CN102711822A

CN102711822A - 用于施用CD19xCD3双特异性抗体的给药方案

Info

Publication number: CN102711822A
Application number: CN201080048898XA
Authority: CN
Inventors: 迪克·那高森; 彼得·库福尔; 格哈德·祖格梅尔; 帕特里克·鲍耶勒
Original assignee: Micromet GmbH
Current assignee: Amgen Research Munich GmbH
Priority date: 2009-10-27
Filing date: 2010-10-27
Publication date: 2012-10-03
Also published as: IL219301A0; US20120328618A1; PL2493503T5; BR112012009778A2; KR20120099647A; CY1116874T1; AU2010311559A1; KR102406407B1; IL219301A; PL2493503T3; RS54655B1; SMT201500267B; KR101841781B1; US20150071928A1; SG10201406533RA; SI2493503T2; RU2548746C2; CA2774919C; DK2493503T3; KR20180031073A

Abstract

本发明涉及一种用于评估(分析)人类患者的潜在不良反应的风险的方法，所述潜在不良反应的风险是由给患者施用CD19xCD3双特异性抗体而介导的，所述方法包括测定所述患者的B细胞∶T细胞比率，其中约1∶5或更低的比率指示所述患者具有潜在不良反应的风险。因此，本发明还涉及一种用于给B细胞∶T细胞比率为约1∶5或更低的患者施用CD19xCD3双特异性抗体的方法(给药方案)，所述方法包括(a)在第一时间段施用第一剂量的所述抗体；以及不间断地(b)在第二时间段施用第二剂量的所述抗体，其中所述第二剂量超过所述第一剂量。在某些实施方案中，在第三时间段施用第三剂量的所述抗体。该给药方案可用于治疗恶性CD19阳性淋巴细胞的方法，或可用于缓解和/或预防由施用所述双特异性抗体而介导的不良反应的方法。本发明还涉及CD19xCD3双特异性抗体在制备本发明方法所使用的药物组合物中的用途。本发明还公开了包括该方法/给药方案所限定的第一剂量及第二剂量以及任选的第三剂量的药物包或试剂盒。

Description

用于施用CD19xCD3双特异性抗体的给药方案

技术领域

本发明涉及一种用于评估(分析)人类患者的潜在不良反应的风险的方法，所述潜在不良反应的风险是由给所述患者施用CD19xCD3双特异性抗体而介导的，所述方法包括测定所述患者体内B细胞∶T细胞比率，其中约1∶5或更低的比率指示所述患者具有潜在不良反应的风险。因此，本发明涉及一种用于给B细胞∶T细胞比率为约1∶5或更低的患者施用CD19xCD3双特异性抗体的方法(给药方案)，所述方法包括(a)在第一时间段施用第一剂量的所述抗体，以及不间断地(b)在第二时间段施用第二剂量的所述抗体，其中所述第二剂量超过第一剂量。在某些实施方案中，在第三时间段施用第三剂量的所述抗体。该给药方案可应用于用于治疗恶性CD19阳性淋巴细胞的方法，或可应用于用于缓解和/或预防由施用所述双特异性抗体而介导的不良反应的方法。本发明还涉及CD19xCD3双特异性抗体在制备本发明方法所使用的药物组合物中的用途。本发明还公开了药物包或试剂盒，所述药物包或试剂盒包括在本发明的方法/给药方案中定义的第一剂量和第二剂量以及任选的第三剂量的所述抗体。

背景技术

基于抗体的癌症疗法需要具有与癌细胞的表面紧密结合的靶抗原才能起效。通过与表面靶标的结合，抗体可直接向癌细胞传递死亡信号，或者如果所述抗体是双特异性抗体，可通过如募集细胞毒性T细胞而间接向癌细胞传递死亡信号。在理想的治疗方案中，靶抗原在每个癌细胞上大量存在且容易接近，而在正常细胞中不存在、被屏蔽或少量存在。这种情况就为一个治疗窗提供了基础，其中一定量的基于抗体的治疗药物避开正常细胞而有效地攻击癌细胞。

尽管抗体是治疗多种疾病尤其是癌症的有效手段，但是抗体给药未必没有副作用。不良反应可能导致患者健康状况出现可逆或不可逆的变化。由于不良反应可能是有害的且不希望发生的，因此非常期望避免不良反应的发生。然而，虽然已知药物会引发不良反应，但是药物具有显著的有益疗效或甚至可以挽救生命，因此开具并施用药物是不可避免或所接受的。

在临床试验中，可在不良反应(AE)和严重不良反应(SAE)之间进行大体区分。具体来说，不良反应可根据不良反应的通用术语标准(CTCAE)划分为5个等级。1级涉及轻微AE，2级涉及中度AE，3级涉及严重AE，4级涉及致命或致残AE，而5级为涉及AE的死亡。

抗体疗法中观察到的不良反应是发生与输注相关的副作用，如细胞因子释放综合征(“CRS”)。其他被描述为与CRS相关的副作用不仅包括疲劳、呕吐、心动过速、高血压、背痛，还包括如癫痫发作、脑病、脑水肿、无菌性脑膜炎和头痛的中枢神经系统反应(CNS反应)。

不仅在施用与T细胞受体结合的单克隆抗体时观察到细胞因子释放和神经性反应，在施用与T细胞受体的CD3部分结合的CD19xCD3单链双特异性抗体(称为Blinatumomab(MT103))时也能观察到。

Blinatumomab(MT103)是一种以淋巴瘤为靶向的重组双特异性单链CD19xCD3抗体，其与几乎所有的B细胞和B肿瘤细胞表面上的CD19结合，同时可以与T细胞啮合，从而触发T细胞杀死该靶B细胞或B肿瘤细胞。Blinatumomab由组装成单个多肽链的四个免疫球蛋白可变结构域组成。该可变结构域中的两个形成CD19的结合位点，所述CD19是一种在大多数B细胞和B肿瘤细胞上表达的细胞表面抗原。另外两个可变结构域形成T细胞上的CD3复合物的结合位点。Blinatumomab被设计成用于指挥体内细胞毒性或细胞破坏性T细胞来对抗肿瘤细胞，代表了一种治疗癌症的新疗法。目前，Blinatumomab正处于临床试验阶段。

如WO 99/54440中所述，在对B细胞系慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)患者进行重复团注施用Blinatumomab的以往研究中，观察到不良反应。如WO 99/54440的图19和图20所示，响应分别两次输注施用3微克和10微克所述双特异性单链抗体20分钟，均发现了TNF、IL-6和IL-8的释放，每次给药后伴随着细胞因子释放。细胞因子的最大释放量是在施用10微克双特异性单链抗体后观察到的。接下来的临床试验是以团注的方式给B细胞系恶性肿瘤患者施用剂量递增的CD19xCD3双特异性单链抗体，期间也观察到不良反应。根据回顾性分析，22名患者中的7名出现早期神经性反应，包括如错乱、共济失调、言语障碍或定向障碍。

为了尝试更好地控制这些不希望发生的副作用，CD19xCD3双特异性单链抗体的给药方式发生了改变，其中由团注改为更长时间的连续静脉内施用所述抗体。如Bargou等人(Science 321(2008)：974-7)所示，以低至0.005毫克/平方米/天的剂量对非何杰金氏淋巴瘤患者连续给药超过4周，其血液中的淋巴瘤靶细胞被清除。在0.015mg/m²/d剂量水平下，首次观察到部分和全部肿瘤消退，并且以0.06mg/m²/d剂量水平治疗的全部7名患者体内均具有观察到肿瘤消退(上文引用的Bargou等人)。CD19xCD3双特异性单链抗体还导致骨髓和肝脏中肿瘤细胞的清除。然而，尽管这项(还在进行的)研究为CD19xCD3双特异性单链抗体形式在血细胞源癌症的治疗中有治疗潜能这一概念确立了临床证据，但是在上述临床试验过程中仍发现了神经性反应。因此，由于Blinatumomab是一种非常有前景的、可用于治疗非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、急性淋巴母细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)和/或外套细胞淋巴瘤的候选药物，所以在用CD19xCD3双特异性单链抗体治疗有此需要的患者时，高度期望减少或者甚至完全避免不希望的副作用。

显然，要设计一种基于CD19xCD3抗体的、又不会引起CNS(神经性)反应(包括神经性反应)的疗法是有难度的；换言之，希望能提供基于CD19xCD3抗体的药物疗法，患者对其的耐受力有所提升，即不希望的不良反应如CNS反应有所减少或者甚至不发生。

尽管允许更为逐步激活T细胞群的药物手段和方法(参见WO2007/068354)已有助于避免进行CD19xCD3双特异性单链抗体治疗的患者出现严重不良副作用，但遗憾的是这些措施仍不能避免神经性反应，尤其是在抗体给药剂量超过5至10微克/m²/d(即24h)的病例中。

发明内容

因此，本发明的基础技术问题是要提供克服上述难题的给药方案和方法。

本发明解决了这种需求，并就此提供了涉及用于给人类患者施用CD19xCD3双特异性抗体的方法和给药方案的具体实施方案。

本文将对这些具体实施方案进行表征和描述，权利要求中也会有所反映。

应注意到，除非上下文另有明确指代，本文所用的单数形式“一个”、“一种”和“某个(种)”均涵盖复数形式。因此，例如，提及“一种试剂”，包括一种或多种此类不同试剂；而提及“该方法”，就包括提及本领域普通技术人员已知的等效步骤和方法，这些步骤和方法是可改变的，或可用本文描述的方法所取代的。

本发明引用的所有出版物和专利通过引用以其全文整并入。如通过引用并入的资料与本说明书相抵触或不一致，本说明书将优先于任何此类资料。

除非另有指代，在一系列元素之前的术语“至少”应理解为是指该系列中每一个元素。本领域技术人员将识别或仅利用常规实验就能确定本文描述的本发明的具体实施方案的许多等同物。意图这些等同物被本发明涵盖。

除非上下文另外要求，贯穿本说明书始终和下文的权利要求中的词语“包含”和变型如“含有”和“包含着”应理解为指代含有某个指定的整体或步骤或者某些整体或步骤的集合，但不排除任何其他整体或步骤或者整体或步骤的集合。

本说明书全篇引用了多篇文件。无论上文还是下文的本文所引用的每篇文件(包括所有专利、专利申请、科学出版物、制造商的说明书、说明书等)，通过引用以其整体形式并入本说明书。本文均不能理解为承认本发明由于在先发明而无权早于此类公开内容。

如按照本文提供的给药方案，就可以施用CD19xCD3双特异性单链抗体且患者可以耐受，从不良反应角度考虑，尤其是从在抗体(还包括CD19xCD3双特异性抗体)给药期间观察到的包括神经性反应在内的CNS反应角度考虑，这项发现绝对是非同凡响的。

具体地，本发明人观察到，如果那些被施用CD19xCD3双特异性抗体的患者的B细胞∶T细胞比率为约1∶5或更低，他们将出现CNS事件。因此，本发明首次确立了低B细胞∶T细胞比率是在治疗白血病和淋巴瘤中出现的恶性CD19阳性淋巴细胞过程中，发生包括神经性反应在内的不良反应的潜在高风险因素(参见实施例2、3和4)。

特别是，本申请的发明人观察到外周血中B细胞∶T细胞比率低的非何杰金氏淋巴瘤(NHL)患者和急性淋巴母细胞白血病(ALL)患者出现早期神经性反应的风险增加。该神经性反应主要出现在进行CD19xCD3双特异性抗体治疗的第一天或头几天。尤其是，该神经性反应大多数在开始治疗后约12至120小时后出现。这些神经性反应是短暂的、完全可逆的，在停止治疗后3至72小时内可缓解且无后遗症。

这些意外发现是本发明人在用CD19xCD3双特异性抗体进行多项临床试验研究中得到的：

“短期”输注(团注)试验中，22名患者中的7名具有早期神经性反应。所述7名患者中的6名的B细胞∶T细胞比率在治疗前就较低，即B细胞∶T细胞比率为约1∶5或更低。其余15名患者未出现神经性反应，其中仅有1名患者的B细胞∶T细胞比率低。

在NHL临床试验(参见上文引用的Bargou等人)中，一共39名患者接受治疗直至2008年8月。此时，已发现所有因神经性反应而永久终止CD19xCD3双特异性抗体治疗的患者体内B细胞∶T细胞比率低(即B细胞∶T细胞比率的阈值低于1∶5)。特别是，在10名B细胞∶T细胞比率低的患者中观察到5个神经性反应(5/10)，而未发现B细胞∶T细胞比率高(即B细胞∶T细胞比率高于1∶5)的患者具有将致使CD19xCD3双特异性抗体治疗永久终止的神经性反应(0/29)。

此后，建立了一个低B细胞∶T细胞比率的患者(即早期神经性反应风险增加的患者)的特殊群组，以便于对理论概述进行前瞻性分析，特别是为高风险患者寻找缓解步骤。

自从建立了单独的高风险患者群组以来，8名NHL患者接受了前瞻性治疗(截至2009年7月的数据)：6名患者的B细胞∶T细胞比率低，2名患者的B细胞∶T细胞比率高。再次发现没有B细胞∶T细胞比率高的患者具有神经性反应，而6名B细胞∶T细胞比率低的患者中有3名具有神经性反应，从而造成治疗终止。

一共69名NHL患者，包括B细胞慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者和外套细胞淋巴瘤(MCL)患者，接受了团注和连续输注两种方式的CD19xCD3双特异性抗体治疗：

观察到61％的B细胞∶T细胞比率低的患者具有神经性反应。相比之下，只有2％的B细胞∶T细胞比率高的患者出现这些不良反应(参见下述实施例)。

在另一项II期临床试验研究中，通过连续输注的方式给成年ALL患者施用15μgCD19xCD3双特异性单链抗体/天/平方米患者体表面积，给药至少4周。11名B细胞∶T细胞比率低于1∶5的高风险组ALL患者中1名患者出现神经性反应，从而导致治疗终止。相比之下，6名B细胞∶T细胞比率高于1∶5的低风险组患者没有出现神经性反应。

此外，在对39名NHL患者进行的回顾性分析中，确定了外周血中1∶5至1∶10或低于1∶5至1∶10的B细胞对T细胞(B∶T)比率基线是随后发生神经性AE的唯一预测因素。该预测值在另8名患者中得到了前瞻性证实(参见实施例1)。

总之，这些数据确定了低B细胞∶T细胞比率，即约1∶5或更低的B细胞∶T细胞比率，是一个在治疗如NHL、MCL、CLL和ALL的白血病和淋巴瘤中出现的恶性CD19阳性淋巴细胞时，采用CD19xCD3双特异性抗体治疗的患者体内发生不良反应(包括神经性反应)的潜在高风险因素(参见实施例1和4)。

因此，本发明的目的在于，提供一种方法，所述方法允许鉴别在采用CD19xCD3双特异性抗体治疗时可能处于遭受不良反应的风险的患者。该方法将提高药物依从性，因为鉴别处于遭受不良反应的风险的患者，允许调整CD19xCD3双特异性抗体的给药方案。事实上，本发明人已经应用了他们的发现，即约1∶5或更低的B细胞∶T细胞比率可以是一个在采用CD19xCD3双特异性抗体进行治疗时遭受不良反应的潜在风险因素，并由此开发出一种旨在预防和/或缓解这些不良反应的给药方案。

相应地，本发明的第一方面是提供一种用于评估(分析)人类患者的潜在不良反应的风险的方法，所述潜在不良反应的风险是由给所述患者施用CD19xCD3双特异性抗体而介导的，所述方法包括测定来自所述患者的样品中所述患者的B细胞∶T细胞比率，其中约1∶5或更低的比率指示所述患者具有潜在不良反应的风险。

“评估(分析)......风险”是指本发明第一部分所述的方法旨在评估或分析患者是否具有出现不良反应的更高或更低的可能性或概率(即，分别增加的或降低的风险)。相应地，普遍认为风险未必意味着患者会或者不会出现不良反应。

在本发明中，当患者的B细胞∶T细胞比率为约1∶5或更低时，所述患者具有(处于)潜在不良反应(还包括不良反应的发作)的增加的风险；而B细胞∶T细胞比率高于1∶5的患者不具有(不处于)潜在不良反应(还包括不良反应的发作)的风险，或至少具有(处于)降低的风险。

因此，约1∶5或更低的B细胞∶T细胞比率指示不良反应的风险，而高于1∶5的B细胞∶T细胞比率则不指示不良反应的风险。

所以，本发明第一部分所述方法上下文中所使用的术语“指示”是指，如果B细胞∶T细胞比率为约1∶5或更低，则患者的潜在不良反应的风险增加；如果当B细胞∶T细胞比率高于1∶5时，则患者的潜在不良反应的风险降低。

“不良反应”为采用CD19xCD3双特异性抗体治疗患者时由药物治疗引起的有害且不希望的效果。不良反应又称为“副作用”。某些不良反应只在开始治疗、增加治疗强度或终止治疗时出现。本发明人观察到，在采用CD19xCD3双特异性抗体治疗患者时可见的不良反应在开始治疗后约12至120小时出现且是可逆的。

不良反应可能引起医疗并发症。本发明人观察到采用CD19xCD3双特异性抗体治疗的患者出现神经性反应。这些神经性反应如果不能停止或避免，则导致无法顺应CD19xCD3双特异性抗体治疗。

然而，如本文中所述，发明人发现，B细胞∶T细胞比率是患者是否处于潜在不良副作用的风险的指标。具体地，约1∶5或更低的B细胞∶T细胞比率是患者处于潜在副作用的风险的指标，而高于约1∶5的B细胞∶T细胞比率是患者不具有潜在副作用的风险或者至少具有潜在副作用的降低的风险的指标。

如上文所述，本发明第一部分所述的方法用于评估(分析)不良反应的风险，并且评估风险包括评估/分析可能性或概率。因此，提及不良反应的情况下所使用的术语“潜在”指的是就算患者的B细胞∶T细胞比率可能为约1∶5或更低，所述患者不一定会出现不良反应。

同理，就算患者的B细胞∶T细胞比率可能高于约1∶5，所述患者不一定就不会出现不良反应。因此，术语“潜在”意味着，本发明的第一部分的方法提供了针对患者是否会出现不良反应的预测，但不言自明，它无法提供100％可靠的预测，因为除B细胞∶T细胞比率以外，如性别、年龄、体重、营养状况、身体状况、以往药物治疗情况等个体因素也可能对患者是否会出现不良反应造成影响。

根据本发明，不良反应的优选表征是神经性反应(本文中有时也称为“CNS反应”或“CNS事件”，鉴于此，这些术语可等同使用)。所述神经性反应优选为选自错乱、共济失调、定向障碍、言语障碍、失语症、言语损伤、小脑症状、震颤、失用症、癫痫发作、癫痫大发作抽搐、瘫痪以及平衡紊乱。

不良反应的程度可例如根据NCI不良反应的通用术语标准(CTCAE)3.0版(出版日：2003年12月12日)进行测量。级别是指不良反应的严重性。3.0版CTCAE对每种不良反应采用独特的严重性临床描述而示出了1级到5级：

1级：轻微不良反应

2级：中度不良反应

3级：严重不良反应

4级：致命或致残的不良反应

5级：患者死亡

“患者”是即将或正在采用CD19xCD3双特异性抗体进行治疗的人个体。根据本发明，患者疑似或被认为具有或者已经具有恶性CD19阳性淋巴细胞(尤其是B细胞)。在后一种情况下，所述患者已被诊断为具有此类细胞。这些恶性CD19阳性淋巴细胞(尤其是B细胞)出现在正发展白血病和/或淋巴瘤的患者体内，以及/或者出现在患有白血病和/或淋巴瘤的患者体内。因此根照本发明，患者需要治疗恶性CD19阳性淋巴细胞。优选地，即将或正在采用CD19xCD3双特异性抗体进行治疗的患者是根据本文所述的本发明第一部分的方法诊断的(或已经被诊断的)。

本发明第一部分所述方法的上下文中所使用的“由......介导的”是指，患者可能或可能不出现的不良反应是由施用CD19xCD3双特异性抗体引起的。换言之，CD19xCD3抗体是可能导致患者出现潜在不良反应的成因。

可以通过团注给药或者连续给药的形式进行给药，优选连续给药。

根据本发明，术语“样品”意指从人类患者获得的任何生物样品，所述样品含有多核苷酸或多肽或其部分。生物样品包括体液(如血液、血清、血浆、尿液、唾液以及脊髓液)和其中发现恶性CD19阳性淋巴细胞的组织来源。从患者获得活组织切片和体液的方法是本领域所熟知的。一般来说，优选来源是含有外周血单核细胞(PBMC)、特别是B细胞和T细胞的生物样品。含有外周血单核细胞(PBMC)、特别是B细胞和T细胞的的样品优选取自人类患者的外周血。

其他优选样品为全血、血清、血浆或滑液，最优选的是血浆或血清。然而，尤其优选的是来自人类患者的外周血的样品。

本文中所用的“B细胞∶T细胞比率”是指B细胞数量与T细胞数量的比率。优选地，测定取自人类患者的样品中的所述比率。优选地，所述样品取自人类患者的外周血。例如，外周血样品中B细胞或T细胞的数量可通过本领域通常采用的任何方法测定，如通过FACS分析法。

B细胞∶T细胞比率优选为约1∶5或更低，包括B细胞∶T细胞比率为约1∶6、1∶7、1∶8、1∶9、1∶10、1∶11、1∶12、1∶13、1∶14、1∶15、1∶20、1∶100、1∶200、1∶400、1∶500、1∶1000、1∶2000、1∶3000、1∶4000、1∶5000或甚至更低，优选为1∶9、1∶10、1∶50、1∶100、1∶500、1∶1000，特别优选为1∶9。

“测定B细胞∶T细胞比率”包括：

(a)测定来自患者的样品中的、优选患者的外周血样品中的B细胞总数；

(b)测定来自患者的样品中的、优选患者的外周血样品中的T细胞总数；

(c)计算步骤(a)中B细胞数量与步骤(b)中T细胞数量的比率，从而得到B细胞∶T细胞比率。

值得注意的是，低B细胞∶T细胞比率还可视为高T细胞∶B细胞比率，反之亦然。因此，本文提供的针对低B细胞∶T细胞比率的比率应相应地颠倒。

相比之下，B细胞∶T细胞比率高于约1∶5(优选1∶9)的患者，包括B细胞∶T细胞比率高于约1∶4、1∶3、1∶2、1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1、8∶1、9∶1、10∶1或更高的患者，在施用CD19xCD3双特异性抗体时，遭受潜在不良反应的风险降低。

因此，本发明还预见了一种用于评估(分析)人类患者的潜在不良反应的风险的方法，所述潜在不良反应的风险是由给所述患者施用CD19xCD3双特异性抗体而介导的，所述方法包括测定来自所述患者的样品中所述患者的B细胞∶T细胞比率，其中高于约1∶5(优选1∶9)的比率指示所述患者具有潜在不良反应的风险低。

发明人观察到B细胞∶T细胞比率为约1∶5或更低的患者处于潜在不良反应的增加的风险，由此得出允许采用CD19xCD3双特异性抗体治疗这些患者的概念。考虑到这点，已经阐明，在能够加大剂量之前，需要通过施用低剂量抗体若干天而使此类高风险患者的T细胞预适应或部分激活。因此已发现，每个时间单位给药剂量的显著下降提高高风险患者对所述抗体的耐受性。

实质上，本发明人发现，使患者在采用CD19xCD3双特异性抗体治疗之前“适应”CD19xCD3双特异性抗体有益于避免不希望的不良反应(特别是不希望的神经性反应)(参见实施例6和7)。

因此，本发明的第二方面涉及一种用于给B细胞∶T细胞比率为约1∶5或更低的人类患者施用CD19xCD3双特异性抗体(给药方案)的方法，所述方法包括：

(a)在第一时间段施用第一剂量的所述抗体；以及不间断地

(b)在第二时间段施用第二剂量的所述抗体；

其中所述第二剂量超过所述第一剂量。

本发明上下文中的术语“方法”应理解为包括用于本发明的方法的“给药方案”。

本发明的上下文中“施用CD19xCD3双特异性抗体”或“正施用CD19xCD3双特异性抗体”或其任意语法形式是指CD19xCD3抗体是以药物组合物的形式，所述药物组合物任选地含有药学上可接受的载体。因此，应理解为给人类患者施用含有CD19xCD3双特异性抗体的药物组合物。

所有语法形式的术语“施用(给药)”意指CD19xCD3双特异性抗体(以药物组合物的形式)作为单独的治疗药剂或与其他治疗药剂相结合地给药。

因此预见到，本发明的药物组合物用于协同治疗方法，即与其他药剂或药物一起协同给药，例如，其他用于治疗患者的恶性CD19阳性淋巴细胞的药物，以及/或者在本发明所述方法的情况下可能有益的任何其他治疗药剂。

例如，如果实施本发明所述方法以用于治疗B细胞急性淋巴母细胞白血病或侵袭性NHL，它可与鞘内化疗(inthrathecal chemotherapy)有利地结合，从而清除CNS中的靶B细胞。例如，可以在根据本文中描述的方法施用CD19xCD3双特异性单链抗体之前进行髓内化疗。

本文中所述药物组合物的给药优选为静脉内给药。情况为，在本发明所述方法中，步骤(a)中的施用途径以及/或者步骤(b)中的施用途径为静脉内给药。可通过团注或连续(持续)给药，优选连续给药。

CD19xCD3双特异性抗体(例如以药物组合物的形式)的给药可以为团注或连续(或有时本文也称为持续)给药，优选连续或持续给药。连续给药是指基本上无间断地给药。“基本上无间断”包括连续给药但通常不含连续流动或空间延伸。

在某些实施方案中，所述的第一剂量并无治疗活性，即其为亚治疗剂量。为实现本发明的目的，5μg/m²/d或更低的剂量被当做是亚治疗性的，但并无严格限制。

在本发明的一个优选实施方案中，第二剂量具有治疗活性。

“治疗有效量”或“有治疗活性的”意指给所施用的目标产生疗效的CD19xCD3双特异性抗体的剂量。

确切剂量将取决于治疗的目的，并且是本领域技术人员运用已知技术可以确定的。如本领域所熟知的以及上文所述，可能需要根据年龄、体重、基本健康状况、性别、饮食习惯、药物相互作用以及情况的严重性进行调整，并且该调整是本技术领域技术人员通过常规实验可以确定的。本发明所述的各方法或方法步骤的疗效可另外通过所有已有指示疗效的方法和途径检测。例如预见到，可以通过外科切除或活组织检查受影响的组织/器官，随后用免疫组化(IHC)或比较免疫学技术分析的方式来检测疗效。或者还预见到，检测患者血清内肿瘤标记物(如果存在)，来判定治疗方法是否已产生疗效。此外或可选地，还可以评估相应患者的整体状况(身体健康、有幸福感、肿瘤介导的病症的减少等)，从而帮助技术从业者评价是否已产生疗效。技术人员知道许多能让他或她观察到本发明所述化合物疗效的其他方法。

本发明的第三方面涉及一种用于治疗B细胞∶T细胞比率为约1∶5或更低的人类患者的恶性CD19阳性淋巴细胞的方法，所述方法包括：

(a)在第一时间段施用第一剂量的CD19xCD3双特异性抗体；以及不间断地

(b)在第二时间段施以第二剂量的所述抗体；

其中所述第二剂量高于所述第一剂量。

白血病及/或淋巴瘤中发现恶性CD19阳性淋巴细胞(特别是B细胞)。因此，在一个优选实施方案中，CD19阳性淋巴细胞是淋巴瘤或白血病细胞。

“恶性”描述了导致逐步恶化的疾病、特别是淋巴瘤或白血病以及本文中所述疾病的淋巴细胞(特别是B细胞)。该术语是对癌症(在本发明中就是淋巴瘤和白血病以及本文中所述疾病)的最常见的描述。恶性CD19阳性淋巴细胞(特别是B细胞)无法自己限制生长，能侵入相邻组织中，还可能扩散到远距离组织(转移)。本文中所用的“恶性”与癌性同义。

然而，由于“正常”(非恶性的)淋巴细胞(特别是B细胞)也表达CD19，预期CD19xCD3双特异性抗体也结合这些正常淋巴细胞(特别是B细胞)，并且一旦募集细胞毒性T细胞(由于CD19xCD3双特异性抗体的第二特异性)，造成这些正常B细胞减少。但是，预期这些正常B细胞群在没有CD19xCD3双特异性抗体情况下将重建。Leandro及同事观察到，风湿性关节炎患者体内B细胞在因抗-CD20抗体导致的B细胞损耗后重建(Arthritis Rheum.2006Feb；54(2)：613-20)。如CD20，CD19同样在几乎所有B细胞上表达，可预期B细胞在因CD19xCD3双特异性抗体而损耗后也将重建。

淋巴瘤优选地是惰性或侵袭性B细胞非何杰金氏淋巴瘤(B NHL)、外套细胞淋巴瘤(MCL)或慢性淋巴白血病(CLL)。在本发明的含义内，术语“B细胞非何杰金氏淋巴瘤”或“B细胞源非何杰金氏淋巴瘤”包括惰性及侵袭性B细胞非何杰金氏淋巴瘤(B NHL)。本文中所用的术语“惰性或侵袭性B细胞非何杰金氏淋巴瘤(B NHL)”指的是恶性B细胞源肿瘤性疾病。惰性B NHL是低度恶性淋巴瘤。侵袭性B NHL是高度恶性淋巴瘤。B细胞非何杰金氏淋巴瘤(B NHL)可能有利地是滤泡性淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤、边缘区细胞淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤(MCL)、弥漫性大型B细胞淋巴瘤(DLBCL)、伯基特氏淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL/CLL)以及任意其它B细胞源亚型。本文中所用的术语“B细胞白血病”可能有利地是任意B细胞白血病(如慢性淋巴细胞白血病或急性淋巴细胞白血病)。更多参考参见如http://www.cancer.org。优选地，如以下实施例所示，惰性B细胞非何杰金氏淋巴瘤可采用针对性抗人CD3及人CD19的双特异性单链抗体进行治疗。

白血病优选地是B细胞急性淋巴母细胞白血病(ALL)。

本发明的第四方面涉及一种方法，用于缓解和/或预防对B细胞∶T细胞比率为1∶5或更低的患者施以CD19xCD3双特异性抗体而介导产生的不良反应，所述方法包括：

(a)在第一时间段中施以第一剂量所述抗体，不间断的

(b)在第二时间段中施以第二剂所述抗体

其中所述第二剂的剂量高于第一剂量。

不良反应优选的是优选自错乱、共济失调、定向障碍、言语障碍、失语、言语障碍、小脑症状、震颤、失用、癫痫发作、癫痫大发作抽搐、瘫痪以及平衡紊乱的一种或多种神经性反应(参见实施例2和3)。

具体地，在用CD19xCD3双特异性抗体进行治疗的起始阶段发现的神经性反应包括如错乱和定向障碍。文中所用的“错乱”是指丧失下述能力：通过时间、地点以及个人身份将自己正确定位于世界的定向能力，和正确回忆在先事件或学习新事物的记忆能力。患者通常难以集中精力，思维不仅模糊不清而且经常显著变慢。具有神经性反应的患者还会失忆。错乱经常导致识人和/或地点或者辨别时间和日期的能力丧失。感到定向障碍在错乱中是普遍的，决策能力受损。神经性反应还包括说话不清和/或选词困难。此类障碍能损害语言表达和理解二者以及读写。伴随着神经性反应，可能某些患者除了尿失禁还出现眩晕和头昏。

在用CD19xCD3双特异性抗体治疗B细胞依赖性淋巴或白血病恶性肿瘤时，出现的神经性反应还受以下因素影响：

1.药物的存在

CD19xCD3双特异性抗体将T细胞毒性重新靶向如B细胞淋巴瘤或白血病细胞中存在的恶性CD19阳性淋巴细胞。鉴于此，可以合理推测患者体内存在的CD19xCD3双特异性抗体正是引发不良反应的原因。此外，仅在CD19xCD3双特异性抗体具有生物学活性的身体部分观察到副作用。因此，推定用CD19xCD3双特异性抗体进行治疗而引发的神经性反应取决于患者脑脊液(CSF；液体)中所述抗体的出现。CD19xCD3双特异性抗体以及T细胞只在低B细胞∶T细胞比率的NHL患者的脑脊液中发现，这一事实可以支持上述推定。如文中所述，此类患者群在接受抗体治疗后出现神经性反应的风险高。这一发现可表明，CD19xCD3双特异性抗体能够进入高风险NHL和ALL患者的分开血管和CNS(包括脑部)的血管周隙。在那儿，CD19xCD3双特异性抗体随后结合T细胞来靶向局部B细胞(不论是良性的还是恶性的)，这可能导致局部细胞因子释放，随后可引起神经性反应。

2.药物的剂量

另外，神经性反应看起来取决于CD19xCD3双特异性抗体的剂量。例如，在高风险患者组中，以5μg/m²体表面积进行CD19xCD3双特异性抗体连续给药时没有观察到神经性反应，但以15μg/m²体表面积或更高进行CD19xCD3双特异性抗体连续给药时，观察到神经性反应。由于这个原因，如文中所述，低于5μg/d/m²的剂量被认为是亚治疗性的。从示于所附实施例的数据明显可见药物剂量的作用。该观察发现可提示，在低B细胞∶T细胞比率的高风险患者中，神经性反应是剂量依赖性的。

3.靶细胞和效应细胞的存在

如前所述，推定CD19xCD3双特异性抗体治疗时出现的神经性反应取决于PVS/CNS中存在i)靶细胞，即携带CD19-抗原的B细胞以及ii)效应细胞，即携带CD3抗原的细胞毒性活性T细胞。

鉴于此，假设来自PVS/CNS的例如靶B细胞的损耗应该会导致避免神经性反应，这是很有趣的。实际上，这正是在所提到的II期研究中所观察到的，在该II期研究中，目前正在用CD19xCD3双特异性抗体治疗B细胞系急性淋巴母细胞白血病(ALL)患者。

在ALL中，通常在CNS中白血病病灶的发生率较高。因此，每位加入文中所述II期临床研究的ALL患者过去都已接受过标准ALL疗法，包括静脉内甲氨蝶呤和/或鞘内化疗，以预防中枢神经系统旧病复发。除此之外，他们中的某些人还接受轴索(neuroaxis)辐射治疗。此后，ALL患者接受了一项巩固治疗，即连续给药15μg/d/m²的CD19xCD3双特异性抗体的若干次为期四周的治疗周期。至今为止，17名用CD19xCD3双特异性抗体治疗的ALL患者中仅有1名出现了神经性反应。该名患者是11名属于B细胞∶T细胞比率低于1∶5的高风险组患者当中的一名。6名B细胞∶T细胞比率高于1∶5的低风险组患者无一出现神经性反应。因此可以假设，所述(症状前)中枢神经系统(CNS)治疗降低了ALL患者出现神经性反应的风险，原因在于已经从PVS和CNS中(包括脑部)除去了B淋巴靶细胞。然而，因这些组织中无B靶细胞，细胞毒性T细胞没有被完全激活。因此，所述患者群观察到的神经性反应出现频率较低。

因此，在上述PVS/CNS中有靶B细胞的情况下，缺少上述某种因素可能有助于预防神经性反应。然而，例如鞘内化疗并不是NHL治疗的可选疗法。举例来说，鞘内化疗在惰性NHL治疗中不起作用，而对于侵袭性NHL，尚不清楚鞘内化疗是否可作为可选治疗方案。此外，鞘内化疗对ALL患者具有高毒性，因此涉及相当大的健康风险。

鉴于上文所述，要减少上述任一指示因素而不丧失疗效是一项不轻松的任务，因为比如要避免NHL的PVS/CNS中存在B细胞并不容易实现。此外，已经发现，包括预给药或协同给药高剂量类固醇在内的其他措施无法预防高风险患者的神经性反应。

然而，通过采用本发明所述的方法/给药方案，可以为处于此类不良反应高风险的患者(如果他们的B细胞∶T细胞比率约为1∶5或更低的话)缓解和/或预防不良反应的发生。本发明预见了提供甚至不受上述可影响采用CD19xCD3双特异性抗体治疗的因素影响的给药方案(方法)。

因此，本发明的优选方面涉及一种用于评估(分析)人类患者的潜在不良反应的风险的方法，所述潜在不良反应的风险是由给人类患者施用CD19xCD3双特异性抗体而介导的，所述方法包括测定来自所述患者的样品中B细胞∶T细胞比率，其中约1∶5或更低的比率指示所述患者具有潜在不良反应的风险，其中给所述患者：

(a)在第一时间段施用第一剂量的所述抗体；不间断地

(b)在第二时间段施用第二剂量的所述抗体；

其中所述第二剂量高于所述第一剂量；

以用于

(i)治疗恶性CD19阳性淋巴细胞；和/或

(ii)缓解和/或预防由CD19xCD3双特异性抗体的施用介导的不良反应。

优选地，在此优选方面，如下文所述，在第三时间段给患者施用以第三剂量的所述抗体。相应地，文中在该三阶段方法(给药方案)情况下所述的具体实施方案和方面可应用于该优选方面。

本发明所述方法的一方面，所述第二时间段超过所述第一时间段。术语“超过”是指第二时间段至少比第一时间段长一天。

本发明所述的每个方法(给药方案)可以重复比如一次、两次、三次、四次、五次、六次或更多次；并且在任何情况下，只要对缓解和/或治疗患者的恶性CD19阳性淋巴细胞、进而治疗淋巴瘤或白血病产生有益的作用，可尽可能多地重复。按照本发明的教导，从业者可根据患者的B细胞∶T细胞比率来决定患者是否需要提前通过采用本发明所述的给药方案(即在施用高剂量CD19xCD3双特异性抗体之前施用低剂量，以使患者“适应”)使患者“适应”进一步的采用CD19xCD3双特异性抗体的治疗。

应理解，本文所述的剂量或天的范围用量通过为1、2、3、4或5的增量进行示例。然而在增量高于1的情况下，这些范围还包括较小的增量，例如以增量为1示例的那些范围(10至30包括如10、11、12、13、13等直至30)，或再更小的增量，如小数点后的数值。

本发明的另一方面预见了所述第一时间段为至少3天，不排除更长的时间段，如8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。由此，“更长”不限于1(一)整天为最小的时间单位，即也可以是1/2天或完整小时数。但最小时间单位优选是一整天。

相应地，所述第一时间段超过3天。更优选地，预见到所述第一时间段为3到10天，特别优选7天。

文中所用的定义为“X至Y”的时间区间等同于定义为“X和Y之间”的时间区间。这两种时间区间具体都包括上限和下限。即意味着例如时间区间为“3至10天”或在“3至10天”之间包括1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天和/或8天。

如文中所述，本发明人观察到，在第一时间段使B细胞∶T细胞比率为约1∶5或更低的人类患者“适应”采用CD19xCD3双特异性抗体的治疗，允许在第二时间段采用增大的第二剂量的抗体治疗该人类患者，借此可以更好地控制不良反应(特别是神经性反应)，即可避免不良反应的发生，或至少将不良反应保持在依据CTCAE的可接受级别内。

然而，为达到此改善目的，需通过在第一时间段给B细胞∶T细胞比率为约1∶5或更低的人类患者施用第一剂量的抗体(其中所述第一剂量低于后续(第二)剂量)，而使其“适应”CD19xCD3双特异性抗体。给药可以是团注给药或连续给药，优选连续给药。

与第一时间段的持续时间相同，第二时间段的持续时间可以根据例如人类患者的年龄、性别、体重等而改变。

因此，本发明的再一方面预见了所述第二时间段为最少18天长，不排除甚至更长的时间段，如19天、20天、25天、30天、35天、40天、45天、49天、50天、55天、60天、65天、60天、65天、70天、75天、80天、81天、82天、83天、84天、85天、86天、87天、88天或90天。据此，“更长”不限于1(一)整天为最小的时间单位，即也可以是1/2天或完整小时数。但最小时间单位优选是一整天。

相应地，所述第二时间段超过18天。更优选地，预见到所述第二时间段为18到81天，特别优选21天或49天。

文中所用的定义为“X至Y”的时间区间等同于定义为“X和Y之间”的时间区间。这两种时间区间具体都包括上限和下限。即意味着如时间区间为“18至81天”或在“18至81天”之间包括1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、32天、34天、36天、38天、40天、42天、44天、46天、48天、50天、52天、54天、56天、58天、60天、61天、62天、63天和/或64天。

在本发明方法/给药方案的更优选的实施方案中，所述第一时间段为3天至10天，而所述第二时间段为18天至81天。

在甚至更优选的实施方案中，所述第一时间段为7天，所述第二时间段为21天或49天。

在文中所述临床试验中，观察到治疗NHL的剂量15μg/m²/d导致在计算机断层扫描中可见的肿瘤收缩。还观察到ALL治疗中的剂量15μg/m²/d导致微小残留病，甚至可以清除微小残留病。

微小残留病(MRD)是指治疗期间或治疗后，当患者处于缓解期(没有疾病的症状或迹象)时患者体内残留的少量白血病/淋巴瘤细胞。至少十年前还没有足够灵敏的评估/检测癌症的方法来检测MRD。但现在已有非常灵敏的、基于DNA、RNA或蛋白的分子生物学检测方法，这些方法可测量组织样品中微量水平的癌细胞，有时可达百万正常细胞中存在1个癌细胞的水平。

在癌症、尤其是白血病的治疗中，MRD检测具有几项重要作用：判定治疗是否根除癌症或这是否有残留，从而比较不同治疗的功效，监测患者缓解期状况以及白血病或癌症的复发，以及选择最能满足这些需求的治疗手段(个性化治疗)。

因此，在本发明方法/给药方案的又一方面中，所述第一剂量为1至15μg/m²/d，即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15μg/m²/d。特别优选的剂量为5或15μg/m²/d。

文中所用的定义为“X和Y之间”的剂量区间等同于定义为“X至Y”的剂量区间。这两种剂量区间具体都包括上限和下限。即意味着例如剂量区间为在“1和15之间”或“1至15”包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15μg/m²/d的剂量。

“d”表示一天。

“m²”表示一平方米患者体表面积(BSA)。“正常”BSA的平均值一般取为成人约1.73m²、新生儿约0.25m²、两岁儿童约0.5m²、9岁儿童约1.07m²、10岁儿童约1.14m²、12-13岁儿童约1.33m²，而男性约为1.9m²，女性约为1.6m²。

然而，还可以用以下公式之一更为精确地计算BSA(在计算BSA时，以下每个公式都可以使用)：

-Mosteller公式(Mosteller，N Engl J Med 1987 Oct 22；317(17)：1098)：

BSA(m²)＝([身高(cm)x体重(kg)]/3600)^1/2或以英寸和磅计：

BSA(m²)＝([身高(in)x体重(lbs)]/3131)^1/2

-DuBois公式(DuBois，Arch Int Med 1916 17：863-871)：

BSA(m²)＝0.007184x身高(cm)^0.725x体重(kg)^0.425

-Haycock公式(Haycock，The Journal of Pediatrics 1978 93：1：62-66)：

BSA(m²)＝0.024265x身高(cm)^0.3964x体重(kg)^0.5378

-Gehan公式(Gehan，Cancer Chemother Rep 1970 54：225-35)：

BSA(m²)＝0.0235x身高(cm)^0.42246x体重(kg)^0.51456

-Boyd公式(Boyd，University of Minnesota Press，1935)：

BSA(m²)＝0.0003207x身高(cm)^0.3x体重(克)^{(07285-(0.0188xlog10(克)}

术语“μg”包括“CD19xCD3双特异性抗体制备物的微克数”。优选地，不超过10％的所述CD19xCD3双特异性抗体制备物折叠错误。由此可知，在优选的实施方案中，正确折叠的CD19xCD3双特异性抗体占90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至达到100％。可想象到，抗体制备物可能任选地包含其他成分，如冻干保护剂、表面活性剂、填充剂、粘合剂及/或膨胀剂等。优选地，这些其他成分的含量没有包括在本发明“剂量”和/或方法(给药方案)所用的术语“μg”内。

例如，1μg/m²/d的剂量是指1μg CD19xCD3双特异性抗体在一天内对每平方米人体表面均匀或连续给药。“在一天内连续”是指允许无间断的长期进行的输注。

本发明所述方法/给药方案的再一个方面中，所述的第二剂量处于15至60μg/m²/d，或15至90μg/m²/d，即15、20、25、30、35、40、45、50、55和60μg/m²/d，或15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、70、80和90μg/m²/d。特别优选的剂量是60或90μg/m²/d。因而所述第二剂量具有治疗活性。

在优选的实施方案中，所述第一剂量为5至15μg/m²/d，而第二剂量为15至60或15至90μg/m²/d。

文中所用的定义为“X与Y之间”的剂量区间等同于定义为“X至Y”的剂量区间。这两种时间区间具体都包括上限和下限。即意味着如剂量区间为在“15与60之间”或“15至60”包括15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59和/或60μg/m²/d的剂量。

应理解，本文所述的范围通过为5的增量进行示例。然而，这些范围还包括较小的增量，如以增量为1示例的那些范围(10至30包括如10、11、12、13、13等直至30)，或再更小的增量，如小数点后的数值。

优选地，对于治疗恶性CD19阳性淋巴细胞，或对于缓解和/预防由施用CD19xCD3双特异性抗体而介导的不良反应，用于施用CD19xCD3双特异性抗体的方法不包括以下给药方案：

(i)按5μg/m²双特异性抗体的剂量给药一天，随后在该时间段的剩余时间里(第二天以及接下来连续的每一天)以15μg/m²为日剂量给药；以及/或者

(ii)按15μg/m²双特异性抗体的剂量给药一天，随后在该时间段的剩余时间里(第二天以及接下来连续的每一天)以45μg/m²为日剂量给药；以及/或者

(iii)按5μg/m²双特异性抗体的剂量给药一天，再按15μg/m²给药一天，随后在该时间段的剩余时间里(第三天以及接下来连续的每一天)以45μg/m²为日剂量给药；以及/或者

(iv)按少于10-80μg/m²双特异性抗体的剂量给药一天，随后(第二天以及接下来连续的每一天)以10-80μg/m²的剂量给药；以及/或者

(v)按少于10-80μg/m²双特异性抗体的剂量给药一天，再按少于10-80μg/m²的剂量给药一天，随后(第三天以及接下来连续的每一天)以少于10-80μg/m²的剂量给药。

如文中所述，B细胞∶T细胞比率高于1∶5的患者不必须通过本发明的给药方案适于CD19xCD3双特异性抗体的治疗。这些患者出现潜在不良反应的风险较低，可以以5μg至75μg/平米体表面积/天的恒定剂量接受CD19xCD3双特异性抗体给药而治疗至少4周。所述给药优选连续给药。

在本发明方法(给药方案)的另一个实施方案中，所述方法还包括在第一和第二时间段的第一剂量和第二剂量后在第三时间段施用第三剂量的所述抗体。因此，本发明提供了一种三3阶段方法(给药方案)。

第三剂量的给药是静脉内给药。可以团注的形式或连续地给药，优选连续给药。

在本发明所述方法的一方面，所述第三时间段超过所述第一和第二时间段。术语“超过”是指第三时间段至少比第一和第二时间段长一天。

与第一和第二时间段的持续时间相同，第三时间段的持续时间可以根据例如人类患者的年龄、性别、体重等而改变。

本发明的三阶段给药方案方面预见到，所述第一时间段为最少3天长，不排除甚至更长的时间段，如8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。由此，“更长”不限于1(一)整天为最小的时间单位，即也可以是1/2天或完整小时数。但最小时间单位优选是一整天。

文中所用的定义为“X至Y”的时间区间等同于定义为“X和Y之间”的时间区间。这两种时间区间具体都包括上限和下限。即意味着如时间区间为“3至10天”或在“3至10天”之间包括1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天和/或8天。

本发明的三阶段给药方案方面预见到，所述第二时间段为最少3天长，不排除甚至更长的时间段，如8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。由此，“更长”不限于1(一)整天为最小的时间单位，即也可以是1/2天或完整小时数。但最小时间单位优选是一整天。

本发明的三阶段给药方案方面预见到，所述第三时间段为最少8天长，不排除甚至更长的时间段，如8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、32天、34天、36天、38天、40天、42天、、44天、46天、48天、50天、52天、54天、56天、58天、60天、61天、62天、63天、64天、65天、66天、67天、68天、69天、70天和/或71天。由此，“更长”不限于1(一)整天为最小的时间单位，即也可以是1/2天或完整小时数。但最小时间单位优选是一整天。

因此，所述第一时间段超过8天。更优选地，预见到所述第一时间段为8到78天，特别优选14天或42天。

文中所用的定义为“X至Y”的时间区间等同于定义为“X和Y之间”的时间区间。这两种时间区间具体都包括上限和下限。即意味着例如时间区间为“18至78天”或在“18至78天”之间包括1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、32天、34天、36天、38天、40天、42天、44天、46天、48天、50天、52天、54天、56天、58天、60天、61天、62天、63天、64天、65天、66天、67天、68天、69天、70天和/或71天。

在本发明的三阶段方法/给药方案的更优选的实施方案中，所述第一时间段为3至10天，所述第二时间段为3至10天，而所述第三时间段为8至78天。

在甚至更优选的实施方案中，所述第一时间段为7天，所述第二时间段为7天，而所述第三时间段为14天或42天。

在本发明三阶段方法/给药方案的实施方案中，所述第三剂量超过所述第一剂量和第二剂量。所述第二和第三剂量优选地具有治疗活性。值得注意的是，所述第二剂量超过所述第一剂量。

因此，在本发明三阶段方法/给药方案的另一方面，所述第一剂量为1至15g/m²/d，优选为5至15μg/m²/d，即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15μg/m²/d。特别优选的剂量为5或10μg/m²/d。

在本发明三阶段方法/给药方案的另一方面，所述第二剂量为1至15μg/m²/d，优选为5至15μg/m²/d，即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15μg/m²/d。特别优选的剂量为15μg/m²/d。

文中所用的定义为“X与Y之间”的剂量区间等同于定义为“X至Y”的剂量区间。这两种剂量区间具体都包括上限和下限。即意味着如剂量区间为在“1与15之间”或“1至15”包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15μg/m²/d的剂量。

在本发明三阶段方法/给药方案的另一方面，所述第三剂量为15至60μg/m²/d，优选为20至60μg/m²/d，即15、20、25、30、35、40、45、50、55和60μg/m²/d。特别优选的剂量为60μg/m²/d。或者，所述第三剂量为15至90μg/m²/d，优选为60至90μg/m²/d，即15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、70、80和90μg/m²/d。

在本发明三阶段方法/给药方案的优选实施方案中，所述第一剂量为1至15μg/m²/d，所述第二剂量为1至15μg/m²/d，而所述第三剂量为15至60或15至90μg/m²/d。

特别优选地，所述第一剂量为5μg/m²/d，所述第二剂量为15μg/m²/d，而所述第三剂量为60μg/m²/d。或者，所述第三剂量可为90μg/m²/d。

文中所用的定义为“X与Y之间”的剂量区间等同于定义为“X至Y”的剂量区间。这两种剂量区间具体都包括上限和下限。即意味着例如剂量区间为在“15与60之间”或“15至60”包括15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59和/或60μg/m²/d的剂量。同样地，意味着例如剂量区间为在“15与90之间”或“15至90”包括15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、86、87、88、89或90μg/m²/d的剂量。

鉴于本发明人观察到三阶段(步)方法/给药方案有助于避免本文中所述的不良反应，本发明涉及一种治疗患者体内的恶性CD19阳性淋巴细胞的方法，所述方法包括(a)在第一时间段施用第一剂量的所述抗体；(b)在第二时间段施用第二剂量的所述抗体；以及不间断地(c)在第三时间段施用第三剂量的所述抗体。

本发明还涉及一种用于治疗患者体内的恶性CD19阳性淋巴细胞的方法，所述方法包括(a)在第一时间段施用第一剂量的所述抗体；(b)在第二时间段施用第二剂量的所述抗体；以及不间断地(c)在第三时间段施用第三剂量的所述抗体。

此外，本发明还涉及一种用于缓解和/或预防通过给人类患者施用CD19xCD3双特异性抗体而介导的不良反应的方法，所述方法包括(a)在第一时间段施用第一剂量的所述抗体；(b)在第二时间段施用第二剂量的所述抗体；以及不间断地(c)在第三时间段施用第三剂量的所述抗体。

优选地，第一、第二及第三时间段正如本文中别处描述。

关于剂量，地如本文中别处描述，优选第二剂量超过第一剂量，而第三剂量超过第二剂量。更优选地，第一剂量为5μg/m²/d，第二剂量为15μg/m²/d而第三剂量为60μg/m²/d。或者，第三剂量还可为90或120μg/m²/d。

如上文所记录，本发明涉及使用CD19xCD3双特异性抗体的治疗方法/给药方案，所述抗体含有能与人CD3-ε链的表位结合的第一结合域和能与人CD19结合的第二结合域。对于根据本发明方法所述的双特异性分子的实施例在WO 99/54440、WO 2004/106381以及WO 2008/119565中有详细描述。其中公开的所有具体CD19xCD3双特异性抗体(包括其变体、片段及等同物等)，是本发明特别优选的CD19xCD3双特异性抗体。

文中所用的“CD19xCD3双特异性抗体”(包括CD19xCD3双特异性单链抗体)是指含有两个结合域的单多肽链。该单链抗体在本发明的方法/给药方案中是优选的。每个结合域包含至少一个来自抗体重链的可变区(“VH或H区”)，其中第一结合域的VH区与CD3ε分子特异结合，而第二结合域的VH区与CD19特异结合。两个结合域任选地通过短多肽间隔序列彼此相连。一个非限制性的多肽间隔序列的例子为Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(G-G-G-G-S)及其重复序列。每个结合域可以还包括一个来自抗体轻链的可变区(“VL或L区”)，第一和第二结合域各自内部的VH区和VL区通过多肽接头彼此相连，例如EP 623679B1所公开及要求保护的类型，但无论如何都足够长以允许第一结合域的VH区和VL区与第二结合域的VH区和VL区相互配对，以使得它们能够特异结合于相应的第一和第二结合域。这种CD19xCD3双特异性单链抗体在WO99/54440和WO 2004/106381中有详细描述。

与本发明相关的术语“结合域”表征与给定靶结构/抗原/表位特异性结合/相互作用的多肽的结构域。因此，所述结合域为“抗原相互作用位点”。依据本发明，术语“抗原相互作用位点”定义了能特异性与特定抗原或特定抗原组(如不同物种中的同一种抗原)相互作用的多肽基序。所述结合/相互作用还应理解为定义了“特异性识别”。依据本发明，术语“特异性识别”是指抗体分子能特异相互作用于和/或结合于抗原(如本文中定义的人CD3抗原)上至少2个氨基酸、优选至少3个、更优选至少4个氨基酸。这种结合可用“锁钥原理”的特异性来例证。因此，一级、二级或三级结构以及所述结构的次级修饰使得结合域的氨基酸序列中的特定基序与抗原相互结合。抗原相互作用位点与其特定抗原的特异性相互作用还可导致所述位点与抗原的简单结合。此外，结合域/抗原相互作用位点与其特定抗原的特异性相互作用还可导致信号起始，如由于抗原构象改变的诱导、抗体的寡聚等。依据本发明的结合域的优选实例是抗体。结合域可以是单克隆或多克隆抗体，或来源于单克隆或多克隆抗体。

术语“抗体”包括仍保留结合特异性的抗体衍生物或功能片段。用于制备抗体的技术是本领域所熟知且在如Harlow和Lane″Antibodies，ALaboratory Manual″，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1988以及Harlow和Lane“Using Antibodies：A Laboratory Manual”Cold Spring HarborLaboratory Press，1999中有所描述。术语“抗体”还包括不同类别的免疫球蛋白(Ig’s，即IgA、IgG、IgM、IgD以及IgE)以及不同亚类(如IgG1、IgG2等)。

术语“抗体”的定义还包括其具体体现，如嵌合体、单链人源化抗体以及抗体片段，例如，尤其是，Fab片段。抗体片段或衍生物还包括F(ab′)2、Fv、scFv片段，或单结构域抗体、单可变结构域抗体或仅含有一个可变结构域的免疫球蛋白单可变结构域，其中可能是不依赖于其他V区或结构域而与抗原或表位特异结合的VH或VL；参见例如以上引用的Harlow和Lane(1988)以及(1999)。该免疫球蛋白单可变结构域不仅包括单独的抗体单可变结构域多肽，还包括组成抗体单可变结构域多肽序列的一个或多个单体的较大多肽。

文中所用的CD3ε是指作为T细胞受体的一部分表达的分子，且其含义通常归入现有技术的含义。在人的情况下，它包括所有已知的单独或独立结合形式的CD3亚基，例如CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD3ζ、CD3α及CD3β。人CD3ε的GenBank登录号为NM_000733。

人CD19蛋白的GenBank登录号为AAA69966。

优选地，本发明方法/给药方案中所用的双特异性抗体的结构域配置为VL(CD19)-VH(CD19)-VH(CD3)-VL(CD3)。

然而，还预见到，本发明的方法可以采用具有如下其他结构域配置的CD19xCD3双特异性单链抗体实现：

VH(CD19)-VL(CD19)-VH(CD3)-VL(CD3)，

VL(CD19)-VH(CD19)-VL(CD3)-VH(CD3)，

VH(CD19)-VL(CD19)-VL(CD3)-VH(CD3)，

VL(CD3)-VH(CD3)-VH(CD19)-VL(CD19)，

VH(CD3)-VL(CD3)-VH(CD19)-VL(CD19)，

VL(CD3)-VH(CD3)-VL(CD19)-VH(CD19)，或

VH(CD3)-VL(CD3)-VL(CD19)-VH(CD19)。

本发明方法所采用的优选CD19xCD3双特异性抗体包含：

(a)抗CD3重链CDR，其示为：SEQ ID NO：11中的CD3CDR-H1(RYTMH)，更优选的是SEQ ID NO：11中的(GYTFTRYTMH)，SEQ IDNO：12中的CD3CDR-H2(YINPSRGYTNYNQKFKD)和SEQ ID NO：13中的CD3CDR-H3(YYDDHYCLDY)；和/或

(b)抗CD3轻链CDR，其示为SEQ ID NO：14中的CD3CDR-L1(RASSSVSYMN)，SEQ ID NO：15中的CD3CDR-L2(DTSKVAS)和SEQID NO：16中的CD3CDR-L3(QQWSSNPLT)；和/或

(c)抗CD19重链CDR，其示为：SEQ ID NO：17中的CD19CDR-H1(SYWMN)，更优选的是SEQ ID NO：17中的(GYAFSSYWMN)，SEQ IDNO：18中的CD19CDR-H2(QIWPGDGDTNYNGKFKG)和SEQ ID NO：19中的CD19CDR-H3(RETTTVGRYYYAMDY)；和/或

(d)抗CD19轻链CDR，其示为：SEQ ID NO：20中的CD19CDR-L1(KASQSVDYDGDSYLN)，SEQ ID NO：21中的CD19CDR-L2(DASNLVS)和SEQ ID NO：22中的CD19CDR-L3(QQSTEDPWT)。

用于本发明方法的CD19xCD3双特异性单链抗体更优选地包含CD3轻重链CDR。甚至更优选地，用于本发明方法的CD19xCD3双特异性单链抗体包含CD3轻重链CDR以及CD19轻重链CDR。

文中提到的CDR与卡巴特编码系统一致。卡巴特编码制是一种广泛用于以一致的形式编码抗体中残基的标准(Kabat等人，Sequences ofProteins of Immunological Interest，1991)。

或者，本发明方法所采用的优选CD19xCD3双特异性抗体包含：

(a)如SEQ ID NO：3所示的CD19可变重链(核苷酸序列如SEQ IDNO：4所示)；和/或

(b)如SEQ ID NO：5所示的CD19可变轻链(核苷酸序列如SEQ IDNO：6所示)；和/或

(c)如SEQ ID NO：7所示的CD3可变重链(核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示)；和/或

(d)如SEQ ID NO：9所示的CD3可变轻链(核苷酸序列如SEQ ID NO：10所示)。

更优选地，本发明方法所采用的CD19xCD3双特异性抗体包含CD19可变重链和轻链以及/或者CD3可变重链和轻链。甚至更优选地，本发明方法所采用的CD19xCD3双特异性抗体包含CD19可变重链和轻链以及CD3可变重链和轻链。

又或者，所述双特异性单链抗体优选地包含选自以下的氨基酸序列：

(a)SEQ ID NO：1所述的氨基酸序列；

(b)由SEQ ID NO：2所述的核酸序列编码的氨基酸序列；

(c)由具有与(b)中的核酸序列至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的核酸序列编码的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列能够与CD3和CD19特异结合；及

(d)由(b)中核苷酸序列的遗传密码简并而成的核酸序列编码的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列能够与CD3和CD19特异结合。

应理解，序列同一性是以完整氨基酸序列确定的。可用GCG软件包(Genetics Computer Group，575Science Drive，Madison，Wisconsin，USA53711(1991))中含有的Gap或BestFit程序进行序列比对(Needleman和Wunsch J.Mol.Biol.48(1970)，443-453；Smith和Waterman，Adv.Appl.Math 2(1981)，482-489)。测定和识别与文中所述CD19xCD3双特异性抗体(优选的是MT103)的氨基酸序列有例如70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，对于本领域技术人员来说是一种常规方法。例如，根据克里克的摆动假说，反密码子的5’碱基不像另外两个碱基有空间局限，因而可能发生不标准的碱基配对。换言之，三联密码子的第三个位点是可变的，所以两个在第三位点不同的三联密码子能编码相同的氨基酸残基。所述假说是为本领域技术人员所熟知的(参加例如http://en.wikipedia.org/wiki/Wobble_Hypothesis；Crick，J Mol Biol 19(1966)：548-55)。测定与文中所述CD19xCD3双特异性单链抗体的核苷酸或氨基酸序列有例如70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列的细胞毒性，对于本领域技术人员来说也是一种常规方法。CD19xCD3双特异性单链抗体或与CD19xCD3双特异性单链抗体的氨基酸序列有例如70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的抗体构建体的细胞毒性可用如WO 99/54440中所述方法进行测定。

尤其优选地，所述CD19xCD3双特异性单链抗体具有SEQ ID NO：1所述氨基酸序列。

还特别优选WO 99/54440所述的CD19xCD3双特异性抗体MT103以及WO 2004/106381和WO 2008/119565所述的那些CD19xCD3双特异性抗体。

此外本发明还涉及一种CD19xCD3双特异性抗体，用于：

(i)给人类患者施用CD19xCD3双特异性抗体，或

(ii)治疗人类患者体内的恶性CD19阳性淋巴细胞；或

(iii)缓解或预防由给人类患者施用CD19xCD3双特异性抗体而介导的不良反应，

其中所述抗体按照上文中任一权利要求所限定的给药方案给药。

本发明还涉及一种CD19xCD3双特异性抗体：

(i)给人类患者施用CD19xCD3双特异性抗体，或

(ii)治疗人类患者体内的恶性CD19阳性淋巴细胞；或

其中所述抗体按照上文中任一权利要求所限定的方法给药。

本发明的再一方面涉及CD19xCD3双特异性抗体在制备药物组合物中的用途，其中药物组合物被上文中任一权利要求所限定的方法所采用。

本发明所述的药物组合物可任选地包含药物载体。合适药物载体的实例是本领域所熟知的，包括磷酸盐缓冲盐水溶液、灭菌溶液等。静脉内载体包括流体和营养补充剂、电解质补充剂(如基于林格氏葡萄糖的补充剂)等等。还可以存在防腐剂及其他添加剂，如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂及惰性气体等。另外，本发明所述的药物组合物可以包含本文中别处所述的其它药剂，例如化疗药物。

本发明的再一方面涉及一种包括本文中所限定的第一剂量和第二剂的(药物)试剂盒或药物包。

在另一个实施方案中，本发明涉及一种(药物)试剂盒或药物包，其包括本文中所限定的第一剂量和第二剂，以及包括在三阶段给药方案/方法情况下所限定的第三剂量。

另一方面，(药物)试剂盒或药物包包括在三阶段给药方案/方法情况下所限定的全部三个剂量，即第一、第二和第三剂量。

由此，所述第一、第二和第三剂量一起包装在一个密封的药物包或试剂盒里。应理解，在此方面，“第一剂量”、“第二剂量”和“第三剂量”含有给定时间段(为第一时间段或者第二时间段)所使用的相应的单剂数量。比方说，这意味着本发明药物包或试剂盒中所包括的“第一剂量”或“第二剂量”含有比如7个的单独日剂量。由此，包装的日剂量数反映了预期的时间段(如果所述的时间段为X天则含X天的剂量，如果时间段为Y天则含Y天的剂量，诸如此类)。这些实施方案中，(药物)试剂盒或药物包在单个包装中包括在单独容器里的日剂量。

或者，还预见到，预期的第一剂量和/或第二剂量和/或第三剂量没有按各自的日剂量数分开，而是全部或部分的被包含在单个容器中(比如在一个输注包中)，其中包含第一时间段和/或第二时间段所需的部分(如1至3天)或全部(即第一或第二时间段)的剂量。这意味着，单个容器包含比方说第一剂量的7个日剂量，可在第一时间段等使用。

应理解，本发明的(药物)试剂盒或药物包还可以几乎包括各时间段所需的日剂量(不论是否分开)。或者，(药物)试剂盒或药物包被制备成使得其包括本文中所限定的第一和第二时间段所需的日剂量数(不论是否分开)，即“第一剂量”、“第二剂量”和“第三剂量”在单个包装里。这样的一个包装在理想状态下应足够患者的完整治疗(包括第一和第二时间段)使用。本发明的试剂盒及包的部分可单独包装到小瓶或瓶子里，或者混合包装到容器或多容器装置中。试剂盒的生产遵循优选的标准流程，这是本领域熟练技术人员已知的。

此外，本发明涉及上文所述的药物包或试剂盒以及依照本发明方法顺序使用的书面说明。所述的药物包或试剂盒可能还包括标签或印迹，用于指示内含物可用于治疗人类患者体内的淋巴瘤或白血病的恶性CD19阳性淋巴细胞；或用于缓解或预防由给患者施用CD19xCD3双特异性抗体而介导的不良反应。

还预见到，本发明的药物包或试剂盒进一步包括用于给患者施用第一剂量和/或第二剂量和/或第三剂量的工具，和/或通常用于治疗药剂输注的缓冲液、小瓶、特氟龙袋或输注袋。由此，“工具”包括一种或多种选自注射器、皮下注射针头、套管、导管、静脉内给药的输注袋、静脉内注射工具、小瓶、缓冲液、稳定剂、有助于技术人员准备本发明的相应剂量和输注液的书面说明等的物件。

还预见到，本发明的药物包或试剂盒进一步包括化疗药剂。

本发明的再一方面提供了一种药物包或试剂盒，其中所述第一剂量和/或第二剂量的设置使得其适用于(准备好)给予根据下文权利要求中任一项的方法的给药方案。

具体实施方案

以下实施例例证了本发明。这些实施例不可解释为限制本发明的范围。包括所述实施例仅为了进行例证，且本发明仅受权利要求的限制。

实施例1

在采用CD19-特异性BiTE抗体blinatumomab治疗的一小组非何杰金氏淋巴瘤患者中，鉴定可逆的神经性不良反应的预测因素

Blinatumomab是一种CD19/CD3双特异性抗体构建体，属于双特异性T细胞衔接器

类，作为单独药剂，在复发的非何杰金氏淋巴瘤(NHL)和B-前体急性淋巴细胞白血病(ALL)患者体内显现出高响应率和长响应时间。除治疗开始的头几天有一小组患者出现神经性不良反应(AE)，如错乱、言语损伤或小脑症状之外，blinatumomab具有良好安全性。迄今为止，所有相关神经性AE(48名患者中的11名)是短暂的、完全可逆的且在输液停止后3至72小时内可缓解且无后遗症。经颅磁共振成像，在任何病例中都未发现病理结果。尽管治疗终止，具有神经性AE的4名患者已取得客观的淋巴瘤缓解。停止输注后的几个小时内取脑脊液进行分析，显示大多数受累患者具有可检测水平的blinatumomab，而在一名无神经性症状患者的CSF中在输注过程中检测不到blinatumomab。此外，CSF中白蛋白和T淋巴细胞水平的升高佐证了血脑屏障(BBB)紊乱是一个可能的潜在事件。对患者血清样品中血管生成素-2和S100β的分析正在进行，以调查内皮应力和BBB完整性标记物的水平是否分别与神经性AE相关联。在对39名NHL患者的回顾性分析中，处于1∶10或低于1∶10的外周血B细胞比T细胞(B∶T)比率基线被鉴定为随后出现神经性AE的唯一一个预测因素。该预测值在另8名患者中得到了预测性证实。值得注意的是，ALL患者，就算B∶T比值极低，也很少出现可与在先的鞘内化疗消耗脑部靶细胞有关的神经性AE。外周B细胞神经保护作用的潜在机制正在处于研究中。总之，我们确立了一种简单的方法来预测性地鉴别在blinatumomab治疗开始后处于出现神经性AE风险的患者，正在这些高风险患者中测试舒缓方法以便于避免治疗终止。

实施例2

对采用CD19xCD3双特异性抗体治疗的患者的观察结果摘要(1)

观测结果摘要(1)

早期CNS事件的共同特征：

·首个症状出现在开始MT103输注后12-48小时：激动、言语损伤、时而震颤、失用症

·导致输注停止的更严重症状出现在输注后24-72小时：错乱、定向障碍、失用症、失语症、癫痫

·MT103输注停止后，在1-3天内CNS症状完全消失；通常没有后遗症。

·大部分CNS事件进入多克隆T细胞的早期激活和重新分配期

缓慢发作的CNS事件的特征：

·偏向于小脑症状

·在治疗期间的不同时间点出现，常是治疗开始或逐步增强时

·震颤、轻微言语损伤、轻微书写损伤；可持续若干天

其他CNS事件

·与其他CNS事件无确凿关系的观察到的其他症状：头疼、发热、恶心

CNS事件的MT103剂量响应关系

·CNS事件的剂量响应关系明显；临界值是剂量水平5μg/m²/d至15μg/m²/d。

实施例3

对采用CD19xCD3双特异性抗体治疗的患者的观测结果摘要(2)

观测结果摘要(2)

CNS事件显现出可预测性

·CNS事件与低B细胞∶T细胞比率(或低B细胞计数)相关

·小于1∶10的B细胞∶T细胞比率被鉴定为发生CNS事件的表观临界值

·未见其他生化或临床参数与CNS事件相关

对具有CNS事件、但大多数无病理发现的患者进行颅脑核磁共振

CSF分析提示BBB开放和神经炎性事件

·大多数受累患者体内发现可检测水平的MT103及蛋白和血清白蛋白水平升高，提示血脑屏障(BBB)出现的短暂故障

·无CNS事件的一名患者的CSF中未发现MT103

·CSF分析还表明在一些受累患者中，单核细胞和T淋巴细胞计数增加，指示了神经炎症过程

·CNS事件是否反映BBB的逐步开放(激动＞错落＞失语症＞共济失调＞癫痫)？

CNS事件的发生率可与疾病和/或肿瘤负荷相关

·当剂量为15μg/m²/d时，3/8(37％)的NHL患者以及仅1名(1/11)(9％)ALL“高风险”患者出现CNS事件

·B-ALL患者常规性地接受可能降低CNS中肿瘤细胞负荷的鞘内化疗(以及静脉内甲氨蝶呤)(“潜隐性肿瘤性脑膜炎(occultmeningeosis neoplastica)”)

实施例4

采用CD19xCD3双特异性抗体治疗的患者的CNS事件总结

NHL患者的临床相关CNS事件的总结

实施例5

在临床试验中采用CD19xCD3双特异性抗体治疗的患者的CNS事件的剂量依赖性

正在进行的NHL试验中的CNS事件的剂量依赖性

·以具有的低B细胞∶T细胞比率(＜1∶10)确定“高风险”患者

·剂量组中的划分考虑起始剂量

§多于48名患者应接受额外治疗和单独患者重新开始治疗(导致变为“高风险”患者)

*首轮治疗过后达到临界B细胞∶T细胞比率

+包括剂量逐步增加的患者

实施例6

1名具有潜在不良反应的高风险患者，接受15μg/m²/天治疗7天，60μg/m²/天治疗21天，没有出现不良反应(神经性反应)。

108-003号患者

·女性，66岁

·2级FL，IVB(FD：09/2006)

·相关病史：贫血，血小板减少，(用2x泽娃灵(Zevalin)进行预治疗和及用FL进行骨髓渗透)，gGT和AP升高，苯二氮平类药物滥用，2.金黄色葡萄球菌败血症(伴随椎间盘炎及脓肿)

·在先淋巴瘤治疗：

-6x R-CHOP 14，8x R 09/2006-02/2007

-R单剂05/07

-1.泽娃灵11/07

-2.泽娃灵01/08

·按最初B细胞∶T细胞比率(1∶10，5)划分，属高风险(群组15/60)，

·2009年1月5日开始治疗(15μg/m²/24h)

·发热、头疼两天——口服扑热息痛和安乃近进行简单处理

·1月12日剂量增至60μg/m²/24h

·又出现发热、头疼——口服扑热息痛和安乃近进行简单处理

·无神经性事件

·对剂量“级”的耐受力强

·骨髓功能疑似改善

实施例7

1名具有潜在不良反应的高风险患者，接受5μg/m²/d治疗7天，60μg/m²/d治疗21天后，出现轻微不良反应(神经性反应)。

·MCL，男性，42岁

·B细胞∶T细胞比率为1∶12

·2009年1月19日以5micg/m²/天的剂量开始治疗

·第一天：发热又发冷、头疼、无其他问题

·步骤：1月26日：发热6h后，严重头疼

·2009年1月27日：疲劳、恶心、呕吐，内窥镜检查(无病理学发现)，频率高达170/min的绝对心律失常→替代钾和洋地黄毒甙后1天内缓解

·进行颅脑CT扫描和CSF；CT：无病理学发现

·CSF：蛋白质略微升高，55mg/dL；细胞：23细胞/micL，主要是单核细胞和一些被激活的淋巴细胞

·2009年1月27日下午：轻微震颤，失用症，“精神状态迟钝”；晚上：轻微言语损伤(小脑？)；后两天内缓慢改善；2009年1月29日基于持续的轻微症状，决定施以地塞米松

·症状缓慢减轻，于2009年3月31日完全缓解

·在进一步的治疗中：又出现弹吉他困难

·治疗4周后：-37％

·治疗8周后：PR/CRu

实施例8

1名具有潜在不良反应的高风险患者接受根据本发明所述的治疗方案。

患者108-005

·男性，71岁，FL IIIB

·B细胞∶T细胞比率：57∶1363(即1∶23.9，低)

·首次诊断为1997年

·多次在先治疗：12x Rituximab(单剂)，6x Rituximab-Bendamustin，6x R-CHOP，自体SCT

·Blinatumomab治疗开始时间：2009年8月17日

·治疗持续时间：8周

·耐受性良好(无SAE)

·无神经性不良事件

·8周后CT扫描：-65％＝淋巴瘤局部缓解

实施例9

另外1名具有潜在不良反应的高风险患者接受根据本发明所述的治疗方案。

患者109-031

·男性，60岁，滤泡性淋巴瘤IVAE

·B细胞∶T细胞比率：0∶492(低)

·首次诊断：2009年5月

·在先治疗：前期w.长春新碱/去氧皮质酮，6x R-CHOP

·Blinatumomab治疗开始时间：2009年11月30日

·治疗持续时间：8周

·耐受性良好(每步骤都出现发红症状-响应类固醇)

·无神经性不良反应

·8周后淋巴瘤减少56％(淋巴瘤局部缓解)

Claims

1.一种用于评估(分析)人类患者的潜在不良反应的风险的方法，所述潜在不良反应的风险是由给所述患者施用CD19xCD3双特异性抗体而介导的，所述方法包括测定来自所述患者的样品中的B细胞∶T细胞的比率，其中约1∶5或更低的比率指示所述患者具有潜在不良反应的风险。

2.一种CD19xCD3双特异性抗体，所述抗体用于治疗B细胞∶T细胞比率为约1∶5或更低的人类患者的恶性CD19阳性淋巴细胞的方法，所述方法包括：

(b)在第二时间段施用第二剂量的所述抗体；

其中所述第二剂量超过所述第一剂量。

3.一种CD19xCD3双特异性抗体，所述抗体用于缓解和/或预防不良反应的方法，所述不良反应是由给B细胞∶T细胞比率为约1∶5或更低的人类患者施用CD19xCD3双特异性抗体而介导的，所述方法包括：

(a)在第一时间段施用第一剂量的所述抗体；以及不间断地

(b)在第二时间段施用第二剂量的所述抗体；

其中所述第二剂量超过所述第一剂量。

4.根据权利要求2或3所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述人类患者具有或被假设具有恶性CD19阳性淋巴瘤或白血病细胞。

5.根据前述权利要求中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中步骤(a)中的施用途径和/或步骤(b)中的施用途径为静脉内给药。

6.根据权利要求3所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述不良反应以神经性反应为特征。

7.根据权利要求6所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述神经性反应是选自下述的一种或多种：错乱、共济失调、定向障碍、言语障碍、失语症、言语损伤、小脑症状、震颤、失用症、癫痫发作、癫痫大发作抽搐、瘫痪以及平衡紊乱。

8.根据前述权利要求中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第二时间段超过所述第一时间段。

9.根据前述权利要求中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第一时间段超过3天。

10.根据前述权利要求中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第一时间段为3至10天，优选7天。

11.根据前述权利要求中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第二时间段超过18天。

12.根据前述权利要求中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第二时间段为18至81天，优选21天或49天。

13.根据前述权利要求中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第一时间段为3至10天，所述第二时间段为18至81天。

14.根据权利要求13所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第一时间段为7天，所述第二时间段为21天或49天。

15.根据前述权利要求中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第一剂量为1μg/m²/d至15μg/m²/d，优选5μg/m²/d或15μg/m²/d。

16.根据前述权利要求中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第二剂量为15μg/m²/d至60μg/m²/d，优选60μg/m²/d。

17.根据前述权利要求中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第二剂量具有治疗活性。

18.根据权利要求2或3所述的CD19xCD3双特异性抗体，在所述第一和第二时间段施用第一和第二剂量之后，还包括在第三时间段施用第三剂量。

19.根据权利要求18所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第三时间段超过所述第一和第二时间段，而所述第二剂量超过所述第一剂量。

20.根据权利要求18或20所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第一时间段超过3天。

21.根据权利要求18至20中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第一时间段为3至10天，优选7天。

22.根据权利要求18或19所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第二时间段超过3天。

23.根据权利要求18至20中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第二时间段为3至10天，优选7天。

24.根据权利要求18或19所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第三时间段超过8天。

25.根据权利要求18至20中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第三时间段为8至78天，优选14或42天。

26.根据权利要求18至25中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第一时间段为3至10天，所述第二时间段为3至10天，所述第三时间段为8至78天。

27.根据权利要求26所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第一时间段为7天，所述第二时间段为7天，所述第三时间段为14天或42天。

28.根据权利要求18至27中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第三剂量超过所述第一和第二剂量。

29.根据权利要求18至28中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第一剂量为1μg/m²/d至15μg/m²/d，优选5μg/m²/d。

30.根据权利要求18至29中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第二剂量为1μg/m²/d至15μg/m²/d，优选15μg/m²/d。

31.根据权利要求18至30中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第三剂量为15μg/m²/d至60μg/m²/d，优选60μg/m²/d。

32.根据权利要求18至31中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第三剂量的施用途径是静脉内给药。

33.根据权利要求18至32中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述第二剂量和第三剂量具有治疗活性。

34.根据前述权利要求中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述抗体是双特异性单链抗体。

35.根据前述权利要求中任一项所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述抗体为MT103。

36.根据权利要求2或3所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述恶性CD19阳性淋巴细胞为淋巴瘤或白血病细胞。

37.根据权利要求36所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述淋巴瘤为惰性或侵袭性B细胞非何杰金氏淋巴瘤(B NHL)、外套细胞淋巴瘤(MCL)或慢性淋巴白血病(CLL)。

38.根据权利要求36所述的CD19xCD3双特异性抗体，其中所述白血病为B细胞系急性淋巴母细胞白血病(ALL)。

39.一种CD19xCD3双特异性抗体，所述抗体用于：

(i)治疗人类患者的恶性CD19阳性淋巴细胞的方法；或

(ii)缓解或预防由给人类患者施用CD19xCD3双特异性抗体而介导的不良反应的方法；

其中所述抗体施用的第一剂量为5μg/m²/d，然后施用的第二剂量为15μg/m²/d，之后不间断地施用的第三剂量为60μg/m²/d。

40.一种CD19xCD3双特异性抗体，所述抗体用于：

(i)给人类患者施用CD19xCD3双特异性抗体，或

(ii)治疗人类患者的恶性CD19阳性淋巴细胞；或

(iii)缓解或预防由给人类患者施用CD19xCD3双特异性抗体而介导的不良反应；

其中所述抗体根据前述权利要求中任一项所限定的方法进行施用。

41.CD19xCD3双特异性抗体在制备用于前述权利要求中任一项所限定的方法中的药物组合物中的用途。

42.一种包括前述权利要求中任一项所限定的所述第一剂量和第二剂量的药物包或试剂盒。

43.根据权利要求42所述的药物包或试剂盒，其还包括前述权利要求中任一项所限定的第三剂量。

44.根据权利要求42或43所述的药物包或试剂盒，其还包括用于给患者施用所述第一剂量和/或第二剂量的工具。