，若有结晶析出，停止浓缩，放出浓缩液，放置55小时，待结晶完全后，真空抽滤，得产品。低温干燥，得产品28.87克，含量为98.4%。

Claims

1.一种牧马豆中提取金雀花碱的方法，步骤包括：

c、层析：浓缩液用100～200目层析硅胶吸附有效物质；

2.根据权利要求1所述的一种牧马豆中提取金雀花碱的方法，其特征在于：所述的步骤b中，每次用5～6倍量体积的有机溶剂对脱脂物料进行2～3次热回流提取，得提取液，将提取液过滤，浓缩至比重为1.05，得浓缩液，放置至室温。

3.根据权利要求1所述的一种牧马豆中提取金雀花碱的方法，其特征在于：所述的步骤c中，浓缩液上层析硅胶吸附柱，TLC检测配合吸附，检测到流出液有斑点,套用下根柱子吸附，流出液有斑点无斑点时直接排掉。

4.根据权利要求1所述的一种牧马豆中提取金雀花碱的方法，其特征在于：所述的步骤d中，层析硅胶吸附柱饱和后，用1倍量石油醚甲醇按重量比99:1混合所得的混合物洗杂质，2倍量石油醚甲醇按重量比98:2混合所得的混合物洗脱有效成分，得洗脱液。

5.根据权利要求1到4中任意一项所述的一种牧马豆中提取金雀花碱的方法，其特征在于：所述步骤a中牧马豆粉碎到30～50目，有机溶剂为环己烷或正己烷，用平转式浸出器脱脂。

6.根据权利要求1到4中任意一项所述的一种牧马豆中提取金雀花碱的方法，其特征在于：所述步骤b中进行热回流的有机溶剂为70%～85%的甲醇或乙醇。

7.根据权利要求1到4中任意一项所述的一种牧马豆中提取金雀花碱的方法，其特征在于：所述步骤f中所使用的有机溶剂为乙醇，需要2～3倍量，在50～70℃的条件下溶解，过滤，浓缩至有结晶析出，放置48小时以上，过滤结晶，烘干得产品。

8.根据权利要求1到4中任意一项所述的一种牧马豆中提取金雀花碱的方法，其特征在于：所述步骤c中，层析柱容积处理能力为自身体积的1.25倍。

9.根据权利要求1到4中任意一项所述的一种牧马豆中提取金雀花碱的方法，其特征在于：所述步骤f中真空低温干燥得成品。

10.根据权利要求1到4中任意一项所述的一种牧马豆中提取金雀花碱的方法，其特征在于：所述的步骤e中，浓缩到比重为1.15～1.2。