CN102791279A - 用于进行冠状动脉旁路移植手术的方法 - Google Patents

用于进行冠状动脉旁路移植手术的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102791279A
CN102791279A CN2010800650175A CN201080065017A CN102791279A CN 102791279 A CN102791279 A CN 102791279A CN 2010800650175 A CN2010800650175 A CN 2010800650175A CN 201080065017 A CN201080065017 A CN 201080065017A CN 102791279 A CN102791279 A CN 102791279A
Authority
CN
China
Prior art keywords
peptide
arg
cabg
lys
administered
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2010800650175A
Other languages
English (en)
Inventor
肯尼斯·博罗
D·特拉维斯·威尔逊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Stealth Peptides International Inc
Original Assignee
Stealth Peptides International Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Stealth Peptides International Inc filed Critical Stealth Peptides International Inc
Publication of CN102791279A publication Critical patent/CN102791279A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
    • A61F2/02—Prostheses implantable into the body
    • A61F2/04—Hollow or tubular parts of organs, e.g. bladders, tracheae, bronchi or bile ducts
    • A61F2/06—Blood vessels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M39/00—Tubes, tube connectors, tube couplings, valves, access sites or the like, specially adapted for medical use
    • A61M39/08—Tubes; Storage means specially adapted therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M5/00—Devices for bringing media into the body in a subcutaneous, intra-vascular or intramuscular way; Accessories therefor, e.g. filling or cleaning devices, arm-rests
    • A61M5/14—Infusion devices, e.g. infusing by gravity; Blood infusion; Accessories therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M2210/00—Anatomical parts of the body
    • A61M2210/12—Blood circulatory system
    • A61M2210/125—Heart

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明提供了治疗哺乳动物对象中的阻塞性冠状动脉疾病的方法。所述方法包括将有效量的芳香族阳离子肽给药至需要该芳香族阳离子肽的所述对象，和对所述对象进行冠状动脉旁路移植手术。

Description

用于进行冠状动脉旁路移植手术的方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2009年12月31日提交的第61/291699号美国临时专利申请、2010年7月9日提交的第61/363138号美国临时专利申请和2010年10月26号提交的第61/406713号美国临时专利申请的优先权，这些美国临时专利申请的全部内容通过引用并入本文。
技术领域
本发明总体涉及利用冠状动脉旁路移植（CABG）手术治疗阻塞性冠状动脉疾病的组合物和方法。具体地，所述方法涉及在CABG手术之前、CABG手术期间和/或CABG手术之后给药有效量的芳香族阳离子肽。
背景技术
提供以下描述来便于读者理解。所提供的信息或者所引用的参考资料都不能看作是本发明的现有技术。
冠状动脉旁路移植（CABG）手术有效地减轻心绞痛并有效地提高患有阻塞性冠状动脉疾病的患者的生命的存活率和生命质量。CABG手术是世界上执行的最常见的手术之一，并且与任何其他单一手术相比，其导致更多的资源花费在心血管医学中。实际上，在2006年，在美国近乎对500000个住院病人进行了CABG手术。然而，在围术期和术后期间，可能发生心肌梗塞、心室衰竭、危及生命的心律不齐、肾机能不全、神经损伤和死亡。需要CABG的患者属于年龄越来越大的人群且其特征在于有共存的病症（包括晚期动脉粥样硬化），在这样的患者中，预计这样的不良事件的发生率会增加。
左心室（LV）功能是冠状动脉手术之后早期死亡率和晚期死亡率的重要预测因素。与LV功能正常的患者相比，在经受冠状动脉旁路手术的患者中，左心室功能与增加的围术期死亡率以及远期死亡率的风险相关联。低射血分数（EF）和临床心衰预示着CABG手术有较高的手术死亡率。最近已报道了，在CABG手术后，术后N-末端脑钠肽前体（NT-proBNP）浓度与较高的住院病死率和延长的重症监护病房（ICU）停留（>4天）有关。
CABG手术后的肌酸激酶同工酶片段（CK-MB）的任何增多暗示心肌细胞坏死，且较高的CK-MB浓度可能与更坏的结果相关。已报道了术后CK-MB升高和死亡率之间的线性关系如下：小于5倍、5倍到小于10倍、10倍到小于20倍和大于20倍的正常上限值的术后CK-MB峰值分别与3.4%、5.8%、7.8%和20.2%的六个月死亡率有关联。近期的一份一致认同的文献建议基于与新型病理Q波或左束支传导阻滞的出现、通过造影术记录的新移植或自体冠状动脉阻塞、或存活心肌的新损耗的影像学证据相关联的在CABG手术之后第一个72小时期间至少5倍于正常上限值的CK-MB升高来定义CABG手术后的心肌梗塞。
最终，如果打算改善CABG患者的疗效，则开发用于预防心肌缺血再灌注损伤（一种引起增加的心脏血管发病率和死亡率的重要机制）的更好方法将是重要的。此外，开发新的辅助治疗且以新的辅助治疗为目标以减轻或最小化对其他脆弱的末端器官（例如肾和脑）的损伤对于改善经受CABG的患者的疗效而言仍然重要。
发明内容
本发明总体涉及通过将治疗有效量的芳香族阳离子肽给药至需要其的对象来治疗哺乳动物中的阻塞性冠状动脉疾病。在一个方面中，本发明提供一种用于治疗阻塞性冠状动脉疾病的方法，该方法包括：（a）将治疗有效量的肽D-Arg-2′6′-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐给药至需要其的哺乳动物对象；以及（b）对该对象进行冠状动脉旁路移植手术。在另一方面中，本发明提供了一种用于预防冠状动脉旁路移植（CABG）手术期间的肾并发症或脑并发症的方法，该方法包括：（a）将治疗有效量的肽D-Arg-2′6′-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐给药至哺乳动物对象；以及（b）对该对象进行冠状动脉旁路移植手术（CABG）。
在一些实施方式中，所述芳香族阳离子肽是具有以下特点的肽：
至少一个净正电荷；
最少四个氨基酸；
最多约20个氨基酸；
净正电荷的最小数目（pm）和氨基酸残基的总数目（r）之间的关系为：3pm是小于或等于r+1的最大数；以及芳香族基团的最小数目（a）和净正电荷的总数目（pt）之间的关系为：除了当a为1时，pt也可为1之外，2a是小于或等于pt+1的最大数。在一个实施方式中，2pm是小于或等于r+1的最大数，且a可以等于pt。所述芳香族阳离子肽可以是具有最少两个正电荷或最少三个正电荷的可溶于水的肽。
在一个实施方式中，所述肽包括一种或多种非自然存在的氨基酸，例如一种或多种D型氨基酸。在一些实施方式中，氨基酸的在C-末端的C-末端羧基被酰胺化。在某些实施方式中，所述肽最少具有4个氨基酸。肽可以最多有约6个、最多约9个或者最多约12个氨基酸。
在一个实施方式中，所述肽包括在N-末端的酪氨酸残基或2′,6′-二甲基酪氨酸（Dmt）残基。例如，所述肽可以具有分子式Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2或2′,6′-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2。在另一实施方式中，所述肽包括在N-末端的苯丙氨酸残基或2′,6′-二甲基苯丙氨酸残基。例如，所述肽可以具有分子式Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2或2′,6′-Dmp-D-Arg-Phe-Lys-NH2。在特定的实施方式中，所述芳香族阳离子肽具有分子式D-Arg-2′,6′-Dmt-Lys-Phe-NH2（也被称为SS-31）。
在一个实施方式中，所述肽由下式I定义：
Figure BDA00002079153600041
其中R1和R2各独立地选自：
（i）氢；
（ii）线性或支链的C1-C6的烷基；
（iii）
Figure BDA00002079153600042
其中m=1-3;
（iv）
（v）
Figure BDA00002079153600044
R3和R4各独立地选自：
（i）氢；
（ii）线性或支链的C1-C6的烷基；
（iii）C1-C6的烷氧基；
（iv）氨基；
（v）C1-C4的烷基氨基；
（vi）C1-C4的二烷基氨基；
（vii）硝基；
（viii）羟基；
（ix）卤素，其中“卤素”包括氯、氟、溴和碘；
R5、R6、R7、R8、R9各独立地选自：
（i）氢；
（ii）线性或支链的C1-C6的烷基；
（iii）C1-C6的烷氧基；
（iv）氨基；
（v）C1-C4的烷基氨基；
（vi）C1-C4的二烷基氨基；
（vii）硝基；
（viii）羟基；
（ix）卤素，其中“卤素”包括氯、氟、溴和碘；且
n为1到5的整数。
在特定的实施方式中，R1和R2是氢；R3和R4是甲基；R5、R6、R7、R8、R9都是氢；且n为4。
在一个实施方式中，肽由下式II定义：
Figure BDA00002079153600051
其中R1和R2各独立地选自：
（i）氢；
（ii）线性或支链的C1-C6的烷基；
（iii）
Figure BDA00002079153600061
其中m=1-3;
（iv）
Figure BDA00002079153600062
（v）
Figure BDA00002079153600063
R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12各独立地选自：
（i）氢；
（ii）线性或支链的C1-C6的烷基；
（iii）C1-C6的烷氧基；
（iv）氨基；
（v）C1-C4的烷基氨基；
（vi）C1-C4的二烷基氨基；
（vii）硝基；
（viii）羟基；
（ix）卤素，其中“卤素”包括氯、氟、溴和碘；且
n为1到5的整数
在特定的实施方式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12均为氢；且n为4。在另一实施方式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R11均为氢；R8和R12为甲基；R10为羟基；且n为4。
所述芳香族阳离子肽可以以各种方式给药。在一些实施方式中，所述肽可以口服给药、局部给药、鼻内给药、腹腔内给药、静脉内给药、皮下给药或经皮给药（例如，通过离子电渗疗法）。
在一个实施方式中，在缺血之前将所述肽给药至对象。在一个实施方式中，在再灌注缺血组织之前，将所述肽给药至对象。在一个实施方式中，大约在再灌注缺血组织时将所述肽给药至对象。在一个实施方式中，在再灌注缺血组织之后将所述肽给药至对象。
在一个实施方式中，在CABG手术之前将所述肽给药至所述对象。在另一实施方式中，在CABG手术之后，将所述肽给药至所述对象。在另一实施方式中，在CABG手术期间和CABG手术之后将所述肽给药至对象。在另一实施方式中，在CABG手术之前、CABG手术期间和CABG手术之后，将所述肽连续地给药至所述对象。
在一个实施方式中，在CABG之前至少5分钟时、至少10分钟时、至少30分钟时、至少1小时时、至少3小时时、至少5小时时、至少8小时时、至少12小时时或至少24小时时开始将所述肽给药至对象。在一个实施方式中，在CABG手术之前约5分钟-30分钟时、从约10分钟-60分钟时、从约10分钟-90分钟时、或从约10分钟-120分钟时，将所述肽给药至对象。在一个实施方式中，将所述肽给药至对象直到CABG手术之后约5分钟-30分钟、约10分钟-60分钟、约10分钟-90分钟或约10分钟-120分钟、或者约10分钟-180分钟。
在一个实施方式中，在CABG手术之后，将所述肽给药至所述对象至少30分钟、至少1小时、至少3小时、至少5小时、至少8小时、至少12小时或至少24小时。在一个实施方式中，在CABG手术之后，给药肽的持续时间为约30分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约8小时、约12小时或约24小时。
在一个实施方式中，在再灌注组织之前约1分钟到30分钟（即，再灌注之前约5分钟、约10分钟、约20分钟或约30分钟）时开始将所述肽以静脉输液的方式给药至所述对象，且在再灌注之后继续约1小时到24小时（即，再灌注之后约1小时、约2小时、约3小时、或约4小时）。在一个实施方式中，在再灌注组织之前，所述对象接受静脉推注。在一个实施方式中，所述对象在再灌注期之后继续长期接受肽，即在再灌注期之后持续约1天-7天、约1天-14天、约1天-30天接受肽。在该时间段期间，可以通过任何途径给药所述肽，例如皮下给药或静脉给药。
在一个实施方式中，通过在麻醉诱导之前约5-60分钟时、约10-45分钟时或约30分钟时开始的全身静脉输注来给药所述肽。在一个实施方式中，所述肽与心脏停搏液联合给药。在一个实施方式中，在心肺转流期间，将所述肽以心肺机中的预充液的一部分的形式给药。
附图说明
图1示出用在实施例中的动物的研究设计；
图2A和图2B示出了表示采用假手术处理（应用结扎线，但未上紧）的兔子的梗塞大小的数据。图2A为利用安慰剂治疗的假手术兔子的心脏切片的照片以及突出显示了梗塞大小的计算机生成图像。图2B为利用肽治疗的假手术兔子的心脏切片的照片以及突出显示了梗塞大小的计算机生成图像；
图3A和图3B示出了表示诱导心肌缺血且利用安慰剂治疗的两个不同的对照兔子的梗塞大小的数据。每个图示出了心脏切片的照片和突出显示了梗塞大小的计算机生成图像；
图4A、4B、4C、4D和4E示出了表示诱导心肌缺血且利用示例性的芳香族阳离子肽治疗的五个不同的兔子的梗塞大小的数据。每个图示出了心脏切片的照片和突出显示了梗塞大小的计算机生成图像；
图5为示出关于对照组兔子和测试组兔子的梗塞面积与左心室面积的比率的图表；
图6为示出关于对照组兔子和测试组兔子的梗塞面积与危险面积的比率的图表。
具体实施方式
应当明白，为了提供对本发明的实质性理解，在下文中以不同的详细程度描述了本发明的某些方面、模式、实施方式、变型和特征。
下文提供了本说明书中使用的一些术语的定义。除非另有说明，本文中使用的所有技术和科学用语通常具有和本发明所属领域的普通技术人员通常理解的意思相同的意思。
除非内容清楚指明，否则本说明书和所附的权利要求中使用的单数形式“一”和“该”包括复数的引用对象。例如，所提及的“一个细胞”包括两个细胞或更多细胞的组合等。
本文中使用的将制剂、药物或肽“给药”至对象包括将化合物引入到或给送至对象以执行其预期功能的任何途径。可以通过任何合适的途径来执行“给药”，包括口服、鼻内、肠胃外（通过静脉内、肌内、腹腔内或皮下）或者局部给药。“给药”包括自己给药和由其他人给药。
本文中使用的术语“氨基酸”包括天然存在的氨基酸和合成的氨基酸以及氨基酸类似物和以类似于天然存在的氨基酸的形式作用的氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是通过遗传密码编码的氨基酸以及后来被改性的那些氨基酸，比如羟(基)脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物指的是具有和天然存在的氨基酸相同的基本化学结构的化合物，例如，所述的基本化学结构即结合至氢的α-碳、羧基、氨基和R基，所述氨基酸类似物比如为高丝氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亚砜、蛋氨酸甲基锍。这样的类似物具有改性的R基（例如正亮氨酸）或改性的肽主链，但保持与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物指的是具有与氨基酸的通用化学结构不同的结构、但以类似于天然存在的氨基酸的方式作用的化学化合物。本文中按照IUPAC-IUB生化命名委员会建议的通常已知的三字母符号或者一字母符号可指代氨基酸。
本文中使用的术语“有效量”指的是足以获得所需的治疗和/或预防效果的量，例如引起预防或减轻心脏缺血再灌注损伤或与心脏缺血再灌注损伤关联的一种或多种病症的量。在治疗应用或预防应用的背景下，给药至对象的组合物的量将取决于疾病的类型和严重性以及个体的性质，比如平常健康情况、年龄、性别、体重和对药物的耐受力。所述量还取决于疾病的程度、严重性和类型。专业的技术人员将能够根据这些因素和其他因素来确定合适的剂量。所述组合物还可结合一种或多种其他的治疗化合物来给药。在本文描述的方法中，芳香族的阳离子肽可以给药至具有血管阻塞的一种或多种症状或症候的对象。在其它实施方式中，哺乳动物具有心肌梗塞的一种或多种症状或症候，比如描述为胸腔中部内的压觉、胀满或挤压的胸痛；胸痛放射至下巴或牙齿、肩膀、手臂和/或背部；呼吸困难或气促；伴随或不伴随恶心呕吐的上腹部不适；以及发汗或出汗。例如，芳香族阳离子肽的“治疗有效量”是指最小程度地减轻CABG期间心脏缺血再灌注损伤的生理作用的平均水平。
本文中使用的术语“缺血再灌注损伤”指的是由以下引起的损害：首先限制血液供应到一组织，之后突然再供应血液并伴随产生自由基。缺血是供应到组织的血液减少且缺血之后再灌注、氧突然灌注入缺血的组织。
“分离的”或“纯化的”多肽或肽基本上不具有源自细胞或组织的源（试剂来自于该源）的细胞材料或其它受污染的多肽，或者当化学合成时基本上不具有化学前体或其它的化学物质。例如，分离的芳香族的阳离子肽将不具有会干扰试剂的诊断用途或治疗用途的材料。这样的干扰材料可以包括酶、激素和其他蛋白质的和非蛋白质的溶解物。
本文中使用的术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中是可互换的，以表示包括通过肽键或改性的肽键而互相连接的两个或更多个氨基酸的聚合物，例如肽电子等排体。多肽指的是短链（通常称为肽、糖肽或低聚物）以及较长的链（通常称为蛋白质）。多肽可以包括与20个基因编码的氨基酸不同的氨基酸。多肽包括通过诸如翻译后加工的天然进程或本领域熟知的化学改性技术改性的氨基酸序列。
本文中使用的术语“同时”治疗应用指的是通过相同的途径且在同一时间或基本上在同一时间将至少两种活性成分给药。
本文中使用的术语“单独”治疗应用指的是在同一时间或者基本上相同的时间通过不同的途径将至少两种活性成分给药。
本文中使用的术语“顺序”治疗应用指的是在不同的时间将至少两种活性成分给药，给药途径相同或不同。更具体地，顺序应用指的是在其它活性成分给药开始之前，将所述活性成分中的一种活性成分完全给药。因此，可能在将其它的活性成分给药之前的若干分钟、若干小时或若干天之前，将一种活性成分给药。在这种情况下没有进行同时治疗。
本文中使用的术语“治疗”或“减轻”指的是治疗处理措施和预防或防止措施，其中，目的是防止或减缓（减轻）目标病症或失调。如果在接受了根据本文所述的方法的治疗量的芳香族的阳离子肽后，对象显示出血管阻塞损伤的一种或多种症状和症候的可以观察到的和/或测定到的减少和消失，例如梗塞大小减小，则对象的血管阻塞损伤得到成功地“治疗”。还应当理解，本文描述的治疗或预防医学病症的各种模式意在表示“显著”，其包括完全治疗或者预防以及小于完全治疗或者预防，其中达到了某种生物学相关或医学相关的结果。
本文中使用的“预防”失调或病症指的是化合物相对于未治疗的对照样本降低治疗的样本的失调或病症的发生，或者相对于未治疗的对照样本延迟失调或病症的一种或多种症候的发生或者减轻失调或病症的一种或多种症候的严重程度。如本文中所使用的，预防CABG的肾并发症或脑并发症包括在统计学样本上预防或减轻对经受CABG的患者中的脑或肾的损害。预防并不意味着对象在以后的生活中不再形成病症，仅仅指发生的可能性减小。
利用芳香族阳离子肽执行CABG手术的方法
本发明涉及通过将给药某芳香族阳离子肽与CABG手术联合来治疗或预防阻塞性冠状动脉疾病。还提供了一种用于治疗或预防心脏缺血再灌注损伤的方法。在一个方面中，本发明涉及一种冠状动脉血管重建的方法，该方法包括将治疗有效量的芳香族阳离子肽给药至哺乳动物对象以及对该对象进行冠状动脉旁路移植（CABG）手术。
已示出某些芳香族阳离子肽（包括D-Arg-2′,6′-Dmt-Lys-Phe-NH2）对具有心肌缺血再灌注（IR）损伤的大量体内动物模型有效。在急性的心肌IR模型中，兔子经历30分钟的缺血，之后经历180分钟的再灌注。在再灌注之前20分钟时开始输注D-Arg-2′,6′-Dmt-Lys-Phe-NH2或赋形剂并在整个实验中继续输注。通过计算处于梗塞风险中的LV的量（由组织学上的不吸收伊文思蓝（Evans Blue）染料的面积的量来测定）与梗塞面积（由未染上氯化三苯基四唑氮的面积的量测量）的比率来确定梗塞大小。
在一个方面中，本发明涉及用于当在经历CABG手术的患者的术前、术中和紧接术后给药时将芳香族阳离子肽用作多器官保护剂的方法。已知心肺转流术诱导氧化应激。在缺血心肌再氧化和再灌注期间，产生氧衍生的自由基（超氧阴离子、氢氧根负离子和过氧化氢），并且清除这些自由基的正常内生机制减少。在大多数情况下，这些氧自由基是细胞代谢的副产物并且通过超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶来酶促地清除或去除活性以及通过抗氧化剂受体（比如为谷胱甘肽、维生素E和血红蛋白）来清除或去除活性。在心肌的再灌注期间活性氧（ROS）的过量产生对细胞膜造成损害并使酶渗漏至组织间质，导致超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的消耗。
线粒体是ROS的主要胞内来源。在功能上，线粒体是氧化应激的发起者并且是氧化应激的第一靶点。线粒体损伤可导致细胞死亡。这反应了线粒体在能量代谢和钙稳态中所起到的重要作用以及线粒体释放促凋亡因子（比如细胞色素C）和凋亡诱导因子的能力。线粒体对缺血非常敏感。实际上，线粒体损伤和功能失调甚至可以在轻度降低的心肌血流量而ATP或磷酸肌酸的浓度没有立即改变的时间段后发生。
再灌注损伤至少部分地涉及线粒体通透性转换的问题。最终，这导致产生低ATP浓度和改变的离子内稳态，引起细胞膜的破裂和细胞死亡。再灌注后心律失常也与线粒体功能失调有关。使用抗氧化剂疗法、钙通道阻断剂、钠-氢交换抑制剂和消炎药物以单独针对患者中的缺血再灌注损伤的已知介质的先前的尝试大多令人失望。这已经导致了这样的观念：需要用于缺血再灌注损伤的多目标机械方法，来成功地将试验干预转化成预防再灌注损伤的临床表现，该再灌注损伤包括：再灌注心律失常、心肌顿抑、和肌细胞死亡以及梗塞。
这种在CABG手术中面向在细胞水平上的心肌挽救的普遍的方法必须包括预防缺血再灌注损伤的疗法，同时维持整个心肌微循环的血液流动。理论上，通过将技术上完美进行的CABG手术与可实现大导管动脉的时序要求严格的开放并维持开放的微脉管系统的双重目标的治疗试剂结合而能最理想地实现这一点。不幸的是，由于多个心脏的病理生理学紊乱与CABG手术冲突，已证明难以找到减少或预防CABG关联的心肌缺血再灌注损伤的有效疗法。
某些芳香族阳离子肽能够以线粒体作为目标。摄取研究表明：肽D-Arg-2′,6′-Dmt-Lys-Phe-NH2的细胞内浓度比细胞外液内的浓度高六倍，且在线粒体颗粒中的该药的浓度比细胞外液内的浓度高约为5000倍。因此，该肽被线粒体选择性地吸收。结合在线粒体中的这种聚集，该肽已显示出具有多个独特的特征，包括：清除活性氧（ROS）、促进线粒体电子传递链内的电子转移、维持线粒体呼吸（氧消耗）、维持三磷酸腺苷（ATP）水平、防止线粒体膜电位的消失、防止细胞色素c的释放和防止与抑制线粒体通透性转换孔（mPTP）开放一致的线粒体肿胀。
在一些实施方式中，在冠状动脉旁路移植手术之前、冠状动脉旁路移植手术期间和/或立即在冠状动脉旁路移植手术之后给药芳香族阳离子肽，预防或治疗CABG手术的肾并发症。在术后CABG患者中，在基线值以上的甚至较小的血清肌酸酐增加也与不良结果相关，且任何程度的肾功能不全，无论多么小，甚至在不存在功能完全丧失的情况下，都具有显著的临床后果。包括缺血再灌注损伤的围术期损伤，可导致形成肾损伤，该肾损伤表现为肾小球滤过率（GFR）降低且血清肌酸酐浓度上升。尽管过去十年中在冠状动脉旁路移植技术、重症看护和血液透析上取得进步，但是与术后肾功能失调相关联的发病率和死亡率没有发生显著的变化。尽管已经开发了不同的术中策略以给经历心脏血管手术的患者提供肾保护，但是这些策略主要集中使用药物，例如多巴胺、甘露醇和利尿磺胺。然而，已证明药物干预对肾没有保护。
已经表明，肽D-Arg-2′,6′-Dmt-Lys-Phe-NH2对减少缺血再灌注导致的ARI的发生有效。参见第20090221514号美国专利公布。尤其是，该肽对减少具有ARI的动物模型的间质纤维化、小管细胞凋亡、巨噬细胞浸和小管细胞增殖有效。该肽显著地提高了来自45分钟缺血和24小时再灌注的组织病理学评分，且还显著地增加再灌注后ATP产生率。
与术后CABG患者的肾功能失调相关的风险因子可以分成患者相关的标准和手术相关的标准。患者相关的因子包括糖尿病、高血压、左心室功能失调、和已存在的肾脏疾病。例如，与具有较低的术前肾血清肌酸酐值的对象相比，具有术前肾血清肌酸酐（SCr）≥1.5mg/dL的患者发生术后肾功能的急剧恶化、延长机械通风、增加的重症看护和住院时间、以及更大的短期死亡率和长期死亡率的风险更大。对于术前SCr≥1.7mg/dL且＜2.5mg/dL的非透析患者，围术期死亡率逐渐增加且可高达33%。总的说来，术前具有更少数量的功能正常的肾元的患者在围术期和术后期对于分布不均的肾脏血液流动和减少的肾脏血液流动、增加的肾血管阻力以及减少的肾小球滤过率更为敏感。
已存在的肾脏疾病极大地增加了围术期的并发症的风险。肾功能随着年龄而衰退，并且肾功能不全是几个常见的心脏血管风险因子（例如高血压和糖尿病）的结果。受损的肾功能恶化这些病症的影响，且与多个其他不能明确定义的风险因子相关，这些其他不能明确定义的风险因子包括增加的急性期蛋白、减少的抗氧化剂和钙/磷酸盐代谢紊乱。肾功能不全也是减少的左心室收缩功能和心力衰竭的常见结果。另外，慢性肾脏疾病本身是左心室肥厚、左心室扩张和左心室功能不全的风险因子。
急性肾损伤（AKI）的工作定义需要肾功能的突发（48小时内）下降，该肾功能下降定义为血清肌酸酐水平的绝对上升≥26.4μmol/l（0.3mg/dl）或血清肌酸酐水平的百分含量增加≥50%（比基线高1.5倍）或尿排出量的减少（记录的少尿＜0.5ml/kg/h持续＞6小时）。假设当这些标准可应用时，在临床表现和后来的充分的液体复苏的情形下应用这些标准。总的来说，急性肾损伤网络（AKIN）提出了描述血清肌酸酐相对于基线的增加以及术后尿排出量减少的三个分级。
多个普通的病理生理学过程被认为对与CABG手术相关联的AKI起作用。缺血性再灌注损伤、氧化应激和炎症包括在该名单中。尤其，这些因子表现为以相互联系的且可能协同的方式起作用。通常地，肾灌注被自调节以便维持肾小球滤过率直到平均动脉血压下降到80mm汞柱以下。在心脏手术期间的平均动脉血压经常处于下限或低于自调节的限度，尤其在血液动力学不稳定期间。此外，由于存在的共存病（例如高龄、动脉粥样硬化、慢性高血压、或慢性肾病）、给药损害肾脏自调节的药物（例如非甾体类抗炎药物、ACE抑制剂、血管紧张素受体阻断剂和放射性对比剂）或促炎状态，许多心脏手术患者具有受损害的自调节。在具有受损害的自调节的患者中，甚至当平均动脉血压处于正常范围内时，肾功能也可恶化。
在CABG患者中，这些因子可导致具有小管上皮细胞和血管内皮细胞的损伤和活化的细胞缺血。此外，可发生微血管及小管的阻塞，导致损伤和细胞减少的恶性循环。在维持期间，当细胞修复、细胞分裂和细胞再分化发生时、以及维持期过渡到恢复期时，损伤得以稳定；或者有害介质的持续释放驱使细胞响应朝着不合适的增殖和纤维化的方向发展。最终，核苷损耗在次黄嘌呤的累积中达到顶点，且有助于反应性氧分子的产生。甚至在非体外循环心脏手术中小管氧化应激很明显，且该小管氧化应激被心肺转流所恶化。现有的证据表明凋亡是在AKI中早期小管细胞死亡的主要机制。凋亡的关键步骤在于活化半胱天冬酶（半胱氨酸天冬氨酸-特异性蛋白酶），该半胱天冬酶在程序化的细胞死亡期间极其起作用。半胱天冬酶的活化通过控制线粒体膜通透性的途径发生，这些途径诱发在线粒体中的孔使细胞色素c外出进入到细胞质中，然后激活半胱天冬酶级联反应。
心脏手术通过激发强烈的全身炎症响应也可以对缺血性肾损伤起作用。在心脏手术期间的促炎事件包括手术创伤、血液成分与CPB管路的人工表面的接触、缺血再灌注损伤和内毒素血症。这种全身炎症反应可导致包括肾、肺、心脏和脑的多种末端器官的机能失调。
对与CABG相关联的AKI为缺血、内皮功能失调和小管损伤之间的复杂相互作用的认识，已经引起对可替选的肾保护方法的探索。某种芳香族阳离子靶向所有这些过程以及有利地影响多个位点上游、和在终止小管损伤和血管损伤时的能力，已经导致发现该分子为肾保护剂。
在一些实施方式中，在CABG手术之前、CABG手术期间和/或立即在CABG手术之后给药芳香族阳离子肽，预防或治疗CABG手术的脑并发症。在经历CABG手术的患者中已经报道有术后神经退化，尤其当使用CPB时。参见Terrando等,Tumor necrosiss factor-α triggers a cytokine cascade yieldingpostoperative cognitive decline.Proc Natl Acad Sci USA 107(47):20518-20522,2010。尽管在心脏手术中取得了许多进步，但是围术期脑损伤和术后脑损伤仍然成为难题。在CPB期间减少的灌注压力以及在主动脉插管期间或CPB停机期间空气或颗粒物质的栓塞，可产生神经损害和神经精神疾病的并发症。
已经表明肽D-Arg-2′,6′-Dmt-Lys-Phe-NH2保护小鼠免受脑缺血。参见第0070129306号美国专利公布。在野生型小鼠的大脑中动脉闭塞30分钟后，在0小时、6小时、24小时和48小时用该肽治疗该小鼠，与生理盐水处理对照相比，导致梗塞体积和半球形肿胀的显著减少。
已经证实：CPB可引起全身炎症响应，该全身炎症响应可有助于在经受CABG手术的患者中形成神经损伤。该全身炎症响应可由外伤、血液与体外侧枝循环的接触和CPB中止后的肺再灌注损伤所介导。CPB相关的全身炎症响应与血清C-反应蛋白、IL-6、IL-8、和皮质醇的浓度有关。减弱这种全身炎症响应是重要的治疗目标，且与提高的疗效相关联。
此外，局部大脑事件可对心脏手术期间的患者不利。脑缺血的存在本身诱发了包括信号机制、基因转录和蛋白形成的复杂的一系列分子途径。在流至大脑区域的血液减少后几秒到几分钟内，引发缺血性级联反应，导致一系列生物化学事件，这些事件最终导致在梗塞中心/核心的细胞膜的分解和神经元死亡。与这些事件相关联的为多个病原效应物的联合作用，该联合作用包括氧化应激、ATP损耗、兴奋性中毒、炎症、凋亡、微血管闭塞和大脑的血-脑屏障的瓦解。氧化应激导致缺血性细胞死亡，该细胞死亡涉及通过多个损伤机制（包括线粒体抑制、Ca2+过载和缺血再灌注损伤）形成ROS/活性氮。缺血损伤引起的局部炎症由活化的小神经胶质细胞和浸润的炎症细胞导致，这些细胞在受损伤的位点进一步释放促炎细胞因子和ROS。由于大脑组织并没有很好的配置有抗氧化和抗炎症的防御措施，因此这些过程威胁缺血的脑组织的生存。脑缺血再灌注引起朝向大脑内促氧化状态的显著转变。由于这个原因，肽D-Arg-2′,6′-Dmt-Lys-Phe-NH2可被用为CABG手术期间的神经保护剂。
在一个实施方式中，在CABG手术期间和CABG手术之后将所述肽给药至对象。在另一个实施方式中，在CABG手术之前、CABG手术期间和CABG手术之后连续将所述肽给药至所述对象。在一个实施方式中，在CABG手术之前至少10分钟时、至少30分钟时、至少1小时时、至少3小时时、至少5小时时、至少8小时时、至少12小时时或至少24小时时开始将所述肽给药至所述对象。在一个实施方式中，在CABG手术之后将所述肽给药至所述对象至少3小时、至少5小时、至少8小时、至少12小时或至少24小时。在一个实施方式中，在CABG手术之前至少8小时时、至少4小时时、至少2小时时、至少1小时时、或至少30分钟时开始将所述肽给药至所述对象。在一个实施方式中，在CABG手术之后将所述肽给药至所述对象至少一周，至少一个月或至少一年。
芳香族阳离子肽为水溶性且具有强极性。尽管这些属性，但该肽仍可以容易穿透细胞膜。该芳香族阳离子肽通常包括由肽键共价连接的至少3个氨基酸或至少4个氨基酸。在该芳香族阳离子肽中存在的氨基酸的最大数目为通过肽键而共价连接的大约20个氨基酸。合适地，氨基酸的最大数目为大约12个、更优选地大约9个、且最优选地大约6个。
芳香族阳离子肽的氨基酸可以是任何氨基酸。本文中使用的术语“氨基酸”用来指包括至少一个氨基和至少一个羧基的任何有机分子。通常，至少一个氨基是相对于羧基在α位。所述氨基酸可以是天然存在的。例如，天然存在的氨基酸包括诸如通常在哺乳动物蛋白中发现的二十种最常见的左旋（L）氨基酸，即丙氨酸（Ala），精氨酸（Arg），天门冬酰胺（Asn），天门冬氨酸（Asp），半胱氨酸（Cys），谷氨酰胺（Gln），谷氨酸（Glu），甘氨酸（Gly），组氨酸（His），异亮氨酸（Ile），亮氨酸（Leu），赖氨酸（Lys），蛋氨酸（Met），苯丙氨酸（Phe），脯氨酸（Pro），丝氨酸（Ser），苏氨酸（Thr），色氨酸（Trp），酪氨酸（Tyr），和缬氨酸（Val）。其它天然存在的氨基酸包括诸如与蛋白质合成无关的代谢过程中合成的氨基酸。例如，氨基酸—鸟氨酸和瓜氨酸是在哺乳动物新陈代谢的产生尿素期间合成的。天然存在的氨基酸的另一示例包括羟（基）脯氨酸（Hyp）。
所述肽可选地包括一种或多种非天然存在的氨基酸。合适地，所述肽不具有天然存在的氨基酸。所述非天然存在的氨基酸可以是左旋（L-）氨基酸、右旋（D-）氨基酸或其混合物。非天然存在的氨基酸是这样的氨基酸：通常不是在生物体的天然代谢过程中合成的，且非天然地出现在蛋白质中。此外，非天然存在的氨基酸合适地也不会由普通的蛋白酶识别。非天然存在的氨基酸可以存在于肽的任何位置中。例如，非天然存在的氨基酸可以在N-末端、C-末端或者在N-末端和C-末端之间的任何位置。
例如，非天然的氨基酸可以包括天然氨基酸中不存在的烷基、芳基或烷基芳基。非天然烷基氨基酸的一些示例包括α-氨基丁酸，β-氨基丁酸，γ-氨基丁酸，δ-氨基戊酸和ε-氨基己酸。非天然的芳基氨基酸的一些示例包括邻氨基苯甲酸、间氨基苯甲酸和对氨基苯甲酸。非天然的烷基芳基氨基酸的一些示例包括邻氨基苯乙酸、间氨基苯乙酸和对氨基苯乙酸、以及γ-苯基-β-氨基丁酸。非天然存在的氨基酸包括天然存在的氨基酸的衍生物。所述天然存在的氨基酸的衍生物可以包括诸如对天然存在的氨基酸添加一种或多种化学基团。
例如，可以将一种或多种化学基团添加至苯基丙氨酸残基或酪氨酸残基的芳香环的2’、3’、4’、5’或6’位置或者至色氨酸残基的苯并环的4’、5’、6’或7’位置。所述基团可以是可以添加到芳香环的任何化学基团。这样的基团的一些示例包括支链的或者无支链的C1-C4的烷基，比如甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、或叔丁基；C1-C4的烷氧基（即烷氧基）；氨基；C1-C4的烷基氨基和C1-C4的二烷基氨基（例如，甲氨基、二甲氨基）；硝基；羟基；卤素（即氟、氯、溴或碘）。天然存在的氨基酸的非天然存在的衍生物的一些特定示例包括正缬氨酸（Nva）和正亮氨酸（Nle）。
肽中氨基酸的改性另一示例是将肽中的天冬氨酸或谷氨酸残基的羧基衍生化。衍生化的一个示例是与氨或伯胺或仲胺（例如甲胺、乙胺、二甲胺或二乙胺）的酰胺化。衍生化的另一示例包括与诸如甲醇或乙醇进行酯化。另一种这样的改性包括赖氨酸、精氨酸或组氨酸残基的氨基的衍生化。例如，这些氨基可以被酰化。例如，一些合适的酰基包括苯甲酰基或者包括以上提及的C1-C4的烷基中的任一烷基的烷酰基，比如乙酰基或丙酰基。
非天然存在的氨基酸对常见的蛋白酶合适地为抵抗性的、和/或为不敏感的。对蛋白酶抵抗性的或者不敏感的非天然存在的氨基酸的示例包括以上提及的任一种自然存在的左旋（L-）氨基酸的右旋（D-）形式以及左旋和/或右旋的非天然存在的氨基酸。尽管右旋氨基酸存在于通过与细胞的常规的核糖体蛋白合成方法不同的方法而合成的某些肽抗生素中，但右旋氨基酸通常不存在于蛋白质中。本文中使用的右旋氨基酸被认为是非天然存在的氨基酸。
为了使蛋白酶灵敏度最小，肽应当具有小于5个、小于4个、小于3个、或小于2个的由普通蛋白酶识别的连续左旋氨基酸，而与氨基酸是否为天然存在无关。优选地，肽仅具有右旋氨基酸，而不具有左旋氨基酸。如果肽具有蛋白酶敏感的氨基酸序列，则所述氨基酸中的至少一个氨基酸优选地为非天然存在的右旋氨基酸，由此提供蛋白酶抗性。蛋白酶敏感序列的示例包括可以由常见的蛋白酶（比如肽链内切酶和胰蛋白酶）容易地切割的两个或更多个连续的碱性氨基酸。碱性氨基酸的示例包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸。
与肽中的氨基酸残基的总数目相比，在生理pH条件下，芳香族阳离子肽应当具有最小数目的净正电荷。生理pH条件下的净正电荷的最小数目将在下文称为（pm）。肽中的氨基酸残基的总数目将在下文称为（r）。下文讨论的净正电荷的最小数目都是在生理pH条件下。本文中使用的术语“生理pH”指的是哺乳动物体的组织和器官的细胞中的正常pH。例如，人的生理pH通常为约7.4，而哺乳动物中的正常生理pH可以为由约7.0至约7.8的任一pH。
本文中使用的“净电荷”指的是存在于肽中的氨基酸所携带的正电荷的数目和负电荷的数目的之间的相抵余数。在本说明书中，应当理解，净电荷是在生理pH条件下测定的。在生理pH条件下带正电的天然存在的氨基酸包括左旋赖氨酸、左旋精氨酸和左旋组氨酸。在生理pH条件下带负电的天然存在的氨基酸包括左旋天冬氨酸和左旋谷氨酸。
通常地，肽具有带正电的N-末端氨基和带负电的C-末端羧基。所述电荷在生理pH条件下相互抵消。作为计算净电荷的实例，肽Tyr-Arg-Phe-Lys-Glu-His-Trp-D-Arg具有一个带负电的氨基酸（即Glu）和四个带正电的氨基酸（即，两个Arg残基、一个Lys和一个His）。因此，以上的肽具有3个净正电荷。
在一个实施方式中，芳香族阳离子肽的在生理pH条件下的净正电荷的最小数目（pm）和氨基酸残基的总数目（r）之间具有如下关系：其中，3pm是小于或等于r+1的最大数。在该实施方式中，净正电荷的最小数目（pm）和氨基酸残基的总数目（r）之间的关系如下：
表1.氨基酸数目和净正电荷（3pm≤p+1）
  （r）   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20
  （pm）   1   1   2   2   2   3   3   3   4   4   4   5   5   5   6   6   6   7
在另一实施方式中，芳香族阳离子肽的净正电荷的最小数目（pm）和氨基酸残基的总数目（r）之间具有如下关系：其中，2pm是小于或等于r+1的最大数。在该实施方式中，净正电荷的最小数目（pm）和氨基酸残基的总数目（r）之间的关系如下：
表2.氨基酸数目和净正电荷（2pm≤p+1）
  （r）   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20
  （pm）   2   2   3   3   4   4   5   5   6   6   7   7   8   8   9   9   10   10
在一个实施方式中，净正电荷的最小数目（pm）和氨基酸残基的总数目（r）相等。在另一实施方式中，肽具有三个或四个氨基酸残基，其净正电荷的最小数目为1、合适地净正电荷的最小数目为2且更优选地净正电荷的最小数目为3。
还重要的是，芳香族阳离子肽相比于净正电荷的总数目（pt）具有最小数目的芳香基团。芳香基团的最小数目在下文将称为（a）。具有芳香基团的天然存在的氨基酸包括氨基酸—组氨酸、色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸。例如，六肽Lys-Gln-Tyr-D-Arg-Phe-Trp具有2个净正电荷（由赖氨酸残基和精氨酸残基提供）以及三个芳香基团（由酪氨酸残基、苯丙氨酸残基和色氨酸残基提供）。
芳香族阳离子肽还应当在芳香基团的最小数目（a）和在生理pH条件下的净正电荷的总数目（pt）之间具有如下关系：其中，除了当pt为1时a也可为1之外，3a是小于或等于pt+1的最大数。在该实施方式中，芳香基团的最小数目（a）和净正电荷的总数目（pt）之间的关系如下：
表3.芳香基团和净正电荷（3a≤pt+1或a=pt=1）
  （pt）   1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20
  （a）   1   1   1   1   2   2   2   3   3   3   4   4   4   5   5   5   6   6   6   7
在另一实施方式中，芳香族阳离子肽在芳香基团的最小数目（a）和净正电荷的总数目（pt）之间具有如下关系：其中，2a是小于或者等于pt+1的最大数。在该实施方式中，芳香氨基酸残基的最小数目（a）和净正电荷的总数目（pt）之间的关系如下：
表4.芳香基团和净正电荷（2a≤pt+1或a=pt=1）
  （pt）   1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20
  （a）   1   1   2   2   3   3   4   4   5   5   6   6   7   7   8   8   9   9   10   10
在另一实施方式中，芳香基团的数目（a）和净正电荷的总数目（pt）相等。
羧基且尤其是C-末端氨基酸的末端羧基合适地与诸如氨进行酰胺化，以形成C-端酰胺。可选地，C-端氨基酸的末端羧基可以与任一伯胺或仲胺进行酰胺化。所述伯胺或仲胺可以是诸如烷基、尤其是支链的或无支链的C1-C4的烷基或者芳香胺。因此，在肽的C末端的氨基酸可以转化为酰胺基、N-甲基酰胺基、N-乙基酰胺基、N,N-二甲基酰胺基、N,N-二乙基酰胺基、N-甲基-N-乙基酰胺基、N-苯基酰胺基或N-苯基-N-乙基酰胺基。未出现在芳香族阳离子肽的C-末端的天冬酰胺残基、谷氨酰胺残基和天冬氨酸残基和谷氨基酸残基的游离的羧酸基也可被酰胺化，不论它们是否存在于肽内。这些内部位置的酰胺化可以与氨或以上所述伯胺或仲胺中的任何一者进行。
在一个实施方式中，芳香族阳离子肽是具有两个净正电荷以及至少一个芳香族氨基酸的三肽。在特定的实施方式中，所述芳香族阳离子肽是具有两个净正电荷和两个芳香族氨基酸的三肽。
芳香族阳离子肽包括但不限于以下肽的示例：
Lys-D-Arg-Tyr-NH2
Phe-D-Arg-His
D-Tyr-Trp-Lys-NH2
Trp-D-Lys-Tyr-Arg-NH2
Tyr-His-D-Gly-Met
Phe-Arg-D-His-Asp
Tyr-D-Arg-Phe-Lys-Glu-NH2
Met-Tyr-D-Lys-Phe-Arg
D-His-Glu-Lys-Tyr-D-Phe-Arg
Lys-D-Gln-Tyr-Arg-D-Phe-Trp-NH2
Phe-D-Arg-Lys-Trp-Tyr-D-Arg-His
Gly-D-Phe-Lys-Tyr-His-D-Arg-Tyr-NH2
Val-D-Lys-His-Tyr-D-Phe-Ser-Tyr-Arg-NH2
Trp-Lys-Phe-D-Asp-Arg-Tyr-D-His-Lys
Lys-Trp-D-Tyr-Arg-Asn-Phe-Tyr-D-His-NH2
Thr-Gly-Tyr-Arg-D-His-Phe-Trp-D-His-Lys
Asp-D-Trp-Lys-Tyr-D-His-Phe-Arg-D-Gly-Lys-NH2
D-His-Lys-Tyr-D-Phe-Glu-D-Asp-D-His-D-Lys-Arg-Trp-NH2
Ala-D-Phe-D-Arg-Tyr-Lys-D-Trp-His-D-Tyr-Gly-Phe
Tyr-D-His-Phe-D-Arg-Asp-Lys-D-Arg-His-Trp-D-His-Phe
Phe-Phe-D-Tyr-Arg-Glu-Asp-D-Lys-Arg-D-Arg-His-Phe-NH2
Phe-Try-Lys-D-Arg-Trp-His-D-Lys-D-Lys-Glu-Arg-D-Tyr-Thr
Tyr-Asp-D-Lys-Tyr-Phe-D-Lys-D-Arg-Phe-Pro-D-Tyr-His-Lys
Glu-Arg-D-Lys-Tyr-D-Val-Phe-D-His-Trp-Arg-D-Gly-Tyr-Arg-D-Met-NH2
Arg-D-Leu-D-Tyr-Phe-Lys-Glu-D-Lys-Arg-D-Trp-Lys-D-Phe-Tyr-D-Arg-Gly
D-Glu-Asp-Lys-D-Arg-D-His-Phe-Phe-D-Val-Tyr-Arg-Tyr-D-Tyr-Arg-His-Phe-NH2
Asp-Arg-D-Phe-Cys-Phe-D-Arg-D-Lys-Tyr-Arg-D-Tyr-Trp-D-His-Tyr-D-Phe-Lys-Phe
His-Tyr-D-Arg-Trp-Lys-Phe-D-Asp-Ala-Arg-Cys-D-Tyr-His-Phe-D-Lys-Tyr-His-Ser-NH2
Gly-Ala-Lys-Phe-D-Lys-Glu-Arg-Tyr-His-D-Arg-D-Arg-Asp-Tyr-Trp-D-His-Trp-His-D-Lys-Asp
Thr-Tyr-Arg-D-Lys-Trp-Tyr-Glu-Asp-D-Lys-D-Arg-His-Phe-D-Tyr-Gly-Val-Ile-D-His-Arg-Tyr-Lys-NH2
在一实施方式中，肽具有μ型阿片（mu-opioid）受体激动剂活性（即肽激活μ型阿片受体）。可通过与克隆的μ型阿片受体连接的放射性配体或通过使用豚鼠回肠的生物测定来评估μ型阿片活性（Schiller等，Eur J Med Chem,35:895-901,2000;Zhao等，J Pharmacol Exp Ther,307:947-954,2003）。μ型阿片受体的激活通常引起止痛效应。在某些情况下，具有μ型阿片受体激动剂活性的芳香族阳离子肽是优选地。例如，在诸如急性疾病或病症的短期治疗期间，使用激活μ型阿片受体的芳香族阳离子肽可能是有利的。这类急性疾病和病症经常与中度疼痛或剧烈疼痛相关。在这些情况下，在人类患者或其他哺乳动物的治疗方案中该芳香族阳离子肽的止痛效应是有利的。然而，根据临床的需要，不激活μ型阿片受体的芳香族阳离子肽也可以与或不与止痛剂一起使用。
可选地，在其他情况下，不具有μ型阿片受体激动剂活性的芳香族阳离子肽是优选地。例如，在长期治疗中，例如慢性疾病状况或病症，使用激活μ型阿片受体的芳香族阳离子肽可能是不可取的。在这些情况下，该芳香族阳离子肽潜在不利的或令人上瘾的效应可排除在人类患者或其他哺乳动物的治疗方案中的使用激活μ型阿片受体的芳香族阳离子肽。潜在不利的效应可包括镇静、便秘和呼吸抑制。在这类情况下，不激活μ型阿片受体的芳香族阳离子肽可能是合适的治疗。
具有μ型阿片受体激动剂活性的肽通常为那些在N-末端（即在第一氨基酸位置）具有酪氨酸残基或具有酪氨酸衍生物的肽。酪氨酸的合适的衍生物包括2’-甲基酪氨酸（Mmt）、2’,6’-二甲基酪氨酸（2’6’-Dmt）、3’,5’-二甲基酪氨酸（3’5’-Dmt）、N,2’,6’-三甲基酪氨酸（Tmt）和2’-羟基-6’-甲基酪氨酸（Hmt）。
在一个实施方式中，具有μ型阿片受体激动剂活性的肽具有式Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2。该肽具有氨基酸酪氨酸、精氨酸和赖氨酸所贡献的三个净正电荷，和氨基酸苯丙氨酸和酪氨酸所贡献的两个芳香基。酪氨酸可以为酪氨酸的改性衍生物，例如2’,6’-二甲基酪氨酸，以制备具有式2’,6’-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2的化合物。该肽具有640的分子量，且在生理pH条件下携带三个净正电荷。该肽以能量非依存的方式易于穿过若干哺乳动物细胞类型的原生质膜（Zhao等，J Pharmacol Exp Ther.,304:425-432,2003）。
不具有μ型阿片受体激动剂活性的肽通常在N-末端（即氨基酸位置1）上不具有酪氨酸残基或不具有酪氨酸衍生物。在N-末端上的氨基酸可以为不同于酪氨酸的任何天然存在的或非天然存在的氨基酸。在一实施方式中，N-末端上的氨基酸为苯丙氨酸或苯丙氨酸的衍生物。苯丙氨酸的示例性衍生物包括2’-甲基苯丙氨酸（Mmp）、2’,6’-二甲基苯丙氨酸（2’,6’-Dmp）、N,2’,6’-三甲基苯丙氨酸（Tmp）和2’-羟基-6’-甲基苯丙氨酸（Hmp）。
不具有μ型阿片受体激动剂活性的芳香族阳离子肽的示例具有式Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2。可选地，N-末端的苯丙氨酸可为苯丙氨酸的衍生物，例如2’,6’-二甲基苯丙氨酸（2’6’-Dmp）。在一个实施方式中，在氨基酸位置1处具有2’,6’-二甲基苯丙氨酸的肽具有式2’,6’-Dmp-D-Arg-Phe-Lys-NH2。在一个实施方式中，氨基酸序列重排使得Dmt不在N-末端。这类不具有μ型阿片受体激动剂活性的芳香族阳离子肽的示例具有式D-Arg-2’6’-Dmt-Lys-Phe-NH2。
本文提到的肽和它们的衍生物还可包括功能类似物。如果类似物具有与所列举的肽相同的功能，则肽被认为功能类似物。例如，该类似物可以为肽的取代变型，其中一个或多个氨基酸被另一氨基酸所取代。该肽合适的取代变型包括保守的氨基酸取代物。氨基酸可以根据其物理化学性质而进行如下分组：
（a）非极性氨基酸：Ala(A)Ser(S)Thr(T)Pro(P)Gly(G)Cys(C)；
（b）酸性氨基酸：Asn(N)Asp(D)Glu(E)Gln(Q)；
（c）碱性氨基酸：His(H)Arg(R)Lys(K)；
（d）疏水性氨基酸：Met(M)Leu(L)Ile(I)Val(V)；以及
（e）芳香族氨基酸：Phe(F)Tyr(Y)Trp(W)His(H)。
肽中的氨基酸被同一组中的另一种氨基酸取代称为保守取代，且可以保留原始肽的物理化学性质。相反，肽中的氨基酸被不同组中的另一种氨基酸取代通常更有可能改变原始肽的物理化学性质。
在一些实施方式中，在芳香族阳离子肽中一个或多个天然产生的氨基酸被氨基酸类似物所取代。活化μ型阿片受体的类似物的示例包括但不限于表5中所示的芳香族阳离子肽。
表5具有μ型阿片活性的肽类似物
  氨基酸位置1  氨基酸位置2  氨基酸位置3   氨基酸位置4   C-末端改性
  Tyr   D-Arg   Phe   Lys   NH2
  Tyr   D-Arg   Phe   Orn   NH2
  Tyr   D-Arg   Phe   Dab   NH2
  Tyr   D-Arg   Phe   Dap   NH2
  2’6’Dmt   D-Arg   Phe   Lys   NH2
  2’6’Dmt   D-Arg   Phe   Lys-NH(CH2)2-NH-dns   NH2
  2’6’Dmt   D-Arg   Phe   Lys-NH(CH2)2-NH-atn   NH2
  2’6’Dmt   D-Arg   Phe   dnsLys   NH2
  2’6’Dmt   D-Cit   Phe   Lys   NH2
  2’6’Dmt   D-Cit   Phe   Ahp   NH2
  2’6’Dmt   D-Arg   Phe   Orn   NH2
  2’6’Dmt   D-Arg   Phe   Dab   NH2
  2’6’Dmt   D-Arg   Phe   Dap   NH2
  2’6’Dmt   D-Arg   Phe   Ahp(2-氨基庚酸)   NH2
  Bio-2’6’Dmt   D-Arg   Phe   Lys   NH2
  3’5’Dmt   D-Arg   Phe   Lys   NH2
  3’5’Dmt   D-Arg   Phe   Orn   NH2
  3’5’Dmt   D-Arg   Phe   Dab   NH2
  3’5’Dmt   D-Arg   Phe   Dap   NH2
  Tyr   D-Arg   Tyr   Lys   NH2
 Tyr   D-Arg   Tyr   Orn   NH2
 Tyr   D-Arg   Tyr   Dab   NH2
 Tyr   D-Arg   Tyr   Dap   NH2
 2’6’Dmt   D-Arg   Tyr   Lys   NH2
 2’6’Dmt   D-Arg   Tyr   Orn   NH2
 2’6’Dmt   D-Arg   Tyr   Dab   NH2
 2’6’Dmt   D-Arg   Tyr   Dap   NH2
 2’6’Dmt   D-Arg   2’6’Dmt   Lys   NH2
 2’6’Dmt   D-Arg   2’6’Dmt   Orn   NH2
 2’6’Dmt   D-Arg   2’6’Dmt   Dab   NH2
 2’6’Dmt   D-Arg   2’6’Dmt   Dap   NH2
 3’5’Dmt   D-Arg   3’5’Dmt   Arg   NH2
 3’5’Dmt   D-Arg   3’5’Dmt   Lys   NH2
 3’5’Dmt   D-Arg   3’5’Dmt   Orn   NH2
 3’5’Dmt   D-Arg   3’5’Dmt   Dab   NH2
 Tyr   D-Lys   Phe   Dap   NH2
 Tyr   D-Lys   Phe   Arg   NH2
 Tyr   D-Lys   Phe   Lys   NH2
 Tyr   D-Lys   Phe   Orn   NH2
 2’6’Dmt   D-Lys   Phe   Dab   NH2
 2’6’Dmt   D-Lys   Phe   Dap   NH2
 2’6’Dmt   D-Lys   Phe   Arg   NH2
 2’6’Dmt   D-Lys   Phe   Lys   NH2
 3’5’Dmt   D-Lys   Phe   Orn   NH2
 3’5’Dmt   D-Lys   Phe   Dab   NH2
 3’5’Dmt   D-Lys   Phe   Dap   NH2
 3’5’Dmt   D-Lys   Phe   Arg   NH2
 Tyr   D-Lys   Tyr   Lys   NH2
 Tyr   D-Lys   Tyr   Orn   NH2
 Tyr   D-Lys   Tyr   Dab   NH2
 Tyr   D-Lys   Tyr   Dap   NH2
 2’6’Dmt   D-Lys   Tyr   Lys   NH2
 2’6’Dmt   D-Lys   Tyr   Orn   NH2
 2’6’Dmt   D-Lys   Tyr   Dab   NH2
 2’6’Dmt   D-Lys   Tyr   Dap   NH2
 2’6’Dmt   D-Lys   2’6’Dmt   Lys   NH2
 2’6’Dmt   D-Lys   2’6’Dmt   Orn   NH2
 2’6’Dmt   D-Lys   2’6’Dmt   Dab   NH2
 2’6’Dmt   D-Lys   2’6’Dmt   Dap   NH2
 2’6’Dmt   D-Arg   Phe   dnsDap   NH2
 2’6’Dmt   D-Arg   Phe   atnDap   NH2
 3’5’Dmt   D-Lys   3’5’Dmt   Lys   NH2
  3’5’Dmt   D-Lys   3’5’Dmt   Orn   NH2
  3’5’Dmt   D-Lys   3’5’Dmt   Dab   NH2
  3’5’Dmt   D-Lys   3’5’Dmt   Dap   NH2
  Tyr   D-Lys   Phe   Arg   NH2
  Tyr   D-Orn   Phe   Arg   NH2
  Tyr   D-Dab   Phe   Arg   NH2
  Tyr   D-Dap   Phe   Arg   NH2
  2’6’Dmt   D-Arg   Phe   Arg   NH2
  2’6’Dmt   D-Lys   Phe   Arg   NH2
  2’6’Dmt   D-Orn   Phe   Arg   NH2
  2’6’Dmt   D-Dab   Phe   Arg   NH2
  3’5’Dmt   D-Dap   Phe   Arg   NH2
  3’5’Dmt   D-Arg   Phe   Arg   NH2
  3’5’Dmt   D-Lys   Phe   Arg   NH2
  3’5’Dmt   D-Orn   Phe   Arg   NH2
  Tyr   D-Lys   Tyr   Arg   NH2
  Tyr   D-Orn   Tyr   Arg   NH2
  Tyr   D-Dab   Tyr   Arg   NH2
  Tyr   D-Dap   Tyr   Arg   NH2
  2’6’Dmt   D-Arg   2’6’Dmt   Arg   NH2
  2’6’Dmt   D-Lys   2’6’Dmt   Arg   NH2
  2’6’Dmt   D-Orn   2’6’Dmt   Arg   NH2
  2’6’Dmt   D-Dab   2’6’Dmt   Arg   NH2
  3’5’Dmt   D-Dap   3’5’Dmt   Arg   NH2
  3’5’Dmt   D-Arg   3’5’Dmt   Arg   NH2
  3’5’Dmt   D-Lys   3’5’Dmt   Arg   NH2
  3’5’Dmt   D-Orn   3’5’Dmt   Arg   NH2
  Mmt   D-Arg   Phe   Lys   NH2
  Mmt   D-Arg   Phe   Orn   NH2
  Mmt   D-Arg   Phe   Dab   NH2
  Mmt   D-Arg   Phe   Dap   NH2
  Tmt   D-Arg   Phe   Lys   NH2
  Tmt   D-Arg   Phe   Orn   NH2
  Tmt   D-Arg   Phe   Dab   NH2
  Tmt   D-Arg   Phe   Dap   NH2
  Hmt   D-Arg   Phe   Lys   NH2
  Hmt   D-Arg   Phe   Orn   NH2
  Hmt   D-Arg   Phe   Dab   NH2
  Hmt   D-Arg   Phe   Dap   NH2
  Mmt   D-Lys   Phe   Lys   NH2
  Mmt   D-Lys   Phe   Orn   NH2
  Mmt   D-Lys   Phe   Dab   NH2
  Mmt   D-Lys   Phe   Dap   NH2
  Mmt   D-Lys   Phe   Arg   NH2
  Tmt   D-Lys   Phe   Lys   NH2
  Tmt   D-Lys   Phe   Orn   NH2
  Tmt   D-Lys   Phe   Dab   NH2
  Tmt   D-Lys   Phe   Dap   NH2
  Tmt   D-Lys   Phe   Arg   NH2
  Hmt   D-Lys   Phe   Lys   NH2
  Hmt   D-Lys   Phe   Orn   NH2
  Hmt   D-Lys   Phe   Dab   NH2
  Hmt   D-Lys   Phe   Dap   NH2
  Hmt   D-Lys   Phe   Arg   NH2
  Mmt   D-Lys   Phe   Arg   NH2
  Mmt   D-Orn   Phe   Arg   NH2
  Mmt   D-Dab   Phe   Arg   NH2
  Mmt   D-Dap   Phe   Arg   NH2
  Mmt   D-Arg   Phe   Arg   NH2
  Tmt   D-Lys   Phe   Arg   NH2
  Tmt   D-Orn   Phe   Arg   NH2
  Tmt   D-Dab   Phe   Arg   NH2
  Tmt   D-Dap   Phe   Arg   NH2
  Tmt   D-Arg   Phe   Arg   NH2
  Hmt   D-Lys   Phe   Arg   NH2
  Hmt   D-Orn   Phe   Arg   NH2
  Hmt   D-Dab   Phe   Arg   NH2
  Hmt   D-Dap   Phe   Arg   NH2
  Hmt   D-Arg   Phe   Arg   NH2
Dab=二氨丁基
Dap=二氨基丙酸
Dmt=二甲基酪氨酸
Mmt=2’-甲基酪氨酸
Tmt=N,2’,6’-三甲基酪氨酸
Hmt=2’-羟基-6’-甲基酪氨酸
dnsDap=β-丹磺酰-L-α,β-二氨基丙酸
atnDap=β-邻氨基苯甲酰-L-α,β-二氨基丙酸
Bio=生物素
不激活μ型阿片受体的类似物的示例包括但不限于表6中所示的芳香族阳离子肽。
表6.缺少μ型阿片活性的肽类似物
 氨基酸位置1  氨基酸位置2  氨基酸位置3  氨基酸位置4   C-末端改性
  D-Arg   Dmt   Lys   Phe   NH2
  D-Arg   Dmt   Phe   Lys   NH2
  D-Arg   Phe   Lys   Dmt   NH2
  D-Arg   Phe   Dmt   Lys   NH2
  D-Arg   Lys   Dmt   Phe   NH2
  D-Arg   Lys   Phe   Dmt   NH2
  Phe   Lys   Dmt   D-Arg   NH2
  Phe   Lys   D-Arg   Dmt   NH2
  Phe   D-Arg   Phe   Lys   NH2
  Phe   D-Arg   Dmt   Lys   NH2
  Phe   D-Arg   Lys   Dmt   NH2
  Phe   Dmt   D-Arg   Lys   NH2
  Phe   Dmt   Lys   D-Arg   NH2
  Lys   Phe   D-Arg   Dmt   NH2
  Lys   Phe   Dmt   D-Arg   NH2
  Lys   Dmt   D-Arg   Phe   NH2
  Lys   Dmt   Phe   D-Arg   NH2
  Lys   D-Arg   Phe   Dmt   NH2
  Lys   D-Arg   Dmt   Phe   NH2
  D-Arg   Dmt   D-Arg   Phe   NH2
  D-Arg   Dmt   D-Arg   Dmt   NH2
  D-Arg   Dmt   D-Arg   Tyr   NH2
  D-Arg   Dmt   D-Arg   Trp   NH2
  Trp   D-Arg   Phe   Lys   NH2
  Trp   D-Arg   Tyr   Lys   NH2
  Trp   D-Arg   Trp   Lys   NH2
  Trp   D-Arg   Dmt   Lys   NH2
  D-Arg   Trp   Lys   Phe   NH2
  D-Arg   Trp   Phe   Lys   NH2
  D-Arg   Trp   Lys   Dmt   NH2
  D-Arg   Trp   Dmt   Lys   NH2
  D-Arg   Lys   Trp   Phe   NH2
  D-Arg   Lys   Trp   Dmt   NH2
  Cha   D-Arg   Phe   Lys   NH2
  Ala   D-Arg   Phe   Lys   NH2
Cha=环己基丙氨酸
表5和表6中显示的肽的氨基酸可以是左旋结构或右旋结构。
还可通过本领域熟知的任何方法来合成肽。例如，用于以化学方式合成肽的合适方法包括诸如Stuart和Young在以下文献中描述的方法：Solid PhasePeptide Synthesis,第二版,Pierce Chemical Company(1984)；以及MethodsEnzymol.289,Academic Press公司,纽约(1997)。
芳香族阳离子肽的预防用途和治疗用途
概述。本文中描述的芳香族阳离子肽可用于预防或治疗疾病。具体地，本发明提供了用于治疗处于血管阻塞损伤或心脏缺血再灌注损伤的危险中（或易得血管阻塞损伤或心脏缺血再灌注损伤）的对象的预防和治疗方法。因此，本方法提供了通过将有效量的芳香族阳离子肽给药至需要该芳香族阳离子肽的对象且执行来CABG手术来预防和/或治疗对象中的血管阻塞损伤或心脏缺血再灌注损伤。
基于芳香族阳离子肽的治疗法的生物学效果的确定。在各种实施方式中，进行合适的体外或体内分析来确定基于特定的芳香族阳离子肽的治疗的效果和该芳香族阳离子肽的给药是否适用于治疗。在各种实施方式中，可采用代表性动物模型进行体外分析，以确定给定的基于芳香族阳离子肽的治疗是否在预防或治疗缺血再灌注损伤中起到了所期望的效果。在人类对象中测试之前，治疗中所用的化合物可以在合适的动物模型系统中进行测试，所述动物模型系统包括但不局限于大鼠、小鼠、鸡、猪、牛、猴子、兔子等。类似地，对于体内测试而言，在给药至人类对象之前，可以使用本领域所知的任何动物模型系统。
预防方法。一方面，本发明提供了一种通过将预防血管阻塞损伤发生或发展的芳香族阳离子肽给药至对象，来预防对象的血管阻塞损伤的方法。例如，可以通过本文描述的诊断分析或预兆性分析来确定处于血管阻塞损伤的风险中的对象。在预防性应用中，将有效量的芳香族阳离子肽的药物组合物或药剂给药至易得疾病或病症或者处于疾病或病症的风险中的对象以消除或降低该疾病的风险、降低该疾病的严重程度或延迟该疾病发病，包括疾病的生物化学的、组织学的和/或行为学的病症、该疾病的并发症和该疾病的发展期间存在的中间病理表型。将预防性的芳香族阳离子肽进行给药可以发生在异常的病症特点表现出来之前，使得疾病或障碍得到防止，或者选择性地其发展得到延迟。适当的化合物可以基于以上描述的筛选试验确定。在一些实施方式中，以足够的量给药肽以预防来自CABG的肾并发症或脑并发症。
治疗性方法。本发明的另一方面包括出于治疗目的来治疗对象中的血管阻塞损伤的方法。在治疗性应用中，将一定量的组合物或药物给药至疑似患上这样的疾病的对象或者已患有这样的疾病的对象，来充分消除或者至少部分地抑制所述疾病的病症，包括其并发症和该疾病发展中的中间病理表现型。因此，本发明提供了通过给药有效量的芳香族阳离子肽且执行CABG手术来治疗患有心脏缺血再灌注损伤的个体的方法。
给药模式和有效剂量
可以使用本领域的技术人员所知的任何方法来将细胞、器官或组织与肽接触。可以在临床前试验和临床试验期间利用内科医生和临床医生熟悉的方法来测定有效量。在该方法中有用的肽的有效量可以通过用于给药药物组合物的多种已知方法中的任一方法来给药至需要该肽的哺乳动物。肽可以全身给药或局部给药。
该肽可被表达为药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”意味着由碱或酸制得的、对给药至患者（例如哺乳动物）而言可接受的盐（例如，对于给定的给药方案具有可接受的哺乳动物安全性的盐）。然而，应该理解，盐没有必须为药学上可接受的盐，例如不用于给药病患的中间化合物的盐。药学上可接受的盐可以从药学上可接受的无机碱或有机碱、以及从药学上可接受的无机酸或有机酸得到。此外，当肽含有碱性部分，例如胺、嘧啶或咪唑，和酸性部分例如羧酸或四唑时，可形成两性离子且该两性离子包括在本文使用的术语“盐”的范围之内。从药学上可接受的无机碱衍生得出的盐包括铵盐、钙盐、铜盐、正铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐和锌盐等。从药学上可接受的有机碱衍生得出的盐包括伯胺盐、仲胺盐和叔胺盐，该盐包括取代胺、环胺、天然存在的胺等，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、还原葡糖胺、葡糖胺、组氨酸、海巴明（hydrabamine）、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶（piperadine）、聚胺树酯、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、缓血酸胺等。从药学上可接受的无机酸衍生得出的盐包括硼酸盐、碳酸盐、氢卤酸盐（氢溴酸盐、盐酸盐、氢氟酸盐或氢碘酸盐）、硝酸盐、磷酸盐、氨基磺酸盐和硫酸盐。从药学上可接受的有机酸衍生得出的盐包括脂肪族羟基酸盐（例如柠檬酸盐、葡糖酸盐、乙醇酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐和酒石酸盐）、脂肪族单羧酸盐（例如醋酸盐、丁酸盐、甲酸盐、丙酸盐和三氟醋酸盐）、氨基酸盐（例如天冬氨酸盐和谷氨酸盐）、芳香族羧酸盐（例如苯甲酸盐、对-氯苯甲酸盐、二苯基乙酸盐、龙胆酸盐、马尿酸盐和三苯基乙酸盐）、芳香族羟酸（例如邻-羟基苯甲酸盐、对-羟基苯甲酸盐、1-羟基萘-2-羧酸盐和3-羟基萘-2-羧酸盐）、抗坏血酸盐、二羧酸盐（例如富马酸盐、马来酸盐、草酸盐和琥珀酸盐）、葡糖糖醛酸盐、苦杏仁酸盐、粘酸盐、烟酸盐、乳清酸盐、帕莫酸盐、泛酸盐、磺酸盐（苯磺酸盐、樟脑磺酸盐、乙二磺酸盐（edisylic）、乙磺酸盐、羟乙基磺酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、萘-1,5-二磺酸盐、萘-2,6-二磺酸盐和对-甲苯磺酸盐）、辛那酸（xinafoicacid）盐等。
本文描述的芳香族阳离子肽可以单独地或组合地加入到药物组合物以给药至对象来治疗或预防本文中描述的疾病。所述组合物通常包括活性剂和药学上可接受的载体。本文中使用的术语“药学上可接受的载体”包括与给药药物可配伍的生理盐水、溶剂、分散介质、涂层、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延缓剂等。辅助性的活性化合物也可以加入到所述组合物中。
通常将药物组合物配制成与其计划给药途径相符。给药途径的示例包括注射（例如，静脉注射、皮内、腹腔或皮下）、口服、吸入、经皮肤（局部）、眼内、离子电渗疗法的和经粘膜给药。用于肠胃外、皮内或皮下应用的溶液或悬浮液可以包括以下成分：诸如注射用水的消毒稀释液、生理盐水、不挥发油、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂，比如苯甲醇或苯甲酸甲脂防腐剂；抗氧化剂，比如抗坏血酸或亚硫酸氢纳；络合剂，比如乙二胺四乙酸；缓冲液，比如醋酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐；以及用于调节渗透压的溶剂，比如氯化钠或左旋糖。可以用酸或碱来调节pH，比如盐酸或氢氧化钠。静脉制剂可以装在玻璃或塑料制的安瓿瓶、一次性注射器或多剂量瓶中。为了患者或治疗医师的方便，可以以包括治疗过程（例如，治疗7天）所需的所有用具（例如，药瓶、稀释液瓶、注射器和针头）的试剂盒的形式提供剂量制剂。
适于注射用途的药物组合物可以包括无菌水溶液（在水溶性的情况下）或者用于临时制备无菌注射液或分散液的分散剂或无菌粉末。为了静脉注射，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF,帕西波尼,N.J.)或磷酸盐缓冲盐水（PBS）。在所有情况下，用于肠胃外给药的组合物必须无菌且应当是达到易于注射的程度的存在的液体。用于肠胃外给药的组合物在制造和存储条件下必须稳定且应当被保存同时防止诸如细菌和真菌的微生物）的污染行为。
所述芳香族阳离子肽组合物可以包括载体，该载体可以是包括诸如水、乙醇、多元醇（例如，丙三醇、丙二醇以及液态聚乙二醇等）及其合适的组合物的溶剂或分散介质。可以通过例如以下的方式来保持适当的流体性：利用比如卵磷脂的涂层；在分散质的情况下，通过保持所需的颗粒尺寸；和通过利用表面活性剂。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂来实现防止微生物的行为，例如尼泊金、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等。可以包括谷胱甘肽和其他的抗氧化剂以防止氧化。在很多情况下，将优选的是，在该组合物中包括等渗剂，比如糖、多元醇（比如甘露醇、山梨醇）或氯化钠。可以通过在该组合物中包括延迟吸收的制剂来引起可注射组合物的延长吸收，所述延迟吸收的制剂例如为单硬脂酸铝或药用胶。
可以通过将所需量的活性化合物加入具有以上列出的一种成分或多种成分的组合的适当的溶剂中、根据需要然后进行过滤灭菌来制备注射用无菌溶液。通常，通过将活性化合物加入在包括基本分散介质以及以上列出的所需的其它成分的无菌载体中来制备分散质。在用来制备注射用无菌溶液的无菌粉末的情况中，典型的制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，这可以产出活性成分以及先前灭菌过滤的溶液中的任何其他所需成分的粉末。
口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用的载体。为了口服治疗给药，活性化合物可以与赋形剂混合并以片剂、锭剂或胶囊（例如明胶胶囊）的形式使用。还可利用用作洗口剂的液态载体来制备口服组合物。药学上相容的粘合剂和/或辅助材料可以被包括为该组合物的一部分。所述片剂、丸剂、胶囊剂或锭剂等可以包括具有相似性质的以下成分或化合物中的任一种：粘合剂，比如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，比如淀粉或乳糖；分裂剂，比如褐藻酸、羧甲淀粉钠、或玉米淀粉；润滑剂，比如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，比如胶态二氧化硅；甜味剂，比如蔗糖或糖精；或者增味剂，比如薄荷、水杨酸甲酯或桔子调味品。
关于通过吸入法给药，所述化合物可以以喷雾剂的形式从包括合适的推进物（例如，比如二氧化碳的气体）的加压容器或分配器或者喷雾器喷洒而递送。这样的方法包括第6468798号美国专利中描述的方法。
本文中描述的治疗化合物的全身给药还可以通过经粘膜方法或经皮肤方法来进行。对于经粘膜给药或经皮肤给药，适合于待渗透的屏障的渗透剂用在该配方中。这样的渗透剂通常是本技术领域已知的，例如，对于经粘膜给药而言，这样的渗透剂包括洗涤剂、胆汁盐类或梭链孢酸衍生物。可以通过使用鼻喷入法来完成经粘膜给药。对于经皮肤给药而言，活性化合物配制成本领域普遍知道的药膏、软膏、凝胶、乳液。在一个实施方式中，经皮肤给药可以通过电离子渗透法来进行。
治疗性蛋白质或肽可以在载体体系中配制而成。该载体可以是胶态体系。该胶态体系可以是脂质体、磷脂双分子层媒介物。在一个实施方式中，在脂质体中该治疗肽被胶囊化，同时保持肽完整性。本领域的本领域技术人员理解，有各种方法来制备脂质体。（参见：Lichtenberg等的Methods Biochem.Anal.,33:337-462(1988);Anselem等的Liposome Technology,CRC Press(1993)）。脂质体制剂可以延迟排出并增强细胞摄取（参见Reddy,Ann.Pharmacother,34(7-8):915-923(2000)）。活性剂还可以载入到由医学上可接受的成分制备成的颗粒中，所述医学上可接受的成分包括但不限于可溶解的、不可溶解的、可渗透的、不可渗透的、可生物降解的或胃内滞留的聚合物或脂质体。这样的颗粒包括但不限于纳米颗粒、可生物降解的纳米颗粒、微颗粒、可生物降解的微颗粒、纳米球、可生物降解的纳米球、微球、可生物降解的微球、胶囊剂、乳剂、脂质体、胶粒以及病毒载体体系。
该载体还可以是聚合物，比如可生物降解的、可生物相容的聚合物基质。在一个实施方式中，治疗性肽可以嵌入到聚合物基质中，同时保持蛋白质完整性。所述聚合物可以是天然的，比如多肽、蛋白质或多糖；或者可以是合成的，比如聚α-羟酸。示例包括由例如以下物质制成的载体：胶原蛋白、纤连蛋白、弹性蛋白、乙酸纤维素、硝酸纤维素、多糖、纤维蛋白、明胶及其组合。在一个实施方式中，所述聚合物是聚乳酸（PLA）或乳酸羟基乙酸共聚物（PGLA）。可以以各种形式和尺寸来制备并分离聚合物基体，包括微球和纳米球。聚合物制剂可以引起治疗作用的期间的延长（参见：Reddy,Ann.Pharmacother.,34(7-8):915-923(2000)）。用于人类生长激素（hGH）的聚合物制剂已用在临床试验中（参见：Kozarich和Rich,Chemical Biology,2:548-552(1998)）。
高分子微球持续释放剂的示例在PCT公布WO 99/15154（Tracy等）、第5674534号美国专利以及第5716644号美国专利（都属于Zale等）、PCT公布WO96/40073（Zale等）和PCT公布WO00/38651（Shah等）中予以描述。第5674534号美国专利以及第5716644号美国专利以及PCT公布WO 96/40073描述了包括含红细胞生成素的颗粒的聚合物基体，所述红细胞生成素的颗粒用盐来防止凝聚而稳定。
在一些实施方式中，治疗性化合物与将保护所述治疗化合物以防止其从身体中快速排出的载体一起制备，所述载体比如控释剂，包括植入体和微胶囊化的输送体系。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，比如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原质、聚原酸酯和聚乳酸。可以利用已知的技术来制备这样的制剂。还可以在市场上获得所述材料，例如从Alza Corporation和NovaPharmaceuticals,Inc.买到的脂质体悬浮液（包括针对具有细胞特异性抗原的单细胞克隆抗体的特定细胞的脂质体）也可用作医学上可以接受的载体。所述胶质体悬浮液可以利用本领域技术人员知道的方法来制备，比如，第4522811号美国专利中描述的方法。
还可以配制所述治疗性化合物以增强细胞内传递。例如，本领域已知脂质体传递系统例如，参见：Chonn和Cullis的“Recent Advances in Liposome DrugDelivery Systems”，Current Opinion in Biotechnology 6:698-708(1995);Weiner的“Liposomes for Protein Delivery:Selecting Manufacture and DevelopmentProcesses”，Immunomethods 4(3)201-9(1994);和Gregoriadis的“EngineeringLiposomes for Drug Delivery:Progress and Problems”Trends Biotechnol.13(12):527-37(1995)。以下文献描述了利用融合脂质体在体内或在体外将蛋白质传递至细胞：Mizguchi等的Cancer Lett.100:63-69(1996)。
可以通过细胞培养或试验动物中的标准药学过程来确定治疗性药物的用量、毒性和治疗效率，例如，用于确定LD50（总数50%的致命剂量）和ED50（总数50%中有效治疗的剂量）。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，且其可以表示为比率LD50/ED 50。表现出高治疗指数的化合物是优选的。尽管具有毒性副作用的化合物可以使用，但应当考虑设计传递系统，该传递系统将这样的化合物靶向组织的受影响的位置，以将对未感染的细胞的可能损伤最小化，且由此降低副作用。
从细胞培养试验和动物研究获取的数据可以用在配制人类中使用的剂量范围中。这样的化合物的剂量优选地位于包括毒性很小或无毒的ED50的循环浓度的范围中。根据使用的剂量类型和利用的给药途径，剂量可以在该范围内变化。对于该方法中使用的任何化合物而言，可以最初根据细胞培养试验来计算出治疗有效的剂量。可以在动物模型中制定一剂量来获得包括细菌培养中确定的IC50（即，测试化合物的获得最大抑制病症的一半的浓度）的循环血药浓度范围。这样的制剂可以用来更准确地确定人类中的有用剂量。可以例如通过高效液相色谱法测定血药浓度。
通常，芳香族阳离子肽的足以获得治疗效果或预防效果的有效量的范围为约0.000001毫克/千克体重/天到约10000毫克/千克体重/天。合适地，剂量范围从约0.0001毫克/千克体重/天到约100毫克/千克体重/天。例如，剂量可以是每天、每两天或每三天1毫克/千克体重或者10毫克/千克体重，或者在每周、每两周或每三周的1毫克/千克体重到10毫克/千克体重的范围中。在一个实施方式中，肽的单剂量的范围从0.1毫克/千克体重到10000毫克/千克体重。在一个实施方式中，芳香族阳离子肽在载体中的浓度的范围从0.2毫克/每毫升到2000毫克/每毫升。示例性的治疗方法每天或每周提供一次给药。在治疗应用中，在相对短的时间间隔中有相对高的剂量有时是需要的，直到疾病的进程减缓或终止为止，且优选地直到对象显示出部分或完全地改善了疾病的病症。其后，可以对患者实行预防性的给药方式。
在一示例实施方式中，通过以约0.001mg/kg/h至约1mg/kg/h，即约0.005mg/kg/h、约0.01mg/kg/h、约0.025mg/kg/h、约0.05mg/kg/h、约0.10mg/kg/h、约0.25mg/kg/h或约0.5mg/kg/h的静脉输液将肽给药至对象。静脉输液可以在组织再灌注之前或组织再灌注之后开始。
在一些实施方式中，芳香族阳离子肽的治疗有效的量可以限定为目标组织中的肽的浓度为10-12摩尔到10-6摩尔，例如约10-7摩尔。可以以0.01毫克/千克到100毫克/千克的全身剂量或身体表面面积的等效剂量来给予前述浓度。优化剂量的时间表，以保持目标组织的治疗浓度，最优选地通过每天或每周给药，但也包括连续给药（例如，输液或经皮肤施药）来进行。
在一些实施方式中，芳香族阳离子肽的剂量提供为“低”、“中”或“高”剂量水平。在一个实施方式中，低剂量提供为从约0.001mg/kg/h到约0.5mg/kg/h、合适地从约0.01mg/kg/h到约0.1mg/kg/h。在一个实施方式中，中剂量提供为从约0.1mg/kg/h到约1.0mg/kg/h，合适地从约0.1mg/kg/h到约0.5mg/kg/h。在一个实施方式中，高剂量提供为从约0.5mg/kg/h到约10mg/kg/h，合适地从约0.5mg/kg/h到约2mg/kg/h。静脉输液可在组织再灌注之前或组织再灌注之后开始。在一些实施方式中，对象可在组织再灌注之前接受静脉推注。在一个实施方式中，肽联合心脏麻痹液给药。在一个实施方式中，该肽在心肺转流期间以心肺机的预充液的一部分的形式给药。
本领域技术人员将认识到，某些因素可以影响有效地治疗一对象的剂量和时间，包括但不限于疾病或失调的严重程度、先前的治疗、健康情况和/或对象的年龄以及存在的其它疾病。而且，利用本文描述的治疗有效量的治疗组合物来治疗一对象可以包括单次治疗或一系列治疗。
根据本发明的方法治疗的哺乳动物可以是任何动物，例如，包括农场动物，如羊、猪、牛和马；宠物动物，如狗和猫；实验室里的动物，如大鼠、小鼠和兔。在优选的实施方式中，所述哺乳动物是人。
实施例
通过以下实施例进一步说明本发明，所述实施例不应当被看作以任何方式限制本发明。
实施例1.芳香族阳离子肽在保护兔模型免受血管阻塞损伤中的作用
研究了芳香族阳离子肽在保护兔模型免受血管阻塞损伤中的作用。通过该实施例证实了肽D-Arg-2’6’-Dmt-Lys-Phe-NH2的心肌保护作用。
实验方法
在该研究中使用新西兰白兔。该兔是雄性的且大于10周龄。设置动物房间的环境控制以保持61°F到72°F的温度和在30%与70%之间的相对湿度。每小时记录且每天监控室温和湿度。动物房间内每小时约10-15次换气。光周期为12小时光照/12小时黑暗（借助于荧光照明），必要的调节剂量和数据收集期间除外。进行常规地日常观察。从到达实验室开始，每天提供大约180克的兔食，即经过认证的食物Harlan Teklad(2030C)。此外，每周三次地将新鲜水果和蔬菜提供给兔子。
肽D-Arg-2’6’-Dmt-Lys-Phe-NH2（无菌冻干粉）用作试验药品。将给药溶液配制成不大于1mg/ml，且以恒定的速率（例如，50μL/Kg/min）通过持续输注（IV）输送。生理盐水（0.9%的NaCl）用作对照。
在全身麻醉的情况下将试验药品/赋形剂药品通过静脉提供，以模拟AMI和PTCA的临床环境中所期望的给药途径。利用Kd Scientific输液泵（Holliston，MA 01746）以恒定量（例如，50μL/kg/min）通过外周静脉进行静脉输液。
该研究接着是预定的安慰剂和假对照设计。简言之，将10-20个健康的、驯化的雄性兔子分配给三个研究组（three study arms）之一（每组大约有2-10个动物）。组A（n=10，CTRL/PLAC）包括以赋形剂治疗的动物（赋形剂；VEH，IV）；组B（n=10，被治疗的）包括以肽治疗的动物；组C（n=2，假手术（SHAM））包括利用赋形剂（赋形剂；VEH，IV）或肽治疗的假手术时间对照。
表7研究设计
Figure BDA00002079153600391
在所有情况下，在30分钟的缺血性损伤（冠状动脉闭塞）开始之后的大约10分钟时开始进行治疗且持续至再灌注之后3小时。在所有情况下，在缺血之前和缺血期间，以及再灌注后至180分钟（3小时）监控心血管功能。在再灌注之后3小时时终止试验（研究结束）；评估该时间点时的不可逆的心肌损伤（通过组织形态计量学获得梗塞面积），并且该不可逆的心肌损伤是该研究的主要终点。该研究设计概括在表7和图1中。
麻醉/手术准备。通过肌肉注射（IM）氯胺酮（~35mg/kg-50mg/kg）/甲苯噻嗪（~5mg/kg-10mg/kg）混合物来引起全身麻醉。将静脉导管置于外周静脉（例如，耳朵）中以给药麻醉剂。为了保留自主神经功能，通过持续注入异丙酚（~8mg/kg/h-30mg/kg/h）与氯胺酮（~1.2mg/kg/h-2.4mg/kg/h）来维持麻醉。通过气管切开术（下腹正中切口）来放置有囊气管导管，且该有囊气管导管用来通过容量转换型动物呼吸机（~40次呼吸/分钟，呼吸容量为~12.5ml/kg）以机械方式向肺通有95%的O2/5%的CO2的混合物，以将PaCO2值主要维持在生理范围内。
当达到麻醉的手术平面时，防止形成两个标准心电图（ECG）导联（例如，导联II，aVF，V2）的经胸廓的电极或针状电极。颈部的切开使颈动脉暴露，该颈动脉被与周围组织分开、从周围组织分离出来且插有双传感器高保真度微压计导管（Millar Instruments）；将该导管的顶端逆行地经过主动脉瓣推入左心室（LV），以同时确定主动脉（根，近端传感器）和左心室（远端传感器）的压力。颈部的切开还使颈静脉暴露，该颈静脉插有空注射导管（用于采血）。最后，将另外的静脉导管放置在外周静脉（例如，耳朵）中以给药赋形剂药品/试验药品。
随后，以右侧卧的方式放置动物，且通过中线胸廓切开术和心包切开术使心脏暴露出来。将心脏搁置在心包支架上以露出左回旋支（LCX）冠状动脉和左前降支（LAD）冠状动脉。将结扎丝线围绕近端LAD松散地放置（利用锥形尖端的针），且取决于每个动物的冠状动脉，必要的话，围绕LCX边缘冠状动脉的一个或多个分支放置。上紧这些勒除器（通过小段的聚乙烯管）使得左心室心肌的一部分暂时缺血。
一旦完成仪器测试，则检验/确保持续至少30分钟的血液动力学稳定以及合适的麻醉深度。随后，利用阿曲库铵（~0.1mg/kg/h到0.2mg/kg/h，静脉注射）麻痹动物，以促进血液动力学稳定/呼吸稳定。在阿曲库铵给药之后，使用自发性多动症的症状和/或BIS值的变化来评估麻醉深度和/或用来加量滴定静脉麻醉药。
试验方案/心血管数据收集。紧接着手术准备之后，对动物进行肝素化(100单位的肝素/kg/h，静脉推注)，在血液动力学稳定（持续约30分钟）之后，收集基线数据，基线数据包括用于评估心肌酶/生物标志物以及试验药品浓度的静脉血。
在血液动力学稳定以及基线测量之后，通过上紧LAD/LCX冠状动脉勒除器，使所述动物经受30分钟的急性的缺血性损伤。通过LAD/LCX的远端分布的颜色（即，青紫）变化以及通过心电图变化的开始来可视地证实心肌缺血。大约在10分钟的缺血之后，所述动物接受持续灌注赋形剂（生理盐水）或肽；在开始治疗后，使缺血再持续20分钟（即，总共30分钟）。随后（即，在30分钟的缺血之后，其中在该30分钟中，最后20分钟同时进行治疗），松开冠状动脉勒除器，且使先前缺血的心肌被持续再灌注3小时。在整个再灌注时间段中继续进行利用赋形剂或肽的治疗。应当注意到，在假手术（sham-operated）的动物中，在缺血/再灌注开始时，操控血管勒除器，但并不上紧也不放松。
在11个预定的时间点处进行心血管数据收集：仪器测试/稳定之后（即，基线）、10分钟的缺血之后、和30分钟的缺血之后、以及再灌注后的5分钟时、再灌注后的15分钟时、再灌注后的30分钟时、再灌注后的60分钟时、再灌注后的120分钟时、以及再灌注后的180分钟时。在整个试验中，利用数据采集系统（IOX；EMKA Technologies）持续地对模拟信号进行数字采样（1000Hz）并记录，且在以上提及的时间点确定下列参数：（1）来自双极经胸心电图（例如，导联II，aVF）：心律（心律不齐量化/等级化）、RR、PQ、QRS、QT、QTc、短期QT不稳定性以及QT:TQ（整复性）；（2）来自主动脉中的固态压力计（Millar）：动脉/主动脉压力（AoP）；以及（3）来自LV中的固态压力计（Millar）：左心室压力（ESP，EDP）以及衍生指数（dP/dtmax、dP/dtmin、Vmax以及tau）。此外，为了确定/量化在具有肽治疗以及不具有肽治疗的情况下的由I/R损伤导致的不可逆的心肌损伤（即，梗塞）的程度，评估心脏生物标记物以及梗塞面积。
血液样本。在以下六个数据收集时间点，针对药物动力学（PK）分析以及针对通过心脏生物标记物分析评估心肌损伤来收集静脉的全血样本（<3ml）：基线、缺血30分钟时、再灌注后的30分钟时、再灌注后的60分钟时、再灌注后的120分钟时以及再灌注后的180分钟时。此外，在基线、缺血60分钟时、和再灌注后的60分钟时以及再灌注后的180分钟时收集三个动脉的全血样本（~0.5ml）以确定血气，将所述动脉样本收集入血气注射器中，且所述动脉样本用来通过I-Stat分析器/片匣(CG4+)测量血气。
组织病理学/组织形态测量学。在完成方案之后，评估由I/R损伤导致的不可逆的心肌损伤（即，梗塞）。简言之，重新上紧冠状动脉勒除器，且静脉注射Evan的蓝色染料（1ml/kg，Sigma,St.Louis,MO）以描记缺血期间处于危险中的心肌区域（AR）。在大约5分钟后，心脏停止（通过将氯化钾注入到左心房），新鲜地切除该心脏。将左心室沿垂直于其纵轴线（从顶点到底部）的方向切成3mm厚的切片。随后，将所述切片在2%的三苯基四氮唑（TTC）中在37℃下持续培养20分钟，并固定在10%的非缓冲福尔马林溶液（NBF）中。
在固定之后，以数字方式描记/测量梗死和处于危险中的区域。为此，利用数字式测微计测量每个切片的厚度且之后拍照/扫描。将所有的照片输入到图像分析程序（Image J；美国国立卫生研究院（National Institutes of Health）），且进行计算机辅助式测平法来确定梗塞（I）区域和处于危险（AR）中的区域的总体大小。对于每一切片，将AR（即，未染上蓝色）表示为LV面积的百分比，且梗塞大小（I，未染色的组织）表示为AR的百分比（I/AR）。在所有的情况下，由不了解处理分配/研究设计的人员进行定量组织形态测量。
动物观察。在EMKA的IOX系统上利用用于分析的心电图（ECG）自动软件获取数据（EMKA技术）。从（数字）示波图手动地或自动地进行所有生理参数的测量。使用从每一目标时间点始60s的数据的平均值（如果可能的话）；然而，如上所述，在整个试验中连续地记录信号/示波图，以允许（如果需要的话）更精确的/详细的时态数据分析（通过修正）。利用Microsoft Excel进行其他的计算。数据表达为具有标准误差的平均值。
结果
图2到图6示出了来自经受30分钟的缺血和3小时的再灌注的心脏的梗塞大小。图2A和图2B示出了表示用于利用安慰剂或肽治疗的假手术（应用结扎线，但未上紧）的兔子的梗塞大小的数据。垂直于LV的纵轴线（从顶部到底部）来将LV切片成3mm厚的切片。图2A是利用安慰剂治疗的假手术兔子的心脏切片的照片以及突出显示了梗塞大小的计算机生成图像。图2B是利用肽治疗的假手术兔子的心脏切片的照片以及突出显示了梗塞大小的计算机生成图像。
图3A和图3B示出了表示诱导心肌缺血且利用安慰剂治疗的两个不同的对照兔子的梗塞大小的数据。每个图示出了心脏切片的照片和突出显示了梗塞大小的计算机生成图像。
图4A、图4B、图4C、图4D和图4E示出了表示诱导心肌缺血且利用肽治疗的五个不同的兔子的梗塞大小的数据。与对照相比，给药肽导致梗塞大小减小。表8示出在研究所所使用的动物中的每一动物的危险面积与左心室面积的比率、梗塞面积与左心室面积的比率以及梗塞面积与危险面积的比率的数据。图5到图6示出了表示用肽治疗的对象和对照对象中的危险面积与左心室面积的比率、梗塞面积与左心室面积的比率以及梗塞面积与危险面积的比率的其他数据。
表8.研究动物的组织病理学结果
Figure BDA00002079153600431
这些结果显示出，在急性的心肌缺血和再灌注的标准兔模型中，在缺血时间段的10分钟时开始直到30分钟通过IV持续输注给药肽且接着在再灌注之后通过IV持续输注给药肽180分钟，相对于对照组能够减小心肌梗塞大小。在对治疗有可确定的反应的兔中，心肌梗塞区域的大小相对于对照组中标注的梗塞大小减小。在再灌注之后小于3小时（即30分钟）的治疗提供类似的心肌挽救（未示出数据）。这些结果表明，肽治疗预防了急性的心肌缺血再灌注损伤的症状的出现。就这一点而言，芳香族阳离子肽在预防和治疗哺乳动物对象中的血管阻塞损伤的方法中是有用的。
实施例2.肽在保护人类免受血管阻塞损伤中的作用
该实施例将确定在血管重建时给药D-Arg-2′6′-Dmt-Lys-Phe-NH2是否会限制急性心肌梗塞期间的梗塞大小。
研究组。在胸痛发作后出现在医院且临床决策对其利用血管重建（例如，PCI或溶栓）治疗的18岁或更年长的男性和女性适合于入选。患者可以是STEMI（ST段抬高心肌梗塞）或非STEMI。STEMI患者将具有以下症状：暗示向心肌供血的切断并且以患者的ECG显示ST段抬高的典型心脏病发作模式为条件。因此，仅基于症状、临床检查以及ECG变化来进行诊断。在非ST段抬高的心脏病发作的情况下，胸痛的症状可以与STEMI的症状相同，但重要的不同之处在于患者的ECG并不显示出通常与心脏病发关联的典型ST段抬高变化。患者通常具有经历心绞痛的病史，但疑似发作时的ECG可以显示出没有任何反常。对病史和症状的诊断是可疑的且通过显示出血液中的被称为心肌酶的物质的浓度升高的血液测试确认该诊断。
血管造影术和血管重建。在血管重建之前，利用标准的技术来执行左心室和冠状动脉造影。利用直接支架术通过PCI执行血管重建。可替选的血管重建方法包括但不局限于充气囊血管成形术、经皮腔内冠状动脉成形术和定向性冠状动脉斑块旋切术。
实验方案。在执行冠状动脉造影术之后且在植入支架之前，满足入选标准的患者被随机地指定到对照组或肽组。使用计算机生成的随机序列来执行随机分组。在直接支架术之前小于10分钟时，肽组中的患者接受静脉推注D-Arg-2′6′-Dmt-Lys-Phe-NH2。肽溶解于生理盐水中且通过位于肘前静脉中的导管注入。将患者等量地随机分至以下治疗组（例如，0mg/kg/h、0.001mg/kg/h、0.005mg/kg/h、0.01mg/kg/h、0.025mg/kg/h、0.05mg/kg/h、0.10mg/kg/h、0.25mg/kg/h、0.5mg/kg/h以及1.0mg/kg/h）中的任一组。自再灌注前大约10分钟到PCI后大约3小时，将肽以IV输注的方式给药。在再灌注时间段之后，通过任何给药方式（例如，皮下或静脉注射）将肽长期给药至所述对象。
梗塞大小。主要终点是通过测量心脏生物标记物来评估的梗塞大小。在住院时获取血液样本并且在之后的3天中重复获取血液样本。在每个患者中测量冠状动脉生物标记物。例如，在每个患者中通过计算机化测面法来测量用于肌酸激酶和肌钙蛋白I释放（Beckman试剂盒）的曲线下面积（AUC）（以任意单位表示）。主要第二终点是通过在梗塞后的第5天评估的、心脏核磁共振成像（MRI）上看到的延迟超增强技术的区域测量的梗塞的大小。对于后期增强分析，0.2mmol钆-四氮杂环十二烷四乙酸（DOTA）/千克以每秒4ml的速率注入并对其注入15ml的生理盐水。在注入钆-DOTA后的10分钟时，利用三维反转恢复梯度回波序列评估延迟超增强术。在覆盖整个左心室的短轴切片上分析图像。
心肌梗塞通过在心肌内的延迟超增强技术识别，通过心肌对比后信号的强度定量地限定，该心肌对比后信号的强度比相同薄片内的远端的非梗塞心肌的参考区域中的信号强度高2SD。对于所有切片，梗塞区域的绝对质量根据以下公式计算：梗塞质量（以组织的克计）=∑（超增强区域[以平方厘米计]）×切片厚度（以厘米计）×心肌比重（1.05克/立方厘米）。
确定的危险因素的生物标记物。测量N-末端脑钠肽前体（NT-proBNP）和葡萄糖的浓度以及估计的肾小球滤过率（eGFR）。这些生物标记物都通过大约两年半的平均随访来显著地预测全因死亡率。基于这三种生物标记物计算风险分数可以在随访期间确定处于高死亡风险的患者。预测到，与经受PCI的没有接受肽的患者相比，肽将降低经受PCI的患者中的这些生物标记物的风险分数。可以取血液样本以确定CK-MB和肌钙蛋白I。在每个患者中可以通过计算机化测面法来测量CK-MB和肌钙蛋白I释放的曲线下面积（AUC）（以任意单位表示）。
其他终点。肽的全血浓度是PCI之前那一刻以及PCI之后的1小时时、2小时时、4小时时、8小时时以及12小时时。在入院时、PCI之后的24小时时、48小时时、72小时时测量血压以及肌酸酐和钾的血清浓度。在入院时以及PCI后的24小时时测量胆红素、γ-谷氨酰基转移酶和碱性磷酸酶以及白血球数的血清浓度。
记录再灌注之后的第一个48小时内发生的主要不良事件的累积发生率，包括死亡、心力衰竭、急性的心肌梗塞、中风、缺血复发、需要再次血管重建、肾功能不全或肝功能不全、血管并发症以及出血。评估与梗塞相关的不良事件，包括心力衰竭和心室纤维性颤动。此外，在急性的心肌梗塞的3个月后，记录心脏事件，通过超声波心动描记术来评估整体的左心室功能（Vivid 7systems;GEVingmed）。
预测到，通过一些测量，与采用安慰剂所观察到的梗塞相比，在再灌注时给药肽将与更小的梗塞相关。
实施例2.肽在CABG期间提供器官保护的作用
该实施例将确定给药芳香族阳离子肽D-Arg-2’6’-Dmt-Lys-Phe-NH2(“所述肽”)是否会限制经受采用了计划了的心肺转流术（CPB）和心脏麻痹的非紧急CABG手术的中度至高度危险患者中的受损伤的心肌的大小。利用由峰值CK-MB酶、肌钙蛋白或乳酸脱氢酶的浓度测量的受损伤心肌的相对大小来评估肽作为心脏保护剂的作用。还评估肽的给药对肾并发症和心脏并发症的作用。
预测到，在与标准护理治疗的背景相结合的条件下，肽在降低采用了计划了的心肺转流术和心脏麻痹的择期CABG手术的心脏并发症、肾并发症和/或脑并发症的发病率方面优于安慰剂。通过术后天数（POD）为4的心肌酶浓度来测量肽作为心脏保护剂的作用，该作用通过经受采用了计划了的心肺转流术和心脏麻痹的择期CABG手术的中度至高度危险患者中的梗塞的心肌的相对大小衡量。
心脏并发症。该研究具有以下目的：（1）为了评估肽对经受采用了计划了的心肺转流术和心脏麻痹的择期CABG手术的中度至高度危险患者中的从随机分组时（术后天数为0）到术后天数（POD）为4、术后天数（POD）为30和术后天数（POD）为90的心血管死亡、非致命性心肌梗塞（MI）或非致命性中风的组合的作用；（2）为了评估肽对经受采用了计划了的心肺转流术和心脏麻痹的择期CABG手术的中度至高度危险患者中的从随机分组时（术后天数为0）到术后天数（POD）为4、术后天数（POD）为30和术后天数（POD）为90的心血管死亡、非致命性心肌梗塞或非致命性中风的单独事件的作用；以及（3）为了评估经受采用了计划了的心肺转流术和心脏麻痹的择期CABG手术的中度至高度危险患者中的术后天数（POD）为2的重要的房性心律失常和/或室性心律失常的发生率。
肾并发症。该研究具有以下目的：（1）为了评估肽作为肾脏保护剂的作用，这是通过对经受采用了计划了的心肺转流术和心脏麻痹的择期CABG手术的中度至高度危险患者中的术后4天的关于急性肾衰竭（AKI）的肾脏功能的连续测定而测量的，所述急性肾衰竭是通过术后4天的CK-MB浓度测量；以及（2）为了评估肽对经受采用了计划了的心肺转流术和心脏麻痹的择期CABG手术的中度至高度危险患者中的从随机分组时（术后天数为0）到术后天数（POD）为30和术后天数（POD）为90的肾脏功能的作用。
脑并发症。该研究具有以下目的：（1）为了评估肽对急性脑损伤的作用，这是通过在经受采用了计划了的心肺转流术和心脏麻痹的择期CABG手术的中度至高度危险患者中在术后天数为4（+2天）之前且不迟于术后天数为4（+2天）时进行的磁共振成像评估；（2）为了评估经受采用了计划了的心肺转流术和心脏麻痹的择期CABG手术的中度至高度危险患者中在手术之前给药、在手术期间给药以及在手术后持续短时间段给药的肽的安全性和耐受性；以及（3）为了评估肽在经受采用了计划了的心肺转流术和心脏麻痹的择期CABG手术的中度至高度危险患者中的药代动力学。
总体研究设计和计划
该研究是试验阶段II的、前瞻性的、随机化的、双盲的、安慰剂对照的、多中心剂量范围的研究，该研究设计成测试这样的假设：在降低经受采用了计划了的心肺转流术（CPB）和心脏麻痹的择期CABG手术的中度至高度危险患者的心脏并发症、肾并发症和脑并发症方面，在与标准护理疗法的背景相结合的条件下，肽优于安慰剂。手术过程包括独立的具有或不具有用于轻度至中度瓣膜功能障碍的二尖瓣修补术的冠状动脉旁路移植（CABG）手术。患者被认定为对于随后的与患者的CABG手术相关的末端器官并发症存在中度风险至高度风险。患者的风险分析包括以下的至少两个：年龄≥65岁；定义为31mL/min到60mL/min的估计的肾小球滤过率（eGFR）的中度肾功能失调；需要治疗而非按规定饮食的糖尿病的病史；以及明显的左心室功能失调（LV射血分数≤0.40）或不存在任何类型的心脏起搏器的充血性心力衰竭的征兆。
主要的排除标准包括：在随机分组之前小于48小时发生的急性心肌梗塞、利用不具有心脏麻痹的间歇主动脉阻断的CABG手术、微创手术（即，不利用CPB）、临床上重要的肾疾病/肝疾病、不受控的糖尿病、陈旧性中风的病史、短暂性脑缺血发作或颈动脉内膜切除术以及六个月之内的头颅外伤或癫痫的病史。在计划了的CABG手术之前，将针对所有的包括/排除准则筛选患者。除了包括抗凝血的标准治疗之外，合格的患者还将被随机地指定成接受两个肽给药方案中的一个或匹配的安慰剂。
将通过三种不同的途径给药肽或匹配的安慰剂。所有的患者将利用全部的三种药物递送模式来以相同的不知情的方式接受研究药品：（1）在麻醉诱导之前的大约30分钟时且持续至大约6小时的总时间段内，进行全身静脉（IV）输液，（2）与心脏麻痹液联用，以及（3）以在CPB期间的心肺机中的预充液的一部分的形式。
住院测试将持续高达96小时。将在CABG手术过程之前的4天内和该手术过程之后的3天到6天内对患者的脑部进行弥散加权磁共振成像（DW-MRI）评估。至少，在指数住院期间每天、在指数CABG手术过程之后的96小时时、30天（范围，30-40）时以及90天（范围，76-104）时，将进行效果、实验数据和不良反应的临床随访。在实验的整个过程中，伴随的医疗护理将交给心脏外科医师和/或护理医师的决定。将强烈鼓励遵守基于指南的治疗和使用基于征兆的药物（阿司匹林、β-阻断剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、钙通道阻滞剂、利尿剂、抗心律失常剂、他汀类药物、胰岛素、口服抗糖尿病药物和香豆素）。
终点和效果随访
该研究的主要疗效终点将为：利用受损伤心肌的相对面积评估作为心脏保护剂的肽的作用，该受损伤心肌的相对面积通过经受采用了计划了的心肺转流术（CPB）和心脏麻痹的非紧急CABG手术的中度至高度危险患者在术后72小时中的峰值CK-MB酶浓度而测量。次要终点将包括通过术后72小时的肾脏功能连续测量而评估的与CABG手术相关的急性肾衰竭（AKI）的发生率以及在POD 3-6时利用脑部的磁共振成像评估的与CABG手术相关的新的急性脑损伤的发生率。
将从随机分组时（术后天数0）到POD 90期间进行用于心血管死亡、非致命性心肌梗塞（MI）、或非致命性中风的预先确定的评估。MI的诊断将基于从研究部位收集的临床信息以及来自核心实验室的CK-MB实验室数据和心电图实验数据。中风将被定义为持续至少24小时的新的、病灶性的、非创伤性的神经功能缺损。独立的、不知情的临床事件委员会将裁定所有可疑的心肌梗塞、中风和所有死亡的死亡原因。
表5.评估安排-最初的24小时
Figure BDA00002079153600491
Figure BDA00002079153600501
1=出于任何原因不满足每一方案标准（包括PCI之前和PCI之后的TIMI血流标准）的患者将被中断给予研究药物并将排除在有效分析之外。为了安全，将跟踪这些患者72小时并且以随机化模式用新患者替代这些患者。
患者的选择和退出
对象包括被安排经受采用了计划了的心肺转流术（CPB）和心脏麻痹的非紧急CABG手术的男性患者或女性患者（45岁或更年长）。手术过程将包括独立的具有或不具有用于轻度至中度瓣膜功能障碍的二尖瓣修补术的冠状动脉旁路移植（CABG）手术。患者必须被认定为对于随后的与患者的CABG手术相关的末端器官并发症存在中度风险至高度风险。患者的风险分析必须包括以下中的至少两个：年龄≥65岁；定义为31ml/min到60ml/min的估计的肾小球滤过率（eGFR）的中度肾功能不全；需要治疗而非按规定饮食的糖尿病的病史；以及明显的左心室功能不全（LV射血分数≤0.40）或不存在任何类型的心脏起搏器的充血性心力衰竭的征兆。
治疗患者
研究药物。D-Arg-2’6’-Dmt-Lys-Phe-NH2是小型肽（CAS编号736992-21-5）。其分子量为639.8（游离碱）。肽无论粉末形式还是流体形式都是对光稳定的。其在高达40℃下是稳定的且抗氧化。该药物物质将以冻干粉的形式提供在无菌玻璃瓶中。在每个位点上，将由非不知情的药剂师用10mL的无菌D5W每个小瓶进行重新配制。
本研究将以不知情的方式在研究位点进行（患者和位点人员都是不知情的）。由独立的统计员创建随机分组代码。患者将被平均地随机分组到任一下列治疗组（0mg/kg/h、0.001mg/kg/h、0.005mg/kg/h、0.01mg/kg/h、0.025mg/kg/h、0.05mg/kg/h、0.10mg/kg/h、0.25mg/kg/h、0.50mg/kg/h或1mg/kg/h）中。在预期的再灌注时间前至少10分钟时开始且在CABG手术之后持续3小时，将重新配制的、稀释的药品使用输液泵以60ml/h注入。记录静脉给药的研究药物的开始时间和完成时间。记录留在输液包中的研究溶液的体积（用眼睛估算足够），且检查是否注入了合适的量的稀释的研究物质。测定肽的血浆浓度，且该血浆浓度将提供最精确的治疗顺应性测量。
疗效评估
疗效的主要分析将是比较安慰剂组和每一肽剂量组之间的经过72小时的肌酸激酶-MB曲线的曲线下面积（AUC）所估算的左心室梗塞大小。次要疗效分析将集中在肽对心肌损伤的效应，该心肌损伤由如下测定：（1）在72小时的肌钙蛋白I酶曲线下面积；（2）在4±1天、30±3天和6+1.5个月时的心脏磁共振（CMR）；（3）再灌注后心律失常的发生率；和（4）微血管阻塞。对于具有基线TIMI血流分级为0、TIMI血流分级为1的患者以及所有患者（TIMI血流分级为0或1）进行这些分析。
在CABG手术后将检查即时效果，包括：（1）冠状动脉血流的程度和心律失常的发生率；（2）确定肽对由CMR测量的心肌功能和心肌改造的30天和6个月的作用；（3）肽对微血管阻塞的发生的影响；（4）经受成功的再灌注的患者中的肽的药代动力学；以及（5）肽对肾功能的即刻、30天、90天和6个月的作用，这由血清肌酸酐、估计的肌酸酐清除率、胱抑素C和BUN测量确定。
心脏生物标记物。采血样以测定CK-MB和肌钙蛋白I。在以下时间点（住院时；CABG前穿过鞘管时和CABG后穿过鞘管时；在CABG后第一个24小时期间的每4小时；在CABG后第二天和第三天期间的每6小时；第三天后，如临床上指定），通过计算机化测面法测量每个患者的CK-MB和肌钙蛋白I释放的曲线下面积（AUC）（以任意单位表达）。用于测定NT-proBNP和CRP浓度的血样在以下时间点采集：CABG前；CABG后24小时；CABG后30±3天；CABG后90±14天；以及CABG后6±1.5个月。
心脏磁共振成像（CMR)。1.5T体磁共振扫描仪用于执行CMR以评估心室功能、心肌水肿（处于风险的面积）、微血管阻塞和梗塞大小。在成功的CABG后4±1天、30±3天和6+1.5个月时进行CMR。具体的CMR方案包括获取左心室体积、质量分数和射血分数的影片图像。在成功的CABG后4±1天、30±3天和6+1.5个月时，进行具有稳态自由进动序列的影片成像技术。获取T2-加权图像以评估用于确定处于梗塞风险的缺血面积的心肌水肿。仅在4±1天CMR研究时，执行三反转恢复快速自旋回波序列。在手术后4±1天、30±3天和6+1.5个月时使用对比后延迟增强以量化受损伤的心肌。这通过心肌对比后信号的强度定量地限定，该心肌对比后信号的强度比相同切片内的远端的非梗塞心肌的参考区域中的信号强度高2SD。以0.2mmol/kg的剂量使用标准的细胞外的基于钆的对比试剂。二维反转恢复制成的快速梯度回波序列将在以下时间点使用：（1）用于评估微血管阻塞的早期（大约在对比注射后2分钟），单点技术如果可用可考虑；和（2）用于评估梗塞大小的晚期（大约在对比注射后10分钟）。
在整个试验中连续测量血压、心率和呼吸速率。血化学和尿化学以及血液学分析将在试验期间连续测量，且包括：电解质（钠、钾、重碳酸盐、氯化物）；肝功能（总胆红素、天冬氨酸氨基转移酶[AST或SGOT]和丙氨酸氨基转移酶[ALT或SGPT]）；肾功能（血清肌酸酐、胱抑素C和血尿素氮[BUN]）；估计的肾小球滤过率（eGFR）；CABG手术后急性肾衰竭（AKI）的发生率；以及全血计数。
通过连续测量血清肌酸酐、胱抑素C和BUN；估计的肾小球滤过率（eGFR）的连续计算；以及在CABG后至少1级对比剂肾病的发生率（定义为血清肌酸酐增加基线值的≥25%和/或接受射线照相对比剂48小时内发生的0.5mg/dl的血清肌酸酐增加）来评估肾功能。
确定的风险因子的生物标记物。测量N-末端脑钠肽前体（NT-proBNP）和葡萄糖的浓度，以及估计的肾小球滤过率（eGFR）。这些生物标记物都通过大约两年半的平均随访来显著地预测全因死亡率。计算基于这些三个生物标记物的风险评分可以在随访期间确定处于高死亡风险的患者。预测到，与经受CABG但没有接受该肽的患者相比，该肽将减少经受CABG的患者中的这些生物标记物的风险评分。
预测结果
预测到，相对于经受CABG但没有接受肽的对象，该肽将减少梗塞大小，且减少肾的AKI和脑并发症的发生率。疗效的主要分析将是使用ANOVA模型（或非参数等效模型、Kruskal-Wallis等级分析，如果分布判断为非高斯）比较安慰剂组与两个肽剂量组中的每一个之间的通过72小时肌酸激酶-MB曲线的曲线下面积（AUC）所估计的LV梗塞大小。也预测到，在经受采用了计划了的心肺转流术和心脏麻痹的CABG手术的患者中，当在手术前、手术期间和立即在手术后给药肽，该肽将充当多器官保护剂。
参考文献
1.ACC/AHA 2004 Guideline Update for Coronary Artery Bypass Graft SurgeryCirculation 2004:110:e340-e437
2.Sellke FW，DiMaio JM,Caplan LR等.Comparing On-Pump and Off-PumpCoronary Artery Bypass Grafting:A Scientific Statement From the American HeartAssociation Council on Cardiovascular Surgery and Anesthesia in Collaboration Withthe Interdisciplinary Working Group on Quality of Care and Outcomes Research.Circulation 2005:111:2858-2864.
3.Heart Disease和Stroke Statistics:2010 Update At-A-Glance.American HeartAssociation,Dallas,Texas,2010.
4.Shroyer AL,Grover FL,Hattler B.On-Pump versus Off-Pump Coronary-ArteryBypass Surgery.N Engl J Med 2009:361:1827-37.
5.Crescenzi G，Landoni G，Bignami E等.N-Terminal B-Natriuretic Peptide AfterCoronary Artery Bypass Graft Surgert.J Cardiothor Vasc Anesth 2009:23:147-150
6.Costa MA,Carere RG，Lichtenstein SV等.Incidence,predictors,and significanceof abnormal cardiac enzyme rise in patients treated with bypass surgery in theArterial Revascularization Therapies
7.Study(ARTS).Circulation.2001：104(22):2689-2693.
8.Klatte K,Chaitman BR,Theroux P等.Increased mortality after coronary arterybypass graft surgery is associated with increased levels of post-operative creatinekinase-myocardial band isoenzyme release:results from the GUARDIAN trial.J AmColl Cardiol.2001:38(4):1070-1077.
9.Thygesen K,Alpert JS,White HD.Universal definition of myocardial infarction.Eur Heart J.2007:28(20):2525-2538.
10.Makhija N,Sendasgupta C,Kiran U等.The role of oral coenzyme Q10 inpatients undergoing coronary artery bypass graft surgery.J Cardiothor Vasc Anesth2008:22:832-9.
11.Ochoa JJ,Vilchez MJ,Ibanez S等:Oxidative stress is evident in erythrocytes aswell as plasma in patients undergoing heart surgery involving cardiopulmonarybypass.Free Radic Res 37:11-17,2003.
12.Hammond B,Hess ML:The oxygen free radical system:Potential mediator ofmyocardialinjury.J Am Coll Cardiol 6:215-220,1985.
13.Shlafer M,Kane PF,Kirsh M:Superoxide dismutase plus catalase enhances theefficacy of hypothermic cardioplegia to protect the globally ischemic,reperfusedheart.J Thorac Cardiovasc Surg 83:830-839,1982.
14.Menasche P，Grousset C,Gauduel Y，等:A comparative study of free radicalscavengers in cardioplegic solutions.Improved protection with peroxidase.J ThoracCardiovasc Surg 92:264-271,1986.
15.Pechan I,Olejarova J,Danova K,等:Antioxidant status of patients afteron-pump and off-pump coronary artery bypass grafting.Bratisl Lek Listy 105:45-50,2004
16.Bolli R,Becker L,Gross G，等.Myocardial protection at a crossroads:The needfor translation into clinincal therapy.Circ Res.2004.95:p.125-34.
17.Hausenloy，D.J.和D.M.Yellon,Time to take myocardial reperfusion injuryseriously.N Engl J Med,2008.359:p.518-20.
18.Hausenloy,D.J.和D.M.Yellon,Preconditioning and postconditioning:united atreperfusion.Pharmacol Ther,2007.116:p.173-91.
19.Ruiz-Meana,M.和D.Garcia-Dorado,Translational cardiovascular medicine(II).Pathophysiology of ischemia-reperfusion injury:new therapeutic options foracute myocardial infarction.Rev Esp Cardiol,2009.62:p.199-209.
20.Verma,S.,等,Fundamentals of reperfusion injury for the clinical cardiologist.Circulation,2002.105:p.2332-6.
21.Piot,C.,等,Effect of cyclosporine on reperfusion injury in acute myocardialinfarction.N Engl J Med,2008.359:p.473-81.
22.Hausenloy,D.J.,M.R.Duchen,和D.M.Yellon,Inhibiting mitochondrialpermeability transition pore opening at reperfusion protects against ischaemia-reperfusion injury.Cardiovasc Res,2003.60:p.617-25.
23.Morin D,Assaly R,Paradis S,Berdeaux A.Inhibition of mitochondrial membranepermeability as a putative pharmacological target for cardioprotection.Cur MedChemistry.2009.16:p.4382-98.
24.Akar,F.G.,等,The mitochondrial origin of postischemic arrhythmias.J ClinInvest,2005:115:p.3527-35.
25.Yellon DM,Hausenloy DJ.Myocardial reperfusion injury.N Engl J Med.2007:357(11):1121-1135.
26.Verrier ED,Sherman SK,Taylor KM,等.Terminal complement blockade withpexelizumab during coronary artery bypas s graft surgery requiring cardiopulmonarybypass.JAMA.2004:291(19):2319-2327.
27.Shernan SK,Fitch JC,Nussmeier NA,等.Impact of pexelizumab,an anti-C5complement antibody,on total mortality and adverse cardiovascular outcomes incardiac  surgical patients undergoing cardiopulmonary bypass.Ann Thorac Surg.2004:77(3):942-950.
28.Smith PK,Carrier M,Chen JC,等.Effect of pexelizumab in coronary arterybypass graft surgery with extended aortic cross-clamp time.Ann Thorac Surg 2006:82:781-9.
29.Carrier M,Menasche P，Levy JH,等.Inhibition of complement activation bypexelizumab reduces death in patients undergoing combined aortic valve replacementand coronary artery bypass surgery.Ann Thorac Surg 2006:131:352-6.
30.Zhao,K.,等,Mitochondria-targeted peptide prevents mitochondrialdepolarization and apoptosis induced by tert-butyl hydroperoxide in neuronal celllines.Biochem Pharmacol,2005:70:1796-806.
31.Szeto H.Mitochondria-targeted cytoprotective peptides for ischemia-reperfusioninjury.Antioxidants & Redox Signaling.2008:10:p.601-19.
32.Zhao,K.,等,Cell-permeable peptide antioxidants targeted to inner mitochondrialmembrane inhibit mitochondrial swelling,oxidative cell death,and reperfusion injury.J Biol Chem,2004:279:34682-90.
33.Whiteman,M.,等,Do mitochondriotropic antioxidants prevent chlorinativestress-induced mitochondrial and cellular injury?Antioxid Redox Signal,2008:10:641-50.
34.Yang,L.,等,Mitochondria targeted peptides protect against 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine neurotoxicity.Antioxid Redox Signal,2009;11:2095-104.
35.Cho,J.,等,Potent mitochondria-targeted peptides reduce myocardial infarctionin rats.Coron Artery Dis,2007:18(3):p.215-20.
36.Leshnower BG，Kanemoto S,Matsubara M,等Cyclosporine preservesmitochondrial morphology after myocardial ischemia/reperfusion independent ofcalcineurin inhibition.Ann Thorac Surg.2008:86:1286-92.
37.Mewton N,Croisille P，Gahide G，等Effect of cyclosporine on left ventricularremodeling after reperfused myocardial infarction.J Am Coll Cardiol,2010:55:1200-5.
38.Lassnigg A,Schmid ER,Hiesmayr M,等:Impact of minimal increases in serumcreatinine on outcome in patients after cardiothoracic surgery:Do we have to revisecurrent definitions of acute renal failure?Crit Care Med 36:1129-1137,2008
39.Lassnigg A,Schmidlin D,Mouhieddine M,等:Minimal changes of serumcreatinine predict prognosis in patients after cardiothoracic surgery:A prospectivecohort study.J Am Soc Nephrol 15:1597-1605,2004
40.Devbhandari MP，Duncan AJ,Grayson AD,等:Effect of risk-adjusted,non-dialysis-dependent renal dysfunction on mortality and morbidity followingcoronary artery bypass surgery:A multi-centre study.Eur J Cardiothorac Surg29:964-970,2006
41.Weerasinghe A,Hornick P，Smith P，等:Coronary artery bypass grafting in non-dialysis-dependent mild-to-moderate renal dysfunction.J Thorac Cardiovasc Surg121:1083-1089,2001
42.Brown JR,Cochran RP，MacKenzie TA,等:Long-term survival after cardiacsurgery is predicted by estimated glomerular filtration rate.Ann Thorac Surg 86:4-11,2008
43.Zakeri R,Freemantle N,Barnett V，等:Relation between mild renal dysfunctionand outcomes after coronary artery bypass grafting.Circulation 112:I270-I275,2005
44.Karkouti K;Wijeysundera DN,Yau TM,等.Acute kidney injury after cardiacsurgery-Focus on modifiable risk factors.Circulation.2009:119:495-502
45.Wijeysundera DN,Karkouti K,Dupuis JY，等.Derivation and validation of asimplified predictive index for renal replacement therapy after cardiac surgery.JAMA.2007:297:1801-9.
46.Kuitunen A,Vento A,Suojaranta-Ylinen R,等:Acute renal failure after cardiacsurgery:Evaluation of the RIFLE classification.Ann Thorac Surg 81:542-546,2006
47.Maslow AD,Chaudrey A,Bert A.Schwartz C,Singh A.Peri-operative renaloutcome in cardiac surgical patients with preoperative renal dysfunction:Aprotininversus epsilon aminocaproic acid.J Cardiothor and Vasc Anesth 2008:22:6-15.
48.Mangano DT,Tudor IC,Dietzel C,for the Multicenter Study of Peri-operativeIschemia Research Group and the Ischemia Research and Education Foundation:Therisk associated with aprotinin in cardiac surgery.N Engl J Med 354:353-365,2006
49.Anderson RJ,O’B rien M,Mawhinney S,等:Renal failure predisposes patients toadverse outcome after coronary artery bypass surgery.Kidney Int 55:1057-1062,1999
50.Nakayama Y，Sakata R,Ura M,等:Long-term results of coronary artery bypassgrafting in patients with renal insufficiency.Ann Thorac Surg 75:496-500,2003
51.Penta de Peppo A,Nardi P，De Paulis R,等:Cardiac surgery in moderate-to-end-stage renal failure:Analysis of risk factors.Ann Thorac Surg 74:378-383,2002
52.Durmaz L,Buket S,Atay Y，等:Cardiac surgery with cardiopulmonary bypass inpatients with chronic renal failure.J Thorac Cardiovasc Surg 118:306-315,1999 53.Durmaz I,yagdi T,Clkavur T,等.Prophylactic dialysis in patients with reanldysfunction undergoing on-pump coroanary bypass surery.Ann Thorac Surg 2003:75:859-64.
54.Bellomo R,Ronco C,Kellum JA,等,and the ADQI Workgroup:Acute renalfailure-Definition,outcome measures,animal models,fluid therapy and informationtechnology needs:The Second International Consensus Conference of the AcuteDialysis Quality Initiative(ADQI)Group.Available at:http://ccforum.com/content/8/4/R204.
55.Mehta RL,Kellum JA,Shah SV，等:Acute Kidney InjuryNetwork:Report of aninitiative to improve outcomes in acute kidney injury.Crit Care 11:R31,2007
56.Garwood S.Cardiac surgery-associated acute renal injury:new paradigms andinnovative therapies.Journal of Cardiothoracic and Vascular Anesthesia,2010:InPress.
57.Haase M,Bellomo R,Matalanis G，等:A comparison of the RIFLE and AcuteKidney Injury Network classifications for cardiac surgery-associated acute kidneyinjury:A prospective cohort study.J Thorac Cardiovasc Surg 138:1370-1376,2009.
58.Abuelo JG.Normotensive ischemic acute renal failure.N Engl J Med 2007:357:797-805.
59.Fontaine D,Pradier O,Hacquebard M,等:Oxidative stress produced bycirculating microparticles in on-pump but not off pump coronary surgery.ActaCardiol 2009:64:715-22.
60.Gerritsen WB,van Boven WJ,Driessen AH,等:Off-pump versus on-pumpcoronary artery bypass grafting:Oxidative stress and renal function.Eur JCardiothorac Surg 2001:20:923-9.
61.Saikumar P，Venkatachalam MA:Role of apoptosis in hypoxic/ischemic damageto the kidney.Semin Nephrol 2003:23:511-21.
62.Kaushal GP，Basnakian AG，Shah SV:Apoptotic pathways in ischemic acute renalfailure.Kidney Int 2004:66:500-6.
63.Dagher PC:Apoptosis in ischemic renal injury:Roles of GTP depletion and p53.Kidney Int 2004:66:5006-9.
64.Castaneda MP，Swiatecka-Urban A,Mitsnefes MM,等:Activation ofmitochondrial apoptotic pathways in human renal allografts afterischemia-reperfusion injury.Transplantion 2003:76:500-4.
65.Granville DJ,Shaw JR,Leong S,等:Release of cytochrome-c,Bax migration,Bid cleavage,and activation of caspases 2,3,6,7,8,and 9 during endothelial apoptosis.Am J Pathol 1999:155:1021-5.
66.Kelly KJ,Plotkin Z,Vulgamott SL,等:P53 mediates theapoptotic responses toGTp depletion after renal ischemia-reperfusion Protective role of a p53 inhibitor.JAm Soci Nephol 203:14:128-38.
67.Molitoris BA,Sutton TA:Endothelial injury and dysfunction:Role in theextension phase of acute renal failure,Kidney Int 2004:66:496-9.
68.Bonventre JV，Zuk A:Ischemic acute renal failure:An inflammatory disease?Kidney Int 2004:66:480-5.
69.Friedewald JJ,Rabb H:Inflammatory cells in ischemic acute renal failure.KidneyInt 2004:66:486-91.
70.Laffey JG，Boylan JF,Cheng DCH.The systemic inflammaory response tocardiac surgery.Anesthesiology.2002:97:215-252.
71.Hudetz JA,Pagel PS.Neuroprotection by Ketamine:A Review of theExperimental and Clinical Evidence.J Cardiothorac Vasc Anesth.2010:24:131-142.
72.Harrison MJ.Neurologic complications of coronary artery bypass grafting:diffuse or focal ischemia?Ann Thorac Surg 1995:59:1356-8.
73.Hornick P，Smith PL,Taylor KM.Cerebral complications after coronary bypassgrafting.Curr Opin Cardiol 1994:9:670-9.
74.Abe T,Shimamura M,Jackman K,等.Key Role of CD36 in Toll-Like Receptor2 Signaling in Cerebral Ischemia.Stroke 2010:41:898-904.
75.Cho S,Park M,Febbraio M,等.The Class B Scavenger Receptor CD36Mediates Free Radical Production and Tissue Injury in Cerebral Ischemia.JNeruroscience 2005:25:2504-12.
76.Lakhan SE,Kirchgessner A,Hofer M.Inflammatory mechanisms in ischemicstroke:therapeutic approaches.J Translational Med 2009:7:97-104.
77.Cho S,Kim E.CD36:A multi-modal target for acute stroke therapy.J Neurochem2009:109(Suppl 1):126-32.
78.Cook DJ,Huston J,Trenerry MR,等.Postcardiac Surgical Cognitive Impairmentin the Aged Using Diffusion-Weighted Magnetic Resonance Imaging.Ann ThoracSurg.2007:83:1389-1395
79.van Everdingen KJ,van der Grond J,Kappelle LJ,等.Diffusion-weightedmagnetic resonance imaging in acute stroke.Stroke 1998:29:1783-90.
80.Nakamura H,Yamada K,Kizu O,等.Effect of thin-section diffusion-weightedMR imaging on stroke diagnosis.AJNR Am J Neuroradiol 2005:26:560-5.
81.Mullins ME,Schaefer PW，Sorensen AG，等.CT and conventional and diffusion-weighted MR imaging in acute stroke:study in 691 patients at presentation to theemergency department.Radiology 2002:224:353-60.
82.Maekawa K,Goto T,Baba T,等.Abnormalities in the Brain Before ElectiveCardiac Surgery Detected by Diffusion-Weighted Magnetic Resonance Imaging.AnnThorac Surg 2008:86:1563-9
83.Knipp SC,Matalko N,Wilhelm H,等.Cognitive Outcomes Three Years AfterCoronary Artery Bypass Surgery:Relation to Diffusion-Weighted MagneticResonance Imaging.Ann Thorac Surg 2008:85:872-879
84.Van Dijk D,Jansen EW，Hijman R,等.Cognitive outcome after off-pump andon-pump coronary artery bypass graft surgery:a randomized trial.JAMA 2002:287:1405-12.
85.Kong RS,Butterworth J,Aveling W，等.Clinical trial of the neuroprotectantclomethiazole in coronary artery bypass graft surgery:a randomized controlled trial.Anesthesiology 2002:97:585-91.
86.Butterworth J,Wagenknecht LE,Legault C,等.Attempted control ofhyperglycemia during cardiopulmonary bypass fails to improve neurologic orneurobehavioral outcomes in patients without diabetes mellitus undergoing coronaryartery bypass grafting.J Thorac Cardiovasc Surg 2005:130:1319.
87.Grigore AM,Mathew J,Grocott HP，等.Prospective randomized trial ofnormothermic versus hypothermic cardiopulmonary bypass on cognitive functionafter coronary artery bypass graft surgery.Anesthesiology 2001:95:1110-9.
88.Selnes OA,Zeger SL.Optional Coronary Artery Bypass Grafting BaselineCognitive Assessment:Essential not optional.Ann Thorac Surg 2007:83:374-6.
89.Marasco SF,Sharwood LN,Abramson MJ.No improvement in neurocognitiveoutcomes after off-pump versus on-pump coronary revascularisation:a meta-analysis.Eur J Cardiothorac Surg 2008:33:961-970.
90.Rasmussen LS,Johnson T,Kuipers HM,等Does anaesthesia causepostoperative cognitive dyfunction?A randomized study of regional versus generalanaesthesia in 438 elderly patients.Acta Anaesthesiol Scand 2003:47:260-6.
91.Wahrborg P，Booth JE,Clayton T,等.Neuropsychological outcome afterpercutaneous coronary inetrvention or coronary artery bypass grafting:results fromthe Stent or Surgery(SoS)trial.Circulation 2004:110:3411-7.
92.Jensen BO,Hughes P，Rasmussen LS,等Cognitive outcomes in elderlyhigh-risk patients after off-pump versus conventional coronary artery bypass grafting.A randomized trial.Circulation 2006:113:2790-5.
93.Cho S,Szeto HH,Kim E,等A Novel Cell-permeable Antioxidant Peptide,SS31,Attenuates Ischemic Brain Injury by Down-regulating CD36.J Biological Chem2007:282:4634-42.
等同物
本发明不限于在本申请中描述的特定实施方式，用作本发明的单独的方面的单一说明。本领域技术人员将理解，可以不脱离本申请的精神和范围的情况下进行各种修改和改动。根据以上描述，除了本文中列举的以外，本公开的范围内的功能上等同的方法和装置对于本领域的本领域技术人员而言是明显的。这样的改动和修改意欲落在所附权利要求的范围内。本公开仅受所附权利要求以及与这样的权利要求的的范围所等同的全部范围限制。应当理解，本公开不限于特定的方法、试剂、组合物和生物系统，当然，所述方法、试剂、组合物和生物系统可以变化。还可理解，本文中使用的术语仅用于描述特定的实施方式，不用来是限制性的。
此外，在以马库什组的方式描述本公开的特征或方面的情况下，本领域的本领域技术人员将意识到，本公开也是以马库什组中的任一单个成员或亚组成员的方式所描述的。
本领域的本领域技术人员将理解，为了任何或所有目的，尤其是提供说明书支持方面，本文中描述的所有范围还可涵盖任何且所有的可能子范围及其子范围的组合。任何列出的范围可以容易地看作充分公开并使其能够同一范围分成至少等半、三分之一、四分之一、五分之一份、十分之一等的子范围。作为非限制性实施例，本文中描述的每一范围可以容易地分成下三分之一、中三分之一和上三分之一等。本领域技术人员还将理解，所有的语言比如“上至”“至少”、“大于“、”小于“等包括所本数且适用于可以随后被分成以上上述所提及子范围的范围。最后，本领域技术人员将理解，范围包括每一单个成员。因此，例如，具有1到3个单元的组指的是具有1个单元、2个单元或3个单元的组。类似地，具有1到5个单元的组指的是具有1个单元、2个单元、3个单元、4个单元或5个单元的组，等等。
本文所参考的或引用的所有专利、专利申请、在先申请和出版物通过引用而全文并入本文，包括所有的附图和表格，使得它们不与本说明书的明确教导相矛盾。在以下的权利要求范围内提出其他的实施方式。

Claims (20)

1.一种用于治疗阻塞性冠状动脉疾病的方法，所述方法包括：
（a）将治疗有效量的肽D-Arg-2’6’-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐给药至哺乳动物对象；和
（b）对所述对象进行冠状动脉旁路移植CABG手术。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述CABG手术之前将所述肽给药至所述对象。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述CABG手术之后将所述肽给药至所述对象。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述CABG手术期间和所述CABG手术之后将所述肽给药至所述对象。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述CABG手术之前、所述CABG手术期间和所述CABG手术之后将所述肽连续地给药至所述对象。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，在所述CABG手术之后将所述肽给药至所述对象至少3小时。
7.根据权利要求5所述的方法，其中，在所述CABG手术之后将所述肽给药至所述对象至少5小时。
8.根据权利要求5所述的方法，其中，在所述CABG手术之后将所述肽给药至所述对象至少8小时。
9.根据权利要求5所述的方法，其中，在所述CABG手术之后将所述肽给药至所述对象至少12小时。
10.根据权利要求5所述的方法，其中，在所述CABG手术之后将所述肽给药至所述对象至少24小时。
11.根据权利要求5所述的方法，其中，在所述CABG手术之前至少8小时时开始将所述肽给药至所述对象。
12.根据权利要求5所述的方法，其中，在所述CABG手术之前至少5小时时开始将所述肽给药至所述对象。
13.根据权利要求5所述的方法，其中，在所述CABG手术之前至少2小时时开始将所述肽给药至所述对象。
14.根据权利要求5所述的方法，其中，在所述CABG手术之前至少1小时时开始将所述肽给药至所述对象。
15.根据权利要求5所述的方法，其中，在所述CABG手术之前至少30分钟时开始将所述肽给药至所述对象。
16.根据权利要求1所述的方法，其中，在麻醉诱导之前大约30分钟时开始将所述肽通过全身静脉输液给药。
17.根据权利要求1所述的方法，其中，将所述肽与心脏麻痹液联合给药。
18.根据权利要求1所述的方法，其中，将所述肽以作为心肺转流期间心肺机的预充液的一部分的方式给药。
19.根据权利要求1所述的方法，其中，与经受CABG手术但没有给药所述肽的可比较的对象相比，在给药所述肽的对象中N-末端脑钠肽前体、葡萄糖和估计的肾小球滤过率中的一个或多个的水平下降。
20.一种用于预防冠状动脉旁路移植CABG手术期间的肾并发症或脑并发症的方法，所述方法包括：
（a）将治疗有效量的肽D-Arg-2’6’-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐给药至哺乳动物对象；和
（b）对所述对象进行冠状动脉旁路移植CABG手术。
CN2010800650175A 2009-12-31 2010-12-30 用于进行冠状动脉旁路移植手术的方法 Pending CN102791279A (zh)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US29169909P 2009-12-31 2009-12-31
US61/291,699 2009-12-31
US36313810P 2010-07-09 2010-07-09
US61/363,138 2010-07-09
US40671310P 2010-10-26 2010-10-26
US61/406,713 2010-10-26
PCT/US2010/062544 WO2011082328A1 (en) 2009-12-31 2010-12-30 Methods for performing a coronary artery bypass graft procedure

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410010809.2A Division CN103830719A (zh) 2009-12-31 2010-12-30 用于进行冠状动脉旁路移植手术的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102791279A true CN102791279A (zh) 2012-11-21

Family

ID=44226817

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410010809.2A Pending CN103830719A (zh) 2009-12-31 2010-12-30 用于进行冠状动脉旁路移植手术的方法
CN2010800650175A Pending CN102791279A (zh) 2009-12-31 2010-12-30 用于进行冠状动脉旁路移植手术的方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410010809.2A Pending CN103830719A (zh) 2009-12-31 2010-12-30 用于进行冠状动脉旁路移植手术的方法

Country Status (7)

Country Link
US (7) US20130190244A1 (zh)
EP (5) EP2519249A4 (zh)
JP (4) JP2013516426A (zh)
CN (2) CN103830719A (zh)
AU (1) AU2010339414A1 (zh)
CA (1) CA2786066A1 (zh)
WO (1) WO2011082328A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018171279A1 (zh) * 2017-03-24 2018-09-27 南京大学 化合物ss-31在制备治疗动脉粥样硬化及相关疾病药物或制剂上的应用

Families Citing this family (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE60318938T2 (de) 2002-03-20 2009-01-22 Mannkind Corp., Valencia Inhalationsgerät
EP1786784B1 (en) 2004-08-20 2010-10-27 MannKind Corporation Catalysis of diketopiperazine synthesis
CA2578175C (en) 2004-08-23 2014-10-14 Mannkind Corporation Diketopiperazine salts, diketomorpholine salts or diketodioxane salts for drug delivery
US7803404B2 (en) 2005-09-14 2010-09-28 Mannkind Corporation Method of drug formulation based on increasing the affinity of active agents for crystalline microparticle surfaces
BRPI0707991B8 (pt) 2006-02-22 2021-05-25 Mannkind Corp métodos de preparação de um medicamento em pó seco com uma propriedade farmacêutica melhorada, dito pó seco e uso de uma quantidade efetiva do pó seco
US8485180B2 (en) 2008-06-13 2013-07-16 Mannkind Corporation Dry powder drug delivery system
EP2570147B1 (en) 2008-06-13 2017-10-18 MannKind Corporation A dry powder inhaler and system for drug delivery
US9364619B2 (en) 2008-06-20 2016-06-14 Mannkind Corporation Interactive apparatus and method for real-time profiling of inhalation efforts
TWI614024B (zh) 2008-08-11 2018-02-11 曼凱公司 超快起作用胰島素之用途
WO2010072228A1 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Xigen S.A. Novel transporter constructs and transporter cargo conjugate molecules
US8314106B2 (en) 2008-12-29 2012-11-20 Mannkind Corporation Substituted diketopiperazine analogs for use as drug delivery agents
EP3560508A1 (en) 2010-03-15 2019-10-30 Stealth Peptides International, Inc. Combination therapies using cyclosporine and aromatic cationic peptides
RU2531455C2 (ru) 2010-06-21 2014-10-20 Маннкайнд Корпорейшн Системы и способы доставки сухих порошковых лекарств
US9345738B2 (en) * 2010-07-09 2016-05-24 Stealth Biotherapeutics Corp. Methods for the prevention or treatment of no-reflow following ischemia/reperfusion injury
US9150618B2 (en) 2010-10-14 2015-10-06 Xigen Inflammation Ltd. Use of cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway for the treatment of chronic or non-chronic inflammatory eye diseases
CN105667994B (zh) 2011-04-01 2018-04-06 曼金德公司 用于药物药盒的泡罩包装
WO2012174472A1 (en) 2011-06-17 2012-12-20 Mannkind Corporation High capacity diketopiperazine microparticles
CN103889993B (zh) * 2011-09-19 2017-05-31 吉奇亚公司 修饰的肌酸化合物
US9988422B2 (en) * 2011-09-29 2018-06-05 Stealth Biotherapeutics Corp Aromatic-cationic peptides and methods for using same
AU2012328885B2 (en) 2011-10-24 2017-08-31 Mannkind Corporation Methods and compositions for treating pain
EP3656394A1 (en) * 2011-12-09 2020-05-27 Stealth Peptides International, Inc. Aromatic-cationic peptides and uses of same
WO2013091670A1 (en) * 2011-12-21 2013-06-27 Xigen S.A. Novel jnk inhibitor molecules for treatment of various diseases
CA2869080C (en) * 2012-03-30 2020-09-01 Stealth Peptides International, Inc. Methods and compositions for the prevention and treatment neuropathy
CN108057154B (zh) 2012-07-12 2021-04-16 曼金德公司 干粉药物输送系统和方法
EP2908839B1 (en) * 2012-10-22 2019-08-21 Stealth Peptides International, Inc. Methods for reducing risks associated with heart failure and factors associated therewith
JP2016522196A (ja) * 2013-05-14 2016-07-28 ステルス バイオセラピューティックス コープ 左室リモデリングの予防または治療のための方法
US10624948B2 (en) 2013-06-26 2020-04-21 Xigen Inflammation Ltd. Use of cell-permeable peptide inhibitors of the JNK signal transduction pathway for the treatment of various diseases
WO2015197097A1 (en) 2014-06-26 2015-12-30 Xigen Inflammation Ltd. New use for jnk inhibitor molecules for treatment of various diseases
WO2014206427A1 (en) 2013-06-26 2014-12-31 Xigen Inflammation Ltd. New use of cell-permeable peptide inhibitors of the jnk signal transduction pathway for the treatment of various diseases
WO2014210062A1 (en) * 2013-06-26 2014-12-31 Stealth Peptides International, Inc. Methods for the regulation of matrix metalloproteinase expression
US9925144B2 (en) 2013-07-18 2018-03-27 Mannkind Corporation Heat-stable dry powder pharmaceutical compositions and methods
US20160175379A1 (en) * 2013-08-12 2016-06-23 Stealth Bio Therapeutics Corp Combination therapy for the treatment of ischemia-reperfusion injury
US10307464B2 (en) 2014-03-28 2019-06-04 Mannkind Corporation Use of ultrarapid acting insulin
US20160030728A1 (en) * 2014-07-31 2016-02-04 Tekni-Plex, Inc. Extrudable tubing and solvent bonded fitting for delivery of medicinal fluids
CN107530395B (zh) 2015-03-06 2021-10-22 康德生物医疗技术公司 制备药物相关肽的方法
WO2017180535A1 (en) 2016-04-11 2017-10-19 Carnot, Llc Chiral peptides
US11034724B2 (en) 2017-04-05 2021-06-15 Stealth Biotherapeutics Corp. Crystalline salt forms of Boc-D-Arg-DMT-Lys-(Boc)-Phe-NH2
US10676506B2 (en) 2018-01-26 2020-06-09 Stealth Biotherapeutics Corp. Crystalline bis- and tris-hydrochloride salt of elamipretide
RU2711414C1 (ru) * 2019-03-27 2020-01-17 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научный центр неврологии" (ФГБНУ НЦН) Способ прогнозирования асимптомного повреждения вещества головного мозга при ангиореконструктивных операциях на сонных артериях

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004070054A2 (en) * 2003-02-04 2004-08-19 Cornell Research Foundation, Inc. Methods for preventing mitochondrial permeability transition
CN1938042A (zh) * 2004-01-23 2007-03-28 科内尔研究基金会 用于减轻氧化性损伤的方法
WO2007035640A2 (en) * 2005-09-16 2007-03-29 Cornell Research Foundation, Inc. Methods for reducing cd36 expression

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US5858784A (en) 1991-12-17 1999-01-12 The Regents Of The University Of California Expression of cloned genes in the lung by aerosol- and liposome-based delivery
US5674534A (en) 1992-06-11 1997-10-07 Alkermes, Inc. Composition for sustained release of non-aggregated erythropoietin
US5716644A (en) 1992-06-11 1998-02-10 Alkermes, Inc. Composition for sustained release of non-aggregated erythropoietin
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
US6245740B1 (en) 1998-12-23 2001-06-12 Amgen Inc. Polyol:oil suspensions for the sustained release of proteins
SI2252312T1 (sl) * 2008-02-07 2014-08-29 Cornell University, Postopki za preprečevanje ali zdravljenje insulinske rezistence
WO2009108695A2 (en) 2008-02-26 2009-09-03 Cornell University Methods for prevention and treatment of acute renal injury
HUE029550T2 (en) * 2009-08-12 2017-03-28 Univ Cornell Methods of preventing or treating metabolic syndrome
CN102711785A (zh) * 2009-10-05 2012-10-03 康奈尔大学 预防或治疗心力衰竭的方法
EP3560508A1 (en) * 2010-03-15 2019-10-30 Stealth Peptides International, Inc. Combination therapies using cyclosporine and aromatic cationic peptides
US10047395B2 (en) * 2013-06-26 2018-08-14 Stealth Biotherapeutics Corp Methods and compositions for detecting and diagnosing diseases and conditions

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004070054A2 (en) * 2003-02-04 2004-08-19 Cornell Research Foundation, Inc. Methods for preventing mitochondrial permeability transition
WO2004070054A3 (en) * 2003-02-04 2005-04-14 Cornell Res Foundation Inc Methods for preventing mitochondrial permeability transition
CN1938042A (zh) * 2004-01-23 2007-03-28 科内尔研究基金会 用于减轻氧化性损伤的方法
WO2007035640A2 (en) * 2005-09-16 2007-03-29 Cornell Research Foundation, Inc. Methods for reducing cd36 expression

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
姚陈一: "冠状动脉旁路移植术后低氧血症相关危险因素分析", 《国际心血管病杂志》, vol. 35, no. 2, 27 May 2008 (2008-05-27) *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018171279A1 (zh) * 2017-03-24 2018-09-27 南京大学 化合物ss-31在制备治疗动脉粥样硬化及相关疾病药物或制剂上的应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20180117112A1 (en) 2018-05-03
CA2786066A1 (en) 2011-07-07
EP3266462A1 (en) 2018-01-10
CN103830719A (zh) 2014-06-04
EP2519249A1 (en) 2012-11-07
EP2519249A4 (en) 2013-06-26
EP3443977A1 (en) 2019-02-20
US20210046146A1 (en) 2021-02-18
US20170028015A1 (en) 2017-02-02
JP2015147811A (ja) 2015-08-20
US20190365845A1 (en) 2019-12-05
JP2017025094A (ja) 2017-02-02
EP2915540A1 (en) 2015-09-09
JP2018087226A (ja) 2018-06-07
US20150320824A1 (en) 2015-11-12
EP3100739A1 (en) 2016-12-07
AU2010339414A1 (en) 2012-07-19
US20130190244A1 (en) 2013-07-25
WO2011082328A1 (en) 2011-07-07
JP2013516426A (ja) 2013-05-13
US20220280593A1 (en) 2022-09-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102791279A (zh) 用于进行冠状动脉旁路移植手术的方法
CN102791280A (zh) 用于预防或治疗血管阻塞损伤的方法
CN102647994A (zh) 预防或治疗代谢综合症的方法
JP2022012924A (ja) 虚血／再灌流障害に続くノーリフローの予防又は処置方法
CN102711785A (zh) 预防或治疗心力衰竭的方法
CN107496899A (zh) 芳族阳离子肽和使用它们的方法
CN104994912A (zh) 肽治疗剂及其使用方法
CN107106637A (zh) 用于疾病预防和治疗的方法和组合物
CN110090304A (zh) 用于治疗动脉粥样硬化的方法
EP3501532A2 (en) Therapeutic compositions including frataxin, lactoferrin, and mitochondrial energy generating enzymes, and uses thereof
EP3502132A1 (en) Therapeutic compositions including therapeutic small molecules and uses thereof
JP2019052158A (ja) カルジオリピン標的化ペプチドはベータアミロイドオリゴマー毒性を阻害する
CN105579054A (zh) 预防或治疗左心室重塑的方法
WO2022036111A1 (en) Methods and compositions for treating sickle cell disease
ES2961003T3 (es) D-Arg-2&#39;6&#39;-Dmt-Lys-Phe-NH2 para su uso en el tratamiento o la prevención del síndrome de Sengers
AU2019203050A1 (en) Methods for performing a coronary artery bypass graft procedure

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1178087

Country of ref document: HK

C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20121121