CN102721587A - 样品中磺胺类药物分析前处理试剂盒及其前处理方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种样品中磺胺类药物分析前处理试剂盒,包括固相萃取器(1),其特征在于所述固相萃取器为锥形过滤管,所述锥形过滤管内设置两纤维团阻挡片(10),所述两纤维团阻挡片(10)间填充有聚合物纳米簇(9),所述锥形过滤管末端通过储液器(2)连接注射器(3),所述注射器(3)驱动储液器(2)内液体流经固相萃取器(1)内聚合物纳米簇(9)。利用该试剂盒进行前处理操作简便,前处理效果理想,并且大大节约了样品前处理的时间和有机溶剂用量,提高效率的同时也减少了有害试剂对环境的污染。
Description
技术领域
本发明属于样品纯化分析技术领域,具体涉及一种样品中磺胺类药物分析前处理试剂盒及其前处理方法。
背景技术
磺胺类(Sulfonamides,SAs)是一类广谱抗菌类药物,由于其性质稳定、价格低廉、使用方便,至今仍被广泛使用。但是由于其在动物体内代谢降解缓慢,如果不遵守休药期规定、超量使用,易造成磺胺类药物残留。食品中SAs的大量残留,可能引起食用者的过敏反应,还具有致癌的作用,并且由于细菌耐药性的产生及耐药因子的传递,造成许多抗菌药物对人类细菌性疾病无法控制。SAs已经成为动物源性食品中兽药残留最严重的药物之一。快速、准确检测样品中的SAs是保障食品安全和人们身体健康的必然需求。
然而,由于SAs残留具有水平低、基质复杂的特点,样品的纯化和富集是影响磺胺类药物检测准确度和灵敏度的重要因素,更是影响检测速度的主要原因。因此样品前处理成为样品中SAs残留检测的关键步骤。磺胺类药物检测的前处理大多采取液液萃取联合固相萃取的方法,通过改变提取溶剂和优化提取、净化条件等方式达到较好的前处理效果。但是,SAs的分子结构决定其在溶液中较强的极性,现有前处理技术都难以避免操作步骤繁琐、效率低、耗时耗力,耗费大量有机溶剂的问题。
许多学者已经将注意力转向开发新型的提取介质取代液液萃取来提取复杂样品中的磺胺类药物。Kunihiro Kishida等应用基质固相萃取-高效液相色谱法成功的测定了鸡肉组织中的六种磺胺类药物的残留,Xu Xu等基于离子液体辅助微波萃取多种样品中的6种磺胺类药物,Qiang Gao等基于Fe3O4/SiO2/P(MAA-co-EGDMA)磁性固相萃取原理检测牛奶中的磺胺类物质,Gizelle Cristina Bedendo等将中空纤维更新液膜(HFRLM)成功应用于蜂蜜中5种磺胺的萃取。这些方法可以起到一定的提取目标物、去除杂质的作用,但是还达不到快速高效的要求,且浓缩富集效果不甚理想,所以还没有推广应用。因此样品中磺胺类物质测定亟需高效快速的样品前处理方法达到去除杂质浓缩目标物的目的。
发明内容
本发明目的在于提供一种样品中磺胺类药物分析前处理试剂盒,解决了现有技术中样品中磺胺类药物分析时不能高效快速的样品前处理方法达到去除杂质浓缩目标物等问题。
为了解决现有技术中的这些问题,本发明提供的技术方案是:
一种样品中磺胺类药物分析前处理试剂盒,包括固相萃取器,其特征在于所述固相萃取器为锥形过滤管,所述锥形过滤管内设置两纤维团阻挡片,所述两纤维团阻挡片间填充有聚合物纳米簇,所述锥形过滤管末端通过储液器连接注射器,所述注射器驱动储液器内液体流经固相萃取器内聚合物纳米簇。
优选的,所述试剂盒还包括分别设置在固相萃取器外侧的第一活化液储存器、第二活化液储存器、淋洗液储存器、洗脱液储存器和接收管。
本发明的另一目的在于提供一种所述的样品中磺胺类药物分析前处理试剂盒在样品中磺胺类药物分析前处理方面的应用。
优选的,所述应用包括以下步骤:
(1)向储液器内加入第一活化液,使用注射器加压驱动储液器内液体流经固相萃取器内聚合物纳米簇;
(2)向储液器内加入第二活化液,使用注射器加压驱动储液器内液体流经固相萃取器内聚合物纳米簇得到已活化的固相萃取器;
(3)将待测样品液加至储液器内加压使用注射器加压驱动储液器内液体流经已活化的固相萃取器,然后向储液器加入淋洗液淋洗,最后向储液器加入洗脱液进行洗脱,洗脱后的样品液体收集于接收管中待测。
本发明的另一目的在于提供一种样品中磺胺类药物分析前处理方法,其特征在于所述方法包括以下步骤:
(1)向储液器内加入第一活化液,使用注射器加压驱动储液器内液体流经固相萃取器内聚合物纳米簇;
(2)向储液器内加入第二活化液,使用注射器加压驱动储液器内液体流经固相萃取器内聚合物纳米簇得到已活化的固相萃取器;
(3)将待测样品液加至储液器内加压使用注射器加压驱动储液器内液体流经已活化的固相萃取器,然后向储液器加入淋洗液淋洗,最后向储液器加入洗脱液进行洗脱,洗脱后的样品液体收集于接收管中待测。
优选的,所述方法中第一活化液选自甲醇、乙醇、甲酸、乙酸的一种或两种以上的任意组合。
优选的,所述方法中第二活化液选自甲醇、乙醇、水的一种或两种以上的任意组合。
优选的,所述方法中所述淋洗液选自水、甲酸水溶液、乙酸水溶液、氨水的一种或两种以上的任意组合。
优选的,所述方法中所述洗脱液选自甲醇、甲酸甲醇溶液、乙酸乙醇溶液、氨化甲醇的一种或两种以上的任意组合。
优选的,所述方法中所述聚合物纳米簇选自聚3,4-乙烯二氧噻吩(PEDOT)、聚吡咯(PPy)、聚噻吩(PT)、聚苯胺(Pan)形成的纳米簇。
纳米材料由于其独特的小尺寸、表面与界面等效应,在各个领域的应用研究成为热点。导电高分子纳米材料通常应用于太阳能电池、传感器及其它光电元件等方面。本发明的原理在于选择适当的单体制备成聚合物纳米簇(包括聚3,4-乙烯二氧噻吩(PEDOT)、聚吡咯(PPy)、聚噻吩(PT)、聚苯胺(Pan)等)。本发明人经长期研究发现,该聚合物纳米簇对磺胺类药物表现出极好的吸附性能。基于此本发明开发出一种萃取效率高且可以有效去除杂质的样品中磺胺类药物分析前处理试剂盒。
聚合物纳米簇的制备:采用化学法制备导电聚合物,在氧化剂的作用下,单体被氧化聚合。采用的氧化剂有:(NH4)2S2O8、H2O2、FeCl3、K2Cr2O7等;介质选用硫酸、盐酸、高氯酸的水溶液。
聚合物纳米簇,如聚3,4-乙烯二氧噻吩(PEDOT)、聚吡咯(PPy)、聚噻吩(PT)、聚苯胺(Pan)等作为导电高分子,主要的应用研究是领域有太阳能电池、传感器及其他光电元件等方面,将其作为一种吸附材料用于分析检测还未见报道。值得关注的是,通过掺杂制备的导电高分子材料带有电荷,也可以考虑将其作为吸附材料富集极性目标分子;另一方面由特殊工艺制备的纳米簇具有巨大的比表面积,也是成为高性能吸附材料的必备条件。
使用时,取活化液A加入固相萃取器中,组合固相萃取器、储液器、注射器加压过液;然后在固相萃取器中加入活化液B再次加压过液,得到已活化的固相萃取器备用。再将待测的样品液加至储液器加压过液,以淋洗液淋洗,洗脱液洗脱收集于接收管中待测。
相对于现有技术中的方案,本发明的优点是:
本发明样品中磺胺类药物分析前处理试剂盒具有很强的普适性,可处理食品、环境样品、生物样品等多类样品;集提取、净化、富集于一身,操作简便,前处理效果理想,并且大大节约了样品前处理的时间和有机溶剂用量,提高效率的同时也减少了有害试剂对环境的污染。
附图说明
下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述:
图1为样品中磺胺类药物分析前处理试剂盒的结构原理图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对上述方案做进一步说明。应理解,这些实施例是用于说明本发明而不限于限制本发明的范围。实施例中采用的实施条件可以根据具体厂家的条件做进一步调整,未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。
实施例
本实施例样品中磺胺类药物分析前处理试剂盒如图1所示。该试剂盒包括固相萃取器1、储液器2、注射器3、接收管4、第一活化液储存器5(装有第一活化液)、第二活化液储存器6(装有第二活化液)、淋洗液储存器7(装有淋洗液)、洗脱液储存器8(装有洗脱液)。固相萃取器1由聚合物纳米簇9装填到锥形过滤管中制成,纳米簇的上下端用合适的纤维团作为阻挡材料(形成纤维团阻挡片10),纤维可以是天然纤维或人工制备的微米或纳米纤维。储液器2前后端分别与萃取器1过滤管的后端、注射器3的前端开口可以紧密配合。
活化液A 5可以是甲醇、乙醇、甲酸、乙酸等醇类和羧酸类有机溶剂;活化液B6可以是甲醇、乙醇、水;淋洗液7可以是水、甲酸水溶液、乙酸水溶液、氨水;洗脱液(8)可以是甲醇、甲酸甲醇溶液、乙酸乙醇溶液、氨化甲醇;纳米簇(9)可以由聚3,4-乙烯二氧噻吩(PEDOT)、聚吡咯(PPy)、聚噻吩(PT)、聚苯胺(Pan)等一系列导电高分子中的一种或多种制成。填装量为1mg-10mg。
聚合物纳米簇的制备:采用化学法制备导电聚合物,在氧化剂的作用下,单体被氧化聚合。采用的氧化剂有:(NH4)2S2O8、H2O2、FeCl3、K2Cr2O7等;介质选用硫酸、盐酸、高氯酸的水溶液。聚合物纳米簇,如聚3,4-乙烯二氧噻吩(PEDOT)、聚吡咯(PPy)、聚噻吩(PT)、聚苯胺(Pan)等作为导电高分子。
进行样品中磺胺类药物分析前处理时,按照以下步骤进行:
(1)向储液器内加入第一活化液,使用注射器3加压驱动储液器2内液体流经固相萃取器1内聚合物纳米簇9;
(2)向储液器内加入第二活化液,使用注射器3加压驱动储液器2内液体流经固相萃取器1内聚合物纳米簇9得到已活化的固相萃取器1;
(3)将待测样品液加至储液器2内加压使用注射器3加压驱动储液器2内液体流经已活化的固相萃取器1,然后向储液器2加入淋洗液淋洗,最后向储液器2加入洗脱液进行洗脱,洗脱后的样品液体收集于接收管4中待测。
应用例蜂蜜中磺胺类药物的检测
固相萃取器在使用前,加入200μL第一活化液,加压过液使材料完全浸入溶液后静置1min,再将其排出,以200μL第二活化液润洗即可。
以国标方法确证没有SAs残留的蜂蜜作为空白,准确称取2g空白蜂蜜,加入浓度为5.00μg/mL的20种SAs混合标准溶液100μL,再加入5mL蒸馏水,加盖震荡10min,测定、调节pH值至弱酸性,10000r/min离心5min,取全部上清过固相萃取器,1mL淋洗液淋洗,200μL洗脱液洗脱于收集管中,混匀后进UPLC-MS检测,所得目标峰峰面积记为Ai,以100ng/mL的20种SAs混合标准溶液进样所得的目标峰面积记为As,以Ai/As计算目标物的提取回收率,所得结果如表1所示。
表1固相萃取器对蜂蜜中20种磺胺类药物的提取回收率
应用新型的导电高分子纳米簇制备固相萃取器,建立了基于前处理试剂盒的蜂蜜中20种磺胺类药物的UPLC-MS检测方法。结果显示导电高分子纳米簇对SAs有极大的吸附容量,洗脱简便。该试剂盒操作过程简便,效率高,且精密度高,回收率好,是一种可靠并且相对高效环保的方法,可应用于样品中磺胺类药物的高通量的分析前处理。
20种磺胺:磺胺醋酰(Sulfacetamide,SCM)、磺胺嘧啶(Sulfadiazine,SDZ)、磺胺二甲异嘧啶(Sulfisomidine,SSM)、磺胺对甲氧嘧啶(Sulfadimethoxydiazine,SMT)、磺胺噻唑(Sulfathiazole,STZ)、磺胺吡啶(Sulfapyridine,SPD)、磺胺甲嘧啶(Sulfamerazine,SM1)、磺胺恶唑(Sulfamethoxazole,SMX)、磺胺二甲异噁唑(Sulfafurazole,SSZ)、磺胺二甲嘧啶(Sulfadimidine,SM2)、磺胺甲氧哒嗪(Sulfamethopyrazine,SMP)、磺胺-6-甲氧嘧啶(Sulfamonomethoxine,SMM)、磺胺甲噻二唑(Sulfamethizole,SML)、磺胺氯哒嗪(Sulfachlorpyridazine,SCP)、磺胺甲基异恶唑(Sulfamethoxazole,SMZ)、磺胺苯酰(Sulfabenzamine,SBZ)、磺胺苯吡唑(Sulfaphenazole,SPZ)、磺胺邻二甲氧基嘧啶(Sulfadimoxine,SDX)、磺胺间二甲氧基嘧啶(Sulfadimethoxine,SDM)、磺胺喹噁啉(Sulfaquinoxaline,SQX)。
上述实例只为说明本发明的技术构思及特点,其目的在于让熟悉此项技术的人是能够了解本发明的内容并据以实施,并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所做的等效变换或修饰,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种样品中磺胺类药物分析前处理试剂盒,包括固相萃取器(1),其特征在于所述固相萃取器为锥形过滤管,所述锥形过滤管内设置两纤维团阻挡片(10),所述两纤维团阻挡片(10)间填充有聚合物纳米簇(9),所述锥形过滤管末端通过储液器(2)连接注射器(3),所述注射器(3)驱动储液器(2)内液体流经固相萃取器(1)内聚合物纳米簇(9)。
2.根据权利要求1所述的样品中磺胺类药物分析前处理试剂盒,其特征在于所述试剂盒还包括分别设置在固相萃取器(1)外侧的第一活化液储存器(5)、第二活化液储存器(6)、淋洗液储存器(7)、洗脱液储存器(8)和接收管(4)。
3.一种权利要求1所述的样品中磺胺类药物分析前处理试剂盒在样品中磺胺类药物分析前处理方面的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于所述应用包括以下步骤:
(1)向储液器内加入第一活化液,使用注射器(3)加压驱动储液器(2)内液体流经固相萃取器(1)内聚合物纳米簇(9);
(2)向储液器内加入第二活化液,使用注射器(3)加压驱动储液器(2)内液体流经固相萃取器(1)内聚合物纳米簇(9)得到已活化的固相萃取器(1);
(3)将待测样品液加至储液器(2)内加压使用注射器(3)加压驱动储液器(2)内液体流经已活化的固相萃取器(1),然后向储液器(2)加入淋洗液淋洗,最后向储液器(2)加入洗脱液进行洗脱,洗脱后的样品液体收集于接收管(4)中待测。
5.一种样品中磺胺类药物分析前处理方法,其特征在于所述方法包括以下步骤:
(1)向储液器内加入第一活化液,使用注射器(3)加压驱动储液器(2)内液体流经固相萃取器(1)内聚合物纳米簇(9);
(2)向储液器内加入第二活化液,使用注射器(3)加压驱动储液器(2)内液体流经固相萃取器(1)内聚合物纳米簇(9)得到已活化的固相萃取器(1);
(3)将待测样品液加至储液器(2)内加压使用注射器(3)加压驱动储液器(2)内液体流经已活化的固相萃取器(1),然后向储液器(2)加入淋洗液淋洗,最后向储液器(2)加入洗脱液进行洗脱,洗脱后的样品液体收集于接收管(4)中待测。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于所述方法中第一活化液选自甲醇、乙醇、甲酸、乙酸的一种或两种以上的任意组合。
7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于所述方法中第二活化液选自甲醇、乙醇、水的一种或两种以上的任意组合。
8.根据权利要求5所述的方法,其特征在于所述方法中所述淋洗液选自水、甲酸水溶液、乙酸水溶液、氨水的一种或两种以上的任意组合。
9.根据权利要求5所述的方法,其特征在于所述方法中所述洗脱液选自甲醇、甲酸甲醇溶液、乙酸乙醇溶液、氨化甲醇的一种或两种以上的任意组合。
10.根据权利要求5所述的方法,其特征在于所述方法中所述聚合物纳米簇选自聚3,4-乙烯二氧噻吩(PEDOT)、聚吡咯(PPy)、聚噻吩(PT)、聚苯胺(Pan)形成的纳米簇。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20121010 |