CN103599540B - 含有格列奈类药物和b族维生素的药物组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种含有格列奈类降血糖药物(简称格列奈类)和B族维生素的药物组合物，由治疗有效量的格列奈类及其药用前体、活性代谢产物或盐类中的一种、治疗有效量的B族维生素的一种或几种、和药学上可接受的载体组成；其中，格列奈类主要包括瑞格列奈、那格列奈、米格列奈，含量为0.5～120mg，B族维生素的含量为0.01～50mg。本发明还涉及该组合物在制备用于治疗糖尿病的药物中的用途。由本发明提供的药物组合物制成的药物，在有效降血糖的基础上，具有更显著的预防或延缓糖尿病血管病变并发症的有益效果。此外，本发明还可使患者服药方便，增加依从性。

Description

含有格列奈类药物和B族维生素的药物组合物及其用途

技术领域

本发明涉及一种含有格列奈类促胰岛素分泌剂(简称格列奈类药物)和B族维生素的药物组合物，属于药学领域。

背景技术

糖尿病是一种常见的内分泌代谢性疾病，其特点是慢性高血糖伴随因胰岛素分泌不足和/或作用缺陷引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱。据流行病学调查，我国糖尿病患病率高达9.7％，估算全国成年糖尿病患者总数达9240万人【Yang W，etal.Prevalence ofdiabetes among men and women in China.N Engl J Med.2010；362：1090-1101】。另外，根据国际糖尿病联盟(IDF)统计，2010年全球糖尿病患者达2.85亿，预计到2030年全球将有近5亿人患糖尿病。因此，糖尿病已是一个严重的公共卫生问题，需要从临床医学、预防医学的不同角度探索解决的方法。

糖尿病随病程进展常发生血管并发症，包括大血管病变和微血管病变，导致心、脑、肾、眼等器官的慢性进行性损害，糖尿病的危害主要来自这些并发症，也是医疗费用增加的主要原因。据中华医学会糖尿病分会的报道，我国糖尿病血管并发症的患病率为：高血压31.9％、脑血管病12.2％、心血管病15.9％、下肢血管病5.0％、肾脏病(肾微血管病变)33.6％、视网膜病变24.3％，总患病率73.2％【中华医学会糖尿病分会慢性并发症调查组.全国住院糖尿病患者慢性并发症及其相关危险因素10年回顾性调查分析.中国糖尿病杂志，2003；11：232-237】。

根据我国糖尿病防治指南(2010年)，糖尿病的治疗目标是使血糖达到或接近正常水平，纠正代谢紊乱，消除糖尿病症状，防止或延缓并发症，降低病死率。治疗2型糖尿病的药物包括双胍类、磺脲类、噻唑烷二酮类、格列奈类、α-葡萄糖苷酶抑制剂以及二肽基肽酶-4抑制剂等。其中，格列奈类是较新的一类降糖药物，属于非磺脲类的促胰岛素分泌剂，国内已上市的有瑞格列奈(Repaglinide)、那格列奈(Nateglinide)和米格列奈(Mitiglinide)。格列奈类药物与胰岛β细胞膜上的特异性受体结合，促进与受体偶联的ATP敏感性钾通道关闭，抑制钾离子从β细胞外流，细胞膜去极化，钙通道开放，钙离子内流，促进胰岛素分泌，其作用快于磺酰脲类。格列奈类药物为进餐时服用的血糖调节药，最大的优点是可以模仿胰岛素的生理性分泌，降血糖作用较快，能有效控制餐后高血糖。但格列奈类药物也存在一些不足：与传统降糖药物相比，格列奈类药物的临床应用历史较短，在预防或延缓糖尿病并发症方面缺乏机制上的优势，也缺乏循证医学研究证据；格列奈类药物也有一些不良反应，常见的有低血糖和体重增加，较少见的还有免疫系统失调、高血糖等。

B族维生素包括维生素B₁、维生素B₂、维生素PP、维生素B₆、维生素B₁₂、叶酸、泛酸和生物素等，对机体新陈代谢、红细胞形成、保持神经系统和免疫系统功能具有重要作用。B族维生素属于水溶性维生素，经人体肠道吸收，由尿排出体外，在体内存留时间短暂，很少蓄积，所以必须经常从体外摄取以满足机体营养和代谢需要。B族维生素缺乏可导致诸多不良后果，包括肌无力、精神混乱、神经系统紊乱、消化障碍、皮肤皱裂、严重贫血和心脏损害等。其中，叶酸、维生素B₆、维生素B₁₂缺乏时影响人体内同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)的生化代谢，而目前认为Hcy是一种心血管危险因子，尤其是易对血管内皮产生损害。

糖尿病的血管病变是多因素长期作用的结果，不仅有慢性高血糖这一重要因素，还有其它复杂因素的参与。目前市场上抗糖尿病药物大多注重纠正糖尿病的血糖异常状态和代谢紊乱，而忽略了对引发糖尿病并发症(例如糖尿病血管病变)的复合危险因素的早期、同步干预。如前述，糖尿病治疗的重要目标之一即是预防或延缓各种并发症，从而降低病死率，所以需要对各种并存的损害因素或临床疾病进行处理。因此，如何进一步提高格列奈类降糖药物的临床应用价值、加强对糖尿病血管组织的保护或降低由糖尿病引发血管并发症的危险，无论从临床医学、抑或预防医学的角度来看，都是值得研究和需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的是克服格列奈类药物存在的不足，提供一种在预防或延缓糖尿病血管并发症方面优于格列奈类药物、而毒副作用不增加的药物组合物(复方药物及制剂)。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种药物组合物，包括

(1)药用剂量的格列奈类药物及其药用前体、活性代谢产物或其盐类中的一种；

(2)药用剂量的B族维生素的一种或几种；

(3)药剂学上可接受的载体。

上述的“药用剂量”是指具有协同、预防或治疗效应的药理作用的量。

所述的格列奈类药物选自瑞格列奈(Repaglinide)、那格列奈(Nateglinide)、米格列奈(Mitiglinide)的一种。

通过实验研究，上述格列奈类药物的含量分别为：瑞格列奈(0.5～4mg)、那格列奈(20～120mg)、米格列奈(5～30mg)，上述物质药用前体、活性代谢产物或盐类的含量与相应的上述物质含量等同。

所述的B族维生素选自维生素B₆、维生素B₁₂和叶酸类化合物的一种或几种。

所述维生素B₆包括吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺、磷酸吡哆醇、磷酸吡哆醛、磷酸吡哆胺及上述物质的衍生物和可在体内代谢和/或生成该类化合物的物质。

所述维生素B₁₂包括钴胺素、甲钴胺素、5’-脱氧腺苷钴胺素、羟钴胺素、氰钴胺素及上述物质的衍生物和可在体内代谢和/或生成该类化合物的物质。

所述叶酸类化合物包括叶酸、5-甲基四氢叶酸、甲酰四氢叶酸、亚叶酸、左亚叶酸钙、叶酸可药用盐、叶酸或叶酸可药用盐的活性代谢产物和可在体内代谢和/或生成叶酸的物质。

B族维生素在本发明中的治疗有效量分别为：0.1mg～5mg的叶酸类化合物，5～50mg的维生素B₆，0.01～1mg的维生素B₁₂；其更佳的治疗有效量分别为：0.4～1.6mg叶酸类化合物，10mg～40mg维生素B₆，0.05～0.5mg维生素B₁₂。

本发明优选由以下含量的组分作为活性成份的药物组合物：其中格列奈类药物选自瑞格列奈(0.5～2mg)、那格列奈(30～90mg)、米格列奈(5～20mg)，B族维生素选自叶酸类化合物(0.4～1.6mg)。

研究发现，B族维生素与格列奈类药物合用时，能协同增强后者的降血糖作用，并能协同加强对糖尿病引起血管损害的预防或缓解作用。因此，本发明提供了含有药用剂量的格列奈类药物、药用剂量的B族维生素及药剂学上可接受的载体的药物组合物在制备用于治疗糖尿病、预防及延缓糖尿病血管并发症及相关疾病的药物中的用途。

糖尿病引起的血管并发症包括但不限于动脉粥样硬化、冠心病、脑血管病、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病变、糖尿病足等。

根据本发明，药物组合物中的活性成分是组合物中的基本组分，其中一个活性成分来自于格列奈类药物中的一种，另一个活性成分为B族维生素的一种或多种，该药物组合物的剂型包括但不限于普通片剂、双层片剂、多层片剂、缓释片剂、单室控释片剂、双室控释片剂、微孔型控释片剂、舌下含片、口腔速崩片、分散片、肠溶片、颗粒剂、丸剂、肠溶胶囊、延迟释放片、定时/位释放片、普通胶囊、缓释胶囊、控释胶囊、含有微丸或小片的胶囊、含有微丸或小片的pH依赖型胶囊、口服液、膜剂或贴剂。特别指出的是，将含有格列奈类药物和B族维生素的一种或多种药物组合物制成片剂或胶囊。

该药物组合物中还含有药剂学可接受的载体，可制成普通口服制剂，包括普通片剂、普通胶囊、颗粒剂等，制成片剂时所述可药用载体包括有助于将活性化合物配制成药用制剂的赋形剂和辅药，如微晶纤维素、无机盐类、乳糖、氯化钠、柠檬酸和亚硫酸钠等的一种或几种物质的组合物，属于本领域常识。

本发明提供的药物组合物中的化合物在相同的制剂中可以同时施与患病个体，也可分别地相继施与个体。若是相继施与，则第二个活性成分施与的延迟不应当导致活性成分联合带来的有益效果的损失。若是同时施与患病个体，组合物中的化合物可以混合存在于同一个药物制剂形式中，也可以以同样的制剂形式分别独立存在。若是以同样的制剂形式分别独立存在，则药物组合物可以变通地以“组合药盒”形式存在。“组合药盒”是一种盒状容器，内置一种或多种剂量形式的药物组合及使用说明书，在本发明中优选格列奈类药物中的一种和B族维生素的一种或几种组成“药盒”。

本发明的另一个目的是提供含有药用剂量的格列奈类药物及其药用前体、活性代谢产物或其盐类中的一种、药用剂量的B族维生素的一种或多种和可药用载体的药物组合物在制备用于治疗糖尿病的药物中的用途。本发明提供的药物组合物因能够治疗糖尿病、防治和延缓糖尿病血管并发症，因而成为更适宜的抗糖尿病药物。其中，格列奈类药物选自瑞格列奈、那格列奈、米格列奈的一种，B族维生素选自维生素B₆、维生素B₁₂和叶酸类化合物中的一种或几种。

本发明的优点：本发明提供了含有药用剂量的格列奈类药物的一种、药用剂量的B族维生素的一种或几种和可药用载体的药物组合物。格列奈类药物和B族维生素的联合效果并不是各个活性物质的各自作用的简单相加，而是导致2型糖尿病患者的在显著改善高血糖的基础上减少血管并发症的发生。也就是说，格列奈类药物和B族维生素联合用药取得了协同治疗效果，因此是更适宜的抗糖尿病药物。

下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明，并非对本发明的限定，凡依照本发明内容进行的任何本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。

具体实施方式

实施例1.制备复方瑞格列奈/叶酸片(1000片量)

制备方法：取处方量叶酸、瑞格列奈按照等量递增法混合均匀，备用；称取处方量的微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素(L-HPC)、羧甲基淀粉钠，与原料药混合粉充分混匀，过80目筛，加入适量5％聚维酮95％乙醇溶液制成软材，20目筛制粒，50℃干燥约6h，20目筛整粒，控制颗粒的含水量为2-3％，将干燥后的颗粒与处方量的硬脂酸镁混合均匀，中间体进行检测，压制成1000片。制备过程中注意避光，制成的片剂需铝塑泡罩包装。制成的复方片剂中每片含瑞格列奈1mg、叶酸0.4mg。

实施例2.制备复方那格列奈/叶酸片(1000片量)

制备方法：取处方量叶酸、那格列奈按照等量递增法混合均匀，备用；称取处方量的微晶纤维素、乳糖、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠，与原料药混合粉充分混匀，过80目筛，加入适量10％聚乙烯吡咯烷酮溶液制成软材，20目筛制粒，50℃干燥约6h，20目筛整粒，控制颗粒的含水量为2-3％，将干燥后的颗粒与处方量的山嵛酸甘油酯和硬脂酸镁混合均匀，中间体进行检测，压制成1000片。制备过程中注意避光，制成的片剂需铝塑泡罩包装，避光保存。制成的复方片剂中每片含那格列奈60mg、叶酸0.4mg。

实施例3.制备复方米格列奈/5-甲基四氢叶酸片(1000片量)

制备方法：辅料为直压辅料，干燥备用。取处方量的5-甲基四氢叶酸及微晶纤维素按照等量递增法混合均匀，得到混粉中间体1；称取剩余处方量的微晶纤维素、乳糖、羧甲基淀粉钠，与米格列奈按等量递增法充分混匀，得到混粉中间体2；将混粉中间体1和混粉中间体2与处方量的硬脂酸镁按照等量递增法混合均匀，得最终混粉中间体，检测混粉中间体，压制成1000片。制备过程中注意避光，制成的片剂需铝塑泡罩包装，避光保存。制成的复方片剂中每片含米格列奈10mg、5-甲基四氢叶酸0.4mg。

实施例4.制备复方米格列奈/甲酰四氢叶酸/维生素B₆胶囊(1000粒量)

制备方法：取处方量甲酰四氢叶酸、维生素B₆、米格列奈按照等量递增法混合均匀，备用；再与微晶纤维素、羧甲基淀粉钠混合均匀后，过80目筛，加入5％聚维酮无水乙醇溶液适量，制软材，50℃干燥约6h过24目筛制颗粒，控制颗粒的含水量为2-3％，将干燥后的颗粒与处方量微粉硅胶、硬脂酸镁混合均匀，得到的颗粒中间体进行含量检测，检测合格后，装入空心胶囊即得。制备过程中注意避光，制成的胶囊需铝塑泡罩包装，避光保存。制成的胶囊中每粒含米格列奈10mg、甲酰四氢叶酸0.4mg、维生素B₆10mg。

实施例5.制备复方那格列奈/5-MTHF+维生素B₁₂双层片

配方：

那格列奈层颗粒的制备方法：将原辅料粉碎过80目筛，干燥备用。取90g那格列奈、122.0g维晶纤维素和18.0g羧甲基淀粉钠，按照等量递增法均匀混合，用5％聚维酮K29/30-95％乙醇溶液制成软材，20目筛制粒，50℃干燥约6h，20目筛整粒，控制颗粒的含水量为2-3％，得到那格列奈层颗粒A；

维生素层颗粒的制备方法：取0.4g5-MTHF、0.1g维生素B₁₂、220.0g微晶纤维素和25.0g低取代羟丙基纤维素，按照等量递增法均匀混合，用5％聚维酮K29/30-95％乙醇溶液制成软材，20目筛制粒，50^℃干燥约6h，20目筛整粒，控制颗粒的含水量为2-3％，得到维生素层颗粒B；

双层片的制备方法：将干燥后的颗粒A、B分别与硬脂酸镁混合均匀，半成品分别进行检测，测定含量后，分别装入料斗中，用双层片压片机压制成1000片。制备过程中注意避光，制成的片剂需铝塑泡罩包装，避光保存。制成的复方片剂中每片含90mg那格列奈、0.4mg的5-MTF、0.1mg维生素B₁₂。

实施例6.瑞格列奈叶酸组合物对糖尿病大鼠的降糖、血管保护作用

方法：(1)链脲佐菌素溶液：称取600mg链脲佐菌素(STZ)临用前溶于200ml柠檬酸溶液中，配成3mg/ml的溶液。(2)健康大鼠约60只，随机选取12只大鼠作为正常对照组，其余大鼠按30mg/kg单次腹腔注射STZ溶液，正常饮食，但饮水中含1％蛋氨酸(拟造成体内同型半胱氨酸升高)，2周后眶后采血测定空腹血糖(FPG)值，FPG值超过11.1mmol/L的大鼠为糖尿病大鼠，用于后续实验。(3)将糖尿病大鼠随机分为模型组、瑞格列奈组、瑞格列奈+叶酸组，每组12只，每日分别灌胃生理盐水、瑞格列奈(0.25mg/kg/d)、瑞格列奈+叶酸(0.25+0.08mg/kg/d)，另以正常大鼠作空白对照，给予等量生理盐水灌胃，各组均为每日2次灌药。连续给药6周后，各组大鼠眼眶采血测FPG、内皮素-1(ET-1)和同型半胱氨酸(Hcy)，统计学检验方法采用t检验。

结果：见表1。模型组大鼠FPG、Hcy水平显著高于正常对照组大鼠，表明模型组大鼠呈现高血糖、高Hcy状态，造模成功。给与大鼠药物治疗后，瑞格列奈、瑞格列奈叶酸组合物组大鼠FPG显著降低(均P＜0.01)，但瑞格列奈叶酸组合物对大鼠的降血糖作用优于瑞格列奈单用(P＜0.05)，提示叶酸有辅助降血糖作用；瑞格列奈叶酸组合物组大鼠Hcy显著降低，但瑞格列奈组没有降低，提示叶酸的显著降Hcy作用。血浆内皮素水平是反映糖尿病血管病变的指标之一，本实验发现，与模型组或瑞格列奈组比较，瑞格列奈叶酸组合物组大鼠血浆ET-1有显著降低，提示叶酸对血管内皮有保护作用。

表1瑞格列奈叶酸组合物对大鼠的作用(n＝12)

注：与正常组比较，*P＜0.01；与模型组比较，^#P＜0.05，^##P＜0.01；与瑞格列奈组比较，^ΔP＜0.05，^ΔΔP＜0.01。

实施例7.那格列奈叶酸组合物对糖尿病大鼠血管、肾的保护作用

方法：(1)动物造模及给药：雄性SD大鼠60只，体重200～230g，适应性饲养1周后随机抽取13只作为空白对照组，其余分别给予30mg/kg STZ单次腹腔注射，14d后大鼠尾静脉采血测定FPG水平，大于11.1mmoL/L确定为糖尿病造模成功，随机分为3组，即模型对照组、那格列奈组、那格列奈+叶酸组，每组13只，后两组分别给予那格列奈8.5mg/kg/d、那格列奈8.5mg/kg/d+叶酸0.04mg/kg/d，均为每日2次，空白组、模型组给予等量的生理盐水灌喂，各组用药或处理时间为8周。除正常对照组喂普通饲料外，其余各组均喂以高热量饲料。(2)标本采集、指标检测：8周后10％水合氯醛腹腔注射麻醉动物，腹主动脉取血测血糖、按试剂盒说明书测血清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、内皮素(ET)水平；代谢笼法接取24h尿液，测定24h尿蛋白量。各组结果及统计见表2、3。

结果：给与糖尿病大鼠药物治疗8周后，与模型组比较，那格列奈、那格列奈叶酸组合物组大鼠FPG显著降低，且那格列奈叶酸组合物对大鼠的降糖作用略强于那格列奈单用，但无显著性差异。模型组尿蛋白显著升高，那格列奈组大鼠尿蛋白显著下降，那格列奈/叶酸组合物尿蛋白下降作用明显，且作用强于那格列奈，可见那格列奈与叶酸合用对肾功能的保护有显著的协同作用(表2)。

表2那格列奈叶酸组合物对大鼠血糖、24h尿蛋白的作用(n＝13)

注：与正常组比较，*P＜0.01；与模型组比较，^#P＜0.05，^##P＜0.01；与那格列奈组比较，^ΔP＜0.05。

与正常对照组大鼠比较，模型组大鼠血清ET水平升高、SOD、CAT水平降低，提示糖尿病模型合并早期血管内皮损伤；与那格列奈组比较，那格列奈叶酸组显示有降ET、升高SOD、CAT的效应，提示叶酸有进一步改善大鼠的抗氧化及抗内皮损伤作用(表3)。

表3那格列奈叶酸组合物对大鼠血管的保护作用(n＝13)

注：与正常组比较，*P＜0.01；与模型组比较，^#P＜0.05，^##P＜0.01；与那格列奈组比较，^ΔP＜0.05。

糖尿病血管病变以动脉硬化为主要表现，血管内皮损伤是糖尿病血管并发症的始动环节，同时糖尿病血管病变的发生又进一步促进内皮损伤，但血管病变的机制尚未完全阐明。血液中ET是血管内皮细胞分泌的活性物质，是强烈的血管收缩剂，与糖尿病血管并发症密切相关。据文献报道，随糖尿病进展，ET水平逐渐升高，是反映糖尿病血管病变的良好指标。氧自由基是导致内皮损伤的重要因素，而血液中SOD、CAT是清除氧自由基的重要蛋白酶。根据上述结果，初步得出结论：叶酸与那格列奈联合应用不仅降血糖作用加强，还有显著改善糖尿病大鼠血管内皮损伤的作用。实施例8.米格列奈/5-甲基四氢叶酸组合物对糖尿病大鼠血管舒张功能的作用

方法：SD大鼠用高脂饮食饲养4周后腹腔注射STZ(30mg/kg)，4周后测FPG确认大鼠2型糖尿病诱导成功，继续饲以高脂饮食。将糖尿病大鼠随机分为3组：模型组、米格列奈组、米格列奈+5-甲基四氢叶酸(5-MTF)组，每组12只，每日2次治疗或处理，相应喂等体积蒸馏水、2.8mg/kg/d米格列奈、2.8mg/kg/d米格列奈+0.12mg/kg/d5-MTF；另设正常对照大鼠12只(始终进食普通饲料)。给药10周后复测FPG，腹腔注射30mg/kg戊巴比妥钠麻醉大鼠，打开腹腔，分离腹主动脉和肠系膜上动脉，在腹主动脉分出肠系膜上动脉的上方和下方分别结扎，将一“Y”形管插入肠系膜上动脉，结扎动脉并固定在“Y”形管上，然后沿肠管将肠系膜完整剪下。“Y”形管一端连接于恒温水浴的蠕动泵灌流系统，可交替恒速灌流Krebs液(平衡和冲洗肠系膜血管床)或含药物的Krebs液(给药)。“Y”形管的另一端连接于四道生理记录仪，记录肠系膜血管床内压力(反映血管张力变化)。肠系膜血管舒张反应测定：在Krebs液中加入终浓度为1μmol/L的去甲肾上腺素(NE)，肠系膜血管收缩达最高并稳定后(血管床内压升高)，再加入终浓度为1μmol/L的乙酰胆碱(ACh)或1μmol/L的硝普钠(SNP)，血管舒张，肠系膜血管床内压下降。以肠系膜血管对ACh或SNP的松弛率百分比[(NE肠系膜血管内压力-ACh或SNP肠系膜血管内压力)/NE肠系膜血管内压力×100％]表示肠系膜血管床对ACh或SNP的舒张反应性。去内皮细胞血管舒张反应测定：在Krebs液中加入终浓度为1μmol/L的皂素去内皮(约灌流20mL，皂素破坏血管内皮而对血管平滑肌无影响)，用Krebs液灌流冲洗30min，再重复上述步骤，观察去内皮细胞后肠系膜血管对ACh或SNP的舒张反应性。

结果：数据见表4和表5。与正常对照组相比，模型组大鼠血糖显著升高，表明造模成功。给予糖尿病大鼠药物治疗后，米格列奈组、米格列奈+5-MTF组合物组大鼠FPG均显著降低，但米格列奈+5-MTF的降血糖作用优于米格列奈(P＜0.05)，提示5-MTF有辅助降血糖作用。

表4米格列奈/5-MTF组合物对大鼠血糖的作用

注：与空白组比较，*P＜0.01；与模型组比较，^##P＜0.01；与米格列奈组比较，^ΔP＜0.05。

糖尿病血管病变的初始原因是血管内皮细胞损害，本研究利用离体血管灌流技术观察本组合物对糖尿病大鼠肠系膜血管内皮细胞是否有保护作用。ACh的舒张率可反映内皮细胞功能。结果发现，与正常对照组比较，模型组大鼠肠系膜血管ACh舒张率明显降低，米格列奈组、米格列奈+5-MTF组血管ACh舒张率均较模型组均有改善，米格列奈+5-MTF的改善程度显著优于米格列奈单用，提示5-MTF有内皮保护作用。用皂素去内皮后，2个治疗组肠系膜血管对ACh舒血管的反应性均明显降低，组间无显著性差异。但去内皮处理前后，各组肠系膜血管对SNP(释放一氧化氮，直接松弛平滑肌，属于非内皮依赖性)舒张血管的反应性无显著变化，间接说明糖尿病大鼠早期血管病变主要是损害血管内皮。根据以上结果，我们认为米格列奈/5-MTF组合物对2型糖尿病大鼠血管内皮具有显著保护作用。

表5米格列奈/5-MTF组合物对大鼠血管内皮功能的影响

注：与空白组比较，*P＜0.01；与模型组比较，^##P＜0.01；与米格列奈组比较，^ΔΔP＜0.01。

实施例9.米格列奈/甲酰四氢叶酸/Vit B₆组合物对糖尿病大鼠视网膜的保护作用

方法：大鼠适应性饲养后测空腹血糖低于7mmol/L者随机选取10只作为正常对照组，其余大鼠用STZ(柠檬酸缓冲液配成1％浓度，过滤灭菌)按30mg/kg腹腔注射诱发糖尿病，2周后取尾血测FPG≥11.1mmoL/L即为糖尿病大鼠。将糖尿病大鼠随机分为3组，每组13只：糖尿病对照组、米格列奈治疗组(2.6mg/kg/d)、米格列奈+甲酰四氢叶酸+Vit B₆治疗组(2.6+0.08+2mg/kg/d)。每天灌胃给药。血糖升高后第12周，取尾血测血糖。每组取10只大鼠，取双侧眼球，置于冰生理盐水中，取出视网膜组织，精密天平称重，冰浴下制成10％组织匀浆，3000r/min离心10分钟，取上清液进行一氧化氮合酶(NOS)和醛糖还原酶(AR)活性测定(NOS用每毫克组织蛋白每分钟生成1mmol NO为一个酶活力单位表示；AR活性的测定用紫外测定法)，蛋白测定用考马斯亮兰比色法。AR单位酶活性为每mg匀浆蛋白每分钟消耗1umolNADPH。测得结果以均值±标准差表示，统计方法采用t检验。

结果：糖尿病视网膜病变的发病机制中，AR活性增强，NOS表达增强。在本实验中，糖尿病大鼠血糖升高后第12周，模型组NOS和AR值均显著高于正常对照组，表明该糖尿病大鼠已经患有早期视网膜病变。米格列奈组糖尿病大鼠的NOS和AR值与模型组糖尿病大鼠相比没有显著差异，而米格列奈/甲酰四氢叶酸/Vit B₆组糖尿病大鼠的NOS和AR值无论是与模型组相比、还是与米格列奈组大鼠相比，都有显著的统计学差异，表明米格列奈/甲酰四氢叶酸/Vit B₆组合物具有协同防治糖尿病视网膜病变的作用。

表6米格列奈/甲酰四氢叶酸/Vit B₆对糖尿病大鼠视网膜的保护(n=10)

注：与正常组比较，*P＜0.01；与模型组比较，^##P＜0.01；与米格列奈组比较，^ΔP＜0.05，^ΔΔP＜0.01。

实施例10.那格列奈/5-MTHF/VitB₁₂组合物对糖尿病大鼠的血管及内皮保护作用

方法：Wistar大鼠(雄性，体重200-250g)高脂饲料喂养12周。大鼠造模前禁食12小时，腹腔注射STZ(30mg/kg)，2周后眶后采空腹血，测血糖FPG≥11.1mmoL/L为糖尿病造模成功，将糖尿病大鼠按血糖值随机分为3组，分别为模型对照组、那格列奈组(8mg/kg/d)、那格列奈/5-MTHF/VitB₁₂组(8+0.06+0.01mg/kg/d)，每组13只，灌胃给药，每天1次，连续12周；另设立正常对照组大鼠，以普通饲料喂养(模型对照及正常对照大鼠每日灌胃蒸馏水)。糖尿病大鼠各组均继续喂以高热量饲料，实验期间动物饮水及饲料不限制，实验12周结束时采血，测血糖以及按试剂盒说明书测定NO(硝酸还原酶法)、总一氧化氮合成酶(T-NOS)和总SOD活力；放免法测定血清血栓素(TXB₂)、前列腺素(6-keto-PGF1α，简称PGF1α)和血浆ET。数据用均数±标准差表示，组间比较行配对t检验。

结果：见表7-9。①那格列奈/5-MTHF/VitB₁₂组合物对血糖的影响：模型组血糖显著升高，那格列奈可显著降低血糖，那格列奈/5-MTHF/VitB₁₂组合物降糖作用有所增强，但未达显著水平。②那格列奈/5-MTHF/VitB₁₂组合物对NO、T-NOS、ET和NO/ET的影响：与正常组比较，模型组血浆NO降低，血清T-NOS活力显著下降，ET含量升高，NO/ET比值降低；与模型组比较，那格列奈组仅NO、T-NOS有所升高，而那格列奈/5-MTHF/VitB₁₂组NO、T-NOS升高更明显，ET降低，同时NO/ET比值显著增高，提示5-MTHF/VitB₁₂增强血管内皮保护。③那格列奈/5-MTHF/VitB₁₂组合物对TXB₂、PGF1α及两者比值的影响：与正常组比较，模型组血浆TXB₂显著升高，PGF1α变化不明显，TXB₂/PGF1α比值升高；与模型组比较，那格列奈/5-MTHF/VitB₁₂组TXB₂有明显下降，PGF1α变化幅度不大，TXB₂/PGF1_α比值明显下降，同样提示5-MTHF/VitB₁₂具有增强对血管栓塞的防治作用。④那格列奈/5-MTHF/VitB₁₂组合物对血清总SOD活力的影响：与正常组比较，模型组血清总SOD活力显著降低，给药组SOD活力均有不同程度上升。其中，与那格列奈组比较，那格列奈/5-MTHF/VitB₁₂组SOD活力升高更明显，提示药物间的协同血管保护作用。

表7那格列奈/5-MTHF/VitB₁₂组合物对大鼠血糖的作用(n=13)

注：与正常组比较，*P＜0.01；与模型组比较，^##P＜0.01。

表8那格列奈/5-MTHF/VitB₁₂组合物对大鼠血管内皮的保护作用(n=13)

注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，^#P＜0.05，^##P＜0.01；

与那格列奈组比较，^ΔP＜0.05，^ΔΔP＜0.01。

表9那格列奈/5-MTHF/VitB₁₂组合物对大鼠血管的保护作用(n=13)

与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，^#P＜0.05，^##P＜0.01；与那格列奈组比较，^ΔP＜0.05。

糖尿病血管病变、尤其是微血管病变是糖尿病多种并发症的病理基础，其中血管内皮细胞损伤可能是重要原因之一，而一氧化氮/内皮素(NO/ET)和血栓素/前列腺素是两组血管活性物质，均由血管内皮细胞分泌，两组动态平衡对维持内皮细胞的正常功能及对血流动力学等起着重要作用。本研究结果提示，与单方相比，那格列奈与5-MTHF/VitB₁₂联合应用更有利于维持NO/ET和血栓素/前列腺素的稳态平衡，有利于协助调节微血管的舒缩、抑制血小板聚集及血栓形成，因此具有防治糖尿病血管病变的药理作用。

Claims (4)

1.一种用于治疗糖尿病的药物组合物，组成是：

(1)2.5mg瑞格列奈和0.8mg叶酸；或85mg那格列奈和0.4mg叶酸

(2)药剂学上可接受的载体。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的制药剂型为片剂、胶囊或颗粒剂。

3.权利要求1所述的药物组合物在制备用于治疗糖尿病的药物中的用途。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于伴有高同型半胱氨酸血症。