CN102726395A - 戊二醛交联壳聚糖在抑制洋葱伯克氏菌群生长中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了戊二醛交联壳聚糖在抑制洋葱伯克氏菌群生长中的应用，所述的戊二醛交联壳聚糖通过如下方法制备：将壳聚糖加入乙酸溶液中，搅拌均匀，制得壳聚糖溶液；将壳聚糖溶液与戊二醛溶液混合，搅拌反应12-36h，得到水凝胶；水凝胶经水洗、干燥后，得到戊二醛交联壳聚糖。本发明的戊二醛交联壳聚糖交联程度合适，以其用于植物栽培，对洋葱伯克氏菌群的抑制效果好，具有良好的高温稳定性和抑菌持久性；以其制备植物保鲜膜或保鲜涂层用于果蔬运输或库存保藏，不仅能有效防止采后病害，而且能起到保水保鲜作用。

Description

戊二醛交联壳聚糖在抑制洋葱伯克氏菌群生长中的应用

技术领域

本发明涉及植物保护的生物防治技术领域，尤其涉及戊二醛交联壳聚糖在抑制洋葱伯克氏菌群(Burkholderia cepacia complex)生长中的应用。

背景技术

壳聚糖是由甲壳素经脱乙酰化处理后的产物，通常将脱乙酰度大于55％的甲壳素称作壳聚糖，其学名为聚氨基葡萄糖，化学名(1，4)-2-氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖，广泛存在于虾、蟹等动物外壳和藻类、真菌的细胞壁中。

壳聚糖是一种抗菌谱较广的天然物质，对细菌、酵母菌和真菌等均有不同程度的抑制作用(Li et al.2008，2010a，b，2011a，b；Fang et al.2010；Lou et al.2011；Algam et al.2011)。已有试验表明，壳聚糖与其他物质复合使用可有效减少果蔬水分、Vc等成分的损失，显著降低采后呼吸作用，保持营养成分，延缓氧化褐变，减少采后病害的发生(赵玉清，2004)；杨玉红等研究发现，经过壳聚糖涂膜处理的草莓可溶性糖与有机酸的含量均高于对照，而多酚氧化酶的活性低于对照，证实了壳聚糖对于果蔬可以起到防止营养流失、抗氧化的功效(杨玉红等，2006)。壳聚糖还具有良好的生物相溶性，可生物降解性以及无毒副作用，其分子内含有-OH和-NH₂-活性基团，对过渡金属离子有良好的吸附作用(Kaspar et al.1999；Sehmieget al.1995；Harrison et al.1998)，可直接作为吸附剂对多种重金属离子如Cd²⁺、Fe²⁺、Hg²⁺、Pb²⁺、Cr³⁺、Mg²⁺、Zn²⁺、Ni²⁺、Cu²⁺等进行吸附(Bassiet al.2000；Juang et al.2000；张廷安等2001；Voldlnger et al.2003；Wong etal.2003；Karthikeya et al.2004；党明岩等2004；郭敏杰等2004)，因此可以用作各种色谱分析、分离的吸附剂，用于金属离子、有机物和蛋白质的分离纯化(Liu et al.1997)。但壳聚糖是线性高分子聚合物，溶于酸性介质并发生降解，给壳聚糖的广泛应用带来了局限性。为此，人们就将其进行化学改性，使其获得更充分的利用。交联，即是其中一种。壳聚糖的交联反应是指通过化学方法或物理方法使壳聚糖由线性结构成为网状结构的高分子聚合物。

壳聚糖的化学交联反应主要是在分子间发生，也可发生在分子内部；可发生在同一直链的不同链结间，也可发生在不同的直链间。壳聚糖的化学交联通常是在双官能团的醛或酸酐等交联剂的作用下进行，主要是醛基与氨基生成席夫碱结构。反应可在均相或非均相条件下，在较宽的pH范围内于室温下迅速进行。常用的交联剂有环氧氯丙烷(Vimar et al.1997)、苯二异氰酸酯、戊二醛(Nunan et al.1992)、甲醛、乙二醛、双醛淀粉和乙二醇双缩水甘油醚(Koltsakis et al.1997)等等。

Noriaki(Noriaki et al.2005)经过多年来对交联反应的研究发现，交联作用可以提高壳聚糖的稳定性，从而使得交联后的壳聚糖作为重金属离子吸附剂成为可能：通过与含有大量对金属离子具有吸附能力基团的物质交联，可以提高其对金属离子的吸附性能。交联壳聚糖在酸性条件下可靠的稳定性使其作为交联吸附剂获得可再生、重复使用的性能，大大提升了吸附剂的效能。许多的研究者发现，双或者多活性官能团的试剂部分交联壳聚糖，在酸性条件下能够有效地吸附金属离子，其吸附能力在一定程度上取决于交联度的大小，并随着交联度的升高而下降(Varmaa et al.2004)。但是，同时也发现，在同质条件下，适度地提高交联度能够增加交联吸附剂的吸附能力。这是由于交联能够部分破坏壳聚糖的晶体结构，从而提高了吸附剂的亲水能力。Koyama(Koyama et al.1986)研究发现：在同质条件下，壳聚糖与戊二醛交联，当交联度低于70％时能有效提高其对铜的吸附性能，当超过70％时，吸附性能力则会下降。

戊二醛交联壳聚糖是目前研究最多并且最普遍的一种方法。基本制备过程是将壳聚糖溶于乙酸溶液中，然后再加入戊二醛溶液，搅拌直至凝胶析出。加入NaOH使凝胶沉淀，再经过过滤、洗涤、干燥，即可得到戊二醛交联的壳聚糖。该交联产物主要用于金属离子的吸附(王爱勤2008)。戊二醛交联壳聚糖不仅可用于金属离子的吸附(夏彩芬等2004)，还可以用于青霉素G酰化酶的固化(程仕伟等2011)。

洋葱伯克氏菌群(Burkholderia cepacia complex，Bcc)为洋葱、杏、香蕉上的条件致病菌，在适当条件下能引发杏果腐病和洋葱细菌性软腐病等病害。例如，杏果腐病(Bacterial Fruit Rot of Apricot)是由Burkholderseminalis引起的(Fang et al.2007，2010；Mahenthiralingam et al.2008；Zhang et al.2007)，Burkholderia seminalis是洋葱伯克氏菌群中新发现的种(Vanlaere et al.2008)。杏果感染Bcc后，最初的症状是在采摘前的水果表面出现水浸斑点。随后，斑点扩展，病组织变得湿软，最后水渍浸斑蔓延至整个果实，引起全果的软腐。同时，洋葱伯克氏菌群也是人体潜在致病菌，进食带有Bcc的果蔬，可能诱发囊胞性纤维症病。Burkholderiaseminalis被认为是囊性所纤维化(cystic fibrosis)的条件致病菌。

发明内容

本发明提供了戊二醛交联壳聚糖在抑制洋葱伯克氏菌群(Burkholderia cepacia complex)生长中的应用，操作简单，抑菌效果好，且具有良好的高温稳定性和抑菌持久性，适用范围广。

戊二醛交联壳聚糖在抑制洋葱伯克氏菌群生长中的应用。

所述的洋葱伯克氏菌群为洋葱条件致病菌、人体潜在致病菌，可以为杏果腐菌(Burkholderia seminalis)、多噬伯克氏菌(Burkholderiamultivorans)、稳定伯克氏菌(Burkholderia stabilis)、越南伯克氏菌(Burkholderia vietnamiensis)、污染伯克氏菌(Burkholderia contaminans)和新洋葱伯克氏菌(Burkholderia cenocepacia)中的至少一种。其中，杏果腐菌可以为菌株Bcc R456、Bcc S9或Bcc 0901；多噬伯克氏菌可以为菌株Bcc PW99；稳定伯克氏菌可以为菌株Bcc M8；越南伯克氏菌可以为菌株Bcc S23；污染伯克氏菌可以为菌株Bcc Y4；新洋葱伯克氏菌可以为菌株Bcc Y8、Bcc Y17。这些菌株均保藏于浙江大学生物技术研究所。试验证明，含有戊二醛交联壳聚糖的培养基能有效抑制洋葱伯克氏菌群的生长。

本发明还提供了戊二醛交联壳聚糖在防治植物病害中的应用，可以包括如下步骤：将戊二醛交联壳聚糖粉末喷施在种植植物的土壤中、植物叶片上或成熟期前的果实上。戊二醛交联壳聚糖不溶于水，只能研成粉末使用。使用时，由于戊二醛有一定毒性，不能在果实成熟期使用，而将其喷施在种植植物的土壤中、植物叶片上或成熟期前的果实上，能取得较好的抑制洋葱伯克氏菌群生长的效果。

所述的植物可以为杏或洋葱。杏果感染Bcc后，很容易引发杏果腐病；洋葱感染Bcc后，很容易引发洋葱细菌性软腐病。本交联物对洋葱伯克氏菌群有较强的抑菌效果，能够有效控制这些相关病害的发生。

本发明还提供了戊二醛交联壳聚糖在制备植物保鲜膜或保鲜涂层中的应用，所述的植物保鲜膜或保鲜涂层中含有戊二醛交联壳聚糖。戊二醛交联壳聚糖具有良好的抑制洋葱伯克氏菌群生长的活性，且其具有良好的高温稳定性(在高温下能保持较稳定的抑菌作用)和抑菌持久性，以其作为掺杂成分通过常规方法加工成植物保鲜膜、保鲜涂层等用于果蔬的运输、库存保藏过程中，可有效防止植物发生病害，起到保鲜防腐作用；同时，以戊二醛交联壳聚糖可有效提高壳聚糖的延展性、成膜性及对果蔬的保水能力等，在果蔬保水保鲜、避免营养物质流失等方面也有较好的效果。

戊二醛与壳聚糖之间的交联程度会影响交联物的抑菌效果，为了获得较好的抑菌效果，上述应用中，所述的戊二醛交联壳聚糖可以通过如下方法制备：将壳聚糖加入乙酸溶液中，搅拌均匀，制得壳聚糖溶液；将壳聚糖溶液与戊二醛溶液混合，搅拌反应12-36h，得到水凝胶；水凝胶经水洗、干燥后，得到戊二醛交联壳聚糖；

其中，所述的壳聚糖溶液中壳聚糖的质量百分比浓度为2-6％，戊二醛溶液中戊二醛的质量百分比浓度为20-30％；壳聚糖溶液与戊二醛溶液的体积比为3∶1-4∶1。

所述的乙酸溶液中乙酸的质量百分比浓度优选为4-6％，既有利于壳聚糖粉末的溶解，又不会使得溶液酸性太强而产生腐蚀性。

所述的干燥优选为冷冻干燥，有利于较好地保持物质活性。

所述的壳聚糖的脱乙酰度优选在85％以上，易获得，成本较低。

本发明还提供了一种戊二醛交联壳聚糖，可以通过如下方法制备：将壳聚糖加入乙酸溶液中，搅拌均匀，制得壳聚糖溶液；将壳聚糖溶液与戊二醛溶液混合，搅拌反应12-36h，得到水凝胶；水凝胶经水洗、干燥后，得到戊二醛交联壳聚糖；其中，所述的壳聚糖溶液中壳聚糖的质量百分比浓度为2-6％，戊二醛溶液中戊二醛的质量百分比浓度为20-30％；壳聚糖溶液与戊二醛溶液的体积比为3∶1-4∶1。通过该方法制得的戊二醛交联壳聚糖的交联程度合适，对洋葱伯克氏菌群的抑制效果最好。

本发明提供了戊二醛交联壳聚糖在抑制洋葱伯克氏菌群生长中的应用，采用本发明方法，具有如下有益效果：

(1)制备交联物所需的原料易得，制备工艺简单，所制得的戊二醛交联壳聚糖交联程度合适，具有良好的高温稳定性和抑菌持久性。

(2)以该戊二醛交联壳聚糖用于植物栽培过程中，操作方便，对洋葱伯克氏菌群的抑制效果好，能有效防治植物杏果腐病和洋葱细菌性软腐病，适用于实际生产，易于推广应用。

(3)本发明的戊二醛交联壳聚糖延展性和成膜性较好，以其制备植物保鲜膜或保鲜涂层用于果蔬的运输、库存保藏，不仅能有效防止发生采后病害，而且还能起到保水保鲜、避免营养物质流失等保鲜作用。与壳聚糖相比，显著提高了应用的稳定性和广泛性，具有广泛的应用前景。

附图说明

图1为本发明实施例2中壳聚糖(Chitosan)的红外光谱图；

图2为本发明实施例2中戊二醛交联壳聚糖(CLCG)的红外光谱图；

图3为本发明实施例3中壳聚糖及戊二醛交联壳聚糖的X-射线衍射分析图，其中，上图为壳聚糖(Chitosan)，下图为戊二醛交联壳聚糖(CLCG)；

图4本发明实施例4中戊二醛交联壳聚糖的扫描电镜图；

图5为本发明实施例6中温度对戊二醛交联壳聚糖的抑菌效果图；

图6为本发明实施例7中时间对戊二醛交联壳聚糖的抑菌效果图。

具体实施方式

实施例1制备戊二醛交联壳聚糖(CLCG)

称取2.00g脱乙酰度为85％壳聚糖粉末，溶于50mL 5％乙酸溶液，在磁力搅拌仪上搅拌至均一黏液后，再加入15mL现配的25％戊二醛溶液，继续在磁力搅拌仪上室温搅拌24h。经过24h形成水凝胶后，小心倒去多余的戊二醛溶液，再用无菌蒸馏水轻柔、反复漂洗多次，去掉未交联上的戊二醛。倒去多余水分，滤纸滤干后放入-70℃冰箱预冷。将-70℃预冷后的戊二醛水凝胶于真空冷冻干燥仪中干燥，干燥好后放入4℃冰箱备用。

实施例2戊二醛交联壳聚糖(CLCG)的红外光谱测定

取实施例1中制备好的1-2mg戊二醛交联壳聚糖与200mg纯KBr混合后均匀研细，研磨至样品粒度小于2μm，用洁净量勺取少量研磨后的粉末，均匀铺洒与模具纸膜上，用(5-10)×10⁷Pa压力在油压机上压成透明薄片，然后放入傅立叶红外光谱仪测定。

壳聚糖及戊二醛交联壳聚糖红外光谱图如图1和图2所示。在壳聚糖粉末的FTIR谱图中，壳聚糖在3430.48cm^-1出现v(O-H)和v(N-H)伸缩振动吸收峰重叠形成的一个宽峰，2877.63cm^-1处出现v(CH₃)和v(CH₂)的伸缩振动峰。由于壳聚糖分子中含有一定量的乙酰氨基，在1655.09cm^-1处出现了v(C＝O)伸缩振动峰，1422.86cm^-1出现了v(C-N)的伸缩振动峰。在1380.72cm^-1出现δ(CH₃)弯曲振动吸收峰。在1259.77cm^-1出现壳聚糖C₃-OH的δ(O-H)弯曲振动吸收峰，在1156.02cm^-1出现糖苷键v(C-O-C)伸缩振动吸收峰，在1084.49cm^-1出现多糖v(C-OH)伸缩振动吸收峰。

戊二醛交联壳聚糖各峰与壳聚糖相似，但在1637.9cm^-1出现了-C＝N-弯曲振动吸收峰，且3431.1cm^-1处的v(O-H)和v(N-H)伸缩振动吸收峰峰形变窄变尖，说明-NH和-OH减少，戊二醛与壳聚糖上的-NH₂发生了席夫碱反应。

实施例3戊二醛交联壳聚糖(CLCG)的X-射线衍射分析

将壳聚糖和由实施例1制得的戊二醛交联壳聚糖分别研细后，用X射线衍射仪(XPert PRO Holland)进行测试。工作电压40kV，工作电流25mA，Ni过滤CuK₀线，测试的衍射角2θ＝5～65°。

X-射线衍射技术是利用X-射线在晶体、非晶体中衍射与散射效应，进行物相的定性和定量分析、结构类型和完整性分析的技术。壳聚糖是一种易于结晶的高聚物，它有两种晶型，即晶型I和晶型II。图3为壳聚糖(Chitosan)和戊二醛交联壳聚糖(CLCG)的X-射线衍射谱图。从图中可以看出，壳聚糖的X射线衍射谱中显示了位于2θ＝11°，2θ＝20°的两个结晶峰，2θ＝11°属于I结晶，2θ＝20°属于结晶II带。与之相比，戊二醛交联壳聚糖CLCG显示的位于2θ＝11°和20°处的结晶峰消失，位于2θ＝15°处产生新的结晶峰。这是因为，从壳聚糖分子结构看，其分子呈半刚性，由于含有大量氨基和羟基，容易形成氢键而易于结晶。壳聚糖通过交联反应后，限制了高聚物分子的活动能力，破坏了分子链的规整性，从而破坏了其分子间的氢键作用，所以结晶峰减弱。

实施例4戊二醛交联壳聚糖(CLCG)的扫描电镜分析

用无菌磷酸缓冲液轻柔漂洗戊二醛交联壳聚糖三次，再转移到干燥、洁净的离心管内，用2.5％戊二醛浸没并存放于冰箱4℃过夜以固定样品。用0.1M pH 7.0的磷酸缓冲液漂洗3次，每次15min。再用1％(w/v)锇酸固定液固定1-2h。取出固定液，再用0.1M pH 7.0的磷酸缓冲液漂洗3次，每次15min。然后再分别用50％、70％、80％、90％、95％、100％(v/v)的乙醇溶液对样品进行梯度脱水，再用驻点干燥器干燥，给样品表面镀金属钯，最后用电子显微镜(JEOL JSM-6400)扫描拍照。

戊二醛交联壳聚糖(CLCG)的扫描电镜结果如图4所示，壳聚糖与戊二醛的交联反应已使壳聚糖由线性结构成为网状结构的高分子聚合物。交联作用提高了壳聚糖的稳定性，从而使得交联后的壳聚糖作为重金属离子吸附剂成为可能。交联壳聚糖也提高了壳聚糖的延展性、成膜性及对果蔬的保水能力等，在果蔬保水保鲜、防腐防病，避免营养物质流失等方面有着广泛的应用前景。

实施例5不同温度处理戊二醛交联壳聚糖(CLCG)

将实施例1中制备的戊二醛交联壳聚糖(CLCG)移入干燥、洁净的玻璃试管内，用橡胶塞封口后分别放置于水浴锅内40℃、70℃、100℃水浴加热2h。加热完成后取出试管擦净水分，室温保存。

实施例6不同温度处理的戊二醛交联壳聚糖(CLCG)的抑菌能力测试

将菌株Bcc 0901(属于Burkholderia seminalis，保藏于浙江大学生物技术研究所)在NA培养基上划线后于28℃恒温培养箱中保温培养至长出单菌落。用灭菌接菌环挑取单菌落小心接种于新鲜LB液体培养基中，28℃振荡过夜培养。将灭菌的NA培养基加热融化后，冷却至40℃左右，每200mL NA培养基中加入5mL过夜培养的Bcc菌液，充分摇匀后倒板。将提前灭好菌的牛津杯插入混有菌液的固体培养基中，并小心在各牛津杯中分别加入实施例5中经过不同温度处理过的戊二醛交联壳聚糖，用封口膜封好培养基平板后，于28℃保温培养24h。

试验结果证明，戊二醛交联壳聚糖可有效抑制Bcc 0901，平均抑菌圈半径为1.42cm。戊二醛交联壳聚糖对温度梯度有着稳定性，40℃水浴处理后的平均抑菌半径为1.34cm，70℃水浴处理后的平均抑菌半径为1.26cm，100℃水浴处理后的平均抑菌半径为1.88cm(图5)。这说明高温处理有利于戊二醛交联壳聚糖提高其对Bcc的抑菌能力。

实施例7不同时间处理的戊二醛交联壳聚糖(CLCG)的抑菌能力测试

在NA培养基上划线培养菌株Bcc 0901，于恒温培养箱中28℃保温孵育至长出单菌落。用灭菌接菌环挑取单菌落并接种于新鲜LB液体培养基中，28℃振荡过夜培养。将灭菌的NA培养基加热融化后，冷却至40℃左右，每200mLNA培养基中加入5mL过夜培养的Bcc菌液，充分摇匀后倒板。将提前灭好菌的牛津杯插入混有菌液的固体培养基中，并小心在各牛津杯中加入戊二醛交联壳聚糖，用封口膜封好培养基平板后，于28℃保温培养。并分别于6h、12h、24h、36h、48h、60h测定其抑菌圈大小。

结果如图6所示，戊二醛交联壳聚糖对Burkholderia cepacia complex菌株Bcc 0901的抑菌圈半径并没有因为时间的推移而受到显著影响，表明其对伯克氏菌有着稳定的抑制活性，在长时间下依然可以保持相对持久的抑制能力。

实施例8戊二醛交联壳聚糖(CLCG)对Bcc抑菌谱测定

本实施例中，所用的菌株Bcc R456、Bcc S9和Bcc 0901属于杏果腐菌(Burkholderia seminalis)；菌株Bcc PW99属于多噬伯克氏菌(Burkholderia multivorans)；菌株Bcc M8属于稳定伯克氏菌(Burkholderiastabilis)；菌株Bcc S23属于越南伯克氏菌(Burkholderia vietnamiensis)；菌株Bcc Y4属于污染伯克氏菌(Burkholderia contaminans)；菌株Bcc Y8和Bcc Y17属于新洋葱伯克氏菌(Burkholderia cenocepacia)。这些菌株均保藏于浙江大学生物技术研究所。

将Bcc菌株R456、S9、0901、PW99、M8、S23、Y4、Y8或Y17在NA培养基上划线后于28℃恒温培养箱中保温培养至长出单菌落。用灭菌接菌环挑取单菌落小心接种于新鲜LB液体培养基中，28℃振荡过夜培养。将灭菌的NA培养基加热融化后，冷却至40℃左右，每200mL NA培养基中加入5mL过夜培养的Bcc菌液，充分摇匀后倒板。将提前灭好菌的牛津杯插入混有菌液的固体培养基中，并小心在各牛津杯中分别加入实施例5中经过不同温度处理过的戊二醛交联壳聚糖，用封口膜封好培养基平板后，于28℃保温培养12、24、48h。

试验结果如下表所示，CLCG对不同的Bcc菌株都有较强的抑菌活性，最大的抑菌圈直径达24mm，最小的达15mm；并且其对不同菌株的抑菌效果都有稳定性，与实施例8的试验结果相符，可见CLCG是Bcc种群的有效拮抗物质。

表1CLCG对不同Bcc菌株的抑菌活性

实施例9采用戊二醛交联壳聚糖防治植物病害

将实施例1制得的戊二醛交联壳聚糖粉末喷施在接种洋葱伯克氏菌的收获前的杏果或洋葱球茎上，作为试验组；以未喷施戊二醛交联壳聚糖粉末的接种洋葱伯克氏菌的相应果蔬作为对照组。栽培完成后，分别统计两组的发病率，结果显示，试验组的发病率显著低于对照组。

Claims (10)

1.戊二醛交联壳聚糖在抑制洋葱伯克氏菌群(Burkholderia cepaciacomplex)生长中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的洋葱伯克氏菌群为杏果腐菌(Burkholderia seminalis)、多噬伯克氏菌(Burkholderiamultivorans)、稳定伯克氏菌(Burkholderia stabilis)、越南伯克氏菌(Burkholderia vietnamiensis)、污染伯克氏菌(Burkholderia contaminans)和新洋葱伯克氏菌(Burkholderia cenocepacia)中的至少一种。

3.戊二醛交联壳聚糖在防治植物病害中的应用，其特征在于，包括：将戊二醛交联壳聚糖粉末喷施在种植植物的土壤中、植物叶片上或成熟期前的果实上。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的植物为杏或洋葱。

5.戊二醛交联壳聚糖在制备植物保鲜膜或保鲜涂层中的应用，其特征在于，所述的植物保鲜膜或保鲜涂层中含有戊二醛交联壳聚糖。

6.根据权利要求1-5任一权利要求所述的应用，其特征在于，所述的戊二醛交联壳聚糖通过如下方法制备：将壳聚糖加入乙酸溶液中，搅拌均匀，制得壳聚糖溶液；将壳聚糖溶液与戊二醛溶液混合，搅拌反应12-36h，得到水凝胶；水凝胶经水洗、干燥后，得到戊二醛交联壳聚糖；

其中，所述的壳聚糖溶液中壳聚糖的质量百分比浓度为2-6％，戊二醛溶液中戊二醛的质量百分比浓度为20-30％；壳聚糖溶液与戊二醛溶液的体积比为3∶1-4∶1。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的乙酸溶液中乙酸的质量百分比浓度为4-6％。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的干燥为冷冻干燥。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的壳聚糖的脱乙酰度在85％以上。

10.一种戊二醛交联壳聚糖，其特征在于，通过如下方法制备：将壳聚糖加入乙酸溶液中，搅拌均匀，制得壳聚糖溶液；将壳聚糖溶液与戊二醛溶液混合，搅拌反应12-36h，得到水凝胶；水凝胶经水洗、干燥后，得到戊二醛交联壳聚糖；

其中，所述的壳聚糖溶液中壳聚糖的质量百分比浓度为2-6％，戊二醛溶液中戊二醛的质量百分比浓度为20-30％；壳聚糖溶液与戊二醛溶液的体积比为3∶1-4∶1。

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