CN102718653A

CN102718653A - 一类防治心、脑血管疾病的前体药物

Info

Publication number: CN102718653A
Application number: CN2012100206039A
Authority: CN
Inventors: 文爱东; 熊利泽; 陈雷; 孙晓莉; 奚苗苗; 权伟
Original assignee: Fourth Military Medical University FMMU
Current assignee: Fourth Military Medical University FMMU
Priority date: 2012-01-30
Filing date: 2012-01-30
Publication date: 2012-10-10

Abstract

本发明公开了一类结构式（I）所示的防治心、脑血管疾病的前体药物及其实用可行的合成路线，相比丹参素镁盐，本发明前体药物稳定性和亲酯性更好。

Description

一类防治心、脑血管疾病的前体药物

技术领域

本发明涉及一类防治心、脑血管疾病的前体药物，属于医药技术领域。

背景技术

世界卫生组织最新的流行病学调查显示，心脑血管疾病死亡的人数位居第一位。可见，研发高效低毒的预防和治疗心脑血管疾病的药物具有重要意义。

临床上，外源性的自由基清除剂被用于心脑血管病的治疗。丹参素属于多酚类自由基清除剂，丹参素对心肌和脑组织具有保护作用；具有缩小心肌及脑组织梗死范围、减轻病程的作用；具有抗动脉粥样硬化及降血脂作用；可预防脑血栓的发生。另一方面，心脑组织缺血时可引起细胞内Ca²⁺浓度的增高，Mg²⁺可以阻止Ca²⁺向细胞内流入，应用镁剂可以减轻心脑血管损伤。发明人研究证明丹参素镁是一种的防治心、脑血管疾病的有效结构。但是，丹参素分子中的两个酚羟基，光照会加速氧化过程。

本发明公开了一类保护了酚羟基的丹参素镁衍生物，成为一类丹参素镁的前药，它的优点是稳定性和亲酯性更好。

发明内容

本发明的目的是提供一种防治心、脑血管疾病的前体药物及其合成方法，初步药效结果显示这类药物对心脑血管损伤具有防治作用。

本发明的实现过程如下：

式（I）所示的酰基化丹参素镁盐，

，

。

一种优选的方案是，R₁和R₂为CH₃CO-。

当R₁和R₂为CH₃CO-，其质谱M/Z为671.43；¹H-NMR（ppm）为7.07-7.34（6H，Ar-H），5.18（2H，-CH），2.94-3.12（4H，-CH2），2.28（12H，-CH3），2.21（6H，-CH3）；使用EDTA滴定Mg²⁺，质量百分含量为3.57～3.59%；其X-射线衍射在22.99、26.74、32.68、40.31、46.87、52.81和58.30 度的2θ处包含强度大于其它峰的特征峰。

上述酰基化丹参素镁盐的制备方法1：丹参素钠在高氯酸催化下，与相应酸酐或酰卤反应得酰基化丹参素，酰基化丹参素用碱调节pH 6-9条件下滴加氯化镁溶液得酰基化丹参素镁盐。

上述酰基化丹参素镁盐的制备方法2：丹参素钠与相应羧酸在缩合剂存在下得到酰基化丹参素，酰基化丹参素用碱调节pH 6-9条件下滴加氯化镁溶液，得酰基化丹参素镁盐，所述缩合剂为1,3-二环己基碳二亚胺（DCC），1,3-二异丙基碳二亚胺（DIC）或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)。

所述碱是碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化钠、氨水。

具体来说，合成方法1：丹参素钠在高氯酸催化下，用酸酐（或酰卤）反应得化合物1， 1用碱调节pH 6-9条件下滴加氯化镁溶液，得镁盐2。重结晶或柱层析纯化。反应主要线路如下（以乙酸酐为例）：

合成方法2：丹参素钠与羧酸(以苯甲酸为例)在缩合剂存在下，得到化合物3， 3用碱调节pH 6-9条件下滴加氯化镁溶液，得镁盐4。重结晶或柱层析纯化。反应主要线路(以苯甲酸为例)如下：

缩合剂为1,3-二环己基碳二亚胺（DCC），1,3-二异丙基碳二亚胺（DIC）或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)。碱可以是碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化钠、氨水等。

附图说明

图1为AcDSS质谱图；

图2为AcDSS-Mg质谱图；

图3为AcDSS-Mg 的X射线粉末衍射图谱；

图4为AcDSS的IR图谱。

具体实施方式

实施例1：

化合物1的合成

在氮气保护下将丹参素钠5.2g和Ac₂O 100ml加入到250ml的三口烧瓶中，冰浴下搅拌30min，滴加入催化量的HClO₄，室温搅拌3h，反应结束后，将反应液倾入碎冰中，用乙酸乙酯萃取，用水洗涤，无水Na₂SO₄干燥。去除溶剂后得到亮黄色油状残余物，快速柱层析，真空抽干后白色粉末状化合物1固体6.5g ，产率84.9%。如图1、4所示，结构表征数据：MS：M/Z =323.20。¹H-NMR（ppm）： 11.56（H，-CO₂H），7.13-7.06（3H，Ar-H），5.32（H，-CH），4.08（2H，-CH₂），2.17（6H，-CH3），1.97（3H，-CH₃）。

化合物2的合成

将化合物1 6.5g加入到50ml水和100ml甲醇的混合溶剂中，加热到45℃，搅拌30min，滴加氨水，至pH=8左右，再滴加氯化镁溶液继搅拌30min后，放置室温。过滤，滤液减压蒸馏得化合物2粗品。将粗品快速柱层析纯化，得到淡黄色化合物2固体粉末3.94g（产率62.7%）。如图2所示，结构表征数据：MS：M/Z =671.43,693.43。¹H-NMR（ppm）： 7.07-7.34（6H，Ar-H），5.18（2H，-CH），2.94-3.12（4H，-CH2），2.28（12H，-CH3），2.21（6H，-CH3）。EDTA-2Na滴定Mg²⁺：W%(Mg²⁺)=3.59% (理论值为3.58%)。X射线粉末衍射见附图3。

实施例2：

化合物3的合成

在氮气保护下将丹参素钠4.4g、苯甲酸10ml、EDC盐酸盐12g、催化剂量的DMAP、100ml二氯甲烷加入到250ml的三口烧瓶中，室温搅拌4h，反应结束后，加水50ml搅拌，分液、水洗有机相两次，有机相去除溶剂后快速柱层析得白色粉末状化合物3固体8.99g，产率88.2%。结构表征数据：MS：M/Z =509.20。¹H-NMR（ppm）： 11.06（H，-CO₂H），8.13-7.00（18H，Ar-H），5.12（H，-CH），3.48（2H，-CH₂）。

化合物4的合成

将化合物3 8.9g加入到50ml水和100ml甲醇的混合溶剂中，加热到45℃，搅拌30min，滴加氨水，至pH=8左右，再滴加氯化镁溶液继搅拌30min后，放置室温。过滤，滤液减压蒸馏得化合物4粗品。将粗品快速柱层析纯化，得到淡黄色化合物4固体粉末3.94g（产率62.7%）。结构表征数据：MS：M/Z =1041.43。¹H-NMR（ppm）： 7.07-8.34（36H，Ar-H），4.68（2H，-CH），2.94-3.12（4H，-CH2），。EDTA-2Na滴定Mg²⁺：W%(Mg²⁺)=2.30% (理论值为2.28%)。

实施例3：乙酰丹参素镁（AcDSS-Mg）的药效学实验

1、试验材料

Sprague-Dawley雄性大鼠64只，重量（230±20）g，由第四军医大学实验动物中心提供；肌酸激酶（CK-MB）试剂盒、乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒、超氧化歧化酶（SOD）试剂盒和丙二醛（MDA）试剂盒，均为南京建成生物研究所产品。

、试验方案及结果

乙酰丹参素镁心肌组织药效学初步评价

①心肌缺血模型的制备

将SD大鼠麻醉后，采用结扎冠状动脉前降支血管方法制备大鼠MI/R（30min/3h）模型：颈正中部切口行气管插管，连接呼吸机行人工呼吸。分离右颈总动脉并行心室导管插管至左心室记录LVSP、LVEDP、+dv/dt、- dv/dt。分离颈静脉用于给药。开胸暴露心脏，3/0号丝线结扎左冠状动脉前降支中上1/3处，心电图ST段抬高为结扎成功指标。缺血30分钟后松开丝线，再灌注3小时。将大鼠随机分为4组：假手术SHAM组；模型MI\R组；MI\R+DSS组(DSS , 30mg/kg)；MI\R+AcDSS-Mg组(AcDSSM-Mg , 45mg/kg)。各给药组均于缺血前20min给药（颈静脉注射）,剂量根据药品说明书和新药的药效曲线确定。

①心肌梗死范围测定

再灌注3h结束后，结扎冠脉，向左心室腔注入3% 伊文蓝（1～2mL）。速取出心脏，冻存于-20℃。用心脏切片器垂直于心脏长轴将其切成1mm厚的薄片，分片置于含2mL 1%TTC（pH 7.4）的12孔培养皿中，37℃孵育15min。用数码相机拍照并输入计算机。采用单盲法分别将伊文蓝染色区（非缺血区）、TTC染色区（红染，缺血但仍存活组织）以及非TTC染色区（梗死心肌)，用SigmaScan 面积测算软件进行计算处理。心肌梗死范围以每一心脏总梗死面积（INF）占总缺血区面积（AAR）的百分比表示。不同处理组大鼠MI/R 3 h 后心肌梗死情况见表1。

②心脏功能检测

通过多导生理记录仪（RM-4200）持续监测大鼠心功能各指标。数据分析系统由计算机自动采集、记录并计算。不同处理组大鼠心肌缺血再灌注3h心功能恢复情况见表2。

③血清CK-MB、LDH活性

于再灌注3h后由颈动脉取血2mL，至于干燥离心管，常温静置30min后，4000r/min离心15min，取血清，严格按照试剂盒说明书操作检测CK-MB、LDH的活性。不同处理组大鼠MI/R 3 h 血清中CK-MB、LDH活性见表3。

乙酰丹参素镁脑组织药效学初步评价

脑缺血再灌注损伤模型制备

根据大脑中动脉闭塞线栓法方法，采用颈内动脉线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉栓塞模型。主要步骤：10％水合氯醛(350mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，分离、结扎并切断右侧颈外动脉，由颈外动脉残端沿颈总动脉和颈内动脉缓慢插入头端膨大的尼龙鱼线约18mm，阻塞大脑中动脉入口造成缺血，缺血3h再灌注，再灌24h后取脑组织材料。假手术组仅分离颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉但不插线。将大鼠随机分为4组：假手术SHAM组；模型MI\R组；MI\R+DSS组(DSS , 30mg/kg)；MI\R+AcDSS-Mg组(AcDSSM-Mg , 45mg/kg)。各给药组均于缺血前20min给药（颈静脉注射）,剂量根据药品说明书和新药的药效曲线确定。

①TYC染色法测定脑梗死范围

采用红四氮唑 (TYC)染色法。大鼠于再灌24h后断头取脑，行2mm厚的冠状切片，共5片，置于2％TTC溶液中37℃孵育30min。正常脑组织被染为深红色，梗死灶呈白色。将染色结果输入计算机，利用图像处理软件(AutoCAD)，分别计算出5个脑片缺血侧的总面积 (正反两侧 )S₁和梗死区域的面积S₂，求出梗死区域占大脑半球总面积的百分比如下：脑梗死面积(％)=S₂/S₁×100％。不同处理组大鼠脑组织I/R 后梗死情况见表4。

②脑损伤保护的抗氧化机制

再灌注24h后，腹腔主动脉取血分离血清，按试剂盒说明书操作测定SOD值，MDA测定采用硫代巴比妥酸法，计算SOD、MDA含量。不同处理组大鼠脑组织SOD活力和MDA含量见表5。

Claims

1.式（I）所示的酰基化丹参素镁盐，

，

。

2.根据权利要求1所述的酰基化丹参素镁盐，其特征在于：R₁和R₂为CH₃CO-。

3.根据权利要求2所述的酰基化丹参素镁盐，其特征在于：其质谱M/Z为671.43。

4.根据权利要求2所述的酰基化丹参素镁盐，其特征在于：¹H-NMR（ppm）为7.07-7.34（6H，Ar-H），5.18（2H，-CH），2.94-3.12（4H，-CH2），2.28（12H，-CH3），2.21（6H，-CH3）。

5.根据权利要求2所述的酰基化丹参素镁盐，其特征在于：使用EDTA滴定Mg²⁺，质量百分含量为3.57～3.59%。

6.根据权利要求2所述的酰基化丹参素镁盐，其特征在于：如图3所示，其X-射线衍射在22.99、26.74、32.68、40.31、46.87、52.81和58.30 度的2θ处包含强度大于其它峰的特征峰。

7.权利要求1所述的酰基化丹参素镁盐的制备方法，其特征在于：丹参素钠在高氯酸催化下，与相应酸酐或酰卤反应得酰基化丹参素，酰基化丹参素用碱调节pH 6-9条件下滴加氯化镁溶液得酰基化丹参素镁盐。

8.权利要求1所述的酰基化丹参素镁盐的制备方法，其特征在于：丹参素钠与相应羧酸在缩合剂存在下得到酰基化丹参素，酰基化丹参素用碱调节pH 6-9条件下滴加氯化镁溶液，得酰基化丹参素镁盐，所述缩合剂为1,3-二环己基碳二亚胺，1,3-二异丙基碳二亚胺或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺。

9.根据权利要求7或8所述的酰基化丹参素镁盐的制备方法，其特征在于：所述碱是碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化钠、氨水。

10.权利要求1所述化合物在制备预防和治疗心、脑血管疾病药物中的应用。