CN102788860A - 番泻叶配方颗粒hplc指纹图谱的构建方法及其hplc指纹图谱 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种番泻叶配方颗粒HPLC指纹图谱的构建方法及其HPLC指纹图谱，该指纹图谱具有25个共有峰，其相对保留时间tR分别为：0.370min、0.385min、0.432min、0.523min、0.552min、0.743min、0.783min、0.810min、1.000min、1.030min、1.052min、1.078min、1.296min、1.363min、1.385min、1.440min、1.898min、2.028min、2.101min、2.144min、2.426min、2.492min、2.560min、3.164min、3.421min。通过指纹图谱中共有峰的有无，可全面地对番泻叶配方颗粒的质量进行评价，保证产品质量的稳定性及临床用药的有效性与安全性。
Description
技术领域
本发明涉及化学分析领域，特别是涉及一种番泻叶配方颗粒HPLC指纹图谱的构建方法及其HPLC指纹图谱。
背景技术
番泻叶配方颗粒为豆科植物狭叶番泻Cassia angustifolia Vahl的干燥小叶经加工制成的配方颗粒，味甘、苦，寒，具有泻热行滞，通便，利水之功效，主要用于热结积滞，便秘腹痛，水肿胀满等症。与传统的中药煎剂相比，中药配方颗粒具有免煎易服，易储存，携带方便等优点。中药指纹图谱是近年来迅速发展起来的一种中药质量控制模式，相对于以单个或少数主要成分作为指标来控制中药材质量的方法，中药指纹图谱能较为全面的反映中药饮片或制剂的内在质量，具有系统性、整体性和稳定性等特点。本发明旨在建立一种番泻叶配方颗粒的鉴别方法，该方法采用高效液相色谱（HPLC）建立其指纹图谱，并用相似度软件进行评价，可全面地对番泻叶配方颗粒的质量进行评价，保证产品质量的稳定性及临床用药的有效性与安全性。
发明内容
基于此，本发明的目的是提供一种番泻叶配方颗粒HPLC指纹图谱的构建方法。
具体的技术方案如下：
一种番泻叶配方颗粒HPLC指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：
（1）供试品溶液的配制：精密称取番泻叶配方颗粒0.05g，加入体积百分含量50%的甲醇25ml，称重，超声处理，冷却后再次称重，用体积百分含量50%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液即得供试品溶液；
（2）高效液相色谱HPLC分析：精密吸取供试品溶液5μl进样，色谱条件如下：色谱柱为Waters Xbridge C18柱，填料粒径5μm，柱长250mm，柱内径4.6mm；流动相：乙腈为流动相A，体积百分含量为1%冰醋酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：从0-30min，流动相A的体积百分含量由10%提高至20%，流动相B的体积百分含量由90%降低至80%；从30-40min，流动相A的体积百分含量由20%提高至30%，流动相B的体积百分含量由80%降低至70%;从40-50min，流动相A的体积百分含量为30%，流动相B的体积百分含量为70%;从50-55min，流动相A的体积百分含量由30%提高至35%，流动相B的体积百分含量由70%降低至65%;检测波长：270nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；
（3）测定10批番泻叶配方颗粒样品并进行分析比较，得到由其共有特征峰构成的番泻叶配方颗粒HPLC的标准指纹图谱。
在其中一些实施例中，所述番泻叶配方颗粒HPLC的标准指纹图谱具有的25个共有峰的相对保留时间tR分别为：0.370min、0.385min、0.432min、0.523min、0.552min、0.743min、0.783min、0.810min、1.000min、1.030min、1.052min、1.078min、1.296min、1.363min、1.385min、1.440min、1.898min、2.028min、2.101min、2.144min、2.426min、2.492min、2.560min、3.164min、3.421min。
本发明的另一目的是提供上述方法构建得到的番泻叶配方颗粒HPLC的标准指纹图谱。
上述的番泻叶配方颗粒HPLC指纹图谱的构建方法得到的番泻叶配方颗粒HPLC的标准指纹图谱。
本发明具有如下优点和用途：通过指纹图谱中共有峰的有无，可全面地对番泻叶配方颗粒的质量进行评价，保证产品质量的稳定性及临床用药的有效性与安全性。
附图说明
图1为番泻叶配方颗粒HPLC标准指纹图谱（1-25为25个共有峰）；
图2为10批番泻叶配方颗粒的HPLC指纹图谱叠加图。
具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明做进一步的阐述。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Waters 2695-2998型高效液相色谱仪（美国）；PDA检测器，四元梯度泵，软件为Empower2数据处理软件系统；KQ5200DE型数控超声波清洗器(昆山)。METTLER XS205DU电子天平（瑞士）。
1.2 试药
番泻叶配方颗粒（批号：0908049、0804005、0907126、0708018、0705099、1003056、0902023、0807038、0911034、0912056）由广东一方制药有限公司提供（见表1）。乙腈为色谱纯，液相用水为屈臣氏蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
表1 番泻叶配方颗粒测试样品批号
2、方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱：Waters Xbridge C18(4.6×250mm，5μm)柱；流动相：以乙腈为流动相A，以体积百分含量为1%冰醋酸水溶液为流动相B，按下表进行梯度洗脱：
检测波长：270nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃。；进样体积：5μl。
理论塔板数按参照峰（9号峰）计算，应不低于2000
2.3 供试品溶液的制备：取番泻叶配方颗粒约0.05g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，称定重量，超声处理（功率720W，频率50kHz）15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 指纹图谱的建立
测定10个批号番泻叶配方颗粒HPLC指纹图谱，并进行分析比较，得到由其共有特征峰构成的番泻叶配方颗粒HPLC的标准指纹图谱（如图1、2所示），其中以9号峰为参照峰，计算得出该标准指纹图谱具有的25个共有峰的相对保留时间tR分别为：0.370min、0.385min、0.432min、0.523min、0.552min、0.743min、0.783min、0.810min、1.000min、1.030min、1.052min、1.078min、1.296min、1.363min、1.385min、1.440min、1.898min、2.028min、2.101min、2.144min、2.426min、2.492min、2.560min、3.164min、3.421min。
将其导入药典委员会推荐的中药色谱指纹图谱相似度评价系统（A版），进行色谱峰匹配，以9号峰为参照确定25个共有峰为构成番泻叶配方颗粒指纹图谱的特征峰，样品共有峰的相对保留时间及相对峰面积分别列于表2、表3。10批番泻叶配方颗粒与标准指纹图谱相似度计算结果分别为：0.992、0.980、0.981、0.983、0.984、0.993、0.993、0.991、0.993、0.993。
表2 10批番泻叶配方颗粒共有峰的相对保留时间（单位：min）
表3 10批番泻叶配方颗粒共有峰的相对峰面积
2.5 方法学考察
2.5.1 重现性试验
取同一批号样品（0908049），分别精密称取6份，按照2.3项下方法制备供试品溶液，分别进样，以9号峰为参照峰，计算出1～25号共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值均小于3%，同时用相似度评价软件计算各色谱指纹图谱的相似度均大于0.99，表明方法重现性良好。
2.5.2 精密度试验
取重现性试验中同一供试品溶液，连续进样5次，以9号峰为参照峰，计算出1～25号共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值均小于3%，同时用相似度评价软件计算各色谱指纹图谱的相似度均大于0.99，表明仪器稳定，精密度良好。
2.5.3 稳定性试验
取重现性试验中同一供试品溶液，分别在0，4，8，12，24h进样，以9号峰为参照峰，计算出1～25号共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值均小于3%，同时用相似度评价软件计算各色谱指纹图谱的相似度均大于0.99，表明供试品溶液在24小时内稳定。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变动和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (3)
1.一种番泻叶配方颗粒HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）供试品溶液的配制：精密称取番泻叶配方颗粒0.05g，加入体积百分含量50%的甲醇25ml，称重，超声处理冷却后再次称重，用体积百分含量50%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液即得供试品溶液；
（2）高效液相色谱HPLC分析：精密吸取供试品溶液5μl进样，色谱条件如下：色谱柱为Waters Xbridge C18柱，填料粒径5μm，柱长250mm，柱内径4.6mm；流动相：乙腈为流动相A，体积百分含量为1%的冰醋酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：从0-30min，流动相A的体积百分含量由10%提高至20%，流动相B的体积百分含量由90%降低至80%；从30-40min，流动相A的体积百分含量由20%提高至30%，流动相B的体积百分含量由80%降低至70%;从40-50min，流动相A的体积百分含量为30%，流动相B的体积百分含量为70%;从50-55min，流动相A的体积百分含量由30%提高至35%，流动相B的体积百分含量由70%降低至65%;检测波长：270nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；
（3）测定10批番泻叶配方颗粒样品并进行分析比较，得到由其共有特征峰构成的番泻叶配方颗粒HPLC的标准指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的番泻叶配方颗粒HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述番泻叶配方颗粒HPLC的标准指纹图谱具有的25个共有峰的相对保留时间tR分别为：0.370min、0.385min、0.432min、0.523min、0.552min、0.743min、0.783min、0.810min、1.000min、1.030min、1.052min、1.078min、1.296min、1.363min、1.385min、1.440min、1.898min、2.028min、2.101min、2.144min、2.426min、2.492min、2.560min、3.164min、3.421min。
3.权利要求1或2所述的番泻叶配方颗粒HPLC指纹图谱的构建方法得到的番泻叶配方颗粒HPLC的标准指纹图谱。
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