CN102784107B - 一种吉西他滨或其盐脂质体及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种吉西他滨或其盐纳脂质体及其制备方法和用途，所述脂质体包括吉西他滨或其盐、注射用油、磷脂和胆固醇，所述吉西他滨或其盐、注射用油、磷脂和胆固醇的重量比为1∶1-20∶50-70∶5-30。该注射液包封率、稳定性更好，副作用更低。

Description

一种吉西他滨或其盐脂质体及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种吉西他滨或其盐新型制剂及其制备方法，具体来讲是涉及吉西他滨或其盐的脂质体及其制备方法和用途。 

背景技术

吉西他滨是一种破坏细胞复制的二氟核苷类抗代谢物抗癌药，是去氧胞苷的水溶性类似物，对核糖核苷酸还原酶是一种抑制性的酶作用物的替代物，这种酶在DNA合成和修复过程中，对所需要的脱氧核苷酸的生成是至关重要的。具有抗瘤谱广、作用机制独特、与其他化疗药物无交叉耐药且毒性反应无叠加等特点。 

吉西他滨作为一种前药在细胞内是脱氧胸苷激酶磷酸化的良好底物，在酶的作用下转化成下列代谢物：吉西他滨一磷酸盐(dFdCMP)、吉西他滨二磷酸盐(dFdCDP)和吉西他滨三磷酸盐(dFdCTP)其中dFdCDP和dFdCTP为活性产物。dFdCDP抑制核糖核苷酸还原酶，从而减少了DNA合成的修复所需的脱氧核苷酸的量(尤其是dCTP)，低水平的dCTP逆转了脱氧苷激酶正常的负反馈抑制，导致dFdCTP更多的积聚。同时dFdCDP抑制了dCTP诱导的脱氧胞氨酶对dFdCMP的脱氨作用，且dFdCTP直接抑制脱氧胞苷脱酶，从而使更多的dFdCMP转化成活性代谢物dFdCMP的脱氨作用，且dFdCTP直接抑制脱氧胞苷脱氨酶，从而使更多的dFdCMP转化成活性代谢物dFdCDP，dFd-CTP而dFdCTP则与dCTP竞争结合进入DNA链，插入至DNA链中脱氧胞苷的位点，并允许鸟苷与其配对，吉西他滨分子就被此鸟苷“掩蔽”使其免受核糖核酸外切酶的移除修复，然后DNA链合成停止，进而DNA断裂、细胞死亡。 

现已证实，吉西他滨对多种实体瘤治疗效果显著，尤其是对非小细胞肺癌、胰腺癌和乳腺癌，单一用药或联合其它抗癌药物都取得很高的疗效。吉西他滨在细胞内的半衰期较短(介于32～94min)，必须 大剂量(推荐剂量为1000mg/m2)、持续静脉给药来维持其有效的药用浓度和对癌细胞的毒性，但这种毒性同时对正常组织也起作用，这种剂量限制性毒性影响临床疗效。此外，吉西他滨缺乏组织特异性，全身毒副作用大；体内代谢迅速，血浆半衰期短；肿瘤耐药性等缺点。 

因此，寻找一种能够使药物靶向性更强，毒副作用更小的给药方法是当前研究的重点与难点。含有有效药物的载药纳米粒子是一种新型的缓释系统，可改变常规的给药方式，有极广阔的前景，是近年来医药学领域的研究热点，纳米药在进入体内后，药物在靶区内缓慢释放，以减轻药物的不良反应。 

黄乐松，王春霞，陈志良等“吉西他滨聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒在小鼠脑内的靶向分布”(中国医院药学杂志，2008，28(16)：1332)，及黄乐松，王春霞，陈志良等“吉西他滨聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒对小鼠脑移植胶质瘤的影响研究”(中国药房，2009，20(19)：1457)中介绍了一种吉西他滨的纳米粒及其对动物的影响。黄君勤，孔俐文“盐酸吉西他滨脂质体的制备及含量和包封率的测定学性质”(中国抗生素杂志，2010，35(1)：30)介绍了一种吉西他滨脂质体的制备和含量测定方法。CN101444485B公开了一种吉西他滨脂质体，该脂质体包括吉西他滨、磷脂、胆固醇，但该脂质体的包封率及分散性均表现不佳，对药物的稳定性及生物利用度均有不利影响。CN101926779A公开了一种吉西他滨固体脂质纳米粒及其制备方法，该制剂仍存在药物包封率不高，且稳定性不佳的问题，储藏3个月左右药品即发生部分降解。虽然部分药物的脂质体或纳米药的研究已经获得较大进展甚至在临床中得到了应用。但由于药物理化性质及药理作用的差别，吉西他滨领域应用脂质体或纳米药的技术仍未获得突破。 

从目前研究的成果中来看，现有方法制备的吉西他滨脂质体或纳米微球存在稳定性差、水溶液中易发生聚集、整体溶蚀或表面降解等问题，无法在临床中得到实际应用。 

发明内容

本发明的目的在于解决上述技术问题，提供一种能够提高药物的包封率和稳定性、减少吉西他滨或其盐在临床应用中的副作用，且适 于临床广泛应用的吉西他滨或其盐纳米乳剂注射液。 

本发明的目的在于提供一种吉西他滨或其盐的脂质体，包括吉西他滨或其盐、注射用油、磷脂和胆固醇，其特征在于，所述吉西他滨或其盐、注射用油、磷脂和胆固醇的重量比为1∶1-20∶50-70∶5-30。 

所述吉西他滨或其盐的平均粒径为10-200nm。 

优选的，所述吉西他滨或其盐、注射用油、磷脂和胆固醇的重量比为1∶10-20∶60-70∶5-10，所述吉西他滨或其盐的平均粒径为50-100nm。 

所述注射用油是指可药用的选自矿物油、植物油、动物油或合成油中的一种或几种；所述植物油选自大豆油、花生油、玉米油、芝麻油、红花油、蓖麻油、棕榈油、棉籽油、椰子油、中链脂肪酸甘油三脂中的一种或多种，优选大豆油、花生油、芝麻油或中链脂肪酸甘油三脂中的一种或多种；所述动物油选自鱼油、鲸蜡油或其混合物。 

所述磷脂选自卵磷脂、豆磷脂或其混合物，优选卵磷脂或豆磷脂。 

任选的，本发明的脂质体可以经过冻干工艺被制备成固体冻干制剂，因此，任选的，本发明的脂质体中还可以包括冻干保护剂。 

所述冻干保护剂选自甘露醇、聚乙二醇、蔗糖、乳糖、麦芽糖或白蛋白中的一种或多种，优选甘露醇、乳糖或麦芽糖中的一种或多种。 

所述冻干保护剂占所述脂质体重量的1％-10％，优选1％-5％。 

优选的，所述吉西他滨或其盐选自盐酸吉西他滨。 

本发明的另一目的还在于，提供一种制备所述吉西他滨或其盐脂质体的方法，包括如下步骤： 

a)在惰性气体保护下，将所述吉西他滨或其盐与所述注射用油混合后高速搅拌，转移到高压匀质机中继续匀化得到吉西他滨或其盐的纳米级油溶液； 

b)制备磷脂与胆固醇的空白脂质体； 

c)将所述吉西他滨或其盐的纳米级油溶液与所述空白脂质体混合均匀即得吉西他滨或其盐脂质体； 

d)任选地，还包括冻干工艺，最终制得吉西他滨或其盐脂质体的固体冻干制剂。 

本发明的另一目的还在于，提供一种所述的吉西他滨或其盐脂质体用于制备抗肿瘤药物的用途。尤其是可以应用于制备治疗晚期胰腺 癌、中、晚期非小细胞肺癌、晚期复发乳腺癌、难治复发卵巢癌等疾病药物。 

上述制剂开辟了吉西他滨或其盐给药的新途径，通过处方研究，确立了稳定的制剂处方，提高了药物的包封率和稳定性，降低了药物在使用中的毒副作用，减轻了患者的用药痛苦。 

具体实施方式

为了更具体地描述该发明，下面将结合具体实施例来进一步说明该发明，但本发明的内容并不局限于具体实施例。 

实施例1 

制备方法： 

步骤1、盐酸吉西他滨油溶液的制备。在惰性气体保护下，将盐酸吉西他滨10g加入到注射用大豆油150g中，在40℃恒温水浴中高速搅拌20min，将混合溶液转移到高压匀质机中匀化15min，至平均粒径在100nm以下。 

步骤2、空白脂质体的制备。称取大豆磷脂600g与胆固醇100g溶于适量乙醚当中，搅拌下将适量浓度为200mmol/L的硫酸铵溶液加入上述脂质溶液中，在搅拌状态下水浴超声，直至形成稳定的W/O型乳剂后转入圆底烧瓶内，50℃减压旋转蒸发除去部分乙醚，达到胶态后，另加入适量浓度为200mmol/L的硫酸铵溶液，50℃减压旋转蒸发除尽乙醚。 

步骤3、盐酸吉西他滨脂质体的制备。将步骤1所制得的盐酸吉西他滨油溶液与步骤2所得的空白脂质体在搅拌状态下混合，超声，得盐酸吉西他滨脂质体。 

实施例2 

处方组成及各组分含量、制备方法与实施例一相同，不同点在于，盐酸吉西他滨油溶液的制备过程中，在40℃恒温水浴中高速搅拌10min，将混合溶液转移到高压匀质机中匀化15min，至平均粒径在120nm以下。 

实施例3 

处方组成及各组分含量、制备方法与实施例一相同，不同点在于，盐酸吉西他滨油溶液的制备过程中，在40℃恒温水浴中高速搅拌45min，将混合溶液转移到高压匀质机中匀化20min，至平均粒径在50nm以下。 

实施例4 

处方组成及各组分含量、制备方法与实施例一相同，不同点在于，盐酸吉西他滨油溶液的制备过程中，在40℃恒温水浴中高速搅拌50min，将混合溶液转移到高压匀质机中匀化30min，至平均粒径在20nm以下。 

实施例5 

制备方法与实施例一相同，不同点在于，将大豆油替换为花生油，其余组分及用量与实施例一相同。 

实施例6 

制备方法与实施例一相同，不同点在于，将大豆油替换为芝麻油，其余组分及用量与实施例一相同。 

实施例7 

制备方法：同实施例一，不同点在于，处方量不同。 

实施例8 

制备方法：同实施例一，不同点在于，处方量不同。 

实施例9 

制备方法：同实施例一，不同点在于，处方量不同。 

实施例10 

制备方法：同实施例一，不同点在于，处方量不同。 

实施例11 

制备方法：同实施例一，不同点在于，在步骤1盐酸吉西他滨油溶液制备过程中还加入了40g甘露醇，此外，还包括了冻干步骤，将最后所获得的盐酸吉西他滨脂质体经过常规冷冻干燥过程，制得盐酸吉西他滨脂质体的冻干粉针。 

实验例1：包封率的测定 

采用透析法测定盐酸吉西他滨脂质体的包封率。取盐酸吉西他滨脂质体1ml置于已处理的透析袋中，将透析袋浸入浓度为200mmol/L的硫酸铵透析液100ml中，置于磁力搅拌器上搅拌，定时更换透析液，12小时后将透析袋中内容物取出置于10ml量瓶中，加入5%乳化剂OP的乙醇溶液1ml破乳，用水定容至刻度。分别取上述溶液各20μl，进样分析，计算出盐酸吉西他滨脂质体中包裹吉西他滨的量W_包和W_总，根据公式包封率=（W_包/W_总）*100%计算盐酸吉西他滨脂质体的包封率，计算结果如下表所示： 

结论，从实验结果可以看出，本发明的盐酸吉西他滨脂质体包封率效果表现优异，适合于临床应用。 

Claims (7)

1.一种吉西他滨或其盐脂质体，包括吉西他滨或其盐、注射用油、磷脂和胆固醇，其特征在于，所述吉西他滨或其盐、注射用油、磷脂和胆固醇的重量比为1:10-20:60-70:5-10，其中所述吉西他滨或其盐与注射用油重量比为1:15，所述磷脂与胆固醇重量比为6:1，所述吉西他滨或其盐的平均粒径为50-100nm，所述吉西他滨或其盐是盐酸吉西他滨；所述注射用油选自大豆油；所述磷脂选自大豆磷脂。

2.根据权利要求1所述的吉西他滨或其盐脂质体，其特征在于，还包括冻干保护剂。

3.根据权利要求2所述的吉西他滨或其盐脂质体，其特征在于，所述冻干保护剂选自甘露醇、聚乙二醇、蔗糖、乳糖、麦芽糖或白蛋白中的一种或多种。

4.根据权利要求2所述的吉西他滨或其盐脂质体，其特征在于，所述冻干保护剂选自甘露醇、乳糖或麦芽糖中的一种或多种。

5.根据权利要求3所述的吉西他滨或其盐脂质体，其特征在于，所述冻干保护剂占所述脂质体重量的1％-10％。

6.根据权利要求3所述的吉西他滨或其盐脂质体，其特征在于，所述冻干保护剂占所述脂质体重量的1％-5％。

7.一种制备权利要求1-6任意一项所述吉西他滨或其盐脂质体的方法，包括如下步骤：

a)在惰性气体保护下，将所述吉西他滨或其盐与所述注射用油混合后高速搅拌，转移到高压匀质机中继续匀化得到吉西他滨或其盐的纳米级油溶液；

b)制备磷脂与胆固醇的空白脂质体；

c)将所述吉西他滨或其盐的纳米级油溶液与所述空白脂质体混合均匀即得吉西他滨或其盐脂质体；

d)任选地，还包括冻干工艺，最终制得吉西他滨或其盐脂质体的固体冻干制剂。