CN102711785A - 预防或治疗心力衰竭的方法 - Google Patents

预防或治疗心力衰竭的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102711785A
CN102711785A CN2010800551907A CN201080055190A CN102711785A CN 102711785 A CN102711785 A CN 102711785A CN 2010800551907 A CN2010800551907 A CN 2010800551907A CN 201080055190 A CN201080055190 A CN 201080055190A CN 102711785 A CN102711785 A CN 102711785A
Authority
CN
China
Prior art keywords
arg
phe
lys
peptide
dmt
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2010800551907A
Other languages
English (en)
Inventor
黑兹尔·H·司徒
彼得·S·拉宾诺维奇
戴道福
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Washington
Cornell University
Original Assignee
University of Washington
Cornell University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by University of Washington, Cornell University filed Critical University of Washington
Publication of CN102711785A publication Critical patent/CN102711785A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0815—Tripeptides with the first amino acid being basic
    • C07K5/0817—Tripeptides with the first amino acid being basic the first amino acid being Arg
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1019—Tetrapeptides with the first amino acid being basic

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明提供了预防或治疗哺乳动物对象中的心力衰竭的方法。所述方法包括将有效量的芳香族阳离子肽给药至需要所述芳香族阳离子肽的对象。

Description

预防或治疗心力衰竭的方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2009年10月5日提交的第61/248681号美国临时申请和2009年12月23日提交的第61/289483号美国临时申请的优先权，这两个美国临时申请的全部内容通过引用并入本文。
技术领域
本发明总体上涉及预防或治疗心力衰竭的组合物和方法。具体地，本发明涉及给药有效量的芳香族阳离子肽来预防或治疗哺乳动物对象的心力衰竭。
背景技术
提供以下描述来便于读者理解。所提供的信息或所引用的参考文献都不能被认为是本发明的现有技术。
在世界范围内，心力衰竭是死亡和病残的主要原因。在美国，心力衰竭侵袭了将近5百万人并且是不断增长的唯一主要的心血管失调。据估计，美国每年诊断出400000到700000个心力衰竭新病例，并且自1979年以来美国由这种疾病引起的死亡的数目已增加了一倍多，目前每年平均死亡人数为250000。虽然心力衰竭侵袭所有年龄段的人，但心力衰竭的风险随年龄增长且在老年人中最为常见。因此，随着在未来几十年期间老年人口增加，预计带着心力衰竭生活的人的数目会明显增多。心力衰竭的原因与多种失调有关，包括冠心病、陈旧性心肌梗死（past myocardial infarction）、高血压、心脏瓣膜异常、心肌病或心肌炎、先天性心脏病、严重的肺疾病、糖尿病、严重贫血、甲状腺功能亢进、心律失常或节律紊乱。
心力衰竭（HF）也被称为充血性心力衰竭，其通常的特点为心输出量降低、心肌收缩力减退、舒张顺应性异常、心搏量降低和肺充血。心力衰竭的临床表现表现出心肌收缩状况下降以及心输出量降低。除了心肌收缩力不足之外，心力衰竭疾病状态可以由左心室衰竭、右心室衰竭、双室衰竭、收缩功能异常、舒张功能不全和肺效应引起。与心脏病有关的心肌收缩功能逐渐减退经常导致重要器官灌注不足。
发明内容
本发明的技术总体上涉及通过将治疗有效量的芳香族阳离子肽给药至需要治疗或预防的对象来治疗或预防哺乳动物中的心力衰竭。在特定的实施方式中，芳香族阳离子肽通过增强心脏组织中的线粒体功能来治疗或预防心力衰竭。
在一个方面中，本发明提供了一种治疗或预防心力衰竭或高血压性心肌病的方法，所述方法包括将治疗有效量的芳香族阳离子肽给药至所述哺乳动物对象。在一些实施方式中，所述芳香族阳离子肽是具有以下特点的肽：
至少一个净正电荷；
最少四个氨基酸；
最多约20个氨基酸；
净正电荷的最小数目（pm）和氨基酸残基的总数目（r）之间的关系为：3pm是小于或等于r+1的最大数；以及芳香族基团的最小数目（a）和净正电荷的总数目（pt）之间的关系为：除了当a为1时，pt也可为1之外，2a是小于或等于pt+1的最大数。在特定的实施方式中，哺乳动物对象是人类。
在一个实施方式中，2pm是小于或等于r+1的最大数，且a可以等于pt。所述芳香族阳离子肽可以是具有最少两个正电荷或最少三个正电荷的可溶于水的肽。
在一个实施方式中，所述肽包括一种或多种非自然存在的氨基酸，例如一种或多种D型氨基酸（右旋氨基酸）。在一些实施方式中，氨基酸的在C末端的C末端羧基被酰胺化。在某些实施方式中，所述肽最少具有4个氨基酸。肽可以最多有约6个、最多约9个或者最多约12个氨基酸。
在一个实施方式中，所述肽包括在N末端的酪氨酸残基或2’,6’二甲基酪氨酸（Dmt）残基。例如，所述肽可以具有式Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-01)或2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-02)。在另一实施方式中，所述肽包括在N末端的苯丙氨酸残基或2',6'-二甲基苯丙氨酸残基。例如，所述肽可以具有式Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2(SS-20)或2’,6’-Dmp-D-Arg-Phe-Lys-NH2。在特定的实施方式中，芳香族阳离子肽具有式D-Arg-2’,6’-Dmt-Lys-Phe-NH2（也被可互换地称为SS-31、MTP-131或BendaviaTM）。
在一个实施方式中，所述肽由如下式I所定义：
Figure BDA00001728044400031
其中R1和R2各独立地选自：
（i）氢；
（ii）线性或支链的C1-C6的烷基；
（iii）
Figure BDA00001728044400032
其中m=1-3;
Figure BDA00001728044400033
Figure BDA00001728044400041
R3和R4各独立地选自：
（i）氢；
（ii）线性或支链的C1-C6的烷基；
（iii）C1-C6的烷氧基；
（iv）氨基；
（v）C1-C4的烷基氨基；
（vi）C1-C4的二烷基氨基；
（vii）硝基；
（viii）羟基；
（ix）卤素，其中“卤素”包括氯、氟、溴和碘；
R5、R6、R7、R8和R9各独立地选自：
（i）氢；
（ii）线性或支链的C1-C6的烷基；
（iii）C1-C6的烷氧基；
（iv）氨基；
（v）C1-C4的烷基氨基；
（vi）C1-C4的二烷基氨基；
（vii）硝基；
（viii）羟基；
（ix）卤素，其中“卤素”包括氯、氟、溴和碘；以及
n为1到5的整数。
在特定的实施方式中，R1和R2是氢；R3和R4是甲基；R5、R6、R7、R8、和R9都为氢，且n为4。
在一个实施方式中，肽由如下式II所定义：
Figure BDA00001728044400051
其中，R1和R2各独立地选自：
（i）氢；
（ii）线性或支链的C1-C6的烷基；
（iii）
Figure BDA00001728044400052
其中m=1-3;
Figure BDA00001728044400053
R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12各独立地选自：
（i）氢；
（ii）线性或支链的C1-C6的烷基；
（iii）C1-C6的烷氧基；
（iv）氨基；
（v）C1-C4的烷基氨基；
（vi）C1-C4的二烷基氨基；
（vii）硝基；
（viii）羟基；
（ix）卤素，其中“卤素”包括氯、氟、溴和碘；以及
n为1到5的整数。
在特定的实施方式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12都为氢，且n为4。在另一实施方式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R11都为氢；R8和R12是甲基；R10是羟基；且n为4。
在一个实施方式中，对象患有心力衰竭。在一个实施方式中，心力衰竭由高血压、缺血性心脏病、接触心脏中毒化合物、心肌炎、甲状腺疾病、病毒性感染、齿龈炎、药物滥用、酗酒、心包炎、动脉粥样硬化、血管疾病、肥厚性心肌病、急性心肌梗塞、左心室收缩功能不全、冠状动脉搭桥手术、饥饿、进食失调或遗传缺陷引起。在一个实施方式中，所述对象患有高血压性心肌病。
在一个实施方式中，与未被给药所述肽的对照对象相比，被给药所述肽的对象中的心肌收缩力和心输出量得到提高。在一个实施方式中，与未被给药所述肽的对照对象相比，被给药所述肽的对象中的心肌收缩力和心输出量提高了至少10%。
在一个实施方式中，所述方法还包括单独地、顺序地或同时地将心血管药给药至所述对象。在一个实施方式中，所述心血管药选自由以下物质组成的组：抗心律失常药、血管舒张药、抗心绞痛药、皮质类固醇、强心苷、利尿剂、镇静剂、血管紧张素转换酶（ACE）抑制剂、血管紧张素II拮抗剂、血栓溶解剂、钙通道阻滞剂、血栓素（throboxane）受体拮抗剂、游离基清除剂、抗血小板药、β-肾上腺素受体阻断药、α-受体阻断药、交感神经抑制剂、洋地黄制剂、伊诺曲普（inotrope）和抗高血脂药。
在另一方面中，本发明提供了一种用于增强患有心力衰竭或高血压性心肌病的对象中的心肌收缩力和心输出量的方法，所述方法包括将治疗有效量的肽D-Arg-2’6’-Dmt-Lys-Phe-NH2或Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2给药至对象。
所述芳香族阳离子肽可以以各种方式给药。在一些实施方式中，所述肽可以口服给药、局部给药、鼻内给药、腹腔内给药、静脉内给药、皮下给药或经皮肤给药（例如，通过电离子透入疗法）。
附图说明
图1是用Ang II（1μM）刺激并载有Mitosox（5μM）（线粒体活性氧的指标）的新生儿心肌细胞的流式细胞分析的曲线图。
图2是示出SS-31对给药增压剂量的Ang II后的血压作用的一系列曲线图。图2A：开始时和利用输注泵给药Ang II（1.1mg/kg/d）后的小鼠的血压迹线。图2B：Ang II使收缩压明显增长了27.2mm Hg以及使舒张压明显增长了24.8mmHg。
图3是示出SS-31缓解Ang II诱导的心脏肥大和舒张功能不全的一系列图。图3A：给药Ang II（1.1mg/kg/d）4周明显地使野生型（WT）对照小鼠的LVMI增大。同时给药SS-31（3mg/kg/d）明显地将Ang II引起的LVMI增大降低至类似于在线粒体过氧化氢酶诱导过度表达（i-mCAT，右边部分）的小鼠中观察到的程度（左边部分）。图3B和图3C：在存在或不存在线粒体抗氧化剂的情况下，左心室舒张末期内径（LVEDD）和缩短分数（FS，%）在Ang II处理4周之后未明显改变。图3D：通过Ea/Aa的组织多普勒成像测量的舒张功能在Ang II处理4周之后明显降低，但这被SS-31或mCAT的基因过度表达明显缓解。
图4是示出SS-31减弱Ang-II引起的心脏肥大和心脏纤维化的一系列图。图4A：Ang II明显地增大心脏重量（标准化为胫骨长度），且该重量增加被SS-31明显地减弱。图4B：定量PCR示出心钠肽（ANP）基因表达显著增加，该显著增加被SS-31明显地防止。图4C：代表性的组织病理学示出，Ang II处理之后发生大量血管周围纤维化（PVF）和间质纤维化（IF），这在SS-31处理的心脏中得到明显防止。图4D：三色染色着蓝色的定量分析证明，Ang II处理后的心肌纤维化显著增加，该显著增加被SS-31显著减弱。图4E：定量PCR显示，前胶原1a2 mRNA在Ang II处理后的上调，该上调在SS-31处理的心脏中得到明显降低。
图5是示出Ang II处理4周之后的线粒体蛋白质羰基和线粒体生物合成的信号传导的增加的一系列图。图5A：Ang II处理4周使心脏线粒体蛋白质的羰基含量（蛋白质氧化损伤的指标）显著增多，该增多可以被SS-31显著减弱。图5B：定量PCR显示了线粒体生物合成中的基因的明显上调，该上调可以由SS-31减弱。与生理盐水组相比，*p<0.05，与Ang II处理的组相比，#p<0.05。
图6是示出SS-31作用于NADPH氧化酶的下游并降低p38 MAPK的活化和降低响应于Ang II发生的细胞凋亡的一系列图。图6A：在Ang II处理后，NADPH氧化酶的活性明显提高。观察到SS-31没有明显效果。图6B：Ang II处理4周明显地引起细胞凋亡，这如裂解的（活化的）半胱天冬酶3（caspase 3）的增多所表示，该增多可以由SS-31显著缓解。图6C：在Ang II处理后，p38 MAP激酶的磷酸化作用显著地增加，该增加在SS-31处理的心脏中显著降低（上面的部分）。P38 MAP激酶的蛋白质含量在Ang II处理后也增加。
图7是示出SS-31改善Gαq过度表达小鼠中的心脏肥大和心力衰竭的一系列图。对利用SS-31处理或不利用SS-31处理的Gαq小鼠和16周大的野生型同窝幼畜进行超声波心动描记术。图7A：给药SS-31（3mg/kg/d）4周（从12周到16周）明显地改善了Gαq过度表达小鼠中的收缩功能的降低，这由FS指示。图7B和图7C：Gαq小鼠中的腔增大和舒张功能受损被SS-31稍微缓解，具有边界显著性，p分别等于0.08和0.06。图7D：Gαq小鼠中的心肌功能指数（MPI）的恶化被SS-31显著改善。图7E：Gαq小鼠中的标准化的心脏重量的增大被SS-31显著防止，而标准化的肺重量的增大显示了SS-31的具有边界显著性的适度作用（p=0.09）。
图8是所提出的线粒体抗氧化剂SS-31对Ang II和Gαq引发的心肌病的效果的图示说明。线粒体抗氧化剂SS-31作用于血管紧张素II受体、Gαq和NADPH氧化酶的下游以及p38 MAPK和细胞凋亡的上游。
图9是示出心肌纤维化和Coll 1a2基因的心脏表达未被为期4周的SS-31处理而明显改变的一系列图（图9A和图9B）。图9C示出Ang II之后心脏线粒体蛋白质羰基含量显著增大，该增大可以被SS-31降低。
具体实施方式
应当明白，下文以不同的详细程度描述了本发明的某些方面、模式、实施方式、变型和特征，以提供对本发明的实质性理解。下文提供了本说明书中使用的一些术语的定义。除非另有说明，否则本文中使用的所有技术用语和科学用语通常具有和本发明所属领域的普通技术人员通常理解的意思相同的意思。
除非内容清楚指明，否则本说明书和所附的权利要求中使用的单数形式“一”和“该”包括复数的引用对象。例如，所提及的“一细胞“包括两个细胞或更多细胞的组合等。
本文中使用的将制剂、药物或肽“给药”至对象包括将化合物引入到或给送到对象以执行其预期功能的任何途径。可以通过任何合适的途径来执行“给药”，包括口服、鼻内、肠胃外（静脉内、肌内、腹腔内或皮下）或者局部给药。“给药”包括自身给药和由其他人给药。
本文中使用的术语“氨基酸”包括天然存在的氨基酸和合成的氨基酸以及氨基酸类似物和以类似于天然存在的氨基酸的形式作用的氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是通过遗传密码编码的氨基酸以及后来被改性的那些氨基酸，比如羟(基)脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物指的是具有和天然存在的氨基酸相同的基本化学结构的化合物，例如，所述的基本化学结构即结合至氢的α-碳、羧基、氨基和R基，所述氨基酸类似物比如为高丝氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亚砜、蛋氨酸甲基锍。这样的类似物具有改性的R基（例如正亮氨酸）或改性的肽主链，但保持与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物指的是具有与氨基酸的通用化学结构不同的结构、但以类似于天然存在的氨基酸的方式作用的化学化合物。本文可按照IUPAC-IUB生化命名委员会建议的通常已知的三字母符号或者一字母符号指代氨基酸。
本文中使用的术语“有效量”指的是足以获得所需的治疗和/或预防效果的量，例如引起预防或减轻心力衰竭或与心力衰竭有关的一种或多种症状的量。在治疗性应用或预防性应用的情况下，给药至对象的组合物的量将取决于疾病的类型和严重性以及个体的性质，比如平常健康情况、年龄、性别、体重和对药物的耐受力。所述量还将取决于疾病的程度、严重性和类型。专业的技术人员将能够根据这些因素和其他因素来确定合适的剂量。所述组合物还可结合一种或多种其他的治疗化合物来给药。在本文描述的方法中，芳香族阳离子肽可以给药至具有心力衰竭的一种或多种征兆或症状的对象，所述一种或多种征兆或症状比如为心肌肥大、呼吸急促和肝肿大。例如，芳香族阳离子肽的“治疗有效量”是指最小程度地减轻心力衰竭的生理作用的平均水平。
本文中使用的术语“充血性心力衰竭”（congestive heart failure—CHF）、“慢性心力衰竭”、“急性心力衰竭”和“心力衰竭”可互换地使用，并且指的是特点为心输出量异常低的任何症状，其中，心脏无法以充足的速率或充足的量输送血。当心脏无法向身体的其他部分充分地输送血时，或者当一个或多个心脏瓣膜变得狭窄或关闭不全，血液可能倒流至肺部，导致肺积液。如果该倒流发生在较长的一段时间中，可能产生心力衰竭。心力衰竭的典型症状包括：呼吸短促（呼吸困难），疲乏，虚弱，平躺时呼吸困难，以及腿、踝关节或腹部浮肿（水肿）。心力衰竭的原因与多种失调有关，包括冠心病、系统性高血压、心肌病或心肌炎、先天性心脏病、心脏瓣膜异常或心脏瓣膜病、严重的肺病、糖尿病、严重贫血、甲状腺机能亢进、心律失常或节律障碍和心肌梗死。充血性心力衰竭的初期征兆是：心肌肥大（心脏扩大）、呼吸急促（气促，在左心衰竭的情况下出现）和肝肿大（肝脏扩大，在右心衰竭的情况下出现）。
本文中使用的术语“高血压性心肌病”指的是因高血压的影响引起的心脏衰弱。随着时间的过去，不受控制的高血压导致心肌衰弱。随着高血压性心肌病恶化，其可以导致充血性心力衰竭。高血压性心肌病的早期症状包括咳嗽、虚弱和疲乏。高血压性心肌病的其他症状包括腿浮肿、体重增加、平躺时呼吸困难、活动时气促增强以及半夜因呼吸短促而苏醒。
“分离的”或“纯化的”多肽或肽基本上不具有源自细胞或组织的源（试剂来自于该源）的细胞材料或其它受污染的多肽，或者当化学合成时基本上不具有化学前体或其它的化学物质。例如，分离的芳香族的阳离子肽将不具有会干扰试剂的诊断用途或治疗用途的材料。这样的干扰材料可以包括酶、激素和其他蛋白质的和非蛋白质的溶解物。
本文中使用的术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中是可互换的，以表示包括通过肽键或改性的肽键而互相连接的两个或更多个氨基酸的聚合物，例如肽电子等排体。多肽指的是短链（通常称为肽、糖肽或低聚物）以及较长的链（通常称为蛋白质）。多肽可以包括与20个基因编码的氨基酸不同的氨基酸。多肽包括通过诸如翻译后加工的天然进程或本领域熟知的化学改性技术改性的氨基酸序列。
本文中使用的术语“同时”治疗应用指的是通过相同的途径且在同一时间或基本上在同一时间将至少两种活性成分给药。
本文中使用的术语“单独”治疗应用指的是在同一时间或者基本上相同的时间通过不同的途径将至少两种活性成分给药。
本文中使用的术语“顺序”治疗应用指的是在不同的时间将至少两种活性成分给药，给药途径相同或不同。更具体地，顺序应用指的是在其它活性成分给药开始之前，将所述活性成分中的一种活性成分完全给药。因此，可能在将其它的活性成分给药之前的若干分钟、若干小时或若干天之前，将一种活性成分给药。在这种情况下没有进行同时治疗。
本文中使用的术语“治疗”或“减轻”指的是治疗处理措施，其中，目的是防止或减缓（减轻）目标病症或失调。如果在接受了根据本文所述的方法的治疗量的芳香族阳离子肽后，对象显示出心力衰竭的一种或多种症状和症候的可以观察到的和/或测定到的减少和消失，则该对象的心力衰竭得到成功地“治疗”，所述症状或症候例如为心输出量、心肌收缩力、心脏肥大、呼吸急促（tachonea）和/或肝肿大。还应当理解，本文描述的治疗或预防医学病症的各种模式意在表示“显著”，其包括完全治疗或者预防以及小于完全治疗或者预防，其中达到了某种生物学相关或医学相关的结果。本文中使用的“治疗心力衰竭”也指的是治疗引起心力衰竭的任何一种或多种病症，包括但不局限于心肌收缩力降低、舒张顺应性异常、心搏量降低、肺淤血和心输出量减少。
本文中使用的“预防”失调或病症指的是化合物在统计样本中，相对于未治疗的对照样本降低治疗的样本的失调或病症的发生，或者相对于未治疗的对照样本延迟失调或病症的一种或多种症候的发生或者减轻失调或病症的一种或多种症候的严重程度。本文中使用的“预防心力衰竭”包括防止引发心力衰竭、延迟引发心力衰竭、防止心力衰竭进展或发展、减缓心力衰竭的进展或发展、延迟心力衰竭的进展或发展以及将心力衰竭的进展从晚期阶段逆转为好于晚期阶段的阶段。
芳香族阳离子肽
本发明涉及通过某些芳香族阳离子肽的给药来治疗或预防心力衰竭以及相关病症。所述芳香族阳离子肽可溶于水并且强极性。除了这些性质之外，所述肽能够容易地穿过细胞膜。芳香族阳离子肽通常最少包括通过肽键而共价键连接的三个氨基酸或最少包括通过肽键而共价键连接的四个氨基酸。芳香族阳离子肽中存在的氨基酸的最大数目为通过肽键而共价键连接的大约二十个氨基酸。合适地，氨基酸的最大数目为约12个、更优选地为约9个且最优选地为约6个。
芳香族阳离子肽的氨基酸可以是任何氨基酸。本文中使用的术语“氨基酸”用来指包括至少一个氨基和至少一个羧基的任何有机分子。通常，至少一个氨基是相对于羧基在α位。所述氨基酸可以是天然存在的。天然存在的氨基酸包括诸如通常在哺乳动物蛋白中发现的二十种最常见的左旋（L）氨基酸，即丙氨酸（Ala），精氨酸（Arg），天门冬酰胺（Asn），天门冬氨酸（Asp），半胱氨酸（Cys），谷氨酰胺（Gln），谷氨酸（Glu），甘氨酸（Gly），组氨酸（His），异亮氨酸（Ile），亮氨酸（Leu），赖氨酸（Lys），蛋氨酸（Met），苯丙氨酸（Phe），脯氨酸（Pro），丝氨酸（Ser），苏氨酸（Thr），色氨酸（Trp），酪氨酸（Tyr），和缬氨酸（Val）。其它天然存在的氨基酸包括诸如与蛋白质合成无关的代谢过程中合成的氨基酸。例如，氨基酸—鸟氨酸和瓜氨酸是在哺乳动物新陈代谢的产生尿素期间合成的。天然存在的氨基酸的另一示例包括羟（基）脯氨酸（Hyp）。
所述肽可选地包括一种或多种非天然存在的氨基酸。最佳地，所述肽不具有天然存在的氨基酸。所述非天然存在的氨基酸可以是左旋（L-）氨基酸、右旋（D-）氨基酸或其混合物。非天然存在的氨基酸是这样的氨基酸：通常不是在生物体的正常代谢过程中合成的，且非天然地出现在蛋白质中。此外，非天然存在的氨基酸合适地也不会由普通的蛋白酶识别。非天然存在的氨基酸可以存在于肽的任何位置中。例如，非天然存在的氨基酸可以在N末端、C末端或者在N末端和C末端之间的任何位置。
例如，非天然的氨基酸可以包括天然氨基酸中不存在的烷基、芳基或烷基芳基。非天然烷基氨基酸的一些示例包括α-氨基丁酸，β-氨基丁酸，γ-氨基丁酸，δ-氨基戊酸和ε-氨基己酸。非天然的芳基氨基酸的一些示例包括邻氨基苯甲酸、间氨基苯甲酸和对氨基苯甲酸。非天然的烷基芳基氨基酸的一些示例包括邻氨基苯乙酸、间氨基苯乙酸和对氨基苯乙酸、以及γ-苯基-β-氨基丁酸。非天然存在的氨基酸包括天然存在的氨基酸的衍生物。所述天然存在的氨基酸的衍生物可以包括诸如对天然存在的氨基酸添加一种或多种化学基团。
例如，可以将一种或多种化学基团添加至苯基丙氨酸残基或酪氨酸残基的芳香环的2’、3’、4’、5’或6’位置或者至色氨酸残基的苯并环的4’、5’、6’或7’位置。所述基团可以是可以添加到芳香环的任何化学基团。这样的基团的一些示例包括支链的或者无支链的C1-C4的烷基，比如甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、或叔丁基；C1-C4的烷氧基（即烷氧基）；氨基；C1-C4的烷基氨基和C1-C4的二烷基氨基（例如，甲氨基、二甲氨基）；硝基；羟基；卤素（即氟、氯、溴或碘）。天然存在的氨基酸的非天然存在的衍生物的一些特定示例包括正缬氨酸（Nva）和正亮氨酸（Nle）。
肽中氨基酸的改性另一示例是将肽中的天冬氨酸或谷氨酸残基的羧基衍生化。衍生化的一个示例是与氨或伯胺或仲胺（例如甲胺、乙胺、二甲胺或二乙胺）的酰胺化。衍生化的另一示例包括与诸如甲醇或乙醇进行酯化。另一种这样的改性包括赖氨酸、精氨酸或组氨酸残基的氨基的衍生化。例如，这些氨基可以被酰化。例如，一些合适的酰基包括苯甲酰基或者包括以上提及的C1-C4的烷基中的任一烷基的烷酰基，比如乙酰基或丙酰基。
非天然存在的氨基酸合适地对常见的蛋白酶为抵抗性的或不敏感。对蛋白酶抵抗性的或者不敏感的非天然存在的氨基酸的示例包括以上提及的任一种自然存在的左旋（L-）氨基酸的右旋（D-）形式以及左旋和/或右旋的非天然存在的氨基酸。尽管右旋氨基酸存在于通过与细胞的常规的核糖体蛋白合成方法不同的方法而合成的某些肽抗生素中，但右旋氨基酸通常不存在于蛋白质中。本文中使用的右旋氨基酸被认为是非天然存在的氨基酸。
为了使蛋白酶灵敏度最小，肽应当具有小于5个、优选地小于4个、更优选地小于3个、且最优选地小于2个的由普通蛋白酶识别的连续左旋氨基酸，而与氨基酸是否为天然存在无关。优选地，肽仅具有右旋氨基酸，而不具有左旋氨基酸。如果肽具有蛋白酶敏感的氨基酸序列，则所述氨基酸中的至少一个氨基酸优选地为非天然存在的右旋氨基酸，由此提供蛋白酶抗性。蛋白酶敏感序列的示例包括可以由常见的蛋白酶（比如肽链内切酶和胰蛋白酶）容易地切割的两个或更多个连续的碱性氨基酸。碱性氨基酸的示例包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸。
与肽中的氨基酸残基的总数目相比，在生理pH条件下，芳香族阳离子肽应当具有最小数目的净正电荷。生理pH条件下的净正电荷的最小数目将在下文称为（pm）。肽中的氨基酸残基的总数目将在下文称为（r）。下文讨论的净正电荷的最小数目都是在生理pH条件下。本文中使用的术语“生理pH”指的是哺乳动物体的组织和器官的细胞中的正常pH。例如，人的生理pH通常为约7.4，而哺乳动物中的正常生理pH可以为由约7.0至约7.8的任一pH。
本文中使用的“净电荷”指的是存在于肽中的氨基酸所携带的正电荷的数目和负电荷的数目的之间的相抵余数。在本说明书中，应当理解，净电荷是在生理pH条件下测定的。在生理pH条件下带正电的天然存在的氨基酸包括左旋赖氨酸、左旋精氨酸和左旋组氨酸。在生理pH条件下带负电的天然存在的氨基酸包括左旋天冬氨酸和左旋谷氨酸。
通常地，肽具有带正电的N-末端氨基和带负电的C-末端羧基。所述电荷在生理pH相互抵消。作为计算净电荷的实例，肽Tyr-Arg-Phe-Lys-Glu-His-Trp-D-Arg具有一个带负电的氨基酸（即Glu）和四个带正电的氨基酸（即，两个Arg残基、一个Lys和一个His）。因此，以上的肽具有的3个净正电荷。
在一个实施方式中，芳香族阳离子肽的在生理pH条件下的净正电荷的最小数目（pm）和氨基酸残基的总数目（r）之间具有如下关系：其中，3pm是小于或等于r+1的最大数。在该实施方式中，净正电荷的最小数目（pm）和氨基酸残基的总数目（r）之间的关系如下：
表1.氨基酸数目和净正电荷（3pm≤p+1）
  （r）   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20
  （pm）   1   1   2   2   2   3   3   3   4   4   4   5   5   5   6   6   6   7
在另一实施方式中，芳香族阳离子肽的净正电荷的最小数目（pm）和氨基酸残基的总数目（r）之间具有如下关系：其中，2pm是小于或等于r+1的最大数。在该实施方式中，净正电荷的最小数目（pm）和氨基酸残基的总数目（r）之间的关系如下：
表2.氨基酸数目和净正电荷（2pm≤p+1）
  （r）   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20
  （pm）   2   2   3   3   4   4   5   5   6   6   7   7   8   8   9   9   10   10
在一个实施方式中，净正电荷的最小数目（pm）和氨基酸残基的总数目（r）相等。在另一实施方式中，肽具有三个或四个氨基酸残基，其净正电荷的最小数目为1、合适地，净正电荷的最小数目为2且更优选地净正电荷的最小数目为3。
还重要的是，芳香族阳离子肽相比于净正电荷的总数目（pt）具有最小数目的芳香基团。芳香基团的最小数目在下文将称为（a）。具有芳香基团的天然存在的氨基酸包括氨基酸—组氨酸、色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸。例如，六肽Lys-Gln-Tyr-D-Arg-Phe-Trp具有2个净正电荷（由赖氨酸残基和精氨酸残基提供）以及三个芳香基团（由酪氨酸残基、苯丙氨酸残基和色氨酸残基提供）。
芳香族阳离子肽还应当在芳香基团的最小数目（a）和在生理pH条件下的净正电荷的总数目（pt）之间具有如下关系：其中，除了当pt为1时a也可为1之外，3a是小于或等于pt+1的最大数。在该实施方式中，芳香基团的最小数目（a）和净正电荷的总数目（pt）之间的关系如下：
表3.芳香基团和净正电荷（3a≤pt+1或a=pt=1）
  （pt）   1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20
  （a）   1   1   1   1   2   2   2   3   3   3   4   4   4   5   5   5   6   6   6   7
在另一实施方式中，芳香族阳离子肽在芳香基团的最小数目（a）和净正电荷的总数目（pt）之间具有如下关系：其中，2a是小于或者等于pt+1的最大数。在该实施方式中，芳香氨基酸残基的最小数目（a）和净正电荷的总数目（pt）之间的关系如下：
表4.芳香基团和净正电荷（2a≤pt+1或a=pt=1）
  （pt）   1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20
  （a）   1   1   2   2   3   3   4   4   5   5   6   6   7   7   8   8   9   9   10   10
在另一实施方式中，芳香基团的数目（a）和净正电荷的总数目（pt）相等。
羧基且尤其是C-末端氨基酸的末端羧基合适地与诸如氨进行酰胺化，以形成C-端酰胺。可选地，C-端氨基酸的末端羧基可以与任一伯胺或仲胺进行酰胺化。所述伯胺或仲胺可以是诸如烷基、尤其是支链的或无支链的C1-C4的烷基或者芳香胺。因此，在肽的C末端的氨基酸可以转化为酰胺基、N-甲基酰胺基、N-乙基酰胺基、N,N-二甲基酰胺基、N,N-二乙基酰胺基、N-甲基-N-乙基酰胺基、N-苯基酰胺基或N-苯基-N-乙基酰胺基。未出现在芳香族阳离子肽的C末端的天冬酰胺残基、谷氨酰胺残基和天冬氨酸残基和谷氨基酸残基的游离的羧酸基也可被酰胺化，不论它们是否存在于肽内。这些内部位置的酰胺化可以与氨或以上所述伯胺或仲胺中的任何一者进行。
在一个实施方式中，芳香族阳离子肽是具有两个净正电荷以及至少一个芳香族氨基酸的三肽。在特定的实施方式中，所述芳香族阳离子肽是具有两个净正电荷和两个芳香族氨基酸的三肽。
芳香族阳离子肽包括但不限于以下肽的示例：
Lys-D-Arg-Tyr-NH2
Phe-D-Arg-His
D-Tyr-Trp-Lys-NH2
Trp-D-Lys-Tyr-Arg-NH2
Tyr-His-D-Gly-Met
Phe-Arg-D-His-Asp
Tyr-D-Arg-Phe-Lys-Glu-NH2
Met-Tyr-D-Lys-Phe-Arg
D-His-Glu-Lys-Tyr-D-Phe-Arg
Lys-D-Gln-Tyr-Arg-D-Phe-Trp-NH2
Phe-D-Arg-Lys-Trp-Tyr-D-Arg-His
Gly-D-Phe-Lys-Tyr-His-D-Arg-Tyr-NH2
Val-D-Lys-His-Tyr-D-Phe-Ser-Tyr-Arg-NH2
Trp-Lys-Phe-D-Asp-Arg-Tyr-D-His-Lys
Lys-Trp-D-Tyr-Arg-Asn-Phe-Tyr-D-His-NH2
Thr-Gly-Tyr-Arg-D-His-Phe-Trp-D-His-Lys
Asp-D-Trp-Lys-Tyr-D-His-Phe-Arg-D-Gly-Lys-NH2
D-His-Lys-Tyr-D-Phe-Glu-D-Asp-D-His-D-Lys-Arg-Trp-NH2
Ala-D-Phe-D-Arg-Tyr-Lys-D-Trp-His-D-Tyr-Gly-Phe
Tyr-D-His-Phe-D-Arg-Asp-Lys-D-Arg-His-Trp-D-His-Phe
Phe-Phe-D-Tyr-Arg-Glu-Asp-D-Lys-Arg-D-Arg-His-Phe-NH2
Phe-Try-Lys-D-Arg-Trp-His-D-Lys-D-Lys-Glu-Arg-D-Tyr-Thr
Tyr-Asp-D-Lys-Tyr-Phe-D-Lys-D-Arg-Phe-Pro-D-Tyr-His-Lys
Glu-Arg-D-Lys-Tyr-D-Val-Phe-D-His-Trp-Arg-D-Gly-Tyr-Arg-D-Met-NH2
Arg-D-Leu-D-Tyr-Phe-Lys-Glu-D-Lys-Arg-D-Trp-Lys-D-Phe-Tyr-D-Arg-Gly
D-Glu-Asp-Lys-D-Arg-D-His-Phe-Phe-D-Val-Tyr-Arg-Tyr-D-Tyr-Arg-His-Phe-NH2
Asp-Arg-D-Phe-Cys-Phe-D-Arg-D-Lys-Tyr-Arg-D-Tyr-Trp-D-His-Tyr-D-Phe-Lys-Phe
His-Tyr-D-Arg-Trp-Lys-Phe-D-Asp-Ala-Arg-Cys-D-Tyr-His-Phe-D-Lys-Tyr-His-Ser-NH2
Gly-Ala-Lys-Phe-D-Lys-Glu-Arg-Tyr-His-D-Arg-D-Arg-Asp-Tyr-Trp-D-His-Trp-His-D-Lys-Asp
Thr-Tyr-Arg-D-Lys-Trp-Tyr-Glu-Asp-D-Lys-D-Arg-His-Phe-D-Tyr-Gly-Val-Ile-D-His-Arg-Tyr-Lys-NH2
在一个实施方式中，所述肽具有μ型阿片（mu-opioid）受体激动剂活性（即，它们活化μ型阿片受体）。具有μ型阿片受体激动剂活性的肽通常是那些在N末端（即，第一氨基酸位置）具有酪氨酸残基或酪氨酸衍生物的肽。酪氨酸的合适衍生物包括2’-甲基酪氨酸（Mmt）、2’,6’-二甲基酪氨酸（2’,6’-Dmt）、3’,5’-二甲基酪氨酸（3’,5’-Dmt）、N,2’,6’-三甲基酪氨酸（Tmt）和2’-羟基-6’-甲基酪氨酸（Hmt）。
在一个实施方式中，具有μ型阿片受体激动剂活性的肽具有式Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2（本文中称为“SS-01”）。SS-01具有由氨基酸—酪氨酸、精氨酸和赖氨酸提供的3个净正电荷以及由氨基酸—苯丙氨酸和酪氨酸提供的两个芳香基团。SS-01的酪氨酸可以是酪氨酸的改性的衍生物，例如2’,6’-二甲基酪氨酸，以产生具有式2’,6’-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2的化合物（本文中称为“SS-02”）。SS-02具有分子量640且在生理pH条件下携带3个净正电荷。SS-02以能量非依存方式容易地穿过若干哺乳动物细胞类型的细胞膜（Zhao等,J.Pharmacol Exp Ther.，304:425-432,2003）。
选择性地，在其他的情况下，芳香族阳离子肽不具有μ型阿片受体激动剂活性。例如，在长期治疗期间，比如在慢性病状态或病症中，可能禁忌使用活化μ型阿片受体的芳香族阳离子肽。在这些情况下，芳香族阳离子肽的潜在的副作用或成瘾作用可以阻止在人类患者或其他哺乳动物的治疗疗程中使用活化μ型阿片受体的芳香族阳离子肽。潜在副作用可以包括镇静作用、便秘和呼吸抑制。在这样的情况下，不活化μ型阿片受体的芳香族阳离子肽可以是合适的治疗药物。不具有μ型阿片受体激动剂活性的肽一般在N末端（即，氨基酸位置1）上不具有酪氨酸残基或酪氨酸衍生物。N末端上的氨基酸可以是与酪氨酸不同的任何自然存在的氨基酸或非自然存在的氨基酸。在一个实施方式中，N末端上的氨基酸是苯丙氨酸或其衍生物。苯丙氨酸的示例性衍生物包括2’-甲基苯丙氨酸（Mmp）、2’,6’-二甲基苯丙氨酸（2’,6’-Dmp）、N,2’,6’-三甲基苯丙氨酸（Tmp）和2’-羟基-6’-甲基苯丙氨酸（Hmp）。
不具有μ型阿片受体激动剂活性的芳香族阳离子肽的示例具有式Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2（本文中称为“SS-20”）。可选地，N末端苯丙氨酸可以是苯丙氨酸的衍生物，比如2’,6’-二甲基苯丙氨酸（2’,6’-Dmp）。在氨基酸位置1包括2’,6’-二甲基苯丙氨酸的SS-01具有式2’,6’-Dmp-D-Arg-Phe-Lys-NH2。在一个实施方式中，SS-02的氨基酸序列重排，以使Dmt不在N末端。不具有μ型阿片受体激动剂活性的芳香族阳离子肽的示例具有式D-Arg-2’,6’-Dmt-Lys-Phe-NH2。
本文所列出的肽的合适的取代变型包括保守的氨基酸取代物。氨基酸可以根据其物理化学性质而进行如下分组：
（a）非极性氨基酸：Ala(A)Ser(S)Thr(T)Pro(P)Gly(G)Cys(C)；
（b）酸性氨基酸：Asn(N)Asp(D)Glu(E)Gln(Q)；
（c）碱性氨基酸：His(H)Arg(R)Lys(K)；
（d）疏水性氨基酸：Met(M)Leu(L)Ile(I)Val(V)；以及
（e）芳香族氨基酸：Phe(F)Tyr(Y)Trp(W)His(H)。
肽中的氨基酸被同一组中的另一种氨基酸取代称为保守取代，且可以保留原始肽的物理化学性质。相反，肽中的氨基酸被不同组中的另一种氨基酸取代通常更有可能改变原始肽的物理化学性质。
活化μ型阿片受体的肽的示例包括但不局限于表5中示出的芳香族阳离子肽。
表5.具有μ型阿片活性的肽类似物
 氨基酸位置1  氨基酸位置2  氨基酸位置3   氨基酸位置4   C-末端改性
 Tyr  D-Arg  Phe   Lys   NH2
 Tyr  D-Arg  Phe   Orn   NH2
 Tyr  D-Arg  Phe   Dab   NH2
 Tyr  D-Arg  Phe   Dap   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  Phe   Lys   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  Phe   Lys-NH(CH2)2-NH-dns   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  Phe   Lys-NH(CH2)2-NH-atn   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  Phe   dnsLys   NH2
 2’6’Dmt  D-Cit  Phe   Lys   NH2
 2’6’Dmt  D-Cit  Phe   Ahp   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  Phe   Orn   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  Phe   Dab   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  Phe   Dap   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  Phe   Ahp(2-氨基庚酸)   NH2
 Bio-2’6’Dmt  D-Arg  Phe   Lys   NH2
 3’5’Dmt  D-Arg  Phe   Lys   NH2
 3’5’Dmt  D-Arg  Phe   Orn   NH2
 3’5’Dmt  D-Arg  Phe   Dab   NH2
 3’5’Dmt  D-Arg  Phe   Dap   NH2
 Tyr  D-Arg  Tyr   Lys   NH2
 Tyr  D-Arg  Tyr   Orn   NH2
 Tyr  D-Arg  Tyr   Dab   NH2
 Tyr  D-Arg  Tyr   Dap   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  Tyr   Lys   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  Tyr   Orn   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  Tyr   Dab   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  Tyr   Dap   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  2’6’Dmt   Lys   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  2’6’Dmt   Orn   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  2’6’Dmt   Dab   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  2’6’Dmt   Dap   NH2
 3’5’Dmt  D-Arg  3’5’Dmt   Arg   NH2
 3’5’Dmt  D-Arg  3’5’Dmt   Lys   NH2
 3’5’Dmt  D-Arg  3’5’Dmt   Orn   NH2
 3’5’Dmt  D-Arg  3’5’Dmt   Dab   NH2
 Tyr  D-Lys  Phe   Dap   NH2
 Tyr  D-Lys  Phe   Arg   NH2
 Tyr  D-Lys  Phe   Lys   NH2
 Tyr  D-Lys  Phe   Orn   NH2
 2’6’Dmt  D-Lys  Phe   Dab   NH2
 2’6’Dmt  D-Lys  Phe   Dap   NH2
 2’6’Dmt  D-Lys  Phe   Arg   NH2
 2’6’Dmt  D-Lys  Phe   Lys   NH2
 3’5’Dmt  D-Lys  Phe   Orn   NH2
 3’5’Dmt  D-Lys  Phe   Dab   NH2
 3’5’Dmt  D-Lys  Phe   Dap   NH2
 3’5’Dmt  D-Lys  Phe   Arg   NH2
 Tyr  D-Lys  Tyr   Lys   NH2
 Tyr  D-Lys  Tyr   Orn   NH2
 Tyr  D-Lys  Tyr   Dab   NH2
 Tyr  D-Lys  Tyr   Dap   NH2
 2’6’Dmt  D-Lys  Tyr   Lys   NH2
 2’6’Dmt  D-Lys  Tyr   Orn   NH2
 2’6’Dmt  D-Lys  Tyr   Dab   NH2
 2’6’Dmt  D-Lys  Tyr   Dap   NH2
 2’6’Dmt  D-Lys  2’6’Dmt   Lys   NH2
 2’6’Dmt  D-Lys  2’6’Dmt   Orn   NH2
 2’6’Dmt  D-Lys  2’6’Dmt   Dab   NH2
 2’6’Dmt  D-Lys  2’6’Dmt   Dap   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  Phe   dnsDap   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  Phe   atnDap   NH2
 3’5’Dmt  D-Lys  3’5’Dmt   Lys   NH2
 3’5’Dmt  D-Lys  3’5’Dmt   Orn   NH2
 3’5’Dmt  D-Lys  3’5’Dmt   Dab   NH2
 3’5’Dmt  D-Lys  3’5’Dmt   Dap   NH2
 Tyr  D-Lys  Phe   Arg   NH2
 Tyr  D-Orn  Phe   Arg   NH2
 Tyr  D-Dab  Phe   Arg   NH2
 Tyr  D-Dap  Phe   Arg   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  Phe   Arg   NH2
 2’6’Dmt  D-Lys  Phe   Arg   NH2
 2’6’Dmt  D-Orn  Phe   Arg   NH2
 2’6’Dmt  D-Dab  Phe   Arg   NH2
 3’5’Dmt  D-Dap  Phe   Arg   NH2
 3’5’Dmt  D-Arg  Phe   Arg   NH2
 3’5’Dmt  D-Lys  Phe   Arg   NH2
 3’5’Dmt  D-Orn  Phe   Arg   NH2
 Tyr  D-Lys  Tyr   Arg   NH2
 Tyr  D-Orn  Tyr   Arg   NH2
 Tyr  D-Dab  Tyr   Arg   NH2
 Tyr  D-Dap  Tyr   Arg   NH2
 2’6’Dmt  D-Arg  2’6’Dmt   Arg   NH2
 2’6’Dmt  D-Lys  2’6’Dmt   Arg   NH2
 2’6’Dmt  D-Orn  2’6’Dmt   Arg   NH2
 2’6’Dmt  D-Dab  2’6’Dmt   Arg   NH2
 3’5’Dmt  D-Dap  3’5’Dmt   Arg   NH2
 3’5’Dmt  D-Arg  3’5’Dmt   Arg   NH2
 3’5’Dmt  D-Lys  3’5’Dmt   Arg   NH2
 3’5’Dmt  D-Orn  3’5’Dmt   Arg   NH2
 Mmt  D-Arg  Phe   Lys   NH2
 Mmt  D-Arg  Phe   Orn   NH2
 Mmt  D-Arg  Phe   Dab   NH2
 Mmt  D-Arg  Phe   Dap   NH2
 Tmt  D-Arg  Phe   Lys   NH2
 Tmt  D-Arg  Phe   Orn   NH2
 Tmt  D-Arg  Phe   Dab   NH2
 Tmt  D-Arg  Phe   Dap   NH2
 Hmt  D-Arg  Phe   Lys   NH2
 Hmt  D-Arg  Phe   Orn   NH2
 Hmt  D-Arg  Phe   Dab   NH2
 Hmt  D-Arg  Phe   Dap   NH2
 Mmt  D-Lys  Phe   Lys   NH2
 Mmt  D-Lys  Phe   Orn   NH2
 Mmt  D-Lys  Phe   Dab   NH2
 Mmt  D-Lys  Phe   Dap   NH2
 Mmt  D-Lys  Phe   Arg   NH2
 Tmt  D-Lys  Phe   Lys   NH2
 Tmt  D-Lys  Phe   Orn   NH2
 Tmt  D-Lys  Phe   Dab   NH2
 Tmt  D-Lys  Phe   Dap   NH2
 Tmt  D-Lys  Phe   Arg   NH2
 Hmt  D-Lys  Phe   Lys   NH2
 Hmt  D-Lys  Phe   Orn   NH2
 Hmt  D-Lys  Phe   Dab   NH2
 Hmt  D-Lys  Phe   Dap   NH2
 Hmt  D-Lys  Phe   Arg   NH2
 Mmt  D-Lys  Phe   Arg   NH2
 Mmt  D-Orn  Phe   Arg   NH2
 Mmt  D-Dab  Phe   Arg   NH2
 Mmt  D-Dap  Phe   Arg   NH2
 Mmt  D-Arg  Phe   Arg   NH2
 Tmt  D-Lys  Phe   Arg   NH2
 Tmt  D-Orn  Phe   Arg   NH2
 Tmt  D-Dab  Phe   Arg   NH2
 Tmt  D-Dap  Phe   Arg   NH2
 Tmt  D-Arg  Phe   Arg   NH2
 Hmt  D-Lys  Phe   Arg   NH2
 Hmt  D-Orn  Phe   Arg   NH2
 Hmt  D-Dab  Phe   Arg   NH2
 Hmt  D-Dap  Phe   Arg   NH2
 Hmt  D-Arg  Phe   Arg   NH2
Dab=二氨丁基
Dap=二氨基丙酸
Dmt=二甲基酪氨酸
Mmt=2’-甲基酪氨酸
Tmt=N,2’,6’-三甲基酪氨酸
Hmt=2’-羟基-6’-甲基酪氨酸
dnsDap=β-丹磺酰-L-α,β-二氨基丙酸
atnDap=β-邻氨基苯甲酰-L-α,β-二氨基丙酸
bio=生物素
不活化μ型阿片受体的肽的示例包括但不局限于表6中示出的芳香族阳离子肽。
表6.缺少μ型阿片活性的肽类似物
 氨基酸位置1  氨基酸位置2  氨基酸位置3  氨基酸位置4   C-末端改性
 D-Arg  Dmt  Lys  Phe   NH2
 D-Arg  Dmt  Phe  Lys   NH2
 D-Arg  Phe  Lys  Dmt   NH2
 D-Arg  Phe  Dmt  Lys   NH2
 D-Arg  Lys  Dmt  Phe   NH2
 D-Arg  Lys  Phe  Dmt   NH2
 Phe  Lys  Dmt  D-Arg   NH2
 Phe  Lys  D-Arg  Dmt   NH2
 Phe  D-Arg  Phe  Lys   NH2
 Phe  D-Arg  Dmt  Lys   NH2
 Phe  D-Arg  Lys  Dmt   NH2
 Phe  Dmt  D-Arg  Lys   NH2
 Phe  Dmt  Lys  D-Arg   NH2
 Lys  Phe  D-Arg  Dmt   NH2
 Lys  Phe  Dmt  D-Arg   NH2
 Lys  Dmt  D-Arg  Phe   NH2
 Lys  Dmt  Phe  D-Arg   NH2
 Lys  D-Arg  Phe  Dmt   NH2
 Lys  D-Arg  Dmt  Phe   NH2
 D-Arg  Dmt  D-Arg  Phe   NH2
 D-Arg  Dmt  D-Arg  Dmt   NH2
 D-Arg  Dmt  D-Arg  Tyr   NH2
 D-Arg  Dmt  D-Arg  Trp   NH2
 Trp  D-Arg  Phe  Lys   NH2
 Trp  D-Arg  Tyr  Lys   NH2
 Trp  D-Arg  Trp  Lys   NH2
 Trp  D-Arg  Dmt  Lys   NH2
 D-Arg  Trp  Lys  Phe   NH2
 D-Arg  Trp  Phe  Lys   NH2
 D-Arg  Trp  Lys  Dmt   NH2
 D-Arg  Trp  Dmt  Lys   NH2
 D-Arg  Lys  Trp  Phe   NH2
 D-Arg  Lys  Trp  Dmt   NH2
 Cha  D-Arg  Phe  Lys   NH2
 Ala  D-Arg  Phe  Lys   NH2
Cha=环己基丙氨酸
表5和表6中显示的肽的氨基酸可以是左旋结构或右旋结构。
还可通过本领域熟知的任何方法来合成肽。例如，用于以化学方式合成肽的合适方法包括诸如Stuart和Young在以下文献中描述的方法：Solid PhasePeptide Synthesis,第二版,Pierce Chemical Company(1984)；以及MethodsEnzymol.289,Academic Press公司,纽约(1997)。
芳香族阳离子肽的预防性用途和治疗性用途
综述。本文中描述的芳香族阳离子肽可用于预防或治疗疾病。具体地，本发明提供了用于治疗患有心力衰竭或处于心力衰竭的危险中（易得心力衰竭）的对象的预防方法和治疗方法。因此，本方法提供了通过将有效量的芳香族阳离子肽给药至需要该芳香族阳离子肽的对象来预防和/或治疗该对象的心力衰竭。参见以下文献：Tsutsui等，“Mitochondrial oxidative stress,DNA damage,andheart failure.“，Antioxidants and Redx Signaling.8(9):1737-1744(2006)。
治疗性方法。本发明的一个方面包括出于治疗目的来治疗对象的心力衰竭的方法。在治疗性应用中，将足以治愈或者至少部分地抑制疾病的症状（包括其并发症和该疾病发展中的中间病理表现型）的量的组合物或药物给药至疑似患上这样的疾病的对象或者已患有这样的疾病的对象。就这点而论，本发明提供了治疗患上心力衰竭的个体的方法。
可以由本领域已知的任一诊断分析或预后分析或其组合来识别患有心力衰竭的对象。例如，心力衰竭的典型症状包括：呼吸短促（呼吸困难），疲乏，虚弱，平躺时呼吸困难，以及腿、踝关节或腹部浮肿（水肿）。该对象还可患有其他的障碍，包括冠心病、系统性高血压、心肌病或心肌炎、先天性心脏病、心脏瓣膜异常或心脏瓣膜病、严重的肺病、糖尿病、严重贫血、甲状腺机能亢进、心律失常或节律障碍和心肌梗死。充血性心力衰竭的初期征兆是：心肌肥大（心脏扩大）、呼吸急促（气促，在左心衰竭的情况下出现）和肝肿大（肝脏扩大，在右心衰竭的情况下出现）。因冠状动脉阻塞引起的急性心肌梗死（“AMI”）是可以最终导致心力衰竭的常见初始事件。然而，患有AMI的对象不一定发展成为心力衰竭。同样，患有心力衰竭的对象不一定患有AMI。
在一个方面中，本发明提供了通过将有效量的芳香族阳离子肽给药至需要该芳香族阳离子肽的对象来治疗高血压性心肌病的方法。当高血压性心肌病恶化时，其可以导致充血性心力衰竭。患有高血压性心肌病的对象可以由本领域已知的任一诊断分析或预后分析或其组合来识别。例如，高血压性心肌病的典型症状包括高血压病（高血压）、咳嗽、虚弱和疲乏。高血压性心肌病的其他症状包括腿浮肿、体重增加、平躺时呼吸困难、活动时气促增强以及半夜因呼吸急促而苏醒。
预防性方法。在一个方面中，本发明提供了一种用于通过将芳香族阳离子肽给药至对象来预防该对象中的心力衰竭的方法，所述芳香族阳离子肽预防该疾病开始或进展。有患心力衰竭风险的对象可以由例如本文描述的诊断分析或预后分析中的任一个或者组合来识别。在预防性应用中，芳香族阳离子肽的药物组合物或药物制剂以足以消除或降低疾病的危险、减轻疾病的严重程度或者延迟疾病发病的量给药至易患疾病或病症或者处于疾病或病症的危险中的对象，所述疾病包括疾病的生物化学的、组织学的、和/或行为的症候、该疾病的并发症和该疾病发展期间的中间病理表型。将预防性的芳香族阳离子肽进行给药可以发生在异常的症状特点表现出来之前，使得疾病或失调得到预防，或者选择性地其发展得到延迟。适当的化合物可以基于上述的筛选试验确定。
确定基于芳香族阳离子肽的治疗药物的生物效果。在各种实施方式中，进行合适的体外测定或体内测定来确定基于特定的芳香族阳离子肽的治疗药物的效果以及其给药是否适于治疗。在各种实施方式中，可以对典型动物模型进行体外测定，以确定给定的基于芳香族阳离子肽的治疗药物是否在预防或治疗心力衰竭方面产生了期望的效果。在对人类对象进行测试之前，可以在合适的动物模型系统中测试治疗中所用的化合物，所述动物模型系统包括但不限于大鼠、小鼠、鸡、牛、猴、兔等。类似地，对于体内测试，将给药至人类对象之前，可以使用本领域已知的任一动物模型系统。
心力衰竭可以在不同的物种中由容量超负荷、压力超负荷、快速起搏（fastpacing）、心肌缺血、心脏毒性药物或基因修饰模型引发。最常使用的模型是利用压力超负荷的模型。高血压发展成心力衰竭的风险较高。在一个小鼠模型中，血管紧张素II（Ang II）使血压增高并引发心肌肥大、心肌纤维化增强和心肌细胞舒张受损。借助微渗透泵将血管紧张素灌注到小鼠中会使收缩压和舒张压升高，使心脏重量和左心室厚度（LVMI）增大并会使心肌功能指数（MPI）受损。
在第二说明性的小鼠模型中，Gαq的持久高水平表达可以导致明显的心肌细胞凋亡，到16周大时引发心肌肥大和心力衰竭（D'Angelo等,1998）。β-肾上腺素受体（βAR）主要与异三聚体G蛋白Gs结合以模拟腺苷酸环化酶的活性。该结合体产生细胞内cAMP和蛋白激酶A活性，调节心肌收缩力和心率。Gαq过度表达引起对β-肾上腺素激动剂的响应降低并导致心力衰竭。
由外科结扎术引起的实验性主动脉缩窄也广泛用作心力衰竭的模型。腹主动脉缩窄术（TAC）导致压力超负荷引发的心力衰竭，左心室（LV）质量增大。如Tamavski O等（2004）所描述，利用7-0号双结丝缝线来进行TAC以使升主动脉缩窄。TAC之后，小鼠在4周的时间内发展成为心力衰竭。
给药模式和有效剂量
可以使用本领域的技术人员所知的任何方法来将细胞、器官或组织与肽接触。适当的方法包括体外法、间接体内法或体内法。体内法通常包括将芳香族阳离子肽（比如上文描述的芳香族阳离子肽）给药至哺乳动物、合适地给药至人。当用在体内以治疗时，芳香族阳离子肽可以以有效的量（即具有期望的治疗效果的量）给药至对象。剂量和给药方案将取决于对象中的感染程度、使用的特定的芳香族阳离子肽的性质（例如其治疗指数）、该对象以及该对象的病史。
可以在临床前试验和临床试验期间利用内科医生和临床医生熟悉的方法来测定有效量。在所述方法中有用的有效量的肽可以通过用于给药药物组合物的多种已知方法中的任一方法来给药至需要该肽的哺乳动物。肽可以以全身给药或局部给药。
所述肽可以配制成药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”表示由适于给药至比如为哺乳动物的患者的碱或酸制备成的盐（例如，对于给定的给药方案，具有可接受的哺乳动物安全度的盐）。然而，应当理解，所述盐不一定是药学上可接受的盐，例如那些不用来给药至患者的中间化合物的盐。药学上可接受的盐可以由药学上可接受的无机碱或有机碱以及药学上可接受的无机酸和有机酸衍生出。此外，当肽同时包含碱性部分（例如胺、吡啶或咪唑）和酸性部分（例如羧酸或四唑）时，可以形成两性离子，且所述两性离子包括在本文中所用的术语“盐”中。由药学上可接受的无机碱衍生出的盐包括铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、三价锰盐、二价锰盐、钾盐、钠盐和锌盐等。由药学上可接受的有机碱衍生出的盐包括伯胺盐、仲胺盐和叔胺盐，包括取代胺盐、环胺盐、天然存在的胺盐等，比如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙胺基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、还原葡糖胺、葡萄糖胺、组氨酸、海巴明青霉素（hydrabamine）、异丙胺、赖氨酸、葡甲胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。由药学上可接受的无机酸衍生出的盐包括硼酸盐、碳酸盐、卤化氢（氢溴酸、盐酸、氢氟酸或氢碘酸）的盐、硝酸盐、磷酸盐、氨基磺酸盐和硫酸盐。由药学上可接受的有机酸衍生出的盐包括脂肪族羟基酸（例如，柠檬酸、葡糖酸、乙醇酸、乳酸、乳糖酸、苹果酸和酒石酸）的盐、脂肪族单羧酸（例如，醋酸、丁酸、甲酸、丙酸和三氟乙酸）的盐、氨基酸（例如，天冬氨酸、谷氨基酸）的盐、芳香羧酸（例如，苯甲酸、对氯苯甲酸、二苯乙酸、龙胆酸、马尿酸和三苯基乙酸）的盐、芳香羟基酸（例如，邻羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、1-羟基萘-2-羧酸和3-羟基萘-2-羧酸）的盐、抗坏血酸盐、二羧酸（例如，富马酸、马来酸、草酸和琥珀酸）盐、葡萄糖醛酸盐、扁桃酸盐、黏液酸盐、烟酸盐、乳清酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磺酸（例如，苯磺酸、樟脑磺酸、乙二磺酸（edisylic）、乙磺酸、羟乙磺酸、甲磺酸、萘磺酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2,6-二磺酸和对甲苯磺酸）的盐、羟萘甲酸（xinafoic acid）的盐等。
本文描述的芳香族阳离子肽可以单独地或组合地加入到药物组合物以给药至对象来治疗或预防本文中描述的疾病。所述组合物通常包括活性剂和药学上可接受的载体。本文中使用的术语“药学上可接受的载体”包括与给药药物可配伍的生理盐水、溶剂、分散介质、涂层、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延缓剂等。辅助性的活性化合物也可以加入到所述组合物中。
通常将药物组合物制备成与其计划给药途径相符。给药途径的示例包括肠胃外（例如，静脉内、皮内、腹腔或皮下）、口服、吸入、经皮肤（局部）、眼内、离子渗入和经粘膜透过给药。用于肠胃外、皮内或皮下的溶液或悬浮液可以包括以下成分：诸如注射用水的消毒稀释液、生理盐水、不挥发油、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂，比如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，比如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；络合剂，比如乙二胺四乙酸；缓冲液，比如醋酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐；以及用于调节渗透压的试剂，比如氯化钠或右旋糖。可以用酸或碱来调节pH，比如盐酸或氢氧化钠。肠胃外制剂可以装在玻璃或塑料制的安瓿瓶、一次性注射器或多剂量瓶中。为了患者或治疗医师的方便，可以以包括治疗过程（例如治疗7天）所需的所有用具（例如，药瓶、稀释液瓶、注射器和针头）的试剂盒的形式提供剂量制剂。
适于注射用途的药物组合物可以包括无菌水溶液（在水溶性的情况下）或者用于临时制备无菌注射液或分散液的分散剂或无菌粉末。为了静脉注射，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，帕西波尼,N.J.)或磷酸盐缓冲盐水（PBS）。在所有情况下，用于肠胃外给药的组合物必须无菌且应当是达到易于注射的程度的液体。用于肠胃外给药的组合物在制造和存储条件下应当稳定且必须被保存同时防止微生物（例如细菌和真菌）的污染行为。
所述芳香族阳离子肽组合物可以包括载体，该载体可以是包括诸如水、乙醇、多元醇（例如，丙三醇、丙二醇以及液态聚乙二醇等）及其合适的组合物的溶剂或分散介质。可以通过例如以下的方式来保持适当的流动性：利用比如卵磷脂的涂层；在分散质的情况下，通过保持所需的颗粒尺寸；和通过利用表面活性剂。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂来实现预防微生物的行为，例如尼泊金、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等。可以包括谷胱甘肽和其他的抗氧化剂以防止氧化。在很多情况下，将优选地是，在该组合物中包括等渗剂，比如糖、多元醇（比如甘露醇、山梨醇）或氯化钠。可以通过在该组合物中包括延迟吸收的制剂来引起可注射组合物的延长吸收，所述延迟吸收的制剂例如为单硬脂酸铝或药用胶。
可以通过将所需量的活性化合物加入具有以上列出的一种成分或多种成分的组合的适当的溶剂中、根据需要然后进行过滤灭菌来制备注射用无菌溶液。通常，通过将活性化合物加入到包括基本分散介质以及以上列出的所需的其它成分的无菌媒介物中来制备分散质。在用于制备注射用无菌溶液的无菌粉末的情况中，典型的制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，这可以产出活性成分以及来自于先前灭菌过滤的溶液中的任何其他所需成分的粉末。
口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用的载体。为了口服治疗给药，活性化合物可以与赋形剂混合并以片剂、锭剂或胶囊（例如明胶胶囊）的形式使用。还可使用液体载体制备口服组合物以用作漱口剂。药学上相容的粘合剂和/或辅助材料可以被包括为该组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊剂和锭剂等可以包括具有相似性质的以下成分或化合物中的任一种：粘合剂，比如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，比如淀粉或乳糖；崩解剂，比如褐藻酸、羧甲淀粉钠、或玉米淀粉；润滑剂，比如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，比如胶态二氧化硅；甜味剂，比如蔗糖或糖精；或者增味剂，比如薄荷、水杨酸甲酯或桔子调味品。
关于通过吸入法给药，所述化合物可以以喷雾剂的形式从包括合适的推进物（例如，比如二氧化碳的气体）的加压容器或分配器或者喷雾器喷洒而递送。这样的方法包括第6468798号美国专利中描述的方法。
本文中描述的治疗化合物的全身给药还可以通过经粘膜方法或经皮肤方法来进行。对于经粘膜给药或经皮肤给药，适合于待渗透的屏障的渗透剂用在该配方中。这样的渗透剂通常是本技术领域已知的，例如，对于经粘膜给药而言，这样的渗透剂包括清洗剂、胆汁盐类或梭链孢酸衍生物。可以通过使用鼻喷入法来完成经粘膜给药。对于经皮肤给药而言，活性化合物配制成本领域普遍知道的药膏、软膏、凝胶或乳液。在一个实施方式中，经皮肤给药可以通过电离子渗透法来进行。
治疗性蛋白质或肽可以在载体体系中配制而成。该载体可以是胶态体系。该胶态体系可以是脂质体、磷脂双分子层媒介物。在一个实施方式中，在脂质体中该治疗肽被胶囊化，同时保持肽完整性。本领域技术人员理解，有各种方法来制备脂质体。（参见：Lichtenberg等的Methods Biochem.Anal.,33:337-462(1988);Anselem等的Liposome Technology,CRC Press(1993)）。脂质体制剂可以延迟排出并增强细胞摄取（参见Reddy，Ann.Pharmacother.,34(7-8):915-923(2000)）。活性剂还可以载入到由医学上可接受的成分制备成的颗粒中，所述医学上可接受的成分包括但不限于可溶解的、不可溶解的、可渗透的、不可渗透的、可生物降解的或胃内滞留的聚合物或脂质体。这样的颗粒包括但不限于纳米颗粒、可生物降解的纳米颗粒、微颗粒、可生物降解的微颗粒、纳米球、可生物降解的纳米球、微球、可生物降解的微球、胶囊剂、乳剂、脂质体、胶粒以及病毒载体体系。
该载体还可以是聚合物，比如可生物降解的、可生物相容的聚合物基质。在一个实施方式中，治疗性肽可以嵌入到聚合物基质中，同时保持蛋白质完整性。所述聚合物可以是天然的，比如多肽、蛋白质或多糖；或者可以是合成的，比如聚α-羟酸。示例包括由例如以下物质制成的载体：胶原蛋白、纤连蛋白、弹性蛋白、乙酸纤维素、硝酸纤维素、多糖、纤维蛋白、明胶及其组合。在一个实施方式中，所述聚合物是聚乳酸（PLA）或乳酸羟基乙酸共聚物（PGLA）。可以以各种形式和尺寸来制备并分离聚合物基体，包括微球和纳米球。聚合物制剂可以引起治疗作用的期间的延长（参见：Reddy，Ann.Pharmacother.,34(7-8):915-923(2000)）。用于人类生长激素（hGH）的聚合物制剂已用在临床试验中（参见：Kozarich和Rich,Chemical Biology，2:548-552(1998)）。
高分子微球持续释放剂的示例在PCT公布WO 99/15144（Tracy等）、第5674534号美国专利以及第5716644号美国专利（都属于Zale等）、PCT公布WO 96/40073（Zale等）以及PCT公布WO 00/38651（Shah等）中予以描述。第5674534号美国专利以及第5716644号美国专利以及PCT公布WO 96/40073描述了包括含红细胞生成素的颗粒的聚合物基体，所述红细胞生成素的颗粒用盐来防止凝聚而稳定。
在一些实施方式中，治疗性化合物与将保护所述治疗化合物以防止其从身体中快速排出的载体一起制备，所述载体比如控释剂，包括植入体和微胶囊化的输送体系。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，比如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原质、聚原酸酯和聚乳酸。可以利用已知的技术来制备这样的制剂。还可以在市场上获得所述材料，例如从Alza Corporation和NovaPharmaceuticals,Inc买到。脂质体悬浮液（包括针对具有细胞特异性抗原的单细胞克隆抗体的特定细胞的脂质体）也可用作医学上可以接受的载体。所述胶质体悬浮液可以利用本领域的本领域技术人员知道的方法来制备，比如，第4522811号美国专利中描述的方法。
还可以配制所述治疗性化合物以增强细胞内传递。例如，本领域已知脂质体传递系统例如，参见：Chonn和Cullis的“Recent Advances in Liposome DrugDelivery Systems”，Current Opinion in Biotechnology 6:698-708(1995);Weiner的“Liposomes for Protein Delivery:Selecting  Manufacture and DevelopmentProcesses”，Immunomethods 4(3)201-9(1994);和Gregoriadis的“EngineeringLiposomes for Drug Delivery:Progress and Problems”Trends Biotechnol.13(12):527-37(1995)。以下文献描述了利用融合脂质体在体内或在体外将蛋白质传递至细胞：Mizguchi等的Cancer Lett.100:63-69(1996)。
可以通过细胞培养或试验动物中的标准药学过程来确定治疗性药物的用量、毒性和治疗效率，例如，用于确定LD50（总数50%的致命剂量）和ED50（总数50%中有效治疗的剂量）。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，且其可以表示为比率LD50/ED 50。表现出高治疗指数的化合物是优选的。尽管具有毒性副作用的化合物可以使用，但应当考虑设计传递系统，该传递系统将这样的化合物靶向组织的受影响的位置，以将对未感染的细胞的可能损伤最小化，且由此降低副作用。
从细胞培养试验和动物研究获取的数据可以用在配制人类中使用的剂量范围中。这样的化合物的剂量优选地位于包括毒性很小或无毒的ED50的循环浓度的范围中。根据使用的剂量类型和利用的给药途径，剂量可以在该范围内变化。对于该方法中使用的任何化合物而言，可以最初根据细胞培养试验来计算出治疗有效的剂量。可以在动物模型中制定一剂量来获得包括细胞培养中确定的IC50（即，测试化合物的获得最大抑制病症的一半的浓度）的循环血药浓度范围。这样的制剂可以用来更准确地确定人类中的有用剂量。可以例如通过高效液相色谱法测定血药浓度。
通常，芳香族阳离子肽的足以获得治疗效果或预防效果的有效量的范围为约0.000001毫克/千克体重/天到约10000毫克/千克体重/天。合适地，剂量范围从约0.0001毫克/千克体重/天到约100毫克/千克体重/天。例如，剂量可以是每天、每两天或每三天1毫克/千克体重或者10毫克/千克体重，或者在每周、每两周或每三周的1毫克/千克体重到10毫克/千克体重的范围中。在一个实施方式中，肽的单剂量的范围从0.001毫克/千克体重到10000毫克/千克体重。在一个实施方式中，芳香族阳离子肽在载体中的浓度的范围从0.2毫克/每毫升到2000毫克/每毫升。示例性的治疗方法每天或每周提供一次给药。在治疗应用中，在相对短的时间间隔中有相对高的剂量有时是需要的，直到疾病的进程减缓或终止为止，且优选地直到对象显示出部分或完全地改善了疾病的病症。其后，可以对患者实行预防性的给药方式。
在一些实施方式中，芳香族阳离子肽的治疗有效的量可以限定为目标组织中的肽的浓度为10-12摩尔到10-6摩尔，例如约10-7摩尔。可以以0.001毫克/千克到100毫克/千克的全身剂量或身体表面面积的等效剂量来给予前述浓度。优化剂量的时间表，以保持目标组织的治疗浓度，最优选地通过每天或每周给药，但也包括连续给药（例如，输液或经皮肤施药）来进行。
本领域技术人员将认识到，某些因素可以影响有效地治疗一对象的剂量和时间，包括但不限于疾病或失调的严重程度、先前的治疗、健康情况和/或对象的年龄以及存在的其它疾病。而且，利用本文描述的治疗有效量的治疗组合物来治疗一对象可以包括单次治疗或一系列治疗。
根据本发明的方法治疗的哺乳动物可以是任何动物，例如，包括农场动物，如羊、猪、牛和马；宠物动物，如狗和猫；实验室里的动物，如小鼠、大鼠和兔。在优选的实施方式中，所述哺乳动物是人。
芳香族阳离子肽和其他治疗剂的组合治疗
在一些实施方式中，芳香族阳离子肽可以与用来预防或治疗心力衰竭的一种或多种其他药剂结合。用于心力衰竭的药物治疗通常包括利尿剂、ACE抑制剂、地高辛（也称为洋地黄）、钙通道阻滞剂和β-受体阻滞剂。在轻度的情况下，噻嗪类利尿剂是有效的，例如以25-50mg/天的氢氯噻嗪或以250-500mg/天的氯噻嗪。然而，可能需要补充氯化钾，因为噻嗪类利尿剂导致低钾血碱中毒症。而且，噻嗪类利尿剂通常对于具有心力衰竭晚期症状的患者而言无效。ACE抑制剂的典型剂量包括以25-50mg/天的卡托普利和以10mg/天的喹那普利（quinapril）。
在一个实施方式中，芳香族阳离子肽可以与β-2肾上腺素能激动剂结合。“β-2肾上腺素能激动剂”指的是β-2肾上腺素能激动剂和其类似物与衍生物，例如，包括具有β-2肾上腺素能激动剂生物活性的天然的或合成的功能性变型以及具有β-2肾上腺素能激动剂生物活性的β-2肾上腺素能激动剂的片段。术语“β-2肾上腺素能激动剂生物活性”指的是模拟对象中肾上腺素和去甲肾上腺素的效应并且改善患有心力衰竭的病人的心肌收缩力的活性。普遍所知的β-2肾上腺素能激动剂包括但不局限于克伦特罗（clenbuterol）、沙丁胺醇、福莫特罗（formeoterol）、左旋沙丁胺醇、奥西那林(metaproterenol)、吡丁醇(pirbuterol)、沙美特罗（salmeterol）和特布他林（terbutaline）。
在一个实施方式中，芳香族阳离子肽与β-1肾上腺素能拮抗剂结合。β-1肾上腺素能拮抗剂和β-1肾上腺素能阻滞剂指的是β-1肾上腺素能拮抗剂及其类似物和衍生物，例如包括具有β-1肾上腺素能拮抗剂生物活性的天然的或合成的功能性变型以及具有β-1肾上腺素能拮抗剂生物活性的β-1肾上腺素能拮抗剂的片段。“β-1肾上腺素能拮抗剂生物活性”指的是阻断肾上腺素对β-受体的作用的活性。普遍所知的β-1肾上腺素能拮抗剂包括但不局限于醋丁洛尔（acebutolol）、阿替洛尔（atenolol）、倍他洛尔（betaxolol）、比索洛尔（bisoprolol）、艾司洛尔（esmolol）和美托洛尔（metoprolol）。
例如，可以在市场上买到多种商标名称的克伦特罗（Clenbuterol），包括（Boehinger Ingelheim公司）、(Von Boch I公司)、
Figure BDA00001728044400343
(Quimedical PT公司)、(Fidelis PT公司)和
Figure BDA00001728044400345
(Biomedica Foscama公司)。类似地，β-1肾上腺素能拮抗剂（比如美托洛尔（metoprolol））及其类似物和衍生物的制备方法在本领域中是公知的。具体地，可以在市场上买到以下公司制造的商标名称为（美托洛尔酒石酸盐）的美托洛尔：Novartis Pharmaceuticals Corporation,One Health Plaza,East Hanover,N.J.07936-1080。也可在市场上买到以下公司的的仿制药：MylanLaboratories公司,1500 Corporate Drive,Suite 400,Canonsburg,Pa.15317;和Watson Pharmaceuticals公司,360 Mt.Kemble Ave.Morristown,N.J.07962。也可买到Astra Zeneca LP公司制造的商标名称为的美托洛尔。
在一个实施方式中，另一种治疗剂可以结合芳香族阳离子肽给药至对象，使得产生协同治疗效果。“协同治疗效果”指的是由两种治疗剂组合产生的大于加和（greater-than-additive）的治疗效果，其胜过仅单独给药一种治疗剂产生的治疗效果。因此，较低剂量的一种或两种治疗剂可以用在治疗心力衰竭中，引起治疗效果增强且副作用降低。
在任何情况下，多种治疗剂可以以任何顺序或甚至同时给药。如果同时地给药，所述多种治疗剂可以以单个、统一的形式或者以多个形式提供（仅举例而言，作为单个的药剂或者两种单独的药剂）。所述治疗剂中的一种治疗剂可以多剂量型提供，或者两者都可以作为多剂量型提供。如果不同时地给药，则多次剂量之间的时间间隔可以从大于0周到小于4周范围中变化。此外，组合方法、组合物和制剂不限于仅使用两种药物。
实施例
通过以下实施例进一步说明本发明，不应当把这些实施例看作任何方式的限制。
实施例1-芳香族阳离子肽在心力衰竭的小鼠模型中的作用
在该实施例中，研究了在高血压性心肌病和心力衰竭中靶向线粒体的抗氧化肽（SS-31）的降低线粒体氧化应激的作用。靶向线粒体的抗氧化肽SS-31用来确定NADPH氧化酶和线粒体在血管紧张素II（Ang-II）引发性心肌病以及患有心力衰竭的Gαq过度表达小鼠中所起的作用。
方法
新生小鼠心肌细胞培养和流式细胞术。解剖不到72个小时大的新生小鼠的心室，将其切碎并用Blendzyme 4（45μg/ml，罗氏制药）使其酶消化。酶消化之后，利用差速贴壁法（differential pre-plating）对心肌细胞进行富集2小时，接着用20%的胎牛血清（sigma公司）以及25μM的阿拉伯糖胞嘧啶（sigma公司）在DMEO（Gibco）中在纤连蛋白涂覆的培养皿上接种24小时。在含0.5%的胰岛素铁硒传递蛋白（Sigma公司）、2mM的谷氨酰胺和1mg/ml的BSA的无血清DMEM中，用血管紧张素II（1μM）刺激心肌细胞3小时。同时，用以下物质之一处理心肌细胞：SS-31（1nM）、N-乙酰半胱氨酸（NAC：0.5mM）或PBS对照。为了测量线粒体超氧化物浓度，将Mitosox（5μM）在37℃下温育30分钟以装载心肌细胞，之后用Hanks平衡盐溶液洗涤两次。按照流式细胞术，利用488/625nm的激发/发射分析样本。利用FCS Express（De Novo Software,洛杉矶,CA）分析流数据并用Mitosox荧光强度的直方图分布表示。
小鼠实验、药物递送、超声波心动描记术和血压测量。所有的动物实验都得到了华盛顿大学动物保护和利用委员会（University of Washington InstitutionalAnimal Care and Use Committee）的批准。将C57BL6小鼠放置在无特定病原体屏障设施中。每一实验组（生理盐水，Ang II，Ang II+SS-31，WT（野生型），Gαq，Gαq+SS-31）包括6到10只小鼠。利用Alzet 1004渗透微型泵在4周的时间中经皮下注射持续给药增压剂量的Ang II（1.1mg/kg/d），同时给药SS-31（3mg/kg/d）或不给药SS-31。在起始时和泵皮下注射4周后，利用配备有13MHz探针的西门子Acuson CV-70执行超声波心动描记术。使用0.5%的异氟烷以降低躁动，获取标准的M型、常规和组织多普勒心动图，根据美国超声心动图学会（American Society of Echocardiography）指南进行功能计算。MPI计算为等容收缩时间和等容舒张时间之和与左心室射血时间的比率。MPI增大指示收缩期消耗了较多的时间来应付等容阶段中的压力变化。包括mCAT诱导的遗传小鼠模型Rosa-26作为SS-31肽对Ang II处理过的小鼠的作用的参照，在该小鼠模型中，在Ang II处理之前，线粒体过氧化氢酶过度表达2周。
利用血管内导管PA-C10（DSI，MN）通过遥测技术测量一单独组的小鼠中的血压，其中，从置泵2天前开始，直到置Ang泵2天后，该测量每三小时进行一次。之后，插入装有Ang II+SS-31的新泵，之后再进行为期2天的记录，以观察SS-31是否对血压产生作用。
定量病理学。将心室组织切成横向薄片，之后将石蜡嵌入其中、切片、经受麦森三色染色。通过测量沾染蓝色的纤维化组织占心室的总横截面区域的比例，进行纤维化定量分析。
测量线粒体蛋白质的羰基。为了提取线粒体蛋白质，将心室组织均匀置于线粒体分离缓冲液（1mM EGTA，10mM HEPES，250nM的蔗糖，10mM三羟甲基氨基甲烷-盐酸（Tris-HCL），pH为7.4）中。在4℃中，以800g对溶解产物进行离心分离7分钟。然后，在4℃中，以4000g对上清液进行离心分离30分钟。将粗线粒体小团再悬浮于少量的线粒体分离缓冲液中，在冰上进行声处理以使细胞膜破裂，用1%的硫酸链霉素进行处理以使线粒体核酸沉淀出来。OxiSelectTM蛋白质羰基化ELISA试剂盒（Protein Carbonyl ELISA Kit）(CellBiolabs公司)用来对每次测定中的1μg的蛋白质样本进行分析。根据使用手册且稍加改动地来执行ELISA。简言之，蛋白质样本与二硝基苯肼（DNPH）反应并用抗DNPH抗体探测，之后用HRP共轭二抗体探测。抗DNPH抗体与HRP共轭二抗体的浓度分别为1:2500和1:4000。
定量聚合酶链反应（PCR )。借助即时荧光基因表达测定技术（Taqman GeneExpression Assays on Demand）利用美国应用生物系统公司（Applied Biosystems）的7900温度循环器（themocycler），通过实时定量PCR对基因表达进行量化，包括：PGC1-α（Mm00731216）、TFAM（Mm00447485）、NRF-1（Mm00447996）、NRF-2（Mm00487471）、胶原蛋白1a2（Mm00483937）和ANP（Mm01255747）。表达测定标准化为18S RNA。
NADPH氧化酶活性。根据在其它地方所描述方法进行NADPH氧化酶测定。简言之，用PBS/DTPA(包括100μM的DTPA)中的二氢乙锭（DHE，10μM）、精子DNA（1.25μg/ml）和NADPH（50μM）培养10μg的心室蛋白质提取物，将被测物在37℃下并且在黑暗中温育30分钟，利用480/580nm的激发/发射检测荧光。
免疫印迹法。在置于冰上的包括蛋白酶和磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液（1.5mM KCl，50mM的Tris HCl，0.125%的脱氧胆酸钠，0.375%的氦核X100，0.15%的NP40，3mM EDTA）中通过均匀化来制备心脏蛋白质提取物。声处理所述样本并在4℃以10000g进行离心分离15分钟。收集上清液且利用BCA测定（Pierce Thermo Scientific,罗克福德,IL）来确定浓度。在NuPAGE的4-12%Bis-Tris凝胶（Invitrogen公司）上分离全部蛋白质（25μg），并转移到0.45μm的PVDF膜（Millipore公司）上，接着使其在具有0.1%的吐温-20（Tween-20）的Tris-缓冲液中的5%的脱脂干奶粉中成块1小时。第一抗体培养一整夜，第二抗体培养1小时。第一抗体包括：抗裂半胱氨酸蛋白酶-3兔源单克隆抗体（rabbitmonoclonal anti-cleaved caspase-3）（Cell Signaling公司）、抗GAPDH鼠源单克隆抗体（Millipore公司）、鼠源多克隆磷酸化-p38丝裂源活化蛋白激酶（CellSignaling公司）和抗-p38鼠源单克隆抗体（Santa Cruz Biotechnology公司）。使用增强化学发光法（Thermo Scienfitic公司）进行检测。使用Image Quant第2.0版来量化作为与GAPDH（内部对照）的比率的相对频带强度。所有的样本标准化为相同的心脏蛋白质样本。
统计分析。所有的数据用平均值±SEM表示。利用Student t-检验来进行两组之间的比较。单因素方差分析（One-way ANOVA）用来比较多个组之间的区别，之后用图基事后检验法（Tukey post-hoc test）检验差异显著性。P＜0.05被认为显著。
结果
Ang II使新生儿心肌细胞中的线粒体活性氧（ROS）增加，这由线粒体抗氧化肽SS-31缓解。流式细胞仪分析证明，血管紧张素II使新生儿心肌细胞中的Mitosox荧光度（线粒体超氧化物的指标）增长近2倍。利用N-乙酰半胱氨酸（NAC）（一种非靶向抗氧化药物）处理并未显示对Ang II处理后的线粒体ROS浓度产生任何作用。相反，SS-31将Ang II诱导的mitosox荧光度降低至与用生理盐水处理的心肌细胞相似的程度（图1）。这些结果表明，心肌细胞中的Ang II诱导的线粒体氧化应激仅可通过靶向线粒体的抗氧化剂来缓解。
尽管并没有降低血压的作用，但SS-31肽改善了Ang II诱导的心肌病。为了重点描述高血压性心肌病，利用Alzet 1004渗透微型泵，通过皮下持续输送来给药增压剂量的Ang II（1.1mg/kg/d）4周。如图2A和图2B所示，血管内遥测术显示，该剂量的Ang II明显地使收缩压和舒张压比开始时升高了25-28mm Hg（开始时，BP：118.8±4.0/94.5±3.5mm Hg，Ang II之后，BP：146.0±5.6/119.3±4.0mm Hg，p<0.001）。同时给药SS-31（3mg/kg/d）未显示出对血压有任何影响（图2）。
Ang II处理4周之后，超声波心动描记术显示，与开始时相比，左心室质量指数（LVMI）近乎增长至2倍（图3A），左心室舒张末期内径（LVEDD，图3B）未发生变化，或通过缩短分数（fractional shortening）测得的收缩功能未发生变化（FS，图3C），Ea/Aa下降了约35%，Ea/Aa为心脏舒张功能的指标（图3D）。同时给药SS-31明显地改善了Ang II诱导的心肌肥大和舒张功能不全，使LVMI降低了33%（Ang:6.32±0.39mg/g相对于Ang+SS-31:4.21±0.17mg/g,p=0.001,图3A的左边部分）以及较佳地使Ea/Aa回升了38%（Ang:0.723±0.15vs.Ang+SS-31:1.17±0.11,p=0.04,图3D的左边部分）。这些作用与靶向线粒体的过氧化氢酶（i-mCAT）的有利作用相当，在Ang II处理的两周前，用线粒体过氧化氢酶诱导赋予了抵抗Ang II诱导的心肌肥大和舒张功能不全的保护性（图3A-D的右边部分）。图4A证明了，Ang II使心脏重量比用生理盐水处理的对照心脏提高了45%（生理盐水中的5.3±0.18相对于Ang中的7.69±0.20,p<0.001），SS-31将心脏重量降到6.05±0.135mg/mm(与仅用Ang相比p<0.01)。通过对心房钠尿肽（ANP）进行定量PCR，确认心肌肥大的表型，心房钠尿肽是公知的心肌肥大期间被再活化的胚胎基因。Ang II诱导ANP基因表达增加至约15倍，而该增加几乎完全被SS-31所阻止（图4B）。
通过马森三色染色法来检查心脏病理，马森三色染色法证明Ang II处理4周之后的血管周围纤维化和间质性纤维化（图4C）。心室纤维化的定量图像分析（三色染色呈蓝色）表明，Ang II使心室纤维化明显地增加至3倍多，该心室纤维化的增加被SS-31充分减轻（图4D）。通过对前胶原la2（procollagen la2）基因进行定量PCR来确认心肌纤维化的增加，前胶原la2基因是纤维化的主要因素。如图4E中所示，Ang II使Coll 1a2基因表达增长至约2.5倍，这几乎完全被SS-31的给药所减轻。
Ang II诱导线粒体蛋白质氧化损伤且为线粒体生物合成传导信号。与Ang II诱导心肌细胞中线粒体ROS这一发现（图1）一致，长期给药Ang II 4周使得心室线粒体蛋白质的羰基含量显著地升高，该含量是蛋白质氧化损伤的指标（p=0.03，图5A）。靶向线粒体的抗氧化剂SS-31明显地减少了线粒体蛋白质的羰基（p=0.02，图5A）。
过氧化物酶增殖体激活受体γ共激活因子（PGC-1α）是线粒体生物合成的主调控物，调节核呼吸因子（NRF）和线粒体转录因子A（TFAM），核呼吸因子和线粒体转录因子分别转录核DNA和编码为线粒体蛋白质的线粒体DNA。由于ROS引起的线粒体损伤已经显示出对线粒体生物合成的信号传导进行上调，表明Ang II还引发PGC-1α及其下游靶基因（包括TFAM、NRF-1和NRF-2）的表达（图5B）。已发现，线粒体抗氧化剂SS-31充分防止在Ang II处理4周之后PGC-1α以及所有下游靶基因的上调（对于所有基因而言，p<0.05，图5B）。
SS-31作用于NADPH氧化酶的下游并减少p38 MAPK的活化以及响应于Ang II而发生的细胞凋亡。与前面的记录一致，给药Ang II4周会明显地增强心脏NADPH氧化酶的活性（p=0.03，图6A），但是，这未通过SS-31给药而改变（p=0.67，图6A），表明SS-31保护作用于NADPH氧化酶的下游。
已表明，Ang II激活某些丝裂原活化蛋白激酶（MAPK），比如p38。已证实，给药Ang 4周提高p38 MAPK的磷酸化作用，该磷酸化作用可以明显地且几乎完全地被SS-31减弱（图6C），表明，该MAP激酶通过mt-ROS敏感机制被激活。线粒体ROS直接或间接地通过激活细胞凋亡信号调节激酶可以引发细胞凋亡。发现Ang II确实引发心脏细胞凋亡，如图所示，其使左心室组织中的裂解的（活化的）半胱天冬酶-3（caspase-3）增加至约3倍（p=0.006，图6B）。SS-31完全防止由Ang II引起的caspase-3激活（p=0.004，图6B）。
SS-31部分地拯救Gαq过度表达引起的心力衰竭。Gαq蛋白质耦联至儿茶酚胺的受体和Ang II的受体，这些受体都是在高血压心血管疾病中的关键介质。为了将这些发现扩展至长期儿茶酚胺/Ang II刺激的模型，使用心脏的Gαq特定过度表达的基因小鼠模型，Gαq过度表达使14周-16周大的小鼠发生心力衰竭。在该研究中，Gαq小鼠在16周大时心脏收缩功能受损，这如FS的明显降低所出（图7A），LV腔增大（图7B），由Ea/Aa降低表示的舒张功能受损（图7C）以及心肌功能指数恶化（MPI，图7D）。从12周到16周给药SS-31（3mg/kg/d）明显地改善收缩功能（p<0.001相对于未处理的Gαq小鼠，图7A）并改善心肌功能（p=0.04，图7D）。LV腔增大得到了略微地减小（p=0.08，图7B），Ea/Aa通过SS-31得到了较好的保持，具有边界显著性（p=0.06，图7C）。在16周大时，Gαq小鼠的标准心脏重量增长了33%，而SS-31大大降低了心脏扩大（p=0.001，图7E）。Gαq小鼠的肺重量明显增长了22%，表示肺充血，这通过SS-31略微改善，具有边界显著性，（p=0.09，图7E）。Gαq小鼠中的心室纤维化增长至约2倍，而在SS-31处理的小鼠中心室纤维化未发生变化（图9A），这可以通过前胶原1a2定量PCR证实（图9B）。线粒体蛋白氧化损伤在Gαq心脏中也是明显的（p=0.01，图9C），以及SS-31处理过的小鼠显示出心脏线粒体蛋白质羰基明显减少（p=0.05，图9C）。在Gαq小鼠心脏中，没有裂解的caspase 3增多的迹象（未示出数据）。
讨论
当前研究表明，接触Ang II 4周会使心脏线粒体蛋白质氧化损伤增加且引发线粒体生物合成的信号传导（图5），与H2O2直接激活PGC-1α的转录这一先前报道一致，其中PGC-1α是线粒体生物合成的主要调控物。SS-31明显地减弱了Ang诱导的线粒体氧化应激且因此降低了线粒体生物合成的上调，以及降低ROS介导的信号传导，比如p38 MAPK磷酸化（图8）。而且，线粒体氧化应激可以导致细胞凋亡，这是因为释放细胞色素c并激活蛋白酶原-9（procaspase-9）、之后激活caspase-3以及细胞凋亡。这些结果表明，利用SS-31减弱线粒体ROS预防了细胞凋亡，这正如通过活化的caspase-3（图6）的测量所示的那样，并伴随着AngII引发的心肌肥大、纤维化和舒张功能不全（图3和图4）的改善。
为了重点描述长期的神经激素刺激对心脏的作用（如慢性高血压中所见到的），使用过度表达Gαq蛋白的转基因小鼠。Gαq是耦联至肾上腺素受体和血管紧张素II受体的G蛋白的亚单位。已显示，Gαq的心脏特异型过度表达可引起14-16周大的小鼠患心力衰竭，即使是在不存在血压升高的情况下。用SS-31对12周大的Gαq小鼠处理4周，且证实，SS-31部分地拯救了Gαq小鼠模型中的心力衰竭表型。SS-31明显地改善了收缩功能不全、心肌肥大并提高了整体心肌功能（图7A、图7D、图7E）。还观察到，SS-31减少腔体增大、舒张功能不全以及肺充血的趋势。（图7B、图7C和图7E）。
高血压是具有发展成动脉粥样硬化、心肌症、中风、心脏性猝死和心力衰竭的主要风险的高度流行疾病。高血压导致的心力衰竭可以表现为收缩性心力衰竭或射血分数正常性心力衰竭（HFpEE）；射血分数正常性心力衰竭（HFpEE）几乎占心力衰竭患者、尤其是女性老年患者的一半，HFpEF预后比收缩性心力衰竭的预后稍微好些。一些临床试验表明，目前推荐的抗高血压药疗法在降低大部分心血管事件和心力衰竭发展方面的有效度仅达50%。尽管这种治疗方法降低了患有确定的收缩性心力衰竭的患者的死亡率并提高了生活质量，但这并不能令人信服地表明其是HFpEF的任何有效治疗方法。这强调了迫切需要开发高血压性心血管疾病的新型预防和治疗策略。
概括来讲，这些结果表明，靶向线粒体的抗氧化剂SS-31在缓解因长期AngII刺激以及Gαq过度表达引起的心肌病方面是有利的，这表明其在高血压性心脏病中具有靶器官保护的潜在临床应用。因此，本发明的芳香族阳离子肽在治疗或预防哺乳动物对象中的心力衰竭方面是有效的。
实施例2-利用SS-20治疗或预防动物模型中的心力衰竭（预示）
在Ang II小鼠模型中或Gαq小鼠模型中检验芳香族阳离子肽SS-20在治疗或预防心力衰竭方面的效果。
在C57B 16小鼠中进行该研究。通过渗透微型泵将Ang II灌注（4周1.1mg/kg/d）到下列组的小鼠中：（1）野生型（WT）；（2）表现出血管紧张肽原的心脏特异型过度表达的转基因小鼠（Tg）；（3）过度表达靶向过氧化物酶体的过氧化氢酶的小鼠（pCAT）；过度表达靶向线粒体的过氧化氢酶的小鼠（mCAT）；以及（4）表达诱导mCAT的小鼠（i-mCAT）。在接受SS-20的小鼠中，将SS-20输送到具有Ang II的同一微型泵中，并以3mg/kg/d的速率灌输4周。
可选地，在以下处理组的C57B16小鼠中进行该研究：（1）WT（野生型C57B16小鼠）；（2）pCAT（过度表达靶向过氧化物酶体的过氧化氢酶）；（3）mCAT（过度表达靶向线粒体的过氧化氢酶）；（4）Gαq（过度表达Gαq）；（5）Gαq/mCAT（过度表达Gαq和靶向线粒体的过氧化氢酶）；（6）Gαq/pCAT(过度表达Gαq和靶向过氧化物酶体的过氧化氢酶)；以及（7）Gαq+SS-肽（用SS-20处理的Gαq小鼠）。
利用标准成像平面—M型、常规和组织多普勒成像来通过超声波心动描记术（Acuson CV-70，Siemens Medical Systems公司,莫尔文,PA）来确定心脏功能。按照实施例1中所描述的，测量心肌功能指数（MPI）、左心室质量指数（LVMI）和Ea/Aa比率。
利用SS-20处理预计会减轻Ang II诱导的心力衰竭或Gαq诱导的心力衰竭，这可由LVMI降低和MPT降低以及心脏重量没有增加来证明。还预计会改善收缩功能和舒张功能。SS-20提供的保护预计与线粒体中的过氧化氢酶过度表达提供的保护类似。因此，芳香族阳离子肽SS-20在预防或治疗哺乳动物对象中的高血压性心肌病和心力衰竭的方法中是有效的。
等同物
本发明不限于在本申请中描述的特定实施方式，该特定实施方式用作本发明的单独的方面的单一说明。本领域技术人员将理解，可以不脱离本申请的精神和范围的情况下进行各种修改和改动。根据以上描述，除了本文中列举的以外，本发明的范围内的功能上等同的方法和装置对于本领域的本领域技术人员而言是明显的。这样的改动和修改意欲落在所附权利要求的范围内。本公开仅受所附权利要求以及与这样的权利要求的范围所等同的全部范围限制。应当理解，本公开不限于特定的方法、试剂、组合物和生物系统，当然，所述方法、试剂、组合物和生物系统可以变化。还可理解，本文中使用的术语仅用于描述特定的实施方式，不用来是限制性的。
此外，在以马库什组的方式描述本公开的特征或方面的情况下，本领域技术人员将意识到，本公开也是以马库什组中的任一单个成员或亚组成员的方式所描述的。
本领域技术人员将理解，为了任何或所有目的，尤其是提供说明书支持方面，本文中描述的所有范围还可涵盖任何且所有的可能子范围及其子范围的组合。任何列出的范围可以容易地看作充分公开并使其能够同一范围分成至少等半、三分之一、四分之一、五分之一份、十分之一等的子范围。作为非限制性实施例，本文中描述的每一范围可以容易地分成下三分之一、中三分之一和上三分之一等。本领域技术人员还将理解，所有的语言比如“上至”、“至少”、“大于“、”小于“等包括所示出数且适用于可以随后被分成以上上述所提及子范围的范围。最后，本领域技术人员将理解，范围包括每一单个成员。因此，例如，具有1到3个单元的组指的是具有1个单元、2个单元或3个单元的组。类似地，具有1到5个单元的组指的是具有1个单元、2个单元、3个单元、4个单元或5个单元的组，等等。
本文所参考的或引用的所有专利、专利申请、在先申请和出版物通过引用而全文并入本文，包括所有的附图和表格，使得它们不与本说明书的明确教导相矛盾。
在以下的权利要求范围内提出其他的实施方式。

Claims (13)

1.一种治疗哺乳动物对象中的心力衰竭或高血压性心肌病的方法，包括将治疗有效量的肽D-Arg-2’6’-Dmt-Lys-Phe-NH2或Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2给药至需要所述治疗的所述哺乳动物对象。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肽是D-Arg-2’6’-Dmt-Lys-Phe-NH2。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肽是Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述对象患有心力衰竭。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述心力衰竭由高血压、缺血性心脏病、接触心脏毒性化合物、心肌炎、甲状腺疾病、病毒性感染、齿龈炎、药物滥用、酗酒、心包炎、动脉粥样硬化、血管疾病、肥厚性心肌病、急性心肌梗塞、左心室收缩功能不全、冠状动脉搭桥手术、饥饿、进食失调或遗传缺陷引起。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述对象患有高血压性心肌病。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，与未被给药所述肽的对照对象相比，被给药所述肽的对象的心肌收缩力和心输出量提高。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，与未被给药所述肽的对照对象相比，被给药所述肽的所述对象的心肌收缩力和心输出量提高了至少10%。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述对象是人。
10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肽口服给药、局部给药、全身给药、静脉内给药、皮下给药、腹腔内给药或肌内给药。
11.根据权利要求1所述的方法，还包括单独地、顺序地或同时地将心血管药给药至所述对象。
12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述心血管药选自由以下物质组成的组：抗心律失常药、血管舒张药、抗心绞痛药、皮质类固醇、强心苷、利尿剂、镇静剂、血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素II拮抗剂、血栓溶解剂、钙通道阻滞剂、血栓素受体拮抗剂、游离基清除剂、抗血小板药、β-肾上腺素受体阻断药、α-受体阻断药、交感神经抑制剂、洋地黄制剂、伊诺曲普和抗高血脂药。
13.一种用于增强患有心力衰竭或高血压性心肌病的对象中的心肌收缩力和心输出量的方法，包括将治疗有效量的肽D-Arg-2’6’-Dmt-Lys-Phe-NH2或Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2给药至所述对象。
CN2010800551907A 2009-10-05 2010-10-04 预防或治疗心力衰竭的方法 Pending CN102711785A (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US24868109P 2009-10-05 2009-10-05
US61/248,681 2009-10-05
US28948309P 2009-12-23 2009-12-23
US61/289,483 2009-12-23
PCT/US2010/051329 WO2011044044A1 (en) 2009-10-05 2010-10-04 Methods for the prevention or treatment of heart failure

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410049107.5A Division CN103845724A (zh) 2009-10-05 2010-10-04 预防或治疗心力衰竭的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102711785A true CN102711785A (zh) 2012-10-03

Family

ID=43823652

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410049107.5A Pending CN103845724A (zh) 2009-10-05 2010-10-04 预防或治疗心力衰竭的方法
CN2010800551907A Pending CN102711785A (zh) 2009-10-05 2010-10-04 预防或治疗心力衰竭的方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410049107.5A Pending CN103845724A (zh) 2009-10-05 2010-10-04 预防或治疗心力衰竭的方法

Country Status (7)

Country Link
US (7) US20110082084A1 (zh)
EP (5) EP2764871A1 (zh)
JP (6) JP2013506696A (zh)
CN (2) CN103845724A (zh)
CA (1) CA2776581C (zh)
HK (1) HK1217293A1 (zh)
WO (1) WO2011044044A1 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110339339A (zh) * 2013-03-01 2019-10-18 康德生物医疗技术公司 治疗线粒体疾病的方法
CN112111003A (zh) * 2019-06-20 2020-12-22 中国农业大学 含有me序列的一类新型抑制血小板聚集和抗血栓形成寡肽
US11771734B2 (en) 2013-03-01 2023-10-03 Stealth Biotherapeutics Inc. Methods and compositions for the prevention or treatment of Barth syndrome

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9306796B1 (en) 2008-03-18 2016-04-05 Mcafee, Inc. System, method, and computer program product for dynamically configuring a virtual environment for identifying unwanted data
EP2464371B1 (en) * 2009-08-12 2016-03-16 Cornell University Methods for preventing or treating metabolic syndrome
EP2764871A1 (en) 2009-10-05 2014-08-13 Cornell University Methods for the prevention or treatment of heart failure
CA2786066A1 (en) * 2009-12-31 2011-07-07 Stealth Peptides International, Inc. Methods for performing a coronary artery bypass graft procedure
US9636378B2 (en) * 2012-03-30 2017-05-02 Stealth Biotherapeutics Corp Methods and compositions for the prevention and treatment neuropathy
US20150246092A1 (en) * 2012-10-22 2015-09-03 Stealth Peptides International, Inc. Methods for reducing risks associated with heart failure and factors associated therewith
EP3586864A1 (en) * 2013-05-14 2020-01-01 Stealth Biotherapeutics Corp Methods for the prevention or treatment of left ventricle remodeling
US20160095867A1 (en) * 2013-05-28 2016-04-07 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Bet inhibition therapy for heart disease
CA2916977A1 (en) 2013-06-26 2014-12-31 Stealth Biotherapeutics Corp Methods and compositions for detecting and diagnosing diseases and conditions
US20160166633A1 (en) * 2013-08-02 2016-06-16 Stealth Bio Therapeutics Corp Methods and compositions for the prevention and treatment of friedreich's ataxia
WO2016004441A1 (en) * 2014-07-03 2016-01-07 Stealth Peptides International, Inc. Methods for the prevention or treatment of acute myocardial infarction injury
US10368774B2 (en) * 2015-07-30 2019-08-06 Medtronic, Inc. Absolute intrathoracic impedance based scheme to stratify patients for risk of a heart failure event
US20190022167A1 (en) * 2016-01-06 2019-01-24 D. Travis Wilson Methods and compositions for the prevention and treatment of duchenne muscular dystrophy
WO2017151886A1 (en) * 2016-03-02 2017-09-08 Stealth Biotherapeutics Corp Methods and compositions for the treatment and prevention of pulmonary arterial hypertension
CA3020393A1 (en) 2016-04-11 2017-10-19 Carnot, Llc Chiral peptides
WO2018005990A2 (en) * 2016-07-01 2018-01-04 Marshall University Research Corporation Compositions and methods for treating uremic cardiomyopathy
US11324748B2 (en) 2017-04-21 2022-05-10 Northeast Ohio Medical University Vasodilators for treatment of heart failure
WO2020118035A1 (en) * 2018-12-06 2020-06-11 Stealth Biotherapeutics Corp Methods and compositions for the treatment of sengers syndrome
EP3771467A1 (en) 2019-07-30 2021-02-03 Fundacio Institut de Recerca de l'Hospital de la Santa Creu i sant Pau Ss-31 for the prevention and/or treatment of aneurysm
EP4168425A4 (en) * 2020-06-17 2024-06-19 Stealth BioTherapeutics Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF MUSCULAR DYSTROPHY
CN116390723A (zh) 2020-09-09 2023-07-04 社会利益网络公司 用于将生物素递送至线粒体的方法和组合物

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009100363A2 (en) * 2008-02-07 2009-08-13 Cornell University Methods for preventing or treating insulin resistance
WO2011019809A1 (en) * 2009-08-12 2011-02-17 Cornell University Methods for preventing or treating metabolic syndrome

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4732898A (en) * 1986-04-29 1988-03-22 Warner-Lambert Company 2-(2-aryl-2-oxoalkylidene) analogs of-3,5-pyridinedicarboxylic acid dialkyl esters useful for treatment of cardiovascular disorders
US5602100A (en) * 1988-06-30 1997-02-11 Astra Ab Dermorphin analogs having pharmacological activity
EP0350221B1 (en) * 1988-06-30 1996-04-17 Astra Aktiebolag Dermorphin analogs, their methods of preparation, pharmaceutical compositions, and methods of therapeutic treatment using the same
US5674980A (en) * 1989-12-21 1997-10-07 Biogen Inc Fusion protein comprising tat-derived transport moiety
US5858784A (en) 1991-12-17 1999-01-12 The Regents Of The University Of California Expression of cloned genes in the lung by aerosol- and liposome-based delivery
US5674534A (en) 1992-06-11 1997-10-07 Alkermes, Inc. Composition for sustained release of non-aggregated erythropoietin
US5716644A (en) 1992-06-11 1998-02-10 Alkermes, Inc. Composition for sustained release of non-aggregated erythropoietin
DE69630918T2 (de) * 1995-06-09 2004-10-28 Hisamitsu Pharmaceutical Co., Inc., Tosu Matrix für Iontophorese
US5849761A (en) * 1995-09-12 1998-12-15 Regents Of The University Of California Peripherally active anti-hyperalgesic opiates
WO1997016169A1 (en) * 1995-11-01 1997-05-09 Chiron Corporation Treatment of a cardiovascular indication by delivery of therapeutics to the pericardial space
US5885958A (en) * 1997-03-25 1999-03-23 Administrators Of The Tulane Educational Fund Mu-opiate receptor peptides
US6489300B1 (en) * 1997-07-31 2002-12-03 Eugene D. Thorsett Carbamyloxy compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
WO1999029721A1 (en) * 1997-12-10 1999-06-17 Washington University Anti-pathogen system and methods of use thereof
EP1071414A1 (en) * 1998-04-24 2001-01-31 Mitokor Compounds and methods for treating mitochondria-associated diseases
US6245740B1 (en) 1998-12-23 2001-06-12 Amgen Inc. Polyol:oil suspensions for the sustained release of proteins
SE9900961D0 (sv) * 1999-03-16 1999-03-16 Astra Ab Novel compounds
CA2386540A1 (en) * 1999-10-04 2001-04-12 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Novel carbamates and ureas
US6759520B1 (en) * 1999-10-28 2004-07-06 The New England Medical Center Hospitals, Inc. Chimeric analgesic peptides
US20050192215A1 (en) * 2000-01-21 2005-09-01 Malabika Ghosh Methods and materials relating to novel polypeptides and polynucleotides
US7498297B2 (en) * 2000-07-18 2009-03-03 Cornell Research Foundation Medicinal uses of mu-opioid receptor agonists
US6900178B2 (en) 2000-09-12 2005-05-31 University Of Kentucky Research Foundation Protection against ischemia and reperfusion injury
IT1318370B1 (it) * 2000-12-21 2003-08-25 Tonino Bombardini Metodo e dispositivo per la diagnosi e la terapia dello scompensocardiaco cronico.
US20070015146A1 (en) * 2001-05-22 2007-01-18 Gene Logic, Inc. Molecular nephrotoxicology modeling
BR0213043A (pt) * 2001-10-01 2004-10-05 Univ Vanderbilt Métodos de tratar ou prevenir dusfunção contrátil miocárdica após infarto do miocárdio em um sujeito, de tratar ou prevenir cardiomiopatia dilatada em um sujeito e de incrementar contratilidade miocárdica em um sujeito, animal transgênico, e, método de identificar um composto que pode tratar doença estrutural do coração
US7776925B2 (en) * 2002-03-06 2010-08-17 Duke University Reversing, postponing or preventing the occurrence of GTN tolerance and/or generation of reactive oxygen species from mitochondria
EP3842055A1 (en) 2003-02-04 2021-06-30 Cornell Research Foundation, Inc. Uses of aromatic-cationic peptide
CN100506841C (zh) * 2003-05-01 2009-07-01 科内尔研究基金会 将分子递送到细胞的方法和载体复合物
US7232824B2 (en) * 2003-09-30 2007-06-19 Scios, Inc. Quinazoline derivatives as medicaments
US7550439B2 (en) * 2004-01-23 2009-06-23 Cornell Research Foundation, Inc. Methods for reducing oxidative damage
US20050272101A1 (en) * 2004-06-07 2005-12-08 Prasad Devarajan Method for the early detection of renal injury
EP3549594A1 (en) * 2005-09-16 2019-10-09 Cornell Research Foundation, Inc. Aromatic-cationic peptide for use in a method for reducing cd36 expression
US20070259377A1 (en) * 2005-10-11 2007-11-08 Mickey Urdea Diabetes-associated markers and methods of use thereof
US20080027082A1 (en) * 2006-06-19 2008-01-31 Berthold Hocher Use of adenosine a1 antagonists in radiocontrast media induced nephropathy
EP3741381B1 (en) * 2008-02-26 2024-04-24 Cornell University A peptide for use for prevention and treatment of acute renal injury
EP3906933A1 (en) 2009-03-20 2021-11-10 The General Hospital Corporation d/b/a Massachusetts General Hospital D-arg-2'6'-dimethyltyrosine-lys-phe-nh2 for use in the prevention of secondary complications of burn injuries
EP2764871A1 (en) 2009-10-05 2014-08-13 Cornell University Methods for the prevention or treatment of heart failure

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009100363A2 (en) * 2008-02-07 2009-08-13 Cornell University Methods for preventing or treating insulin resistance
WO2011019809A1 (en) * 2009-08-12 2011-02-17 Cornell University Methods for preventing or treating metabolic syndrome

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
程龙献等: "降钙素基因相关肽的临床应用进展", 《医药导报》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110339339A (zh) * 2013-03-01 2019-10-18 康德生物医疗技术公司 治疗线粒体疾病的方法
US11771734B2 (en) 2013-03-01 2023-10-03 Stealth Biotherapeutics Inc. Methods and compositions for the prevention or treatment of Barth syndrome
CN112111003A (zh) * 2019-06-20 2020-12-22 中国农业大学 含有me序列的一类新型抑制血小板聚集和抗血栓形成寡肽
CN112111003B (zh) * 2019-06-20 2022-02-11 中国农业大学 含有me序列的一类新型抑制血小板聚集和抗血栓形成寡肽

Also Published As

Publication number Publication date
US20230285499A1 (en) 2023-09-14
EP2485749A4 (en) 2013-07-24
US20180236025A1 (en) 2018-08-23
JP2013506696A (ja) 2013-02-28
US20140100166A1 (en) 2014-04-10
JP2015163609A (ja) 2015-09-10
JP2016190876A (ja) 2016-11-10
US20200188470A1 (en) 2020-06-18
JP2022046811A (ja) 2022-03-23
US20210187056A1 (en) 2021-06-24
HK1217293A1 (zh) 2017-01-06
EP2485749A1 (en) 2012-08-15
EP3120860A1 (en) 2017-01-25
JP7382607B2 (ja) 2023-11-17
CA2776581C (en) 2020-12-15
CA2776581A1 (en) 2011-04-14
WO2011044044A1 (en) 2011-04-14
US12102659B2 (en) 2024-10-01
JP7017762B2 (ja) 2022-02-09
JP6429835B2 (ja) 2018-11-28
EP2764871A1 (en) 2014-08-13
US20110082084A1 (en) 2011-04-07
EP3120860B1 (en) 2019-06-26
EP2944317A1 (en) 2015-11-18
EP3603658A1 (en) 2020-02-05
JP2018203764A (ja) 2018-12-27
JP2020097627A (ja) 2020-06-25
US20160106800A1 (en) 2016-04-21
US11534476B2 (en) 2022-12-27
CN103845724A (zh) 2014-06-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102711785A (zh) 预防或治疗心力衰竭的方法
EP2464371B1 (en) Methods for preventing or treating metabolic syndrome
CN102834408A (zh) 芳香族阳离子肽及其用途
CN102791279A (zh) 用于进行冠状动脉旁路移植手术的方法
CN102791280A (zh) 用于预防或治疗血管阻塞损伤的方法
CN102834105A (zh) 保护免受机械通气诱导的膈膜功能障碍和骨骼肌萎缩的线粒体靶向的抗氧化剂
CN103249423A (zh) 预防或治疗缺血/再灌注损伤之后无复流的方法
CN105407906A (zh) 预防或治疗巴斯综合征的方法和组合物
CA2916497C (en) Methods for the regulation of matrix metalloproteinase expression
EP2996707B1 (en) Methods for the prevention or treatment of left ventricle remodeling

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1176561

Country of ref document: HK

C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20121003