CN102690781B - 一种灌流式细胞培养的培养基更换方法 - Google Patents
一种灌流式细胞培养的培养基更换方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种灌流式细胞培养的培养基更换方法，它包括如下步骤：(1)降温：降低细胞培养罐内培养基的温度至4～15℃；(2)通氧：通入氧气至培养基的溶氧量为150～250％(mg/L)；(3)更换培养基：停止搅拌，沉降细胞，沉降时间为0～48h，抽出上清液，加入新鲜培养基。本发明还公开了一种搅拌式细胞培养罐，以及一种细胞培养方法。本发明培养方法可以克服现有细胞灌流培养方法存在设备复杂、成本高的缺点，具有实际应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种哺乳动物细胞灌流培养方法。
背景技术
随着基因工程的发展，人们逐渐认识到许多生物制品不能在原核细胞内正确表达，它们需要经过真核细胞所特有的翻译后修饰，以及正确的切割、折叠后，才能形成与自然分子一样的功能和抗原性，使得动物细胞一跃成为一种重要的宿主细胞，用以生产各种各样的生物制品，因而，哺乳动物细胞大规模工业化培养成为生物药物生产的关键。目前，动物细胞株培养需要解决的核心问题包括如下三个：如何提高细胞密度，如何长时间维持细胞活力，如何提供高表达所需的营养环境以及良好的物理化学环境。
灌流式培养，又称灌注培养，是把细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和产物形成过程中，不断地将部分培养基取出，同时又连续不断地灌注新的培养基的细胞培养方式。灌流式培养大致可以解决上述动物细胞株培养的三个问题：连续灌注的培养基可以提供充分的营养成分，带走代谢副产物，给细胞生长提供优良的环境，细胞密度高，表达时间长，可以大幅度提高生产产率。
实现细胞灌流培养的核心技术是：如何有效地进行细胞截留(将细胞与培养基分离)，即如何在保证细胞密度和细胞活力的基础上更换培养基。目前，有效地解决方法在于使用细胞截流装置。常用的细胞截留装置是沉降截留装置，其中，倾斜式重力沉降器因设备简单、对细胞造成的损伤较小、操作简易，已用于杂交瘤和CHO细胞连续灌注培养(吕中华等，哺乳动物细胞灌注培养工艺研究进展，中国中医药咨讯，2011年7月第3卷第20期)。用倾斜式细胞重力沉降器进行细胞截留，需将细胞悬液从生物反应器中取出，加入沉降器中，细胞悬液进入沉降器以后，大部分活细胞在垂直沉降区沉降，并从底端出料口流出，回流至生物反应器；少量细胞向上流动，留在倾斜沉降区；沉降上清液从上部的排液口排出，工作前沉降器内的空气从排气口排出。
使用截留装置截留细胞，必须要将含有活细胞的培养液抽出，离开原培养环境，且需在沉降装置中停留一段时间，无法到达原位整体分离的目的，存在细胞损伤、反应器环境恶化等问题，且细胞截留装置价格昂贵，生产成本高，难以实现大规模工业化生产。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种灌流式细胞培养的培养基更换方法和灌流式细胞培养方法。
本发明提供了一种灌流式细胞培养的培养基更换方法，它包括如下步骤：
(1)降温：降低细胞培养罐内培养基的温度至4～15℃；
(2)通氧：通入氧气至培养基的溶氧量为150～250％(mg/L)；
(3)更换培养基：停止搅拌，沉降细胞，沉降时间为0～48h，抽出上清液，加入新鲜培养基。
其中，步骤(1)所述温度为8～12℃。
其中，步骤(2)所述溶氧量为250％(mg/L)。
其中，步骤(3)所述沉降时间为15-36h。所述沉降时间进一步优选为20-36h，再进一步优选为20-24h。
其中，所述细胞为哺乳动物细胞。
其中，所述哺乳动物细胞为中国仓鼠卵巢细胞、小鼠骨髓瘤细胞、人胚胎肾细胞、骨髓瘤细胞或者HEK293细胞、BHK细胞。
其中，所述哺乳动物细胞为制备生物制品的细胞。本发明可以提高由动物细胞表达的蛋白或抗体等生物制品的产量，例如单克隆抗体、生长因子和酶、DNA、疫苗等，根据本发明生产的生物制品，具有医药用途，如阿伐他汀(atorvastatin)，卵泡刺激素(Gonal-F)，曲妥株单抗Trastuzumab(HerceptinTM)，托株单抗注射液Tocilzumab(actemraTM)，帕利珠单抗Palivizumab(aynagisTM)，抗CD20抗体(Rituximab)，狄诺赛单抗denosumab(ProliaTM)，卡那奴单抗canakinumab(LlarisTM)，氟替卡松+沙美特罗(salmeterol plus fluticasone)，奥马珠单抗Omalizumab(×olairTM)，TNFRII-Fc融合蛋白，商品名为(enbrelTM)，埃索美拉唑(esomeprazole)，缬沙坦(valsartan)等。
本发明还提供了一种用于前述方法的细胞培养罐，所述搅拌式细胞培养罐包括罐体(1)，罐体(1)上设置导流管(3)，导流管(2)上设置开关(7)，罐体(1)内部设置搅拌器(2)，罐体(1)外部设置夹套(4)，夹套(4)通过循环管(5)与温度调节器(6)连接。
其中，所述搅拌器(3)为桨叶式搅拌器。
本发明还提供了一种灌流式细胞培养方法，它包括如下步骤：
①取细胞，经过复苏、传代后，接种至搅拌式细胞培养罐中搅拌培养，培养温度30℃-37℃；
②结束培养，按照前述的方法，更换培养基；
③升高培养基温度至30～37℃，继续培养。
本发明提供的灌流式细胞培养的培养基更换方法，通过调节细胞培养的温度和溶氧等参数，无需使用传统细胞截留装置，原位分离细胞培养基和细胞，在保证细胞密度和细胞活力的基础上更换培养基，实现细胞高密度连续培养，且可以充分利用培养基，勿需消耗大量培养基，克服了传统细胞灌流培养方法的缺陷，操作简单，生产成本低。同时，本发明提供的哺乳细胞培养方法还可以极大地提高目标产物的表达量，实现了生物制品的大规模工业化多批次连续培养生产，具有工业应用价值。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1本发明搅拌式细胞培养罐结构示意图。其中，1为罐体，2为导流管，3为搅拌器，4为夹套，5为循环管，6为温度调节器，7为开关
图2本发明灌流方法示意图
图3培养CHO-TNFRII-Fc细胞五轮次(C1-C5)细胞显微图(10×10倍放大)
图4培养CHO-TNFRII-Fc细胞五轮次蛋白表达情况
图5细胞沉降效率与时间关系图
具体实施方式
实施例1表达重组人TNFRII-Fc的CHO细胞的重组蛋白的生产
1、材料设备
细胞株：表达重组人TNFRII-Fc的CHO细胞(CHO-TNFRII-Fc)
培养基：E×-CELLTM 302无血清培养基(Sigma，24326C-100L)
其它材料：碳酸氢钠(Sigma，S5761-5KG)、L-谷氨酰胺(Sigma，G8540-1KG)、葡萄糖(分析纯，成都科龙化工试剂厂)
细胞培养罐：BC-150L搅拌式细胞培养罐(广州奇志)；BC-7.5L搅拌式细胞培养罐(广州奇志)或者本发明搅拌式细胞培养罐，如图1所示，该搅拌式细胞培养罐包括罐体1，罐体1上设置导流管2，导流管2上设置开关7，罐体1内部设置搅拌器3，罐体1外部设置夹套4，夹套4通过循环管5与温度调节器6连接。其中，所述搅拌器3为桨叶式搅拌器
制冷设备：LD-30低温水冷式冷水机(北京环球联合机电设备有限公司)
倒置显微镜：凤凰×DS200倒置生物显微镜
细胞染色液：溶于1×PBS的4％台盼蓝
血小板计数板
HPLC：Agilent 1260高效液相色谱仪
分析柱：HiTrap Protein A HP 1ML预装柱
缓冲液：平衡液，20mM磷酸盐缓冲液，pH7.0；洗脱液A，1M氯化钠，20mM磷酸盐缓冲液，pH7.0；洗脱液B，20mM，柠檬酸-氢氧化钠缓冲液，pH3.5
2、制备方法
包括如下步骤：
(一)细胞复苏、传代
(1)培养基配制：按产品说明书要求分阶段配制1×E×-CELL 302培养基500L以及5×E×-CELL 302培养基25L，过滤除菌后4℃避光保存备用；
(2)培养罐清洁灭菌：按要求对细胞培养罐进行清洗、灭菌消毒处理。加入一定量1×培养基检菌；
(3)待培养罐检菌合格后备用；
(4)复苏细胞：从液氮保存的细胞库中取出一只细胞冻存管，37℃融化后500g离心5分钟，弃上清，重悬细胞于新鲜1×培养基中，置于37℃，5％CO2环境中方瓶培养；
(5)细胞在方瓶中传代扩增足够数量，转入转瓶扩增培养；在转瓶中扩增细胞到足够数量，接种到7.5L罐培养，37℃扩增培养使体积到5L，密度到2×106cell/ml。
(二)第一轮培养
(6)转细胞种子到150L培养罐，或者使用本发明提供的搅拌式细胞培养罐，起始体积25L，37℃，溶氧50％，pH7.0条件下进行培养；
(7)在细胞密度到达1.8×106cell/ml时补进25L新鲜1×培养基继续培养；
(8)在细胞密度再次达到1.8×106cell/ml时再补进50L新鲜1×培养基继续培养；
(9)在细胞密度达到最高2.4×106cell/ml时降温至30℃继续培养，每天补充5×培养基500ml；降温培养7天，至细胞活力低至88％时，结束第一轮培养，此时细胞密度2.0×106cell/ml。
(三)第一次更换培养基
本发明灌流方法如图2所示：
(10)启动制冷设备或者调节本发明温度调节器，利用水浴调节培养基温度，循环水温控制在12℃作为细胞沉降温度，将罐体内培养基温度2小时内降至该温度，并稳定1小时；
(11)通入氧气，罐内培养基溶氧提高到250％时停止通氧，停止搅拌，开始细胞沉降；
(12)沉降18小时后，将空气通气到罐内，使罐压升高到0.1MPa，打开上清液输出管道，将上清液抽出。补充50L新鲜1×培养基，升高温度至37℃，温度升高速率为8℃/h，继续培养，经测定，此时，细胞活力为86％，细胞密为3.1×106cell/ml。
(四)第二轮培养
(13)细胞密度到达5×106cell/ml时，补充50L新鲜1×培养基，继续培养；
(14)当细胞密度到达5×106，活力88％，体积100L，降温至30℃继续培养。每天补充5×培养基600ml；至细胞活力低至86％时，结束第一轮培养，此时细胞密度4.2×106cell/ml。
(五)第二次更换培养基
(15)按步骤10、11和12操作，开始第三轮细胞培养。细胞密度此时为3.6×106，活力85％，体积55L。
(六)第三轮培养
(16)细胞密度到达5×106cell/ml时，补充50L新鲜1×培养基，继续培养；
(17)当细胞密度到达6×106，活力87％，体积100L，降温至30℃继续培养。每天补充5×培养基650ml；至细胞活力低至84％时，结束第二轮培养，此时细胞密度4.5×106cell/ml。
(七)第三次更换培养基
(18)按步骤10、11和12操作，开始第四轮细胞培养。细胞密度此时为3.7×106，活力85％，体积55L。
(八)第四轮培养
(19)细胞密度到达5×106cell/ml时，补充50L新鲜1×培养基，继续培养；
(20)当细胞密度到达6×106，活力87％，体积100L，降温至30℃继续培养。每天补充5×培养基650ml；至细胞活力低至85％时，结束第三轮培养，此时细胞密度4.4×106cell/ml。
(九)第四次更换培养基
(21)按步骤10、11和12操作，开始第五轮细胞培养。细胞密度此时为3.5×106，活力84％，体积55L。
(十)第五轮培养
(22)细胞密度到达5×106cell/ml时，补充50L新鲜1×培养基，继续培养；
(23)当细胞密度到达6×106，活力86％，体积100L，降温至30℃继续培养。每天补充5×培养基650ml。降温培养7天后开始沉降细胞。此时细胞密度4.4×106cell/ml，活力84％；
(24)结束培养，结束此次试验。
本发明方法可以实现连续的细胞培养，提高了细胞密度，为提高表达量奠定了基础。
3、细胞活力测定及显微形态观察
分析样品：培养过程中每日所取除细胞培养悬液。将细胞悬液滴于载玻片上，置于显微镜下10×10倍观察照相。
步骤：
(1)另将细胞悬液与台盼蓝1∶1混匀，将混合液加到血小板计数板上，置于倒置显微镜上计数。
(2)不被染色的细胞计为活细胞，染成蓝色的细胞计为死细胞，根据死细胞和活细胞数计算活力。测定的实验数据显示于表1。
(3)细胞显微形态观察结果见图3，结果显示，经过5轮次培养，细胞形态依然保持光洁、圆润。
表1细胞活力测定结果
| 培养轮次 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 最高细胞密度 | 2.4 | 6.0 | 5.8 | 6.1 | 5.7 |
| 每轮次细胞最后活力 | 88 | 86 | 84 | 85 | 84 |
如表1所示，经过第一轮的沉降灌流，细胞密度比原来提高一倍以上，后续几轮细胞密度可以继续维持这样的高密度，而且5轮培养后细胞活力可以维持相当的水平，说明本发明方法可以提供长时期、多轮次连续细胞培养的物质基础。
4、重组蛋白人TNFRII-Fc各轮次表达量测定
表达量分析样品：每轮次培养最后一天所取样留样，经离心去除细胞之上清。
标准蛋白样品：经纯化的重组蛋白人TNFRII-Fc。
步骤：
(1)用平衡液将纯化的重组蛋白人TNFRII-Fc配制成浓度0.1、0.25、0.5、0.75以及1mg/ml的溶液。
(2)色谱分析步骤为：
a.平衡液平衡柱子5个柱体积；
b.0.5ml样品上样；
c.平衡液平衡3个柱体积；
d.洗脱液A洗脱2个柱体积；
e.平衡液平衡3个柱体积；
f.洗脱液B洗脱2个柱体积，得到一个目的蛋白洗脱峰；
g.制作标准蛋白浓度-峰面积对应曲线；
h.检测培养基上清目的蛋白峰面积，然后根据标准蛋白浓度-峰面积曲线上计算出相应的蛋白浓度，也即得到目的蛋白的表达量。
实验结果如图4所示，第二轮次的培养表达量高于第一轮次一倍以上，后续轮次的表达量可以维持在差不多相同的高水平。
实验说明使用本发明提供的更换培养基的方法连续培养，细胞密度和细胞活力均很高，且目标产物的表达量高。证明本发明提供的方法可以在保证细胞密度和细胞活力的基础上更换培养基，解决了灌流培养的核心问题。
实施例2参数优选实验
材料设备
细胞：CHO细胞(ATCC CCL-61)，NS0细胞((ECACC catalogue no.03061601)，HEK293细胞(ATCC CRL-1573)。
培养基：EX-CELLTM 302无血清培养基(sigma，24326C-100L)
EX-CELLTM NS0无血清培养基(Sigma，14650C)
EX-CELLTM 293无血清培养基(Sigma，24571C-100L)
其它材料：碳酸氢钠(Sigma，S5761-5KG)
L-谷氨酰胺(Sigma，G8540-1KG)
葡萄糖(分析纯，成都科龙化工试剂厂)
细胞培养罐：BC-50L搅拌式细胞培养罐(广州奇志)。
BC-7.5L搅拌式细胞培养罐(广州奇志)。
制冷设备：LD-30低温水冷式冷水机(北京环球联合机电设备有限公司)
1、沉降时间对细胞沉降效率的影响：
(1)实验方法
①在75cm2方瓶中复苏经培养无血清驯化适应的CHO细胞、NSO细胞以及HEK293细胞，培养体积10ml。培养条件为37℃，95％湿度，5％CO2。②逐步扩增培养至体积各150ml，密度3×106细胞/ml。
③将细胞混匀后加入层析柱中，液面高度为1.2m，垂直放置于10℃层析柜。
④在时间5、10、15、20、25、30、35、40小时分别记录细胞在层析柱底部堆积的高度，绘制时间-沉降高度图。
(2)实验结果
表2细胞沉降高度与沉降时间关系表
从表2和图5可以看出，CHO、NSO以及HEK293细胞具有近似的沉降特性，沉降前15个小时，沉降高度随着沉降时间的延长而增加，沉降15小时后，沉降高度增加幅度逐渐变小，至沉降40h时，几乎不再沉降。为保证高密度培养，沉降时间选择在15h以上，进一步优选为20h以上。
2、温度及沉降时间对于细胞活力的影响：
以NSO细胞为例，其余细胞培养方法与NSO细胞一致。
按照实施例1中的培养方法，仅在在步骤10和12中分别设定不同的沉降温度和沉降时间，步骤10中分别设定循环水温度设定为4℃、8℃、12℃、15℃、37℃分别培养NSO细胞株，步骤12分别设定沉降时间为0h，12h，36h，48h完成两轮培养后分别测定各循环温度条件下和不同细胞的活力，其结果见表3：
表3CHO细胞、NS0细胞以及HEK293细胞-沉降温度、时间实验结果
如表3所示，温度为4℃-15℃，沉降时间为0-36h时，CHO细胞、NSO细胞以及HEK293细胞的细胞活力维持在80％以上，温度为4℃-15℃。
综合细胞密度与细胞活力，温度为4℃-15℃，进一步优选为8～12℃，沉降时间为15-36h，进一步优选为20-36h。
3、不同溶氧量对细胞活力影响：
以NSO细胞为例，其余细胞培养方法与NSO细胞一致。
培养方法按照实施例1所述的培养方法，仅在在步骤11分别设定溶氧量为150％，250％，350％完成三轮培养测定各细胞的活力，其结果见表4：
表4CHO细胞、NS0细胞以及HEK293细胞-溶氧量实验结果
如表4所示，溶氧量在150-250％之间时，CHO细胞、NS0细胞以及HEK293细胞的活力达到80％以上，在溶氧量为250％时的细胞活力均高于溶氧量为150％或者300％时的细胞活力。
综上，本发明提供的细胞灌流培养方法可以实现细胞的稳定、连续培养，为大规模工业化生产重组蛋白提供了可能，具有良好的市场应用前景。
Claims (8)
1.一种灌流式细胞培养的培养基更换方法，其特征在于：它包括如下步骤：
（1）降温：降低细胞培养罐内培养基的温度至4~15℃；
（2）通氧：通入氧气至培养基的溶氧量为150~250%（mg/L）；
（3）更换培养基：停止搅拌，沉降细胞，沉降时间为0~48h，抽出上清液，加入新鲜培养基。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述温度为8~12℃。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）所述溶氧量为250%（mg/L）。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）所述沉降时间为15-36h。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述沉降时间为20-36h。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述细胞为哺乳动物细胞。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述哺乳动物细胞为中国仓鼠卵巢细胞、小鼠骨髓瘤细胞、人胚胎肾细胞、骨髓瘤细胞或者HEK293细胞、BHK细胞。
8.一种灌流式细胞培养方法，其特征在于，它包括如下步骤：
①取细胞，经过复苏、传代后，接种至搅拌式细胞培养罐中搅拌培养，培养温度30℃-37℃；
②结束培养，按照权利要求1~7任意一项所述的方法，更换培养基；
③升高培养基温度至30~37℃，继续培养。
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Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103589638B (zh) * | 2013-11-12 | 2014-12-17 | 罗火生 | 一种气动自循环动物细胞培养生物反应器及其使用方法 |
| JP6737813B2 (ja) * | 2015-05-29 | 2020-08-12 | グリコトープ ゲーエムベーハー | 懸濁細胞の小スケール培養 |
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| CN110894494B (zh) * | 2019-11-22 | 2022-09-27 | 广西梧州制药（集团）股份有限公司 | 一种大规模高密度悬浮培养293细胞高产腺病毒的方法 |
| CN112625902B (zh) * | 2020-12-03 | 2024-02-13 | 广州迈普再生医学科技股份有限公司 | 一种生物反应器及具有其的生物反应系统 |
| CN112662619A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-04-16 | 汇康再生医学(深圳)有限公司 | 一种治疗骨关节炎的脂肪细胞制剂 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN201437539U (zh) * | 2009-06-02 | 2010-04-14 | 北京必威安泰生物科技有限公司 | 改进的搅拌式生物反应器 |
| CN101085978B (zh) * | 2007-06-27 | 2011-01-05 | 广州铭康生物工程有限公司 | 一种用于动物细胞灌流培养的过滤-沉降双结合灌流系统 |
| CN201737932U (zh) * | 2010-08-18 | 2011-02-09 | 成都康华生物制品有限公司 | 生物反应器 |
| CN102108333A (zh) * | 2009-12-29 | 2011-06-29 | 上海日泰医药设备工程有限公司 | 一种流化床生物反应器 |
-
2012
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101085978B (zh) * | 2007-06-27 | 2011-01-05 | 广州铭康生物工程有限公司 | 一种用于动物细胞灌流培养的过滤-沉降双结合灌流系统 |
| CN201437539U (zh) * | 2009-06-02 | 2010-04-14 | 北京必威安泰生物科技有限公司 | 改进的搅拌式生物反应器 |
| CN102108333A (zh) * | 2009-12-29 | 2011-06-29 | 上海日泰医药设备工程有限公司 | 一种流化床生物反应器 |
| CN201737932U (zh) * | 2010-08-18 | 2011-02-09 | 成都康华生物制品有限公司 | 生物反应器 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102690781A (zh) | 2012-09-26 |
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