CN102816211A - 一种制备美那诺坦的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制备美那诺坦的方法，包括以下步骤：1)由Fmoc-L-Val-OH和氨基树脂出发，得到Fmoc-L-Val-氨基树脂；2)将Fmoc-L-Val-氨基树脂采用固相合成方法按美那诺坦的多肽序列顺序逐一偶联得到N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂；3)乙酰化反应生成含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂；4）采用裂解试剂裂解含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂，冰乙醚沉淀得到粗肽；粗肽经过纯化、冻干得到美那诺坦。本发明采用的制备美那诺坦的工艺方法具有广泛的应用前景和可观的经济实用价值。
Description
技术领域
本发明属于制药技术领域，尤其是涉及一种制备美那诺坦(Afamelanotide)的方法。
背景技术
研究证实，皮肤被晒黑或皮肤沉积色素可以保护光敏性皮肤病的人群免受日光和紫外线的伤害。黑色素细胞刺激激素（Melanocortin peptide hormone alpha-melanocyte stimulating hormone, α-MSH）能够使皮肤的黑素细胞产生黑色素，在光照诱导的晒黑反应过程中起重要作用。
1995年，美国专利US4457864公开了一系列包括美那诺坦在内的-MSH类似物。美那诺坦分子结构式为:乙酰基-L-丝氨酰-L-酪氨酰-L-丝氨酰-L-正亮氨酰-L-谷氨酰-L-组氨酰-D-苯丙氨酰-L精氨酰-L-色氨酰-甘氨酰-L-赖氨酰-L-脯氨酰-缬氨酰胺。美那诺坦是一种人工合成的-MSH类似物，最初由Arizona University研发，已证实可激活皮肤色素沉着，促使皮肤变黑，可缓解各种光线性皮肤病症状。美那诺坦具有较强的日光防护作用，作用强度比天然α-MSH高近1000倍。2010年5月，意大利药物管理局批准美那诺坦用于治疗红细胞生成性原卟啉征导致的光敏性疾病。
目前国内还没有关于美那诺坦合成工艺方法的报道；国外关于美那诺坦合成工艺的报道，如PNAS77(10): 5754-5758，采用Boc固相合成工艺，操作复杂，收率仅为25%，在合成过程中使用了大量腐蚀性强的三氟乙酸和氢氟酸，不利于工业生产、应用价值不高。
发明内容
本发明的目的在于提供一条较适当的固相合成法合成美那诺坦路线，有利于产业化生产，成本低、操作方便、对环境影响小、收率高。
为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：
一种制备美那诺坦的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1) 由Fmoc-L-Val-OH和氨基树脂为起始原料，氨基树脂经脱保护后与Fmoc-L-Val-OH偶联得到Fmoc-L-Val-氨基树脂；
2) 将Fmoc-L-Val-氨基树脂采用固相合成方法按美那诺坦的多肽序列逐一偶联得到N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂；
3) N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂经与乙酸酐/吡啶反应生成含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂；
4) 裂解含侧链保护基团的美那诺坦氨基树脂，纯化、冻干得到美那诺坦。
其中：所述氨基树脂选自Sieber树脂、Rink Amide树脂、Rink Amide-MBHA树脂、Rink Amide-BHA树脂和Rink Amide-AM树脂中的任一种，优选为Rink Amide树脂。
所述氨基树脂取代度为0.1 mmol/g-1.6 mmol/g，优选氨基树脂取代度为0.3 mmol/g-0.8 mmol/g。
其中，所述的步骤1为：Fmoc-L-Val-OH和氨基树脂在偶联剂和有机碱的作用下，在反应溶剂中生成Fmoc-L-Val-氨基树脂；所述的偶联剂包括DIC/HOBt、PyBOP/HOBt、HBTU/HOBt、HATU/HOAt或TBTU/HOBt，优选偶联剂为HBTU/HOBt或HATU/HOAt；所述的有机碱包括TMP、NMM或DIPEA；所述的反应溶剂包括NMP和/或DMF。其中"/"表示"和"的含义。
实验发现，本发明的偶联剂能够明显提高反应速率，同时HBTU/HOBt偶联体系显著的降低生产成本并提高收率。
所述步骤3中反应采用等摩尔数的乙酸酐和吡啶作为反应物，乙酸酐和吡啶的摩尔总用量为树脂取代摩尔数的1.5-100倍，优选为10-30倍。
本发明要求保护的方法，所述步骤4中，裂解含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂采用的裂解试剂为：TFA/H2O、TFA/H2O/TIS、TFA/thioanisole/anisole/EDT或TFA/thioanisole/H2O/phenol/EDT；优选体积比为95/5的TFA/H2O，体积比为95/2.5/2.5的TFA/H2O/TIS，体积比为90/5/3/2的TFA/thioanisole/anisole/EDT，或体积比为82.5/5/5/5/2.5的TFA/thioanisole/H2O/phenol/EDT。
更具体的，本发明所述的制备方法优选包括如下步骤：
所述的步骤1为：将氨基树脂置于反应器中，经NMP洗涤溶胀后；将体积比1:4的哌啶NMP溶液加至溶胀的氨基树脂中脱除氨基树脂上的Fmoc保护基；加入相当于氨基树脂用量1.5-10倍量的Fmoc-L-Val-OH、1.5-10倍量的HOBt、1.5-10倍量的HBTU，加入体积为足以溶解上述溶质的NMP溶解，完全溶解后加入相当于氨基树脂用量3-20倍量的DIPEA至反应器中反应1-20h，反应结束后量取相当于氨基树脂用量5-100倍量的乙酸酐、相当于氨基树脂用量5-100倍量的吡啶混合于NMP中，加入反应器中反应1-10h，洗涤得Fmoc-Val-氨基树脂。
所述的步骤2为：将体积比1:4的哌啶NMP溶液加至Fmoc-L-Val-氨基树脂中进行脱保护反应；加入相当于氨基树脂用量1.5-10倍量的Fmoc-L-Pro-OH、1.5-10倍量的HOBt、1.5-10倍量的HBTU，加入体积为足以溶解上述溶质的NMP溶解，完全溶解后加入相当于氨基树脂用量3-20倍量的DIPEA混合均匀后加入反应器中反应1-20h；反应结束后洗涤产物，再按美那诺坦的多肽序列逐个偶联氨基酸，各氨基酸及偶联试剂的用量同上，依次完成Fmoc-L-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-L-Trp(Boc)-OH、Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-His(Trt)-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Nle-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH的偶联，得到N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂。
所述的步骤3为：将N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂经洗涤后投入反应器，相当于氨基树脂用量5-100倍量的乙酸酐、相当于氨基树脂用量5-100倍量的吡啶混合于等体积的NMP中，加入反应器中反应1-10h，得到含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂。
所述的步骤4为：向含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂中加入体积比为82.5/5/5/5/2.5的TFA/thioanisole/H2O/phenol/EDT的裂解试剂，冰浴反应0.1-1h后，室温下继续搅拌反应1-10h，然后抽滤。抽滤后将裂解试剂滤液利用旋转蒸发和/或N2气吹至无TFA溢出，加入3-100倍量的沉淀试剂静置；离心分离沉淀的粗肽，粗肽经纯化、冻干得美那诺坦。
该步骤中，对含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂进行裂解、沉淀得到的粗肽，其沉淀试剂包括：乙醚、环己烷、石油醚、乙醚/石油醚（体积比为1:10-10:1）、乙醚/环己烷（体积比为1:10-10:1），优选乙醚或体积比为1:1的乙醚/石油醚，更优选冰乙醚。
本发明中，美那诺坦是通过对含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂进行裂解，得到的粗肽经过高压液相色谱纯化、冻干得到。
此外，本发明中，缩略语的解释如下：
NMM：N-甲基吗啡啉；
DIC：N,N'-二异丙基碳二酰亚胺；
HBTU：苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐；
HOBt：1-羟基苯并三唑；
DMF：二甲基甲酰胺；
NMP：1-甲基-吡咯烷酮；
DCM：二氯甲烷；
TFA：三氟乙酸；
TNBS：2 4 6-三硝基苯磺酸；
DIPEA：N,N-二异丙基乙基胺；
TIS：三异丙基硅烷；
Thioanisole：甲基苯基硫醚；
Anisole：苯甲醚；
EDT：1，2-乙二硫醇；
Phenol：苯酚；
h为时间单位:小时。
采用上述技术方案，本发明能够制备得到一种纯度高于83%的美那诺坦，此外，本发明制备采用了Fmoc固相合成方法，该方法与原有报道的Boc固相合成方法相比，操作简单，合成过程中避免了大量使用腐蚀性强的三氟乙酸和氢氟酸，有利于工业生产和环境保护，有效降低生产成本，纯度83%，合成收率60%，远高于报道的25%收率。具有广泛的应用前景和可观的经济实用价值。适宜工业化推广应用。
附图说明
图1 本发明实施例1所述制备方法反应路线图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，由于篇幅所限，此处只列举了最具代表性的实施方式，虽然本发明所涉及的各反应条件及其具体参数未一一体现在具体实施方式中，但本领域技术人员依然可以预见，说明书中给出的各反应条件均能够实现本发明。
实施例1
如图1所示，本发明要求保护的制备方法包括如下步骤：
步骤一、Fmoc-L-Val-Rink Amide树脂制备
1、将10g取代度为0.6 mmol/g的Rink Amide树脂置于反应器中，加入NMP洗涤两次，随后采用NMP溶胀1h。
2、将体积比1:4的哌啶NMP溶液加至溶胀的Rink Amide树脂中，脱除Rink Amide树脂上的Fmoc保护基，脱除完毕用NMP洗涤4次，DCM洗涤2次，甲醇洗涤2次。
3、称取6.11g Fmoc-L-Val-OH、2.43g HOBt、6.83g HBTU，加入54ml NMP溶解，完全溶解后加入6.27ml DIPEA，混合均匀后加入反应器中开始反应。
4、反应6h，结束反应，NMP洗涤三次，量取7.6ml乙酸酐、6.5ml吡啶混于40ml NMP中，加入反应器中反应2h，用NMP进行洗涤3次，DCM洗涤2次，甲醇洗涤2次，直接用于下一步氨基酸偶联。
步骤二、N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-Rink Amide树脂的制备
1 、将体积比1:4的哌啶NMP溶液加至Fmoc-L-Val-Rink Amide树脂中，进行脱保护反应，反应后用NMP进行洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次。
2、称取6.07g Fmoc-L-Pro-OH，2.43g HOBt、6.83g HBTU，加入54ml NMP溶解，完全溶解后加入6.27ml DIPEA，混合均匀后加入反应器中开始反应。
3、反应4h结束反应。
4、反应结束，NMP进行洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次，按美那诺坦的多肽序列逐个偶联氨基酸，依次完成Fmoc-L-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-L-Trp(Boc)-OH、Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-His(Trt)-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Nle-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH的偶联。
步骤三、N端乙酰化反应
1、N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-Rink Amide树脂用NMP进行洗涤3次，DCM洗涤2次，甲醇洗涤2次。量取11.4ml乙酸酐、9.8ml吡啶混于40ml NMP中，加入反应器中反应2h，得到含侧链保护基团的美那诺坦-Rink Amide树脂，用NMP进行洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次，甲醇洗涤抽干待用。
步骤四、含侧链保护基团的美那诺坦-Rink Amide树脂的裂解
1、配制裂解试剂：按TFA/thioanisole/H2O/phenol/EDT体积比为82.5/5/5/5/2.5配制，放置于4℃冷藏保存。
2、称取抽干的10g含侧链保护基团的美那诺坦-Rink Amide树脂至另一反应器中，加入50ml裂解试剂，冰浴反应0.5h后，室温下继续搅拌反应2h。
3、反应结束，抽滤裂解试剂，向滤液中倒入1L的冰乙醚，静置6h。
4、离心分离沉淀的粗肽，沉淀用冰乙醚洗涤3次，用体积百分数为0.1%的TFA的水溶液溶解，冷冻后置于冷冻干燥机上干燥至恒重，得白色粗肽4.38g，纯度83%，合成收率60%。
实施例2
如图1所示，本发明要求保护的制备方法包括如下步骤：
步骤一、Fmoc-L-Val-Rink Amide树脂制备
1、将30g取代度为0.1 mmol/g的Rink Amide树脂置于反应器中，加入NMP洗涤两次，随后采用NMP溶胀1h。
2、将体积比1:4的哌啶NMP溶液加至溶胀的Rink Amide树脂中，脱除Rink Amide树脂上的Fmoc保护基，脱除完毕用NMP洗涤4次，DCM洗涤2次，甲醇洗涤2次。
3、称取10.2g Fmoc-L-Val-OH、4.05g HOBt、11.4g HBTU，加入80ml NMP溶解，完全溶解后加入10.5ml DIPEA，混合均匀后加入反应器中开始反应。
4、反应1h，结束反应，NMP洗涤三次，量取3.8ml乙酸酐、3.3ml吡啶混于70ml NMP中，加入反应器中反应2h，用NMP进行洗涤3次，DCM洗涤2次，甲醇洗涤2次，直接用于下一步氨基酸偶联。
步骤二、N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-Rink Amide树脂的制备
1 、将体积比1:4的哌啶NMP溶液加至Fmoc-L-Val-Rink Amide树脂中，进行脱保护反应，反应后用NMP进行洗涤3次，DCM洗涤2次，甲醇洗涤2次。
2、称取10.1g Fmoc-L-Pro-OH、4.05g HOBt、11.4g HBTU，加入80ml NMP溶解，完全溶解后加入10.5ml DIPEA，混合均匀后加入反应器中开始反应。
3、反应1h结束反应。
4、反应结束，NMP进行洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次，按美那诺坦的多肽序列逐个偶联氨基酸，依次完成Fmoc-L-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-L-Trp(Boc)-OH、Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-His(Trt)-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Nle-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH的偶联。
步骤三、N端乙酰化反应
1、N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-Rink Amide树脂用NMP进行洗涤3次，DCM洗涤2次，甲醇洗涤2次。量取28.5ml乙酸酐、24.5ml吡啶混于50ml NMP中，加入反应器中反应10h，得到含侧链保护基团的美那诺坦-Rink Amide树脂，用NMP进行洗涤3次，DCM洗涤2次，甲醇洗涤2次，抽干待用。
步骤四、含侧链保护基团的美那诺坦-Rink Amide树脂的裂解
1、配制裂解试剂：按TFA/thioanisole/anisole/EDT体积比为90/5/3/2配制，放置于4℃冷藏保存。
2、称取抽干的20g含侧链保护基团的美那诺坦-Rink Amide树脂至另一反应器中，加入50ml裂解试剂，冰浴反应0.5h后，室温下继续搅拌反应10h。
3、反应结束，抽滤裂解试剂，向滤液中倒入200mL的冰乙醚，静置6h。
4、离心分离沉淀的粗肽，沉淀用冰乙醚洗涤3次，用体积百分数为0.1%的TFA的水溶液溶解，冷冻后置于冷冻干燥机上干燥至恒重，得白色粗肽。
实施例3
如图1所示，本发明要求保护的制备方法包括如下步骤：
步骤一、Fmoc-L-Val-Rink Amide树脂制备
1、将5g取代度为1.6 mmol/g的Rink Amide树脂置于反应器中，加入NMP洗涤两次，随后采用NMP溶胀1h。
2、将体积比1:4的哌啶NMP溶液加至溶胀的Rink Amide树脂中，脱除Rink Amide树脂上的Fmoc保护基，脱除完毕用NMP洗涤4次，DCM洗涤2次，甲醇洗涤2次。
3、称取4.07g Fmoc-L-Val-OH、1.62g HOBt、4.55g HBTU，加入36ml NMP溶解，完全溶解后加入4.18ml DIPEA，混合均匀后加入反应器中开始反应。
4、反应20h，结束反应，NMP洗涤三次，量取7.6ml乙酸酐、6.5ml吡啶混于40ml NMP中，加入反应器中反应2h，用NMP进行洗涤3次，DCM洗涤2次，甲醇洗涤2次，直接用于下一步氨基酸偶联。
步骤二、N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-Rink Amide树脂的制备
1 、将体积比1:4的哌啶NMP溶液加至NMP洗涤干净的Fmoc-L-Val-Rink Amide树脂中，进行脱保护反应，反应后用NMP进行洗涤3次，DCM洗涤2次，甲醇洗涤2次。
2、称取4.05g Fmoc-L-Pro-OH、1.62g HOBt、4.55g HBTU，加入36ml NMP溶解，完全溶解后加入4.18ml DIPEA，混合均匀后加入反应器中开始反应。
3、反应20h结束反应。
4、反应结束，NMP进行洗涤3次，DCM洗涤2次，甲醇洗涤2次，按美那诺坦的多肽序列逐个偶联氨基酸，依次完成Fmoc-L-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-L-Trp(Boc)-OH、Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-His(Trt)-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Nle-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH的偶联。
步骤三、N端乙酰化反应
1、N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-Rink Amide树脂用NMP进行洗涤3次，DCM洗涤2次，甲醇洗涤2次。量取76ml乙酸酐、65ml吡啶混于20ml NMP中，加入反应器中反应1h，得到含侧链保护基团的美那诺坦-Rink Amide树脂，用NMP进行洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次，甲醇洗涤抽干待用。
步骤四、含侧链保护基团的美那诺坦-Rink Amide树脂的裂解
1、配制裂解试剂：按TFA/H2O/TIS体积比为95/2.5/2.5配制，放置于4℃冷藏保存。
2、向抽干的含侧链保护基团的美那诺坦-Rink Amide树脂加入20ml裂解试剂，冰浴反应0.5h后，室温下继续搅拌反应1h。
3、反应结束，抽滤裂解试剂，向滤液中倒入400mL的冰乙醚，静置6h。
4、离心分离沉淀的粗肽，沉淀用冰乙醚洗涤3次，用体积百分数为0.1%的TFA的水溶液溶解，冷冻后置于冷冻干燥机上干燥至恒重，得白色粗肽14.0g，纯度53%，合成收率56%。
实施例4
与实施例1相比，区别点仅在于，本实施例中氨基树脂为取代度为0.1 mmol/g的Sieber树脂。
步骤1中采用的偶联剂为所述的偶联剂为HATU/HOAt；有机碱为TMP；反应溶剂为NMP/DMF。步骤4中，裂解试剂为体积比为95/5的TFA/H2O。
本实施例所得产物纯度为55%，合成收率54%。
实施例5
与实施例1相比，区别点仅在于，本实施例中氨基树脂为取代度为0.3 mmol/g的Rink Amide-MBHA树脂。步骤1中采用的偶联剂为所述的偶联剂为DIC/HOBt，有机碱为NMM，反应溶剂为DMF。步骤4中，裂解试剂为体积比为95/2.5/2.5的TFA/H2O/TIS。
本实施例所得产物纯度为58%，合成收率57%。
实施例6
与实施例1相比，区别点仅在于，本实施例中氨基树脂为取代度为0.8 mmol/g的Rink Amide-BHA树脂。步骤1中采用的偶联剂为PyBOP/HOBt，有机碱为DIPEA，反应溶剂为DMF。步骤4中，裂解试剂为体积比为90/5/3/2的TFA/thioanisole/anisole/EDT。
本实施例所得产物纯度为61%，合成收率57%。
实施例7
与实施例1相比，区别点仅在于，本实施例中氨基树脂为取代度为1.2 mmol/g的Rink Amide-AM树脂。步骤1中采用的偶联剂为TBTU/HOBt，有机碱为NMM，反应溶剂为NMP。步骤4中，裂解试剂为体积比为82.5/5/5/5/2.5的TFA/thioanisole/H2O/phenol/EDT。
本实施例所得产物纯度为67%，合成收率56%。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种制备美那诺坦的方法，包括以下步骤:
1) 由Fmoc-L-Val-OH和氨基树脂为起始原料，氨基树脂经脱保护后与Fmoc-L-Val-OH偶联得到Fmoc-L-Val-氨基树脂；
2) 将Fmoc-L-Val-氨基树脂采用固相合成方法按美那诺坦的多肽序列逐一偶联得到N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂；
3) N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂经乙酰化反应生成含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂；
4) 裂解含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂，纯化、冻干得到美那诺坦。
2.根据权利要求1所述制备美那诺坦的方法，其特征在于：所述氨基树脂选自Sieber树脂、Rink Amide树脂、Rink Amide-MBHA树脂、Rink Amide-BHA树脂和Rink Amide-AM树脂的任一种，优选为Rink Amide树脂。
3. 根据权利要求1所述制备美那诺坦的方法，其特征在于：所述氨基树脂取代度为0.1 mmol/g-1.6 mmol/g，优选氨基树脂取代度为0.3 mmol/g-0.8 mmol/g。
4. 根据权利要求1所述制备美那诺坦的方法，其特征在于：所述的步骤1中，Fmoc-L-Val-OH和脱保护后的氨基树脂在偶联剂和有机碱的作用下，在反应溶剂中生成Fmoc-L-Val-氨基树脂；所述的偶联剂包括DIC/HOBt、PyBOP/HOBt、HBTU/HOBt、HATU/HOAt或TBTU/HOBt，优选偶联剂为HBTU/HOBt或HATU/HOAt；所述的有机碱包括TMP、NMM或DIPEA；所述的反应溶剂包括NMP和/或DMF。
5. 根据权利要求1所述制备美那诺坦的方法，其特征在于：所述步骤3中乙酰化反应采用等摩尔数的乙酸酐和吡啶作为反应物，乙酸酐和吡啶的摩尔总用量为树脂取代摩尔数的1.5-100倍，优选为10-30倍。
6. 根据权利要求1所述制备美那诺坦的方法，其特征在于：所述步骤4中，裂解试剂为：TFA/H2O、TFA/H2O/TIS、TFA/thioanisole/anisole/EDT或TFA/thioanisole/H2O/phenol/EDT；优选体积比为95/5的TFA/H2O，体积比为95/2.5/2.5的TFA/H2O/TIS，体积比为90/5/3/2的TFA/thioanisole/anisole/EDT，或体积比为82.5/5/5/5/2.5的TFA/thioanisole/H2O/phenol/EDT。
7. 根据权利要求1-6任一项所述制备美那诺坦的方法，其特征在于：所述的步骤1为：将氨基树脂置于反应器中，经NMP洗涤溶胀后；将体积比1:4的哌啶NMP溶液加至溶胀的氨基树脂中脱除氨基树脂上的Fmoc保护基；加入相当于氨基树脂用量1.5-10倍量的Fmoc-L-Val-OH、1.5-10倍量的HOBt、1.5-10倍量的HBTU，加入体积为足以溶解上述溶质的NMP溶解，完全溶解后加入相当于氨基树脂用量3-20倍量的DIPEA至反应器中反应1-20h，反应结束后量取相当于氨基树脂用量5-100倍量的乙酸酐、相当于氨基树脂用量5-100倍量的吡啶混合于NMP中，加入反应器中反应1-10h，洗涤得Fmoc-L-Val-氨基树脂。
8. 根据权利要求1-6任一项所述制备美那诺坦的方法，其特征在于：所述的步骤2为：将体积比1:4的哌啶NMP溶液加至Fmoc-L-Val-氨基树脂中进行脱保护反应；加入相当于氨基树脂用量1.5-10倍量的Fmoc-L-Pro-OH、1.5-10倍量的HOBt、1.5-10倍量的HBTU，加入体积为足以溶解上述溶质的NMP溶解，完全溶解后加入相当于氨基树脂用量3-20倍量的DIPEA混合均匀后加入反应器中反应1-20h；反应结束后洗涤产物，再按美那诺坦的多肽序列逐个偶联氨基酸，各氨基酸及偶联试剂的用量同上，得到N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂。
9.根据权利要求1-6任一项所述制备美那诺坦的方法，其特征在于：所述的步骤3为：将N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂经洗涤后投入反应器，相当于氨基树脂用量5-100倍量的乙酸酐、相当于氨基树脂用量5-100倍量的吡啶混合于适量的NMP中，加入反应器中反应1-10h，得到含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂。
10.根据权利要求1-6任一项所述制备美那诺坦的方法，其特征在于：所述的步骤4为：向含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂中加入体积比为82.5/5/5/5/2.5的TFA/thioanisole/H2O/phenol/EDT的裂解试剂，冰浴反应0.1-1h后，室温下继续搅拌反应1-10h，然后抽滤；抽滤后将裂解试剂滤液利用旋转蒸发和/或N2气吹至无TFA溢出，加入3-100倍量的沉淀试剂静置；离心分离沉淀的粗肽，粗肽经纯化、冻干得美那诺坦。
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