CN102796112B

CN102796112B - 异戊烯基黄酮化合物及其在制备胰脂肪酶抑制剂中的用途

Info

Publication number: CN102796112B
Application number: CN201110137006.XA
Authority: CN
Inventors: 侯爱君; 王贺瑶; 雷春; 赵婷; 闫桂蕊; 俞媚华
Original assignee: Fudan University; Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Current assignee: Fudan University; Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Priority date: 2011-05-25
Filing date: 2011-05-25
Publication date: 2014-10-29
Anticipated expiration: 2031-05-25
Also published as: CN102796112A

Abstract

本发明属医药技术领域，涉及从白桂木中分离得到的式（I）结构的异戊烯基黄酮化合物及其用途。该化合物经胰脂肪酶的抑制活性试验，结果显示具有明显的胰脂肪酶抑制活性。该化合物可作为制备新的预防或治疗肥胖症及相关代谢性疾病药物的先导化合物，也可用于制备预防或治疗临床常见多发的肥胖症及相关代谢性疾病的药物。

Description

异戊烯基黄酮化合物及其在制备胰脂肪酶抑制剂中的用途

技术领域

本发明属医药技术领域，涉及异戊烯基黄酮化合物，具体涉及从白桂木中分离得到的异戊烯基黄酮化合物及其在制备胰脂肪酶抑制剂中的用途。

背景技术

近20年来，全世界尤其是发达国家的肥胖症发病率日益增多。由于经济的快速发展和生活水平的不断提高，现代人生活方式中始终存在运动不足和摄食能量相对过剩的问题，这导致了众多现代人机体能量的摄入超过了能量消耗，过剩的能量中会有一部分作为脂肪贮存在脂肪组织中，而它的积累则会导致肥胖以及相关疾病，如糖尿病、癌症、心脏病、高脂血症和脂肪肝等的发生。

目前，治疗肥胖症的主要途径之一在于开发增加能量消耗的药物或减少能量摄取的药物。其中，减少能量摄取的主要方法就是减少身体对食物的消化和吸收，尤其是其中的脂肪。研究表明，胰脂肪酶是肠道中脂肪消化吸收所必需的酶，食物中的脂肪在胰脂肪酶作用下被水解为单酰甘油和游离脂肪酸，在肠道被重新吸收后，在体内再次合成脂肪，引起脂肪堆积，最终导致肥胖以及相伴的高脂血症、糖尿病等代谢性疾病的发生。研究还显示，胰脂肪酶抑制剂可有效抑制肠道中胰脂肪酶对脂肪的分解催化作用，达到减少脂肪吸收和治疗肥胖的目的，因而开发和应用有效的胰脂肪酶抑制剂受到有关研究者的普遍关注。目前市场上畅销的胰脂肪酶抑制剂是赛尼可，赛尼可具有活性强，稳定性好等优点，但同时也具有难以控制的肠道症状、油便和呕吐腹涨等缺点。因此寻找新的胰脂肪酶抑制剂对肥胖以及糖尿病等代谢性疾病的防治具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供用于制备胰脂肪酶抑制剂异戊烯基黄酮化合物，具体涉及结构如式（I）所示的化合物，尤其是化合物5-甲氧基-8-(2,4-二羟基苯基)-2,2-二甲基-9-(3-甲基-2-丁烯基)-2H,10H-苯并[1,2-b:3,4-b']二吡喃-10-酮，该化合物是从白桂木Artocarpus hypargyreus Hance的茎枝中分离得到的天然化合物。

（I）

本发明的另一目的是提供所述化合物的药用用途，该化合物经胰脂肪酶的抑制活性试验，结果显示具有明显的胰脂肪酶抑制活性。该化合物可作为制备新的预防或治疗肥胖症及相关代谢性疾病药物的先导化合物，也可用于制备预防或治疗临床常见多发的肥胖症及相关代谢性疾病的药物。

本发明所述的化合物通过以下方法制得：

将白桂木Artocarpus hypargyreus Hance的茎枝粉碎后，用有机溶剂或/和水提取制备得到总提取物，将总提取物溶于水后，以卤代烃类溶剂萃取，取卤代烃类溶剂萃取相，回收溶剂后干燥即得到卤代烃类提取物，

将卤代烃类提取物进行硅胶柱层析，依次用10:1～1:1的石油醚-丙酮梯度洗脱，收集流份；将石油醚-丙酮1:1流份进行硅胶柱层析，以氯仿-丙酮 4:1洗脱后得到化合物5-甲氧基-8-(2,4-二羟基苯基)-2,2-二甲基-9-(3-甲基-2-丁烯基)- 2H,10H-苯并[1,2-b:3,4-b']二吡喃-10-酮，用波谱方法鉴定其结构，如式（I）所示。

本发明中，所述的有机溶剂可采用醇类，如乙醇，甲醇等，其中优选95%（体积比）乙醇。

本发明中，所述的卤代烃类溶剂可以用氯仿或二氯甲烷，其中优选氯仿。

对本发明式（I）的化合物进行胰脂肪酶抑制活性测试，结果表明，所述化合物（I）具有很强的胰脂肪酶抑制作用，该化合物可作为研制新的预防或治疗肥胖症及相关代谢性疾病药物的先导化合物，也可用于制备预防或治疗临床常见多发的肥胖症及相关代谢性疾病的药物组合物。

本发明提出的预防或治疗临床常见多发的肥胖症及相关代谢性疾病的药物组合物含有有效剂量的化合物（I），以及一种或多种药学上可接受的载体。

所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等；填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钙；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钠和镁、聚乙二醇等。所述的组合物中还可以加入其它辅料如香味剂、甜味剂等。

本发明可以组合物的形式通过口服、注射、经皮吸收、经黏膜吸收等方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸等固体剂型，或者溶液剂、混悬剂、乳剂等液体剂型。用于注射时，可将其制成注射用的溶液、混悬液、乳液或无菌粉末等。用于经皮吸收时，可将其制成软膏、凝胶或搽剂等。用于经黏膜吸收时，可将其制成舌下片、口含片、栓剂、喷雾剂、粉雾剂等。

本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。

具体实施方式

下面结合具体实施实例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。

实施例1 从白桂木中提取分离本发明化合物

（1）提取：白桂木Artocarpus hypargyreus Hance干燥茎枝20 kg粉粹后，用20倍量的95%乙醇渗漉提取，收集渗滤液，浓缩干燥，得到浸膏1.63 kg，将此浸膏溶于水后用氯仿萃取，回收溶剂浓缩至干，得氯仿提取物214 g；

（2）分离：将氯仿提取物50 g进行硅胶柱层析，用石油醚-丙酮（10:1→6:1→3:1→1:1）梯度洗脱，每个梯度用量5000 ml，收集流份；其中石油醚-丙酮1:1流份进行硅胶柱层析，以氯仿-丙酮 4:1洗脱（用量1000 ml）后得到化合物5-甲氧基-2,2-二甲基-9-(3-甲基-2-丁烯基)-8-(2,4-二羟基苯基)-2H,10H-苯并[1,2-b:3,4-b']二吡喃-10-酮30 mg（I）。

化合物（I）的理化性质及光谱数据如下述：分子式为C₂₆H₂₆O₆；分子量为434；性状为黄色无定形粉末；紫外光谱最大吸收波长值（甲醇）：280 (3.54), 206 (4.41) nm；红外光谱最大吸收频率值（溴化钾）：3386, 2965, 2925, 1645, 1588, 1464, 1447, 1370, 1351, 1205, 1121, 1083, 847 cm^-1；电子轰击质谱（质荷比）：434 (93, M⁺), 419 (32), 401 (39), 391 (100), 379 (24), 361 (16), 281 (12), 217 (33), 207 (37)；高分辨电子轰击质谱（质荷比）：434.1729 [M]⁺（示分子式为 C₂₆H₂₆O₆）；核磁共振氢谱（400 MHz）数据（化学位移：ppm，偶合常数：Hz, 溶剂：氘代丙酮）：8.73 (1H, br s, OH), 7.13 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-6'), 6.60 (1H, d, J = 10.0 Hz, H-16), 6.55 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-3'), 6.48 (1H, dd, J = 8.3, 2.2 Hz, H-5'), 6.44 (1H, s, H-8), 5.63 (1H, d, J = 10.0 Hz, H-17), 5.11 (1H, br t, J = 7.0 Hz, H-12), 3.91 (3H, s, OCH₃-7), 3.04 (2H, br d, J = 7.0 Hz, H₂-11), 1.55 (3H, br s, H₃-15), 1.46 (6H, br s, H₃-19, 20), 1.38 (3H, br s, H₃-14); 核磁共振碳谱（100 MHz）数据（化学位移：ppm，溶剂：氘代丙酮）：176.3 (C-4), 161.1 (C-4'), 160.0 (C-9), 159.3 (C-7), 158.7 (C-2), 157.1 (C-2'), 154.6 (C-5), 132.2 (C-6'), 131.2 (C-13), 128.4 (C-17), 124.1 (C-3), 123.6 (C-12), 116.8 (C-16), 113.4 (C-1'), 109.3 (C-10), 107.9 (C-5'), 107.8 (C-6), 103.8 (C-3'), 92.2 (C-8), 77.6 (C-18), 56.5 (OCH₃-7), 27.9 (C-19, 20), 25.8 (C-15), 25.2 (C-11), 17.6 (C-14)。

实施例2 本发明化合物（I）对胰脂肪酶的抑制活性测定

首先底物p-Nitrophenyl acetate（sigma公司）用磷酸缓冲液（PBS，pH 7.4）配成1.35 M；猪胰脂肪酶（sigma公司）用磷酸缓冲液配成10 mg/ml；化合物（I）用磷酸缓冲液配制成不同浓度的溶液，然后在96孔板中依次加入50 μl稀释20倍后的酶溶液、40 μl稀释1000倍后的底物溶液以及10 μl不同浓度的受试样品，混匀，25 ℃下反应20分钟，每隔2分钟在405 nm下检测每孔的吸光度；

根据在405 nm下的吸光度计算受试样品对胰脂肪酶的抑制率（%），以蒸馏水为对照，并将酶活性抑制率（%）达到50 %时抑制剂的浓度测定为IC₅₀值，抑制率（%）可以根据下式进行：

抑制率 (%) = [(A-B)-(C-D)]/(A-B)×100

上式中，A表示反应后空白孔在405 nm下的吸光度，

B表示反应前空白孔在405 nm下的吸光度，

C表示反应后样品孔在405 nm下的吸光度，

D表示反应前样品孔在405 nm下的吸光度。

测试结构式（I）化合物对胰脂肪酶活性抑制作用结果，IC₅₀ 为2.31 ± 0.13 (μM)，表明化合物（I）对胰脂肪酶具有很强的抑制作用。

依据脂肪摄入过多可能导致肥胖以及与肥胖相关的糖尿病、高脂血症、脂肪肝等代谢失调性疾病，抑制胰脂肪酶可以抑制脂肪在小肠的分解，从而抑制脂肪的吸收；因此，所述的化合物（I）能作为胰脂肪酶抑制剂，用于预防或治疗肥胖症等疾病。

实施例3 制备含本发明化合物（I）片剂

将化合物（I）20 g和乳糖69 g粉碎、过筛、混合均匀，用水润湿制成软材，过20目筛制湿颗粒，80℃ 烘干，用20目筛整粒，加入淀粉10 g和硬脂酸镁1 g，充分混合后压片，每片重100 mg，活性成分含量为 20 mg。

实施例4 制备含本发明化合物（I）滴丸剂

将化合物（I）5 g经超微粉碎过200目筛后得细粉，加入至熔融的50 g聚乙二醇6000基质中，搅匀，以二甲基硅油为冷却剂，滴制法制丸，干燥，即得。

实施例5 制备含本发明化合物（I）胶囊剂

将化合物（I） 10 g粉碎过80目，与乳糖 100 g，微粉硅胶0.5 g，混合均匀，装2#胶囊，每粒110 mg。

实施例6 制备含本发明化合物（I）口服液

取化合物（I）10 g，加聚乙二醇400 1000 ml，搅拌使溶解，加水6000 ml混合均匀，加入甜叶菊素1 g，搅拌溶解，加水稀释至10000 ml，滤过，分装，10 ml/支。

实施例7 制备含本发明化合物（I）注射剂

取化合物（I）10 g，加入丙二醇和乙醇各200 ml，搅拌使溶解，加注射用水稀释至10000 ml，用0.22 μm的微孔滤膜滤过，灌封，2 ml/支，流通蒸汽灭菌30 min，检验、包装，得注射液。

Claims

1.式(I)结构的异戊烯基黄酮化合物，

所述化合物是5-甲氧基-8-(2,4-二羟基苯基)-2,2-二甲基-9-(3-甲基-2-丁烯基)-2H,10H-苯并[1,2-b:3,4-b′]二吡喃-10-酮；其分子式为C₂₆H₂₆O₆；分子量为434；

通过下述方法制备：

将白桂木Artocarpus hypargyreus Hance的茎枝粉碎后，用有机溶剂或/和水提取制备得到总提取物，将总提取物溶于水后，以卤代烃类溶剂萃取，取卤代烃类溶剂萃取相，回收溶剂后干燥即得到卤代烃类提取物；

将卤代烃类提取物进行硅胶柱层析，依次用10:1～1:1的石油醚-丙酮梯度洗脱，收集流份；将石油醚-丙酮1:1流份进行硅胶柱层析，以氯仿-丙酮4:1洗脱后得到式(I)化合物。

2.按权利要求1所述的异戊烯基黄酮化合物，其特征在于，所述的制备方法中，有机溶剂选自乙醇或甲醇。

3.按权利要求2所述的异戊烯基黄酮化合物，其特征在于，所述的制备方法中，有机溶剂为体积比95％的乙醇。

4.按权利要求1所述的异戊烯基黄酮化合物，其特征在于，所述的制备方法中，卤代烃类溶剂选自氯仿或二氯甲烷。

5.按权利要求1所述的异戊烯基黄酮化合物，其特征在于，所述的制备方法中，卤代烃类溶剂为氯仿。

6.权利要求1的式(I)化合物在制备胰脂肪酶抑制剂中的用途。

7.一种预防或治疗肥胖症药物组合物，其特征在于，含有权利要求1所述的式(I)化合物，以及药学上可以接受的载体。