CN102727894A - 一种治疗糖尿病及其并发症的药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗或预防糖尿病或其并发症的药物组合物及其用途，属于医药领域。本发明药物组合物以胰岛素增敏剂和溴隐亭或其可药用盐为药物活性成分，在用于治疗或预防糖尿病或其并发症时，药物作用方式互补，在降糖方面体现出显著的协同作用，且不良反应低，价格低廉，有着很好的应用前景。

Description

一种治疗糖尿病及其并发症的药物组合物及其应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种治疗糖尿病及其并发症的药物组合物及其用途，特别涉及含有甲磺酸溴隐亭或其可药用盐和胰岛素增敏剂的药物组合物及其制备治疗糖尿病及其并发症的药物中的用途。

背景技术

糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一组由环境和遗传因素共同作用引起的综合征，其基本病理特点为胰岛素分泌绝对或相对不足，或外周组织对胰岛素不敏感，引起以糖代谢紊乱为主，包括脂肪、蛋白质代谢紊乱的一种全身性疾病。糖尿病控制与并发症的临床试验(DCCT)、英国前瞻性糖尿病研究(UKPDS)等多项循证医学研究已使人们对强化血糖控制的意义达成共识，血糖达标不仅可以预防或延缓糖尿病慢性并发症的发生，提高患者的生活质量，而且会大大降低糖尿病相关的医疗费用。然而现实中糖尿病患者的血糖达标率较低。据一项统计显示，我国接受治疗的糖尿病患者有2/3未达到治疗目标。随着2型糖尿病病程的延长，很多患者单纯依靠口服降糖药已经无法达到强化治疗的目标，此时胰岛素治疗就成为血糖达标的重要方法。

但是临床治疗中发现，胰岛素注射本身也存在如下问题：(1)只能降低注射期间的血糖，不能完全按血糖变化曲线控制血糖；(2)容易产生低血糖；(3)胰岛素的吸收稳定性差，吸收差异达52％；(4)不能有效控制并发症。

格列酮类药物(TZDs)是一类新型的胰岛素增敏剂，通过激活过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR s)γ而显著改善2型糖尿病患者的胰岛素抵抗状态，降低血糖，并且可通过活化PPARγ，下调TGF-β1，显著减少糖尿病患者尿微量白蛋白，从而延缓肾脏损伤。TZD s的肾保护作用可以独立于胰岛素增敏和糖脂代谢的调节而直接发挥，如抑制系膜增生、抑制炎症损害等。TZD s可能通过抑制ox-LDL的受体Lox-1的表达及由其引起的氧化应激，从而减轻ox-LDL对肾脏的损伤。其中吡格列酮(pioglitazone)是格列酮类最畅销的药物。

吡格列酮是噻唑烷二酮类抗糖尿病药物，属胰岛素增敏剂，作用机制与胰岛素的存在有关，可减少外周组织和肝脏的胰岛素抵抗，增加依赖胰岛素的葡萄糖的处理，并减少肝糖的输出。临床研究表明，吡格列酮可改善胰岛素抵抗患者的胰岛素敏感性，提高胰岛素对细胞的反应性，并改善体内葡萄糖平衡障碍。作用至少可持续1年，在临床对照试验中，吡格列酮与磺酰脲、二甲双胍或胰岛素合用，能提高疗效。吡格列酮的临床试验还选择了脂类异常患者，患者经吡格列酮治疗，可降低三酰甘油水平，增加HDL-C，但LDL及TC则无一致性的改变。

罗格列酮属噻唑烷二酮类抗糖尿病药，通过提高胰岛素的敏感性而有效地控制血糖。罗格列酮为过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPAR-γ)的高选择性、强效激动剂。在临床研究中，空腹血糖(FPG)和HbA1c的检测结果表明，罗格列酮可改善血糖控制情况，同时伴有血胰岛素和C肽水平降低，也可使餐后血糖和胰岛素水平下降。罗格列酮对血糖控制的改善作用较持久，可维持达52周。罗格列酮的绝对生物利用度很高，高达99％。

溴隐亭系麦角生物碱、选择性的液动多巴胺受体，临床上常用来治疗震颤麻痹，也可作为催乳激素抑制剂用于预防和制止生理性泌乳及伴随的闭经和不排卵。2009年5月6日，美国FDA批准溴隐亭速释片用于治疗II型糖尿病。研究证实溴隐亭速释片单一治疗或辅助磺酰脲、二甲双胍加磺酰脲治疗，均可改善对广大糖尿病患者的血糖控制，且不增加心血管疾病危险，为糖尿病患者提供了一条崭新的治疗途径。

临床前研究表明，增加多巴胺能活性可改善糖尿病症状，白日增加多巴胺能活性也是重要的。对糖尿病动物研究显示，白天的特定时间增加多巴胺能活性在生理学上是改善糖尿病代谢障碍最有效的“重新设定”生物时钟的有效手段。溴隐亭速释片一日1次早上用药，口服后不久可产生单一简短脉冲式多巴胺激动活性。溴隐亭上午改善膳食后的血糖而不增加血浆胰岛素浓度，在药物已基本从血液循环中清除后的许多小时还显示对2型糖尿病餐后(如午餐和晚餐)血糖控制的有效作用。

溴隐亭速释片代表了治疗2型糖尿病的新途径。对糖尿病患者来说是首个靶向人体多巴胺(神经系统内神经元或神经细胞的化学递质)活性的药物。多巴胺激动剂溴隐亭增加多巴胺活性。然而，溴隐亭速释片在人体内改善血糖控制的特异机制尚未清晰，溴隐亭治疗糖尿病的研发是基于临床前研究显示在代谢疾病状态时大脑多巴胺活性低，在2型糖尿病患者体内发现这些因素主要是诸如胰岛素抵抗性(人体丧失胰岛素降血糖作用的能力)等多种代谢功能障碍。而且，临床前以多巴胺激动剂溴隐亭治疗糖尿病动物显示，溴隐亭速释片作用于中枢神经系统，启动重新设定和改善对外周代谢的控制。

公开号为CN 101204394A的中国发明专利申请公开了一种以盐酸吡格列酮和瑞格列奈为药物活性成分的药物组合物及其制备方法，并公开了其用于治疗II型糖尿病的用途。公开号为CN 101632673A的中国发明专利申请公开了一种包含氯沙坦、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物及其用于制备治疗代谢综合症的药物中的用途。公开号为CN 101884643A的中国发明专利申请公开了含有吡格列酮和肝素或低分子肝素或其可药用盐的药物组合物在制备治疗或预防脂肪肝药物的用途。王丽红在《吡格列酮和二甲双胍治疗2型糖尿病的疗效观察》一文中公开了吡格列酮、二甲双胍以及两种药物联合治疗2型糖尿病的疗效，实验结果显示二甲双胍和吡格列酮在治疗糖尿病方面有显著的相加作用。郑立军在《胰岛素联合吡格列酮及二甲双胍治疗2型糖尿病临床观察》中发现2型糖尿病患者单纯应用胰岛素控制血糖效果不佳时，加用胰岛素增敏剂吡格列酮及二甲双胍后疗效满意，且无不良反应。

经过现有专利和文献检索，尚未发现关于胰岛素增敏剂特别是吡格列酮及其盐与溴隐亭及其盐联合应用及该药物组合物联合用于糖尿病及其并发症的治疗的报道。

发明内容

现有的糖尿病患者多采用补充胰岛素来增加体内胰岛素的含量，但长期服用又会导致胰岛素抵抗，而单独使用胰岛素增敏剂如吡格列酮则会造成体液潴留，易造成水肿和体重增加，用药的不安全性增加。而现有的其他糖尿病治疗药物控制血糖效果不佳。为了克服上述现有技术的不足，本发明提供一种药物组合物，该药物组合物在用于糖尿病的治疗时，降糖效果明显，不良效果低，用药安全，为糖尿病及其并发症的治疗提供一个新的用药选择。

在人类的疾病中，由一种慢性病引发出多种疾病的，糖尿病当属前首。临床上常见的并给患者身心造成巨大痛苦的慢性并发症有糖尿病心脑血管病及糖尿病肾病等。糖尿病人常常伴有高血脂、高血压、血管粥样硬化，极易患心脑血管疾病。本发明的药效实施例13证明了吡格列酮和溴隐亭组成的药物复方，不仅可以在降低血糖方面存在显著协同作用，而且在降低尿微量蛋白含量，改善肾指数以及降低糖尿病引发的高血压方面也存在明显的协同作用，有效降低了糖尿病并发症的发生率。本发明的药效实施例14证明了罗格列酮和溴隐亭组成的药物复方，不仅可以在降低血糖方面存在显著协同作用，而且在降低尿微量蛋白含量，改善肾指数以及降低糖尿病引发的高血压方面也存在明显的协同作用，有效降低了糖尿病并发症的发生率。

本发明所述的药物组合物由以下药物活性成分组成：

1)胰岛素增敏剂

2)溴隐亭或其可药用盐

上述药物组合物中胰岛素增敏剂以游离酸计，溴隐亭或其可药用盐以游离碱计，药物组合物中，溴隐亭或其可药用盐与胰岛素增敏剂的重量比为1∶0.1～500，优选为1∶0.25～200。

上述药物组合物中，胰岛素增敏剂可选自吡格列酮或其可药用盐、罗格列酮或其可药用盐，或者两者的组合。其中吡格列酮的可药用盐、罗格列酮的可药用盐可分别选自其盐酸盐、马来酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、氢溴酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、苯磺酸盐、枸橼酸盐或甲磺酸盐；优选地，吡格列酮为其盐酸盐，罗格列酮为其马来酸盐。溴隐亭的可药用盐选自其盐酸盐、马来酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、氢溴酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、苯磺酸盐、枸橼酸盐或甲磺酸盐，优选为甲磺酸溴隐亭。

在本发明的一个具体实施方式中，药物组合物含有如下药物活性成分

1)吡格列酮或其可药用盐

2)溴隐亭或其可药用盐

上述的药物组合物，吡格列酮或其可药用盐以游离酸吡格列酮计，溴隐亭或其可药用盐以游离碱溴隐亭计，其特征在于药物组合物中溴隐亭或其可药用盐与吡格列酮的重量比为1∶1～200，进一步优选为1∶3～55。

在上述实施方式的优选药物组合物中，药物组合物含有如下药物活性成分：

1)盐酸吡格列酮

2)甲磺酸溴隐亭

在本发明的另一个具体实施方式中，所述药物组合物含有如下活性成分：

1)罗格列酮或其可药用盐；和

2)溴隐亭或其可药用盐。

上述的药物组合物，罗格列酮或其可药用盐以游离酸罗格列酮计，溴隐亭或其可药用盐以游离碱溴隐亭计，其特征在于药物组合物中罗格列酮与溴隐亭的重量比为1∶0.25～40，进一步优选为1∶0.8～10。

上述实施方式的优选的药物组合物中，药物组合物含有如下活性成分：

1)马来酸罗格列酮；和

2)甲磺酸溴隐亭。

以上所述含有胰岛素增敏剂和溴隐亭或其可药用盐的药物组合物中，发明人通过实验将其制备成了比较稳定的片剂、胶囊剂和颗粒剂，其中片剂含有两种以上如下辅料：淀粉、糊精、低取代羟丙基纤维素、硬脂酸镁、微晶纤维素、羟丙基纤维素、淀粉浆乳糖、甘露醇、微粉硅胶、交联羧甲基纤维素和交联聚乙烯吡咯烷酮。

胶囊剂或颗粒剂含有两种以上如下辅料：可压性淀粉、乳糖、低取代羟丙基纤维素、微晶纤维素和微粉硅胶。

优选地，胰岛素增敏剂按游离酸计，溴隐亭或其可药用盐按游离碱计，上述所述片剂、颗粒剂或胶囊剂中，每一制剂单位中含有胰岛素增敏剂的有效量为2-80mg，含有溴隐亭或其可药用盐的有效量为0.4-8mg。

本发明还公开了含有胰岛素增敏剂和溴隐亭或其可药用盐在制备治疗或预防糖尿病及其并发症的药物中的用途。用于治疗或预防糖尿病或其并发症时，本发明药物组合物可制备成合适的药物剂型，如片剂、胶囊剂或颗粒剂，此时，胰岛素增敏剂的给药剂量为0.033mg/kg.d～1.33mg/kg.d，优选为0.066mg/kg.d～0.9mg/kg.d，溴隐亭或其可药用盐的给药剂量为0.0067mg/kg.d～0.133mg/kg.d，优选为0.0133mg/kg.d～0.08mg/kg.d。

本发明药物组合物用于糖尿病的治疗或预防时，优势体现在下列几个方面：

第一，本发明药效实施例13和药效实施例14表明无论是罗格列酮或其可药用盐与溴隐亭或其可药用盐组成的药物组合物，还是吡格列酮或其可药用盐与溴隐亭或其可药用盐组成的药物组合物，不仅在降低血糖方面存在显著的协同作用，而且在降低尿微量蛋白含量，改善肾指数以及降低糖尿病引发的高血压方面也存在明显的协同作用，有效降低了糖尿病并发症的发生率。

第二，两种药物的药理作用机制不同，在用于糖尿病的治疗或预防时，两种药物作用机制相互互补，使两种药物在广泛的剂量范围内能够协同互补，不但能够显著控制血糖水平，而且降糖平稳，降低了两种药物单药使用特别是胰岛素增敏剂药物单独使用的毒副作用。

第三，由于在组成固定复方时，各单药的剂量均有减少，因而药物副作用的发生率降低；关于治疗费用，由于所用药物剂量比单独使用时降低，且生产和包装成本降低，因此，治疗费用不仅不会增加，反而会有下降，使得治疗的效益/费用比有明显提高。因此患者的治疗依从性大大增加，生活质量也就明显改善。

具体实施例

我们在筛选实验中发现，本发明组合物中溴隐亭的药理活性与其所成的盐、酯或溶剂化物关系很小，其预防或治疗糖尿病或其并发症的活性的大小仅与溴隐亭游离碱的量有关。所以本发明中溴隐亭可以为任何一种可以药用的盐，即合适的溴隐亭生理可接受的盐，包括衍生自无机的和有机的酸所形成的盐，如其盐酸盐、硫酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、氢溴酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、苯磺酸盐、枸橼酸盐或甲磺酸盐等；同理，本发明组合物中吡格列酮、罗格列酮可以为任何一种可以药用的盐，如盐酸盐、硫酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、氢溴酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、苯磺酸盐、枸橼酸盐或甲磺酸盐等。

现通过如下实施例进一步说明本发明的组合物及其制备方法以及治疗效果，但本发明的保护范围并不限于实施例。

实施例1复方吡格列酮溴隐亭片剂

制备工艺：称取处方量的溴隐亭、吡格列酮、淀粉、糊精和低取代羟丙基纤维素混合均匀。另取适宜量的60％乙醇，加入于混合粉末中，混合均匀后制软材，通过16目筛制粒，60℃以下干燥。干燥完成后用18目筛进行整粒，筛出干粒中的细粉，与过筛的硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混和均匀，压片，即得。

实施例2复方吡格列酮溴隐亭片剂

制备工艺：称取处方量的溴隐亭、吡格列酮、微晶纤维素和羟丙基纤维素混合均匀。另取适宜量的8％淀粉浆溶液，加入混合粉末中，混合均匀后制软材，通过16目筛制粒，60℃以下干燥。干燥完成后用18目筛进行整粒，筛出干粒中的细粉，与过筛的硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混和均匀，压片，即得。

实施例3复方吡格列酮溴隐亭片剂

制备工艺：称取处方量的溴隐亭、吡格列酮、淀粉、糊精和低取代羟丙基纤维素混合均匀。另取适宜量的60％乙醇，加入于混合粉末中，混合均匀后制软材，通过16目筛制粒，60℃以下干燥。干燥完成后用18目筛进行整粒，筛出干粒中的细粉，与过筛的硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混和均匀，压片，即得。

实施例4复方吡格列酮溴隐亭片剂

制备工艺：称取处方量的溴隐亭、吡格列酮、淀粉、糊精和低取代羟丙基纤维素混合均匀。另取适宜量的60％乙醇，加入于混合粉末中，混合均匀后制软材，通过16目筛制粒，60℃以下干燥。干燥完成后用18目筛进行整粒，筛出干粒中的细粉，与过筛的硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混和均匀，压片，即得。

实施例5复方吡格列酮溴隐亭缓释片剂

制备工艺：将处方中的各辅料过100目筛，称取溴隐亭、吡格列酮与乳糖、甘露醇混合均匀后，再分别加入处方量的微粉硅胶、微晶纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮和交联羧甲基纤维素钠，混合均匀，加入60％乙醇溶液制软材，18目筛制颗粒，湿颗粒于60℃干燥，16目筛整粒，加入硬脂酸镁混合均匀，压片，即得。

实施例6复方吡格列酮溴隐亭缓释胶囊剂

制备工艺：将处方中的各辅料过100目筛，称取溴隐亭和吡格列酮与可压性淀粉、乳糖和低取代羟丙基纤维素混合均匀后，加入60％乙醇溶液制软材，18目筛制颗粒，于60℃干燥，16目筛整粒，装填胶囊，即得。

实施例7复方罗格列酮溴隐亭胶囊剂

制备工艺：将处方中的各辅料过100目筛，称取溴隐亭、罗格列酮与可压性淀粉、乳糖、低取代羟丙基纤维素混合均匀后，加入60％乙醇溶液制软材，18目筛制颗粒，于60℃干燥，16目筛整粒，装填胶囊，即得。

实施例8复方罗格列酮溴隐亭胶囊剂

制备工艺：将处方中的各辅料过100目筛，称取溴隐亭、罗格列酮与可压性淀粉、乳糖、低取代羟丙基纤维素混合均匀后，加入60％乙醇溶液制软材，18目筛制颗粒，于60℃干燥，16目筛整粒，装填胶囊，即得。

实施例9复方罗格列酮溴隐亭胶囊剂

制备工艺：将处方中的主药和辅料过100目筛，分别称取溴隐亭、罗格列酮与微晶纤维素、乳糖和微粉硅胶混合均匀后，装填胶囊，即得。

实施例10复方罗格列酮溴隐亭胶囊剂

制备工艺：将处方中的主药和辅料过100目筛，分别称取溴隐亭和罗格列酮与微晶纤维素、乳糖和微粉硅胶混合均匀后，装填胶囊，即得。

实施例11复方罗格列酮溴隐亭颗粒剂

制备工艺：将处方中的各辅料过100目筛，称取溴隐亭和罗格列酮与可溶性淀粉、乳糖和蔗糖混合均匀后，加入8％淀粉浆制软材，18目筛制粒，于60℃干燥，16目筛整粒，装袋，即得。

实施例12复方罗格列酮溴隐亭颗粒剂

制备工艺：将处方中的各辅料过100目筛，称取溴隐亭和罗格列酮与可溶性淀粉、乳糖和蔗糖混合均匀后，加入8％淀粉浆制软材，18目筛制粒，于60℃干燥，16目筛整粒，装袋，即得。

实例13吡格列酮溴隐亭复方对大鼠糖尿病及其并发症的影响

1大鼠糖尿病模型制备

SD大鼠，鲁南制药实验动物中心繁殖。周龄为9周～10周。雄性体重180-230g，雌性体重160-200g。大鼠高糖尿病模型采用高糖高脂饲料致糖尿病法。高糖高脂饲料配方如下：77.5％基础饲料，10％蔗糖，10％猪油，2％胆固醇和0.5％胆酸钠，确保各成分混合均匀。饲以此高糖高脂饲料一个月后，大鼠禁食14h，每只大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)50mg/kg(STZ溶于0.1mol/L PH4.2的枸橼酸缓冲液中)，注射后亦禁食数小时。次日出现多饮多尿、消瘦等糖尿病症状。72小时检查血糖≥12.0mmol/L为糖尿病大鼠造模成功，此模型具有中度高血糖、高血脂、高血压、血胰岛素不低、胰岛素抵抗等特点。

2分组与给药

将造模成功的大鼠按血糖水平均衡原则随机分为(1)模型对照组；(2)吡格列酮1mg/kg组；(3)吡格列酮10mg/kg组；(4)溴隐亭0.05mg/kg组；(5)溴隐亭1mg/kg组；(6)吡格列酮1mg/kg和溴隐亭0.05mg/kg组；(7)吡格列酮1mg/kg和溴隐亭1mg/kg组；(8)吡格列酮10mg/kg和溴隐亭0.05mg/kg组；(9)吡格列酮10mg/kg和溴隐亭1mg/kg组；每组10只，雄性5只，雌性5只。本试验采用1次/日给药方法，连续灌胃5周，模型对照组灌纯化水(3ml/kg)。

3检测指标

3.1血糖的测定。所有大鼠分别于治疗前和治疗后取尾静脉血(空腹12小时)检测空腹血糖(FBG)，进食后2h血糖(PBG)。将取出的血样放入蛋白沉淀剂中，室温放置7min后，离心5min(3000r/min)，取上清液，用葡萄糖氧化酶法测全血糖。

由表1的结果表明，吡格列酮组、复方组与模型组比较都有显著性差异。具体地说，与模型组比较，*p＜0.05，有显著性差异。与模型组比较，**p＜0.01，有极显著性差异。说明吡格列酮和溴隐亭的联合应用在影响大鼠血糖方面有很好的协同作用，尤其是，低剂量的吡格列酮与高剂量的溴隐亭联合应用，所表现出来的协同作用更强。

表1吡格列酮和溴隐亭复方对糖尿病大鼠血糖的影响

^*与模型组相比较，P＜0.05，^**与模型组相比较，P＜0.01。

3.2尿微量清蛋白含量及肾指数的测定

(1)尿微量清蛋白含量测定

试剂：1、10％(v/v)的冰醋酸溶液(PH2.8)。

2、0.303mol/L甘氨酸-冰醋酸缓冲液(PH3.0)：称取22.72g甘氨酸，用10％冰醋酸溶液稀释成1000ml，加NaN3100mg，室温密封可稳定1年。

3、溴酚蓝(1.924mmol/L)贮存液：精确称取257.36mgBPB，用无水乙醇溶至200ml，4℃冰箱可稳定1年。

4、溴酚蓝(0.231mmol/L)显色剂：取60mlBPB贮存液，加入2.5mlTriton X-100，用甘氨酸-冰醋酸缓冲液稀释至500ml，室温密封可保存1年。

标本的采集和检测：于第5周末将大鼠分别放于代谢笼中饲养，收集隔夜12小时尿，准确记录尿量。取4ml，叠氮钠处理后，离心(2000r/min)10min，取上清液置-20℃冰箱保存待测尿微量清蛋白。取相应浓度的尿微量清蛋白标准液400μL于对应的杯内，各加200μL显色剂，混匀(防止产生气泡)，用紫外分光光度计，于600nm下测定吸光度A。

(2)肾指数的测定

准确称取大鼠体重后，颈椎脱位法处死大鼠，打开腹腔，取出肾脏，称湿重。以两肾总湿重/体重得出大鼠肾指数值。

由表2结果表明，与模型组比较，*p＜0.05，有显著性差异；与模型组比较，**p＜0.01，有极显著性差异。说明吡格列酮和溴隐亭的联合应用在影响大鼠尿微量清蛋白和肾指数方面有很好的协同作用，尤其是，低剂量的吡格列酮与高剂量的溴隐亭联合应用，所表现出来的协同作用更强。

表2吡格列酮和溴隐亭复方对糖尿病大鼠尿微量清蛋白和肾指数的影响

^*与模型组相比较，P＜0.05，^**与模型组相比较，P＜0.01。

3.3复方对高血压模型大鼠血压的影响

从第一周末开始，每两周进行一次尾动脉收缩压测定。实验数据用Excel系统进行统计学分析。结果表明，各给药组与模型组均有显著性差异，说明吡格列酮和溴隐亭的联合应用在降低大鼠血压方面有很好的协同作用，尤其是，低剂量的吡格列酮与高剂量的溴隐亭联合应用，所表现出来的协同作用更强。

表3复方对大鼠血压的影响(kPa)

^*与模型组相比较，P＜0.05。

实施例14罗格列酮溴隐亭复方对大鼠糖尿病及其并发症的影响

1大鼠糖尿病模型制备

SD大鼠，鲁南制药实验动物中心繁殖。周龄为9周～10周。雄性体重180-230g，雌性体重160-200g。大鼠高糖尿病模型采用高糖高脂饲料致糖尿病法。高糖高脂饲料配方如下：77.5％基础饲料，10％蔗糖，10％猪油，2％胆固醇和0.5％胆酸钠，确保各成分混合均匀。饲以此高糖高脂饲料一个月后，大鼠禁食14h，每只大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)50mg/kg(STZ溶于0.1mol/L PH4.2的枸橼酸缓冲液中)，注射后亦禁食数小时。次日出现多饮多尿、消瘦等糖尿病症状。72小时检查血糖≥12.0mmol/L为糖尿病大鼠造模成功，此模型具有中度高血糖、高血脂、高血压、血胰岛素不低、胰岛素抵抗等特点。

2分组与给药

将造模成功的大鼠按血糖水平均衡原则随机分为：(1)模型对照组；(2)罗格列酮1mg/kg组；(3)罗格列酮3mg/kg组；(4)溴隐亭0.05mg/kg组；(5)溴隐亭1mg/kg组；(6)罗格列酮1mg/kg和溴隐亭0.05mg/kg组；(7)罗格列酮1mg/kg和溴隐亭1mg/kg组；(8)罗格列酮3mg/kg和溴隐亭0.05mg/kg组；(9)罗格列酮3mg/kg和溴隐亭1mg/kg组；每组10只，雄性5只，雌性5只。本试验采用1次/日给药方法，连续灌胃5周，模型对照组灌纯水(3ml/kg).

3检测指标

3.1血糖的测定。所有大鼠分别于治疗前和治疗后取尾静脉血(空腹12小时)检测空腹血糖(FBG)，进食后2h血糖(PBG)。将取出的血样放入蛋白沉淀剂中，室温放置7min后，离心5min(3000r/min)，取上清液，用葡萄糖氧化酶法测全血糖。

由表1的结果表明，无论是罗格列酮组、溴隐亭组，还是复方组，它们与模型组比较都有显著性差异。具体地说，与模型组比较，*p＜0.05，有显著性差异。与模型组比较，**p＜0.01，有极显著性差异。说明罗格列酮和溴隐亭的联合应用在影响大鼠血糖方面有很好的协同作用，尤其是，低剂量的罗格列酮与高剂量的溴隐亭联合应用，所表现出来的协同作用更强。

表4罗格列酮和溴隐亭复方对糖尿病大鼠血糖的影响

^*与模型组相比较，P＜0.05，^**与模型组相比较，P＜0.01。

3.2尿微量清蛋白含量和肾指数测定

(1)尿微量清蛋白含量测定

试剂：1、10％(v/v)的冰醋酸溶液(PH2.8)。

2、0.303mol/L甘氨酸-冰醋酸缓冲液(PH3.0)：称取22.72g甘氨酸，用10％冰醋酸溶液稀释成1000ml，加NaN3100mg，室温密封可稳定1年。

3、溴酚蓝(1.924mmol/L)贮存液：精确称取257.36mgBPB，用无水乙醇溶至200ml，4℃冰箱可稳定1年。

4、溴酚蓝(0.231mmol/L)显色剂：取60mlBPB贮存液，加入2.5mlTriton X-100，用甘氨酸-冰醋酸缓冲液稀释至500ml，室温密封可保存1年。

标本的采集和检测：于第5周末将大鼠分别放于代谢笼中饲养，收集隔夜12小时尿，准确记录尿量。取4ml，叠氮钠处理后，离心(2000r/min)10min，取上清液置-20℃冰箱保存待测尿微量清蛋白。取相应浓度的尿微量清蛋白标准液400μL于对应的杯内，各加200μL显色剂，混匀(防止产生气泡)，用紫外分光光度计，于600nm下测定吸光度A。

(2)肾指数的测定

准确称取大鼠体重后，颈椎脱位法处死大鼠，打开腹腔，取出肾脏，称湿重。以两肾总湿重/体重得出大鼠肾指数值。

由表2结果表明，与模型组比较，*p＜0.05，有显著性差异；与模型组比较，**p＜0.01，有极显著性差异。说明罗格列酮和溴隐亭的联合应用在影响大鼠尿微量清蛋白和肾指数方面有很好的协同作用，尤其是，低剂量的罗格列酮与高剂量的溴隐亭联合应用，所表现出来的协同作用更强。

表5罗格列酮和溴隐亭复方对糖尿病大鼠尿微量清蛋白和肾指数的影响

^*与模型组相比较，P＜0.05，^**与模型组相比较，P＜0.01。

3.3复方对高血压模型大鼠血压的影响

从第一周末开始，每两周进行一次尾动脉收缩压测定。实验数据用Excel系统进行统计学分析。结果表明，各复方给药组与模型组均有显著性差异，说明吡格列酮和溴隐亭的联合应用在降低大鼠血压方面有很好的协同作用，尤其是，低剂量的罗格列酮与高剂量的溴隐亭联合应用，所表现出来的协同作用更强。

表6复方对大鼠血压的影响(kPa)

^*与模型组相比较，P＜0.05。

Claims (17)

1.一种治疗或预防糖尿病或其并发症的药物组合物，其特征在于含有如下药物活性成分：

1)胰岛素增敏剂；和

2)溴隐亭或其可药用盐；

所述溴隐亭的可药用盐为其盐酸盐、马来酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、氢溴酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、苯磺酸盐、枸橼酸盐或甲磺酸盐。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述溴隐亭的可药用盐为其甲磺酸盐。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述胰岛素增敏剂为吡格列酮或其可药用盐、罗格列酮或其可药用盐、或者两者任意比例的组合。

4.如权利要求3所述的药物组合物，其特征在于吡格列酮的可药用盐、罗格列酮的可药用盐选自其盐酸盐、马来酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、氢溴酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、苯磺酸盐、枸橼酸盐或甲磺酸盐。

5.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的溴隐亭或其可药用盐与胰岛素增敏剂的重量比为1∶0.1～500。

6.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于所述的溴隐亭或其可药用盐与胰岛素增敏剂的重量比为1∶0.25～200。

7.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于含有如下活性成分：

1)吡格列酮或其可药用盐；和

2)溴隐亭或其可药用盐。

8.如权利要求7所述的药物组合物，吡格列酮或其可药用盐以游离酸吡格列酮计，溴隐亭或其可药用盐以游离碱溴隐亭计，其特征在于药物组合物中溴隐亭与吡格列酮的重量比为1∶1～200。

9.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于药物组合物中溴隐亭与吡格列酮的重量比为1∶3～55。

10.如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于含有如下活性成分：

1)盐酸吡格列酮；和

2)甲磺酸溴隐亭。

11.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于含有如下活性成分：

1)罗格列酮或其可药用盐；和

2)溴隐亭或其可药用盐。

12.如权利要求11所述的药物组合物，罗格列酮或其可药用盐以游离酸罗格列酮计，溴隐亭或其可药用盐以游离碱溴隐亭计，其特征在于药物组合物中溴隐亭与罗格列酮的重量比为1∶0.25～40。

13.如权利要求12所述的药物组合物，其特征在于药物组合物中溴隐亭与罗格列酮的重量比为1∶0.8～10。

14.如权利要求11所述的药物组合物，其特征在于含有如下活性成分：

1)马来酸罗格列酮；和

2)甲磺酸溴隐亭。

15.如权利要求1-14所述的药物组合物，其特征在于药物组合物为片剂、胶囊剂或颗粒剂。

16.如权利要求15所述的药物组合物，其中胰岛素增敏剂以游离酸计，溴隐亭或其可药用盐以游离碱计，其特征在于每一制剂单位中含有胰岛素增敏剂的有效量为2～80mg，含有溴隐亭的有效量为0.4～8mg。

17.权利要求1-16所述药物组合物在制备治疗或预防糖尿病或其并发症药物中的应用。